Khi trứng giun được tìm thấy trên các đối tượng môi trường khác nhau (đất, nước, rau, v.v.), luôn cần xác định khả năng tồn tại của chúng bằng cách xuất hiện, nhuộm bằng thuốc nhuộm quan trọng, nuôi trồng trong điều kiện tối ưu và thiết lập mẫu sinh học, tức là

Nuôi dưỡng động vật thí nghiệm.

Xác định khả năng sống của trứng hoặc ấu trùng giun sán khi xuất hiện. Đầu tiên, trứng giun xoắn được soi bằng kính hiển vi ở độ phóng đại thấp, sau đó ở độ phóng đại cao. Trong trứng giun sán bị biến dạng và chết, vỏ bị rách hoặc cong vào trong, huyết tương đục, lỏng. Trứng phân mảnh có bóng phân cắt (blastomere) có kích thước không bằng nhau, hình dạng không đều, thường bị dịch chuyển về một cực. Đôi khi có những trứng bất thường, có dị tật bên ngoài, phát triển bình thường. Ở ấu trùng giun đũa sống, hạt mịn chỉ có ở phần giữa của cơ thể, khi chúng chết đi, hạt lan ra khắp cơ thể, xuất hiện các không bào hyalin bóng lớn - cái gọi là chuỗi ngọc.

Để xác định khả năng tồn tại của trứng trưởng thành của giun đũa, giun roi, giun kim, cần thực hiện chuyển động tích cực của ấu trùng bằng cách đun nóng nhẹ chế phẩm (đến nhiệt độ không quá 37 ° C). Sẽ thuận tiện hơn khi quan sát khả năng tồn tại của ấu trùng giun đũa và giun đũa sau khi chúng được phân lập khỏi vỏ trứng bằng cách dùng kim hoặc nhíp chọc vào kính đậy của chế phẩm.

Ở ấu trùng xâm nhập của giun đũa, người ta thường thấy một cái nắp đã tróc ra ở phần đầu, và ở ấu trùng của trùng roi đã hoàn thành quá trình phát triển trong trứng, người ta tìm thấy một chiếc mũ ở nơi này ở độ phóng đại cao. Ở ấu trùng giun sán đã chết, bất kể vị trí của chúng (trong trứng hay bên ngoài) đều có thể nhận thấy sự phân hủy cơ thể. Trong trường hợp này, cấu trúc bên trong của ấu trùng trở nên vón cục hoặc dạng hạt, và cơ thể trở nên đục và trắng đục. Không bào được tìm thấy trong cơ thể, và các vết vỡ được tìm thấy trên lớp biểu bì.

Khả năng tồn tại của các cầu khuẩn teniid (bò, sán dây lợn, v.v.) được xác định bởi sự di chuyển của phôi khi chúng tiếp xúc với các enzym tiêu hóa. Trứng được đặt trên kính đồng hồ có dịch dạ dày của chó hoặc dịch tá tràng nhân tạo. Thành phần của thuốc sau: pancreatin 0,5 g, natri bicarbonat 0,09 g, nước cất 5 ml. Kính đồng hồ có trứng được đặt trong máy điều nhiệt ở 36-38 ° C trong 4 giờ. Trong trường hợp này, phôi sống được giải phóng khỏi vỏ. Vỏ của các quả cầu sống cũng hòa tan trong pepsin đã axit hóa và trong dung dịch kiềm của trypsin sau 6-8 giờ trong máy điều nhiệt ở 38 ° C.

Nếu đặt trứng teniid trong dung dịch natri sulfua 1%, hoặc dung dịch natri hypoclorid 20%, hoặc trong dung dịch nước clo 1% ở 36-38 ° C, phôi trưởng thành và sống sẽ được giải phóng khỏi màng và làm không đổi trong 1 ngày. Các tế bào nội tạng chưa trưởng thành và chết co lại hoặc sưng lên và tăng mạnh, sau đó "tan biến" trong vòng 10 phút - 2 giờ. Phôi sống của teniids cũng tích cực di chuyển trong hỗn hợp dung dịch natri clorua 1%, dung dịch natri bicacbonat 0,5% và mật ở 36- 38 ° C.

Khả năng tồn tại của linh chi Scolex được xác định khi gia nhiệt thấp. Để thực hiện việc này, người ta đặt những con chuồn hoặc viên nang bố mẹ đã rửa trong nước vào một giọt nước trên lam kính có lỗ, đậy bằng một tấm bìa và được soi dưới kính hiển vi có giai đoạn nung nóng ở nhiệt độ 38-39 ° C. Nếu không có bàn gia nhiệt, chế phẩm được làm nóng bằng bất kỳ nguồn nhiệt nào. Đồng thời, các ống dẫn tinh có thể di chuyển tích cực, làm giảm hoặc giãn các ống hút, kéo dài và rút ngắn ống dẫn trứng. Nếu các chuồn chuồn được đặt trong dung dịch nước 0,5-1% của filicilene ở nhiệt độ phòng, thì tất cả các chuồn chuồn còn sống sẽ nhanh chóng biến mất và chết. Những chiếc chuồn không khả thi sẽ không xuất hiện.

Khả năng tồn tại của sán lá gan lớn được thu thập từ thực vật và các đối tượng khác của thủy vực được kiểm tra bằng cách kiểm tra chúng trên lam kính trong nước muối dưới kính hiển vi có giai đoạn gia nhiệt. Khi bị đốt nóng, ấu trùng sán lá trong nang bắt đầu di chuyển.

Khả năng tồn tại của trứng sán dây lùn được xác định bởi vị trí của các móc trên phôi.

Trong trứng sống của sán dây lùn, các chuyển động chậm chạp giống như quả lắc của nguyên sinh chất và các phần mở rộng gần như không thể nhận thấy và sự dịch chuyển của các đầu nhọn của cặp móc bên diễn ra khỏi cặp móc giữa.

Sự co thắt của nguyên sinh chất của phôi và các móc mầm giúp phôi tự giải phóng trước tiên khỏi lớp vỏ của sinh quyển, sau đó là khỏi lớp vỏ bên ngoài của trứng.

Ở một quả trứng sống, các cặp móc giữa và các cặp móc bên được sắp xếp song song; ở một số trứng, các lưỡi của các cặp móc bên xích lại gần nhau và nằm ở một góc nhỏ hơn 45 ° so với các cặp móc ở giữa.

Phôi chết co giật co giật và đẩy các móc ra xa nhau một cách chậm chạp. Trong phôi chết, chuyển động của các móc dừng lại, và chúng sắp xếp một cách lộn xộn, đôi khi các móc bên này sang cặp bên cạnh bị lệch ra xa nhau theo góc vuông, góc tù hoặc góc nhọn.

Đôi khi phôi bị nhăn, quan sát thấy sự hình thành các hạt. Một phương pháp chính xác hơn là dựa trên sự xuất hiện của các chuyển động của oncosphere khi nhiệt độ thay đổi mạnh: từ 5-10 đến 38-40 ° C.

Việc xác định khả năng sống của giun tròn chưa trưởng thành cần được nghiên cứu trong buồng ẩm (đĩa Petri), đặt trứng giun đũa vào dung dịch formalin 3% được pha trong dung dịch natri clorua đẳng trương ở nhiệt độ 24-30 ° C, cho trứng giun đũa vào dung dịch 3%. dung dịch axit clohydric ở nhiệt độ 30-35 ° C, trứng giun kim trong dung dịch natri clorid đẳng trương ở nhiệt độ 37 ° C. Nên mở đĩa petri 1-3 lần một tuần để thông khí tốt hơn và làm ẩm lại giấy lọc nước sạch.

Việc quan sát sự phát triển của trứng giun sán được thực hiện ít nhất 2 lần một tuần. Việc không có dấu hiệu phát triển trong vòng 2-3 tháng cho thấy khả năng tồn tại của chúng. Dấu hiệu nhận biết sự phát triển của trứng giun sán trước hết là giai đoạn nghiền nát, phân chia các chất chứa trong trứng thành các phôi bào riêng biệt. Trong ngày đầu tiên, có tới 16 phôi bào phát triển, chúng chuyển sang giai đoạn thứ hai - phôi dâu, v.v.

Trứng giun móc được nuôi trong ống trụ thủy tinh (cao 50 cm, đường kính 7 cm) đậy kín bằng nút. Một hỗn hợp gồm cát, than và phân vô trùng có thể tích bằng nhau với trứng giun móc, được pha loãng với nước đến độ sệt bán lỏng, được cẩn thận đổ vào đáy ống đong bằng ống thủy tinh. Trong 1-2 ngày định cư trong bóng tối ở nhiệt độ 25-30 ° C, ấu trùng rhabditoid nở ra từ trứng, và sau 5-7 ngày, chúng đã trở thành dạng filariform: ấu trùng bò lên thành của hình trụ, nơi chúng có thể nhìn thấy bằng mắt thường. Trứng sán lá phát triển tự nhiên trong nước, chẳng hạn như opisthorchis, diphyllobotriid, fasol, v.v., được đặt trên kính đồng hồ, đĩa Petri hoặc trong một bình khác, một lớp nhỏ được đổ nước lã. Khi nuôi cấy trứng sán lá gan lớn, cần lưu ý rằng chúng phát triển nhanh hơn trong bóng tối, trong khi đó, vi sinh vật được hình thành trong trứng sống ở nhiệt độ 22-24 ° C trong 9-12 ngày. Khi kính hiển vi trứng đang phát triển các chuyển động của sán lá có thể nhìn thấy rõ ràng. Fasciola magicidium chỉ xuất hiện từ vỏ trứng khi có ánh sáng. Khi vun xới, sau 2-3 ngày thay nước.

Ấu trùng giun móc và giun lươn được nuôi cấy trên thạch trong đĩa Petri có than động vật. Sau khi ở trong tủ điều nhiệt ở nhiệt độ 26-30 ° C trong 5-6 ngày, ấu trùng lây lan trên thạch, để lại đường dẫn vi khuẩn (phương pháp Fülleborn).

Phương pháp của Harada và Mori (1955). 7 ml nước cất được cho vào các ống nghiệm đặt trong giá đỡ. Lấy 0,5 g phân bằng que gỗ và làm vết bẩn trên giấy lọc (15X150 mm) cách mép trái 5 cm (thao tác này được thực hiện trên tờ giấy để bảo vệ bề mặt bàn thí nghiệm). Sau đó, dải có vết bẩn được đưa vào trong ống sao cho đầu bên trái không có vết bẩn chạm đến đáy ống. Đầu trên được phủ một mảnh giấy bóng kính và quấn chặt bằng dây thun. Trên ống nghiệm ghi số hiệu và họ của đối tượng. Ở trạng thái này, các ống được bảo quản trong 8-10 ngày ở nhiệt độ 28 ° C. Để nghiên cứu quá trình nuôi cấy, lấy và gỡ bỏ lớp giấy bóng kính và dùng nhíp lấy một dải giấy lọc. Cần cẩn thận trong trường hợp này, vì một số lượng nhỏ ấu trùng nhiễm bệnh có thể di chuyển lên đầu trên của giấy lọc hoặc thành ống nghiệm và xâm nhập vào dưới bề mặt của giấy bóng kính.

Các ống được đặt trong nóng tắm nướcở nhiệt độ 50 ° C trong 15 phút, sau đó lắc đều và đổ nhanh vào ống 15 ml để lắng ấu trùng. Sau khi ly tâm, phần nổi phía trên được loại bỏ và kết tủa được chuyển sang một lam kính, được phủ bằng một tấm bìa và được soi dưới độ phóng đại thấp.

Để chẩn đoán phân biệt ấu trùng filariform, cần sử dụng dữ liệu được trình bày trong Bảng. 13.

Phương pháp nhuộm trứng và ấu trùng giun sán. Trong hầu hết các trường hợp, mô chết cảm nhận màu sắc nhanh hơn mô sống. Những đặc điểm này được sử dụng trong nghiên cứu giun sán để xác định khả năng tồn tại của trứng và ấu trùng giun sán. Tuy nhiên, trong một số trường hợp, một số loại sơn được các mô sống cảm nhận tốt hơn các loại sơn đã chết.

Bảng 13. Chẩn đoán phân biệt ấu trùng dạng sợi của A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp.

Để nhận biết phân biệt trứng và ấu trùng sống và chết, các loại sơn và phương pháp sau được sử dụng.

Methylene blue leucobase được sử dụng để nhuộm các mô sống và chết. Tế bào hoặc mô sống khử xanh methylene thành leucobase không màu; mô chết không có khả năng này và do đó có màu.

Để tạo màu cho trứng giun đũa, bạn có thể dùng xanh methylen trong dung dịch axit lactic với kiềm ăn da (xanh metylen 0,05 g, xút 0,5 g, axit lactic 15 ml). Trứng sống không cảm nhận được màu sắc, phôi của trứng chết bị nhuộm màu trong Màu xanh.

Phương pháp nhuộm không áp dụng được đối với trứng giun đũa và giun đũa chưa trưởng thành; vỏ có sắc tố ố vàng, và do đó không thể nhìn thấy tế bào mầm bên trong quả trứng có bị nhuộm màu hay không.

Ấu trùng giun đũa được nhuộm bằng dung dịch cơ bản là sơn màu xanh lam-cresyl nồng độ 1:10 000 như sau: nhỏ một giọt chất lỏng có trứng giun đũa và một giọt dung dịch sơn cơ bản lên lam kính. Chế phẩm được bao phủ bởi một tấm bìa, được ép chặt vào vật thể bằng cách gõ nhẹ bằng kim mổ. Dưới kính hiển vi quan sát số lượng ấu trùng nở ra và mức độ nhuộm màu của chúng, sau đó xem xét lại việc chuẩn bị tương tự sau 2-3 giờ. vỏ bị vỡ (một phần hoặc toàn bộ).

Khả năng nhuộm các chế phẩm với dung dịch iốt để xác định khả năng sống của trứng chim ascaridia được chỉ ra. Trong trường hợp này, dung dịch cồn iốt 5% được sử dụng làm thuốc nhuộm. Khi nó được áp dụng để chuẩn bị, các phôi của trứng ascaridia chết sẽ được nhuộm trong 1-3 giây. màu cam. Trứng chết của opisthorchis và oncospheres sán dây bò nhuộm bằng dung dịch xanh toluidine (1: 1000), và các tế bào chết của sán dây bò - bằng dung dịch có màu xanh lam rực rỡ (1: 10.000). Đồng thời, phôi và vỏ của cả trứng chết và trứng sống đều có màu sắc. Vì vậy, sau khi nhuộm, trứng và các quả cầu được rửa trong nước tinh khiết và nhuộm thêm safranin (pha loãng 1: 10.000 với dung dịch cồn 10%). Rượu loại bỏ chất nhuộm màu khỏi vỏ và safranin tạo cho chúng màu đỏ. Kết quả là trứng sống có màu đỏ, phôi của trứng chết có màu xanh và vỏ vẫn đỏ. Phôi chết của sán dây bò có nội cầu nhanh chóng, trong vòng vài phút, chuyển sang màu đỏ tươi hoặc màu hồng safranin hoặc xanh lam rực rỡ-cresyl xanh lam ở độ pha loãng 1: 4000 hoặc chàm carmine ở độ pha loãng 1: 1000-1: 2000.

Phôi sống không thay đổi dưới ảnh hưởng của những màu này ngay cả sau 2-7 giờ.

Để xác định khả năng tồn tại của trứng sán dây lùn, nên sử dụng các loại sơn sau: 1) màu xanh cresyl rực rỡ (1: 8000) - sau 1 giờ, phần vỏ trứng của trứng chết có màu đặc biệt sáng, nổi bật so với màu nhợt nhạt hoặc nền không màu của phần còn lại của quả trứng; 2) safranin: ở độ pha loãng 1: 8000 khi tiếp xúc trong 2 giờ và 1: 5000 trong 3-5 giờ; 3) Dung dịch axit pyrogallic 50% ở độ pha loãng 1: 2 - khi phơi trong 1 giờ ở nhiệt độ 29-30 ° C (nhiệt độ càng thấp thì quá trình nhuộm càng lâu).

Plerocercoids sống của sán dây rộng được nhuộm rất tốt bằng dung dịch nước (1: 1000) của miệng trung tính trong 5-20 phút. Để có được màu hồng dai dẳng, không biến mất trong vòng 5 ngày và không ảnh hưởng đến khả năng di chuyển của plerocercoids, thường là 10 phút là đủ. Mức độ màu sắc được kiểm soát bằng cách xem ấu trùng trong sạch giải phap tương đương natri clorua, mà chất plerocercoids được loại bỏ định kỳ khỏi sơn. Nên sử dụng xanh methylen để nhuộm các chất plerocercoids đã chết.

R.E. Chobanov và cộng sự (1986) đã đề xuất một phương pháp xác định khả năng sống của trứng và ấu trùng giun sán bằng cách sử dụng sắc tố rubrin thu được trong quá trình nuôi cấy làm thuốc nhuộm. nấm mốc Peniciliium rubrum. Để làm điều này, hãy sử dụng dung dịch thuốc nhuộm dạng nước 3%.

Quá trình tạo màu cho trứng và ấu trùng hoàn thành sau 1,5 giờ. Trứng không sống được của giun kim, bò và sán dây lùn, các loại giun đũa, trichostrongylid có màu hồng đậm, ấu trùng của giun đũa và trichostrongylid trở thành màu đỏ. Màu sắc kém tươi sáng hơn được quan sát thấy trong trứng giun đũa và giun đũa, vì, nổi bật từ ruột, chúng đã có màu nâu sẫm: Trứng và ấu trùng sống được không nhuộm màu.

Các phương pháp hóa lý để kích thích sự phóng thích vi khuẩn từ trứng sán lá. Các phương pháp được phát triển bởi S.M. German và S.A. Beer (1984) để xác định khả năng sống sót của trứng opisthorchia và dicrocelium bằng cách cho trứng tiếp xúc với môi trường phản ứng. Nếu chúng còn sống, thì sẽ xuất hiện magicidium. Các phương pháp này dựa trên sự kích hoạt hóa lý của tuyến nở của vi khuẩn và kích thích hoạt động vận động của ấu trùng. Kích thích đạt được bằng cách cho trứng sán lá tiếp xúc với môi trường phản ứng đặc biệt kết hợp với các phương pháp liên tiếp - tạo ra sự chênh lệch nhiệt độ, làm khô huyền phù của trứng, tiếp xúc với dòng điện yếu của chất lỏng trong giọt thử nghiệm, góp phần giải phóng khối lượng vi khuẩn từ trứng.

Xác định khả năng sống của trứng opistor theo phương pháp của Herman, Beer. Hỗn dịch trứng trong nước (vòi, lắng) được làm lạnh trước đến 10-12 ° C. Tất cả các hoạt động tiếp theo được thực hiện ở nhiệt độ phòng (18-22 ° C). Một giọt (khoảng 0,05 ml) huyền phù chứa 100-400 trứng được cho vào ống ly tâm. Các ống nghiệm được đặt trên giá trong vòng 5-10 phút để trứng kết tủa. Sau đó, với một dải giấy lọc hẹp, phần nước thừa được hút cẩn thận cho đến khi loại bỏ hoàn toàn. Cho 2 giọt môi trường vào ống nghiệm, lắc đều, dùng pipet chuyển lượng chứa bên trong lên lam kính và để yên trong 5 - 10 phút, lắc nhẹ (hoặc đặt dưới máy sấy tóc) để tạo dòng chất lỏng yếu trong đình chỉ đang nghiên cứu. Hoạt động này, mô phỏng nhu động ruột của động vật thân mềm, cho phép bạn kích hoạt giải phóng chất thần kỳ. Sau đó, thêm 2 giọt môi trường nữa vào huyền phù, rồi chế phẩm được kiểm tra bằng kính hiển vi ánh sáng thông thường (X200). Trong thời gian này, trứng có khả năng sống sót nên mở nắp, trong khi ấu trùng tích cực xuất hiện trong môi trường. Do sự hiện diện của etanol trong đó, nên manti được cố định trong 3-5 phút, và sau đó được nhuộm bằng thuốc nhuộm trong môi trường. Kết quả là, chứng thần kỳ được phát hiện và đếm một cách dễ dàng.

Chuẩn bị môi trường phản ứng. Môi trường được chuẩn bị trong đệm Tris-HCi 0,05 M trong điều kiện pH tối ưu là 8,0-9,5. Ethanol được thêm vào dung dịch đệm lên đến 10-13% và thuốc nhuộm (safranin, xanh methylen và các chất khác hoạt động trong phạm vi pH) cho đến khi chất lỏng có màu nhẹ (ví dụ, đối với safranin, nồng độ cuối cùng của nó sẽ là 1: 50.000). Bạn có thể sử dụng một chất đệm khác hoạt động trong phạm vi pH kiềm, chẳng hạn như 0,05 M phosphate (pH 8,5). Do đó, môi trường chứa 96% etanol - 12 phần; thuốc nhuộm ( rượu mẹ) - 1-10 phần; 0,05 M tris-HC! đệm (pH 8,5-9,5) - lên đến 100 phần. Ví dụ trung bình: 12 phần ethanol 96%, 1 phần dung dịch safranin bão hòa, phần còn lại lên đến 100 phần - đệm Tris-HCl 0,05 M, pH 9,5.

Xác định khả năng sống của trứng dicrocelium theo phương pháp của Herman, Beer, Stratan. Nhỏ một giọt huyền phù chứa 100-150 trứng sán vào ống ly tâm trong 1-2 phút để lắng trứng. Chất lỏng sau đó được làm khô cẩn thận bằng một dải giấy lọc. Thêm 1-2 giọt môi trường phản ứng bằng pipet Pasteur và ủ trong nồi cách thủy ở 28-30 ° C trong 2-3 phút. Thành phần môi trường: 6 phần butanol, 94 phần dung dịch natri clorua 0,4% hoặc dung dịch kali clorua 0,3% trong nước cất. Trứng trong môi trường được chuyển bằng pipet lên lam kính và để trong 1,5-2 giờ ở nhiệt độ phòng (18-22 ° C), trong khi cứ sau 25-30 phút (khi nó khô), thêm 1-2 giọt (0,05 ml) dung dịch butanol trong nước cất. Sau đó, việc chuẩn bị được soi bằng kính hiển vi ở độ phóng đại 100-200 lần. Khả năng tồn tại được xác định bởi số lượng trứng đã mở có vi khuẩn được phóng thích. Butanol thâm nhập qua các lỗ chân lông của vỏ trứng, đến các cơ quan thần kỳ và kích hoạt chúng. Ủ ở nhiệt độ rõ rệt giúp tăng cường quá trình này. Butanol ở nồng độ 3-7% là bất lợi cho vi diệu đã xuất hiện từ trứng. Việc chuyển huyền phù trứng từ ống nghiệm sang lam kính cho phép, vào thời điểm magicidium thoát ra (sau 30-40 phút), làm giảm nồng độ butanol do bay hơi đến mức an toàn (1,5-0,5%). Sự hiện diện của natri clorua trong môi trường ở nồng độ 0,1-0,5% (hoặc kali clorua ở nồng độ 0,05-0,4%) xác định hoạt tính của chất magie được giải phóng. Trái ngược với những quả trứng nhỏ trong suốt của opisthorch, trứng của dicrocelium có vỏ màu sẫm; chúng có một nắp có thể nhìn thấy rõ ràng, nắp này sẽ mở ra sau khi giải phóng vi diệu. Do đó, khả năng tồn tại của trứng dicrocelium được đánh giá thuận tiện hơn bằng cách đếm trứng đã mở, thay vì nhuộm và đếm vi khuẩn.

Phương pháp phát quang để nghiên cứu trứng và ấu trùng giun sán.

Lần đầu tiên trong thực hành giun sán, phương pháp hiển vi phát quang đã được áp dụng vào năm 1955. Người ta báo cáo rằng kính hiển vi phát quang giúp phân biệt vật thể sống và vật chết mà không làm hỏng trứng. Đối với huỳnh quang, không phải tia UV đã được sử dụng, mà là phần xanh tím của ánh sáng nhìn thấy, với kính hiển vi thông thường và lam kính; một bộ lọc màu đặc biệt đã được sử dụng cho đèn chiếu sáng OI-18.

Người ta thấy rằng trứng sống và chết của giun đũa, giun kim, sán dây lùn, sán dây bò, sán dây rộng và các loài giun sán khác phát quang khác nhau. Hiện tượng này được quan sát thấy cả trong quá trình phát quang sơ cấp mà không sử dụng thuốc nhuộm và khi nhuộm bằng fluorochromes (acridine da cam, corifosphine, primulin, auroline, berlerin sulfate, tripaflavin, rivanol, quinacrine, v.v.).

Trứng giun đũa sống không phân đoạn không sơn màu xanh lục sáng pha chút vàng; ở trứng chết, vỏ phát ra ánh sáng xanh lục sáng hơn nhiều so với phôi xanh đậm; trong trứng giun đũa có ấu trùng chỉ xuất hiện vỏ, còn khi chết cả vỏ và ấu trùng đều có màu vàng tươi.

Trứng sống không có sắc tố và không phân mảnh của giun kim và sán dây lùn phát ra ánh sáng màu vàng lục; trong trứng chết, vỏ phát sáng mạnh trên nền của một khối phôi màu xanh đậm. Với sự phát quang thứ cấp (khi nhuộm acridine da cam ở độ pha loãng 1:10 OOO và 1:50 OOO từ 30 phút đến 2 giờ), vỏ của tuyến trùng sống và chết, sán lá và cestodes phát quang khác nhau.

Vỏ của Ascaris lumbricoides sống và chết, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum chuyển sang màu đỏ cam. Phôi sống Asc. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum và các tế bào trên cầu của sán dây bò phát quang thành màu lục sẫm hoặc xanh xám. Phôi chết của những quả trứng giun sán này phát ra ánh sáng màu đỏ cam "cháy". Ấu trùng giun kim còn sống và giun đũa (vỏ trứng) phát ra ánh sáng xanh xám, và khi chúng chết, màu sắc thay đổi từ phần đầu sang màu xanh lục nhạt, sau đó là vàng, cam và cuối cùng là cam sáng.

Khi được nhuộm bằng fluorochromes - coryphosphyllum, primulin - trong trứng chết của giun đũa và trùng roi, người ta quan sát thấy ánh sáng từ màu vàng hoa cà đến màu đỏ đồng. Trứng sống được không phát quang mà chuyển sang màu xanh đậm. Trứng sống của sán lá Paragonimus westermani và Clonorchis sinensis không phát quang sau khi nhuộm bằng acridine cam, trong khi trứng chết phát ra ánh sáng xanh lục vàng.

Phương pháp phát quang cũng có thể được sử dụng để xác định khả năng tồn tại của ấu trùng giun sán. Vì vậy, fluorochrom hóa bằng dung dịch acridine da cam (1: 2000) ấu trùng của Strongylate, rhabdita phát sáng: sống - xanh lá cây (có pha màu), chết - sáng cam sáng. Ấu trùng sống của Trichinella không phát sáng hoặc phát sáng yếu khi xử lý trong 10 phút bằng các dung dịch huỳnh quang isothiocyanate, auramine, ... Ấu trùng chết được fluorochrom hóa (nồng độ 1: 5000) sẽ phát sáng.

Các vi khuẩn sống chui ra khỏi vỏ phát ra ánh sáng xanh mờ với tràng hoa màu vàng nhạt của lông mao khó nhận thấy, nhưng 10-15 phút sau khi chết, chúng xuất hiện dưới dạng ánh sáng xanh “cháy”, sau đó là ánh sáng đỏ cam.

Phương pháp trực tiếp: phát hiện bản thân giun sán, các mảnh vỡ của chúng, trứng, ấu trùng trong phân, nước tiểu, dịch tiết tá tràng, đờm, chất nhầy ở mũi và âm đạo, chất chứa của các khoang dưới lưỡi, các mảnh mô sinh thiết.

Khi chẩn đoán, không thể xác định bằng một phương pháp nào đó là trứng hoặc ấu trùng của tất cả các loại giun sán sống trong đó. hệ thống tiêu hóa người. Do đó, khi sử dụng phương pháp tuyển nổi, trứng sán lá và trong một số trường hợp, trứng giun đũa không được thụ tinh sẽ không nổi lên màng bề mặt (do trọng lượng riêng lớn). Trong phân, rất hiếm khi tìm thấy trứng giun kim, các tế bào trùng teniid, được phát hiện bằng các phương pháp nghiên cứu đặc biệt: nạo từ các nếp gấp quanh hậu môn để tìm giun kim và teniids, phương pháp lắng tìm sán lá (trứng opistor, v.v.). Do đó, để kiểm tra bệnh nhân có mục tiêu giun sán, bác sĩ trong giấy giới thiệu nên chỉ ra loại giun sán nào nên được chú ý chính (chẩn đoán), điều này sẽ cho phép trợ lý phòng thí nghiệm chọn kỹ thuật thích hợp để xác định loại giun sán này. Phân được lấy từ Những nơi khác nhau phân với số lượng ít nhất là 50 gam (thìa cà phê) trong một đĩa thủy tinh sạch nên được gửi đến phòng xét nghiệm muộn nhất là một ngày sau khi đại tiện và được kiểm tra vào ngày nhập viện.

Nếu cần thiết phải giữ phân cho đến ngày hôm sau, nó được đặt ở nơi lạnh (0-4 ° C) hoặc chứa đầy một trong các chất bảo quản.

Trước khi nghiên cứu, phân được trộn bằng que để trứng giun sán được phân bổ đều trong tổng khối lượng.

Nếu bất kỳ trứng giun sán nào được tìm thấy trong quá trình chuẩn bị, việc xem xét không được dừng lại, bởi vì. có thể là xâm lấn gấp đôi hoặc gấp ba.

Theo dõi hiệu quả của việc điều trị bệnh giun sán được thực hiện bằng cách xét nghiệm phân tìm trứng giun sán trong 2-3 tuần hoặc 2-3 tháng sau khi điều trị, tùy thuộc vào loại giun sán phát hiện được.

Phương pháp kính hiển vi được sử dụng để phát hiện toàn bộ giun sán trưởng thành sinh dục hoặc các mảnh của chúng trong phân bằng mắt thường hoặc bằng kính lúp cầm tay.

Thường trên bề mặt phân sau khi đi đại tiện, bạn có thể thấy giun kim đang bò chủ động; thải ra ngoài theo phân giun đũa; đôi khi bản thân người ta cũng nhận thấy sự thải ra của giun sán. Ở những bệnh nhân mắc bệnh giun chỉ, các mảnh của sán dây (ở dạng "sợi mì") có thể nổi bật, và ở những bệnh nhân bị nhiễm teniids (sán dây lợn hoặc bò), các đoạn giun sán (ở dạng "vết cắt trắng" ) thường để lại phân (dưới dạng "vết cắt trắng") hoặc chúng chủ động bò ra ngoài hậu môn.

Phương pháp macro là phương pháp chính cho Chẩn đoán phân biệt teniidosis và teniarhynchosis (kết hợp với khảo sát).

Trong số các phương pháp vĩ mô đặc biệt, phương pháp rửa phân tuần tự được sử dụng.

Phân được trộn trong nước để thu được hỗn dịch đồng nhất, sau đó, dưới ánh sáng tốt, chúng được kiểm tra cẩn thận thành từng phần nhỏ riêng biệt trong cuvet ảnh đen hoặc trên nền tối trong đĩa Petri. Bằng nhíp hoặc kim mổ, tất cả các hạt trắng nghi ngờ, hình thành lớn nghi là các mảnh giun sán đều được lấy ra và soi dưới kính lúp giữa hai lam kính. Các con giun sán nhỏ hoặc đầu của các con trùng được kiểm tra dưới kính lúp trong một giọt glycerin hoặc dưới kính hiển vi.

Khi sử dụng phương pháp này để chẩn đoán các phân đoạn của thịt lợn, sán dây bò, sán dây rộng, các phân đoạn đã rửa sạch được đặt giữa hai kính và khi nhìn vào ánh sáng dưới kính lúp hoặc kính hiển vi có độ phóng đại thấp, loài được xác định bằng cấu tạo của tử cung (ở sán dây lợn trưởng thành có 8-12 nhánh bên, ở sán dây bò 18-32, thường gặp hơn 28-32, ở sán dây rộng, các đoạn này rộng hơn và tử cung trong trung tâm ở dạng "hoa thị"). Nếu tử cung không được nhìn thấy rõ, thì trước tiên có thể giữ tử cung trong một thời gian trong dung dịch glycerin 50%, sau đó thậm chí còn có thể nhìn thấy rõ các thân tử cung bị sa mạc.

Khi xác định các mã này bằng cấu trúc của các đầu tách rời, chúng được đặt cẩn thận với một cổ giọt glyxerol giữa các lam kính (hoặc phủ một tấm bìa) và không cần bóp, được kiểm tra dưới kính hiển vi ở độ phóng đại thấp.

Phương pháp hiển viđược chia thành đơn giản, phức tạp và đặc biệt.

Các phương pháp đơn giản là bôi nhọ bản địa, phết tế bào gốc với dung dịch Lugol, các phương pháp phết dày dưới giấy bóng kính theo Kato, nạo (theo Shulman) và nạo quanh hậu môn.

Các phương pháp phức tạp hiệu quả hơn và dựa trên nồng độ của trứng trong chế phẩm. Chúng bao gồm việc xử lý trước phân bằng thuốc thử dạng lỏng, do đó trứng giun sán kết tủa hoặc nổi lên bề mặt chất lỏng.

Các phương pháp phức tạp bao gồm các phương pháp làm giàu:

a) Sự nổi (khi trọng lượng riêng của trứng nhỏ hơn trọng lượng riêng của dung dịch muối và trứng nổi lên màng bề mặt);

b) lắng cặn (khi trọng lượng riêng của trứng lớn hơn trọng lượng riêng của dung dịch muối và trứng lắng thành cặn).

Các phương pháp đặc biệt để phát hiện trứng và ấu trùng giun sán, nang sán và các dạng sinh dưỡng của động vật nguyên sinh là phương pháp nạo, hút nổi, lắng cặn, soi ấu trùng, soi đơn bào, nghiên cứu mật và các phương pháp nhuộm phết phân, đờm, v.v.

Các phương pháp đơn giản để kiểm tra phân

bôi nhọ bản địa. Dùng que gỗ lấy một hạt phân nhỏ từ các phần khác nhau của phần được phân phối, xoa đều trên lam kính trong một giọt dung dịch glycerin 50% và phết mỏng trên lam kính 2-3 lam kính. Ít nhất 3 chế phẩm được kiểm tra dưới kính hiển vi. Nhược điểm của phương pháp: lượng nguyên vật liệu ít nên không được sử dụng như một phương pháp độc lập.

Phương pháp xoắn(Shulman). Cho 2,0-3,0 g phân vào ly, dùng đũa thủy tinh khuấy kỹ với thể tích nước muối hoặc nước cất gấp 5 lần phân, làm động tác nhanh trong 2-3 phút, nhanh chóng lấy phân ra khỏi hỗn hợp. Một giọt hỗn hợp ở cuối que được chuyển vào lam kính và được soi bằng kính hiển vi. Nguyên lý của lực ly tâm gây ra sự tích tụ của trứng và ấu trùng trên một que.

Phương pháp bôi dày Kato với giấy bóng kính. Thuốc thử hóa học: 100% glixerol, dung dịch phenol 6% (100 ml nước + 6 g phenol), dung dịch xanh malachit 3% (2,5 ml nước cất + 75 ml xanh malachit).

Chuẩn bị dung dịch làm việc: 100 ml dung dịch phenol 6% + 100 ml glyxerin nguyên chất + 1,2 ml dung dịch xanh malachit 3%.

Chuẩn bị dải giấy bóng kính: các dải giấy bóng kính được cắt, kích thước tương ứng với lam kính. Giấy bóng kính phải là loại ưa nước (bóng kính khi cháy là thích hợp, nếu nóng chảy thì không thích hợp). Có thể xử lý tới 5 nghìn dải trong giải pháp làm việc. Thời gian tiếp xúc của dải giấy bóng kính cho đến khi sẵn sàng sử dụng trong dung dịch làm việc ít nhất là 24 giờ.

Tiến độ nghiên cứu. 50 mg phân (kích thước bằng hạt đậu lớn) được cho vào lam kính, dùng que riêng (thủy tinh, gỗ) cọ xát, phủ một dải giấy bóng kính và dùng nút cao su chà lên trên cho đến khi thu được vết bẩn dày đồng nhất. . Thuốc được làm khô ở nhiệt độ phòng trong một giờ hoặc trong máy điều nhiệt ở 40 ° C trong 20 - 30 phút và ở kính hiển vi (có thể tăng thời gian phơi ở nhiệt độ phòng lên 5 - 6 giờ hoặc hơn).

Về hiệu quả, phương pháp này tiệm cận với phương pháp tuyển nổi, nhưng bộc lộ sự xâm thực cường độ trung bình và mạnh.

Nó được sử dụng như một phương pháp chẩn đoán độc lập và được khuyến khích để kiểm tra hàng loạt quần thể.

Trong các phòng xét nghiệm chẩn đoán lâm sàng, nó được sử dụng như một phương pháp thống nhất để chẩn đoán bệnh giun sán trong trường hợp không có chẩn đoán cụ thể theo hướng của bác sĩ.

Các phương pháp cạo quanh hậu môn và phết tế bào gốc bằng dung dịch Lugol được mô tả trong phần các phương pháp đặc biệt.

Các phương pháp làm giàu phân phức tạp

Các phương pháp làm giàu dựa trên sự khác biệt về trọng lượng riêng của trứng giun sán và dung dịch muối được sử dụng.

Khi áp dụng phương pháp tuyển nổi có thể dùng các dung dịch muối sau:

1. Dung dịch PbNO3 chì nitrat (chì nitrat) có khối lượng riêng là 1,5. Được pha chế với tỷ lệ 650 g chất trên 1 lít nước. Muối được hòa tan từng phần trong nước nóng trong bát men, đun trên bếp và liên tục khuấy cho đến khi tan hoàn toàn. Không cần thiết phải lọc dung dịch. Dung dịch được chuẩn bị vào ngày nghiên cứu, vì theo thời gian nó sẽ kết tủa và khối lượng riêng của nó bắt đầu giảm sau 24 giờ. Nếu dung dịch được chuẩn bị trong Với số lượng lớn, sau đó trong những ngày tiếp theo trước khi nghiên cứu, nó được đun nóng, khuấy chất lắng cặn. Việc chuẩn bị dung dịch được thực hiện trong tủ hút, vì chì nitrat là một muối kim loại nặng.

2. Người ta pha chế dung dịch amoni nitrat NH4NO3 (dạng hạt hoặc amoni nitrat thường) có khối lượng riêng là 1,3, được pha chế tương tự như phương pháp trước nhưng với tỷ lệ 1500 g chất trên 1 lít. nước nóng.

3. Người ta điều chế dung dịch natri nitrat NaNO3 hoặc natri nitrat có khối lượng riêng từ 1,38-1,4 với tỷ lệ 1000 g chất trên 1 lít nước nóng.

4. Một dung dịch natri thiosunfat Na2S2O3 × 5H2O (natri hyposulfit) có khối lượng riêng là 1,4 được điều chế với tỷ lệ 1750 g chất trên 1 lít nước nóng.

5. Dung dịch natri sunfat Na2SO4 (muối epsom) có khối lượng riêng 1,26-1,28 được pha chế với tỉ lệ 920 g chất trong 1 lít nước nóng.

6. Một dung dịch kẽm clorua ZnCl2 (kẽm clorua) có khối lượng riêng là 1,82 được điều chế với tỷ lệ 2000 g chất trên 1 lít nước nóng. Dung dịch nguội không kết tinh.

7. Dung dịch bão hòa natri clorua NaCl (muối thường) có khối lượng riêng là 1,18-1,2. Trên! 1 l nước, cho 400-420 g muối từng phần vào một xô nước sôi tráng men, khuấy liên tục cho đến khi tan hoàn toàn. Khi dung dịch nguội đi, các tinh thể natri clorua kết tủa.

Trọng lượng riêng của các dung dịch tuyển nổi chỉ được đo bằng khí kế sau khi dung dịch đã nguội hoàn toàn ở nhiệt độ phòng.

Phương pháp tuyển nổi có hiệu quả nhất để phát hiện trứng của sán dây, giun đũa, giun móc, giun đũa và sán dây rộng.

Màng bề mặt có thể được loại bỏ bằng một vòng dây hoặc tấm kính.

Trong dung dịch natri clorua bão hòa, màng có thể được kiểm tra sau 30-40 phút, trong dung dịch amoni nitrat - sau 10-20-30 phút sau khi lắng.

Khi tháo màng bằng vòng dây, cần kiểm tra ít nhất 8 giọt.

Các trang trình bày bị xóa khỏi phim nhiều trứng hơn hơn vòng dây. Thủy tinh phải tiếp xúc với chất lỏng dung dịch tuyển nổi, được cho vào cốc bằng pipet. Sau khi lắng, kính được lấy ra, đặt bề mặt đã được làm ướt lên trên kính kích thước lớn hơn và được kiểm tra dưới kính hiển vi. Các tấm trượt phải được tẩy dầu mỡ trước khi sử dụng.

Để nghiên cứu, bạn phải có: lam kính, cốc đựng hóa chất, vòng dây, cuvet, đĩa Petri, pipet, lê, thủy tinh hoặc que gỗ.

Tiến độ nghiên cứu. 5 g phân được đổ với lượng gấp 10 lần lượng dung dịch tuyển nổi (tốt nhất là có khối lượng riêng từ 1,38-1,40), khuấy kỹ, các hạt lớn không tan được loại bỏ từ trên xuống và để huyền phù trong 10-15 phút. Sau đó, phim được lấy ra bằng một vòng lặp trên lam kính hoặc bằng lam kính. Để pha loãng phân, tốt hơn là lấy cốc có dung tích 30-50 ml, đổ dung dịch bằng mép (hoặc lấp dưới 2-3 mm) và đậy hỗn hợp bằng một phiến kính, sau đó thêm dung dịch tuyển nổi bằng một pipet cho đến khi nó tiếp xúc với phiến kính. Sau 10-20 phút, kính nhanh chóng được lấy ra và phim còn lại trên đó được quét bằng kính hiển vi mà không cần kính che.

Phương pháp lắng-lắng

Phương pháp lắng được sử dụng để phát hiện trứng giun sán, giun sán trong phân và là phương pháp nghiên cứu đặc biệt đối với bệnh sán lá gan nhỏ.

Phương pháp Goryachev-Zolotukhin(phương pháp đơn giản hóa của Goryachev). Khoảng 1,5 g phân được khuấy trong ly hóa chất trong 3-4 ml nước. Hỗn dịch thu được được lọc qua hai lớp gạc vào ống ly tâm, xếp lớp cẩn thận lên trên 4-5 ml dung dịch natri clorua bão hòa có trong đó. Đặt ống nghiệm trong giá 15-20 giờ, trong thời gian này, trứng sán lá nặng sẽ lắng xuống. Nhận hai lớp được phân chia rõ ràng. Lớp trầm tích được kiểm tra bằng kính hiển vi.

Phương pháp ete-formalin. Nó được sử dụng để chẩn đoán tất cả các lần xâm nhập đường ruột và là một phương pháp đặc biệt đối với động vật nguyên sinh và trứng opisthorchia.

Thiết bị: máy ly tâm 3000 vòng / phút; ống chia độ ly tâm, phễu; rây lọc bằng kim loại (trà) hoặc băng hai lớp; lam kính và nắp đậy; gậy bằng gỗ (hoặc thủy tinh); bông, băng.

Thuốc thử hóa học: Dung dịch formalin 10% (1 phần dung dịch formalin dược phẩm và 4 phần nước cất); ete etylic (y tế).

7 ml dung dịch formalin 10% được đổ vào ống ly tâm và 1 g phân được đặt (lượng phân như vậy mà dung dịch trong ống nghiệm tăng lên 8 ml). Phân được trộn với formalin cho đến khi tạo thành hỗn hợp đồng nhất, sau đó được đổ qua rây lọc kim loại (hoặc gạc hai lớp, băng) vào một ống ly tâm khác (nếu phân vẫn còn trên rây lọc, thì rây lọc phải được tráng bằng formalin). Thêm 2 ml ete vào ống ly tâm này, đậy nút và lắc mạnh trong 30 giây.

Hỗn hợp được ly tâm ở tốc độ 3000 vòng / phút trong một phút (có thể trong hai phút ở tốc độ 1500 vòng / phút). Do phản ứng của ete-formalin, xảy ra hiện tượng đông tụ protein dưới dạng nút chai ở đầu ống nghiệm, trứng giun sán kết tủa. Lớp đông tụ được loại bỏ, phần nổi phía trên được làm ráo, cho kết tủa lên lam kính trực tiếp từ ống nghiệm hoặc bằng pipet Pasteur, đậy bằng nắp trượt và quan sát dưới kính hiển vi.

Phương pháp kết tủa ete-axetic. Nguyên tắc kết tủa bằng ete-acetic của trứng giun sán là xử lý tuần tự các mẫu phân bằng dung dịch nước 10%. A-xít a-xê-tíc và ête. Axit axetic tốt hơn những loại khác các hợp chất hóa học tạo nhũ tương một mẫu phân. Nó thâm nhập vào các phần tử không tiêu hóa được, bao gồm chủ yếu là chất xơ, khi nội dung tuyệt vời can thiệp vào nghiên cứu bằng cách kết tủa sau khi ly tâm. Sau đó, việc thêm ete vào ống và khuấy dẫn đến việc chiết xuất axit axetic từ bên trong ống cùng với các hạt phân được ngâm tẩm trong ống. Vì trọng lượng riêng của hỗn hợp ete và axit axetic nhỏ hơn trọng lượng riêng của nước, các mẫu phân được xử lý bằng các chất này nổi lên và trứng giun sán, có trọng lượng riêng lớn, lắng xuống.

Khối lượng kết tủa thu được sau khi tạo kết tủa ete-axetic ít hơn 3-4 lần so với sau khi kết tủa ete-fomanđehit. Điều này tạo điều kiện thuận lợi đáng kể cho việc phát hiện trứng giun sán trong đó và cho phép bạn nghiên cứu toàn bộ cặn lắng với mẫu 0,5-1 g. Độc tính của phương pháp ether-acetic thấp hơn 5 lần.

Tiến độ nghiên cứu. 7 ml dung dịch axit axetic 10% được đổ vào ống ly tâm chia độ và thêm 1 g mẫu phân (tức là lượng phân như vậy mà tại đó dung dịch axit axetic tăng lên 8 ml). Khuấy kỹ bằng thủy tinh hoặc que gỗ. Lọc qua phễu có hai lớp gạc vào một ống ly tâm khác. 2 ml ete etylic (tức là lên đến 10 ml) được thêm vào nhũ tương. Đậy ống nghiệm bằng nút cao su (có thể dùng lọ penicilin) ​​và lắc trong 15 giây. Sau khi tháo nút, các ống được ly tâm trong một phút với tốc độ 3000 vòng / phút trong 2 phút. Phần nổi phía trên được loại bỏ khỏi ống. Trong một số trường hợp, nút phân hình thành cản trở việc thải chất nổi bên trên. Trong trường hợp này, nút chai được tách ra khỏi thành ống nghiệm bằng một thanh thủy tinh hoặc gỗ. Toàn bộ kết tủa được dùng pipet đưa lên lam kính và được soi dưới tấm phủ ở độ phóng đại thấp. Kết tủa thường nhỏ và không màu. Trứng giun sán, đặc biệt là trứng sán lá nhỏ được phát hiện rất tốt.

Phương pháp lắng hóa học. Nguyên tắc của nghiên cứu dựa trên sự lắng đọng của trứng từ một mẫu phân trong dung dịch muối có trọng lượng riêng là 1,15. Bản chất của phương pháp này nằm ở việc ly tâm trực tiếp một ống nghiệm trong đó nút phân được nhũ tương hóa trong dung dịch axit axetic 1% được xếp trên dung dịch natri nitrat (trọng lượng là 1,16). Trọng lượng riêng cao của dung dịch muối và các bong bóng do phản ứng hóa học giải phóng, xuyên qua lớp phân đã đồng nhất, ngăn chặn quá trình lắng của nó. Trứng giun sán kết tủa với một lượng nhỏ chất xơ. Có thể làm sạch cặn còn lại bằng cách xử lý với axit axetic 10% và ete. Trong trường hợp này, chỉ còn lại một quả trứng giun sán, điều này rất thuận lợi cho việc xác định chúng.

Tiến độ nghiên cứu. 6 ml dung dịch natri nitrat có khối lượng riêng là 1,15 được đổ vào ống ly tâm chia độ. Rót 7 ml dung dịch axit axetic 1% vào một ống nghiệm khác. Một mẫu phân được đưa vào (đến vạch 7,5 ml đối với mẫu 0,5 g và lên đến 8 ml đối với mẫu 1,0 g). Trộn kỹ mẫu bằng đũa thủy tinh. Lọc qua phễu có một lớp gạc, phủ một lớp dung dịch natri nitrat. Ống có dịch lọc phân lớp được ly tâm với tốc độ 1500-2000 vòng / phút trong 5 phút. Loại bỏ phần nổi phía trên bằng cách đảo nhanh ống. Cho 3-4 ml dung dịch axit axetic 10% và 0,5 ml ete vào ống nghiệm có kết tủa, đậy nút cao su và lắc. Lặp lại ly tâm trong 1 phút. Đổ bỏ phần nổi phía trên. Kết tủa được chuyển sang lam kính, được phủ bằng một tấm bìa và được kiểm tra dưới kính hiển vi.

NGHIÊN CỨU Y HỌC GIÚP ĐỠ NỘI TIẾT KÉP, Đờm, MÁU, URINE VÀ NẤM

Phát hiện trứng và ấu trùng giun sán trong dịch và mật tá tràng. Nghiên cứu về thành phần mật và tá tràng được thực hiện khi nghi ngờ bệnh giun sán ở gan và túi mật (bệnh sỏi mắt, sỏi clonorchiasis, bệnh giun chỉ) và tá tràng(giun lươn).

Tiến độ nghiên cứu. Nội dung tá tràng và mật (các phần A, B, C) được lấy theo cách thông thường bằng cách sử dụng đầu dò. Đối với phần B, khuyến cáo để có được phản xạ túi mật bằng cách đưa dung dịch 33% qua đầu dò magiê sunfat. Từ chất lỏng được khảo sát, các mảnh nổi trong đó được chọn và quan sát dưới kính hiển vi, sau đó nó được trộn với một lượng tương đương ete sulfuric. Hỗn hợp được lắc kỹ và ly tâm. Phần nổi phía trên được loại bỏ và toàn bộ kết tủa được kiểm tra dưới kính hiển vi.

Trong trường hợp không có mủ và chất nhầy, dịch mật và tá tràng được ly tâm mà không trộn với ete.

Kiểm tra đờm. Trong thực hành giun sán, kiểm tra đờm được thực hiện để chẩn đoán trong phòng thí nghiệm sự đồng nhất. Đôi khi, trứng sán, ấu trùng giun đũa, các yếu tố của bàng quang cầu khuẩn được phát hiện.

Phôi tự nhiên được chuẩn bị từ đờm trên lam kính, được kiểm tra dưới kính hiển vi.

Với hàm lượng mủ dồi dào trong đờm, người ta trộn lẫn với dung dịch xút hoặc kali xút 0,5%, lắc trong 5 phút và ly tâm. Lớp trầm tích được kiểm tra bằng kính hiển vi.

Nghiên cứu máu. Xét nghiệm máu nếu nghi ngờ bệnh nhân mắc bệnh giun chỉ.

Do thực tế là với một số loại bệnh giun chỉ (loiasis, bệnh wuchereriosis gây ra bởi một chủng sống dưới chu kỳ), ấu trùng (microfilariae) ở máu ngoại vi chỉ vào ban ngày, và với một số (bệnh bầm tím, bệnh wuhereriosis do một chủng định kỳ gây ra) - tương ứng chỉ vào ban đêm, lúc này họ mới lấy máu để phân tích.

Kỹ thuật lấy mẫu máu, chuẩn bị các chế phẩm (phết mỏng và nhỏ giọt dày), nhuộm chúng (theo Romanovsky) và nghiên cứu tương tự như trong phòng thí nghiệm chẩn đoán bệnh sốt rét.

microfilariae các loại khác nhau khác nhau về chiều dài, chiều rộng, độ cong của cơ thể, có hay không có nắp, hình dạng của đầu đuôi, vị trí của chất nhân trong cơ thể và vùng đuôi của ấu trùng.

Tiến độ nghiên cứu. Nước tiểu lắng ít nhất 30 phút, sau đó rút hết lớp trên cùng, để lại 10-15 ml cặn, được đổ vào ống ly tâm và ly tâm trong 1-2 phút. Sau khi làm cạn phần nổi phía trên, kết tủa được chuyển sang lam kính và được kiểm tra dưới kính hiển vi.

NGHIÊN CỨU NẤM SINH HỌC

Phương pháp nội soi Trichinoscopy. Nhu cầu nghiên cứu các mẫu sinh thiết cơ của bệnh nhân nảy sinh khi nghi ngờ mắc bệnh giun xoắn.

Sinh thiết được thực hiện theo các quy tắc chung. Cơ delta thường được sinh thiết. Trong quá trình khám bệnh, có thể làm sinh thiết các cơ hoành, thực quản, lưỡi, cơ nhai và cơ liên sườn, cơ gấp các chi, cơ nhãn cầu, vì chúng bị ấu trùng Trichinella ảnh hưởng nhiều nhất.

Trong phòng thí nghiệm, một mảnh cơ được sinh thiết được cắt thành các mảnh rất nhỏ (microtome), được đặt giữa hai kính, nghiền nát các sợi cơ và được kiểm tra dưới kính hiển vi. Hiện nay, kính hiển vi đặc biệt, kính hiển vi trichinelloscope, được sử dụng rộng rãi cho mục đích này.

Trong trường hợp mắc bệnh trichinosis, soi da trichinosit dọc theo các thớ cơ cho thấy các nang trichinosis hình bầu dục (giống quả chanh) nổi rõ. Kích thước trung bình của viên nang người là 0,4 x 0,26 mm. Quả nang, theo quy luật, chứa một con trichinella được gấp theo hình xoắn ốc thành 2,5 vòng. Với cường độ xâm nhập cao, một nang có thể chứa 2 hoặc 3 ấu trùng. Các sợi cơ tiếp giáp với nang mất đi vân ngang và có vẻ ngoài đồng nhất.

Thịt được kiểm tra theo cách tương tự sản phẩm thịtđã gây ra nhiễm trùng.

Phương pháp tiêu hóa cơ bắp. Phương pháp này hiệu quả hơn.

Tiến độ nghiên cứu. Các cơ được nghiên cứu được cắt nhỏ và đổ đầy dịch vị nhân tạo theo tỷ lệ 1: 15-20. Hỗn hợp thu được được đặt trong máy điều nhiệt ở 37 ° C trong 12-16 giờ. Sau khoảng thời gian này, trầm tích được soi bằng kính hiển vi, trong đó ấu trùng Trichinella tự do được tìm thấy trong số phần còn lại của các sợi cơ đã tiêu hóa.

Dịch vị nhân tạo có thể mua ở hiệu thuốc hoặc được bào chế trong phòng thí nghiệm. Để làm điều này, thêm 10 ml axit clohydric đậm đặc vào 1 lít nước cất; Trước khi sử dụng, 30 g pepsin được thêm vào 1 lít axit pha loãng.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG

Phương pháp nghiên cứu định lượng được sử dụng để xác định cường độ xâm lấn, đánh giá hiệu quả của các loại thuốc tẩy giun sán khác nhau, xác định chất lượng tẩy giun, theo dõi các biện pháp điều trị và phòng ngừa hàng loạt đang diễn ra, v.v.

Việc xác định định lượng trứng giun sán được thực hiện bằng hai phương pháp: phương pháp Stoll và phương pháp của Krasilnikov và Volkova (1974).

Phương pháp Stoll. Để tiến hành nghiên cứu, bạn phải có kính hiển vi, bình thủy tinh có vạch 56 và 60 ml, ống đong, hạt thủy tinh, nút cao su cho bình, pipet chia độ, lam kính và dung dịch natri hydroxit 0,4%.

Tiến độ nghiên cứu. Đổ dung dịch natri hydroxit không thông thường (nồng độ khoảng 0,4%) vào bình có ống đong đến vạch 56 ml và thêm phân cho đến khi mức chất lỏng đạt 60 ml (tức là 4 ml phân). Lắc kỹ hỗn hợp bằng hạt thủy tinh trong 1 phút, đậy bình bằng nút cao su (bạn cũng có thể trộn bằng que). Ngay sau khi lắc, 0,075 ml hỗn hợp được lấy bằng pipet chia độ (nó chứa 0,005 ml phân), chuyển sang lam kính và số lượng trứng trong chế phẩm được đếm dưới kính hiển vi. Để xác định số trứng trong 1 g phân, người ta nhân số tìm được với 200.

So sánh số lượng trứng trong chế phẩm, được tìm thấy ở bệnh nhân trước và sau khi điều trị, cho phép chúng tôi đánh giá hiệu quả của việc tẩy giun.

Phương pháp của Stoll rất đơn giản, cho kết quả có thể so sánh được ở tất cả các loại giun sán, mầm bệnh tiết trứng một cách có hệ thống vào ruột của bệnh nhân. Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp là độ nhạy tương đối thấp, đặc biệt ở cường độ xâm lấn thấp.

Phương pháp Krasilnikov-Volkova. Khi kiểm tra phương pháp này, ít nhất 1 g phân được trộn trong bình thủy tinh hoặc ống nghiệm lớn với dung dịch Lotus 1% (hoặc dung dịch Extra 1,5%) theo tỷ lệ 1:10. Lắc kỹ huyền phù cho đến khi tạo thành huyền phù đồng nhất, sau đó lấy nhanh 0,1 ml huyền phù (tương đương 0,01 g phân) bằng pipet chia độ và chuyển sang lam kính. Chế phẩm được bao phủ bởi một tấm kính hoặc giấy bóng kính (20 x 30 mm), được ủ ít nhất một ngày trong 50% dung dịch nước glixerin.

Đếm số lượng trứng trong toàn bộ quá trình chuẩn bị. Để tính số lượng trứng trong 1 g phân, số kết quả phải được nhân với 100.

Phương pháp này có một số ưu điểm so với phương pháp Stoll. Thứ nhất, nó nhạy hơn và cho phép phát hiện giun sán với mức độ xâm nhập thấp. Thứ hai, rất thuận tiện cho việc kiểm tra hàng loạt, vì dung dịch tẩy rửa, là chất bảo quản trứng giun sán, nên có thể thực hiện các nghiên cứu đối với nguyên liệu không hoàn toàn tươi. Tuy nhiên, điều kiện tiên quyết cho việc này là gom phân trực tiếp vào dung dịch tẩy rửa.

Đối với nghiên cứu định lượng, có thể sử dụng bất kỳ phương pháp định tính thống nhất nào được mô tả dựa trên nguyên tắc trứng nổi. Nhưng trong trường hợp này, cùng một lượng phân, cùng một thể tích dung dịch tuyển nổi để phân tích. Có thể tính toán mức độ xâm nhập, biết số lượng trứng trong 1 g phân, theo bảng dưới đây.

Cường độ xâm nhập tùy thuộc vào số lượng trứng giun sán

trong 1 g phân

CHẨN ĐOÁN HÌNH HỌC

Các phương pháp này, dựa trên việc phát hiện các kháng thể cụ thể trong huyết thanh, được sử dụng cho các mục đích chẩn đoán và sàng lọc.

Các phương pháp huyết thanh học bao gồm:

Phản ứng kết tủa vòng (RCP) (bệnh giun xoắn, bệnh nang sán);

Phản ứng kết tủa vòng trong ống nghiệm ở nhiệt độ lạnh (bệnh giun xoắn, bệnh nang sán);

Phản ứng vi kết tủa trên ấu trùng sống (trichinosis, ascariasis);

Phản ứng của quá trình đông máu gián tiếp (RIHA) (trichinosis, echinococcosis, alveococcosis, cysticercosis, v.v.);

Phản ứng ngưng kết latex (RAL) (echinococcosis, phế cầu, trichinosis, teniarinhoz, v.v.);

Phản ứng cố định bổ thể (RCC) (trichinosis, echinococcosis, cysticercosis);

Phản ứng của các kháng thể đánh dấu enzym (REMA) (echinococcosis, onchocerciasis, schistosomiasis, trichinosis, toxocariasis);

ELISA (trichinosis, opisthorchiasis, toxocariasis, toxoplasmosis, v.v.).

Để thiết lập các phản ứng huyết thanh học, các kháng nguyên tiêu chuẩn được tạo ra hoặc chúng được điều chế độc lập (ví dụ, từ bệnh bạch cầu echinococcal của cừu), các hệ thống xét nghiệm đặc biệt cho ELISA được sản xuất.

Phương pháp đặc biệt nghiên cứu về bệnh enterobiosis, taeniarhynchosis, taeniasis

Nạo từ các nếp gấp quanh hậu môn. Để cạo các nếp gấp quanh hậu môn, bạn có thể dùng thìa gỗ, dải giấy bóng kính, giấy hoặc băng dính xenlulo, dán mắt bằng lớp keo đặc biệt:

a) cạo bằng thìa gỗ (thìa là que diêm hoặc que dẹt) được làm ẩm bằng dung dịch glycerin 1% (hoặc dung dịch 0,5% Uống soda), được thực hiện bằng cách cạo nhẹ từ bề mặt của các nếp gấp quanh hậu môn xung quanh toàn bộ chu vi của hậu môn. Việc nạo kết quả được chuyển với mép của tấm bìa từ cuối dao trộn sang lam kính trong một giọt dung dịch glycerol 50%, được phủ bằng cùng một tấm bìa và được soi bằng kính hiển vi. Nhược điểm của phương pháp là không phát hiện được trứng và có tác dụng gây khó chịu;

b) theo phương pháp Torgushin, xả nước được thực hiện tăm bông trên một thìa gỗ hoặc thìa khác được làm ẩm bằng dung dịch 50% của glyxerin, và chuẩn bị một vết bẩn trên lam kính trong một giọt glyxerin;

c) theo phương pháp Kevorkova, khoảng 5 ml được đổ vào ống ly tâm nước đun sôi, đặt một chiếc thìa (que) có tăm bông vào đó. Trước khi lấy nguyên liệu, tăm bông được ép nhẹ vào thành trong của ống nghiệm, dùng nó lau các nếp gấp quanh hậu môn và dùng thìa có gắn tăm bông vào trong ống nghiệm. Tampon trong ống nghiệm được lắc kỹ, rửa ly tâm trong 3 phút, và kiểm tra kết tủa thu được dưới kính hiển vi;

d) cạo bằng băng dính theo Graham. Một miếng băng dính (loại băng polyetylen trong suốt có lớp dính để trẻ sáng tạo, nhưng tốt hơn là dùng màng mổ LPO-1, LPO-2) dài 8-10 cm được dán một lớp dính vào các nếp gấp quanh hậu môn của da, giữ nó bằng các đầu, và sau đó được chuyển vào kính chủ đề với một lớp dính xuống (các đầu của băng kéo dài ra ngoài các cạnh của kính được cắt ra), kính được đánh số và dữ liệu của bệnh nhân và số kính được ghi vào nhật ký. Trong phòng thí nghiệm, băng được bóc ra ở một đầu trên một khoảng cách dài, nhỏ 1-2 giọt dầu vaseline hoặc glycerin dưới đó (để loại bỏ các khuyết tật quang học) và được soi bằng kính hiển vi;

e) Cạo bằng que mắt thủy tinh, bề mặt được phủ một lớp chất kết dính đặc biệt. Gậy mắt được lắp vào một giá ba chân đặc biệt. Vật liệu được lấy bằng cách tiếp xúc phần phẳng của thìa với da của lỗ quanh hậu môn. Sau đó, thanh được cố định một lần nữa trong giá ba chân để vận chuyển. Kính hiển vi được thực hiện trực tiếp trên dao bào ở cả hai mặt (không có phiến kính và nắp đậy) với việc buộc sơ bộ trong băng cassette ở độ phóng đại thấp (thị kính x 10, vật kính x 8). Khi kết thúc công việc, các thanh được khử trùng bằng cách đun sôi trong dung dịch xà phòng, chân máy và băng cát xét được xử lý bằng cồn và rửa sạch bằng dung dịch soda xà phòng. Thành phần keo: cleol - 10 g, Dầu thầu dầu- 2,5 g, ete etylic - 5 g, rượu etylic 96% - 2,5 g.

Các que cấy được nhúng vào dung dịch keo, sau đó được làm khô trong không khí ở nhiệt độ phòng. Lớp màng kết dính hình thành trên bề mặt vẫn tồn tại trong vài ngày.

Phương pháp này thuận tiện cho việc kiểm tra hàng loạt quần thể trẻ em để tìm bệnh enterobiosis và dân số trưởng thành đối với bệnh teniidoses.

Ngoài phương pháp nạo hạch đối với chứng viêm bao gân và tắc vòi trứng, phương pháp khảo sát và phương pháp vĩ mô được mô tả ở trên (khi phát hiện các phân đoạn) cũng được sử dụng.

Các phương pháp nghiên cứu đặc biệt đối với bệnh giun lươn

Phương pháp ether-acetic được sử dụng để phát hiện trứng (xem ở trên) và phương pháp Berman để phát hiện ấu trùng trong phân.

Phương pháp Berman. Kiểm tra phân tươi, tốt hơn sau khi uống thuốc nhuận tràng. 5 g mẫu phân được đặt trên một rây kim loại (lưới được lót bên trong bằng hai lớp gạc) trong một phễu thủy tinh được cố định trong giá ba chân. Một ống cao su có kẹp được đặt ở đầu dưới của phễu (thiết bị của Berman).

Lưới có phân được nâng lên và nước được làm nóng đến 40-50 ° C được đổ vào phễu để phần dưới của lưới được nhúng trong nước và phân được bao phủ hoàn toàn trong nước. Sau 2-4 giờ, kẹp trên ống cao su nhanh chóng được mở ra, và chất lỏng đi xuống ống ly tâm. Sau khi ly tâm (1-2 phút) phần trên chất lỏng nhanh chóng được thoát ra, và kết tủa với lượng 1 ml được phủ thành một lớp mỏng trên lam kính và soi dưới kính hiển vi có độ phóng đại thấp.

Phương pháp IMP và TM. Một phần phân có kích thước bằng quả hạch được cho vào cốc đựng hóa chất, đổ nước muối ấm 40 ° C vào sao cho phân phủ kín dung dịch, để trong 20 phút. Sau 20 phút, chất lỏng được đổ vào đĩa Petri và được quan sát dưới kính hiển vi hai mắt MBS.

Để chẩn đoán bệnh giun lươn, đặc biệt để theo dõi hiệu quả điều trị, nên kết hợp phương pháp Berman với nghiên cứu nội dung tá tràng.

Các phương pháp nghiên cứu đặc biệt đối với bệnh giun tròn

Nematoses

Bệnh giun đũa

Trong niên đại, người ta chú ý đến thái độ làm vườn, làm vườn. Ăn các loại rau sống, gỏi chế biến từ các loại rau này.

Biểu hiện lâm sàng của giai đoạn đầu của bệnh giun đũa là do cơ thể có những thay đổi dị ứng. Giai đoạn ấu trùng di trú hoặc sớm của bệnh giun đũa thường xảy ra với biểu hiện sốt với nhiệt độ cơ thể từ 38 ° trở lên, với một phức hợp triệu chứng tổn thương phổi và sự hiện diện của tăng bạch cầu ái toan trong máu nghiêm trọng. Trong hầu hết các trường hợp, ở trẻ em, các dấu hiệu đầu tiên của bệnh là khó chịu, suy nhược, nhức đầu tái phát, đổ mồ hôi, và đôi khi đau cơ và khớp. Thường có phát ban dạng mày đay nhiều kèm theo ngứa dữ dội hoặc trung bình. Chẩn đoán giai đoạn đầu được xác nhận bởi các nghiên cứu X-quang cho sự hiện diện của các hạt dễ bay hơi trong phổi. thâm nhiễm bạch cầu ái toan Leffler. Soi đờm tươi thường thấy các tế bào bạch cầu ái toan, hồng cầu, tinh thể Charcot-Leiden và ấu trùng giun đũa.

Trong giai đoạn hình ảnh ruột của bệnh giun đũa, có sự kết hợp của các biểu hiện từ hội chứng tiêu hóa và suy nhược, ruột triệu chứng đau. Ở trẻ em, thường có sự sụt giảm về trọng lượng, đôi khi khá đáng kể. Buồn nôn, tăng tiết nước bọt, khó chịu, giữ chân phát triển tâm lý, trí tuệ giảm sút.

Để chẩn đoán trong phòng thí nghiệm của st ruột

Ershova I.B., Osychnyuk L.M., Mochalova A.A., Tổ chức Nhà nước "Bang Lugansk đại học Y”, Khoa Nhiễm nhi đồng.
Bài báo đã được đăng trên tạp chí "Actual Infectology", số 2 (3), 2014.
Nguồn thông tin "Nhà xuất bản Zaslavsky" www.mif-ua.com

Bài báo mô tả các phương pháp chẩn đoán sự xâm nhập của giun xoắn: xét nghiệm miễn dịch bằng kính hiển vi, enzym, huyết thanh học, phản ứng chuỗi polymerase, chẩn đoán nguồn gốc sinh học, quét máu, cũng như dụng cụ (siêu âm và chụp X-quang, chụp cắt lớp vi tính) và phòng thí nghiệm, có ý nghĩa gián tiếp ( phân tích lâm sàng xét nghiệm máu, xét nghiệm gan, xét nghiệm phân tìm vi khuẩn gây bệnh). Các ưu điểm của các phương pháp, nhược điểm của chúng và độ tin cậy của dữ liệu thu được được mô tả. Bảng câu hỏi được đề xuất cho bệnh nhân để xác định nguy cơ nhiễm giun sán. Các ưu điểm của các phương pháp, nhược điểm của chúng và độ tin cậy của dữ liệu thu được được mô tả. Bảng câu hỏi được đề xuất cho bệnh nhân để xác định nguy cơ nhiễm giun sán.

Giun sán có ảnh hưởng xấu đến cơ thể con người. Chúng dẫn đến dị ứng, sự phát triển của polyhypovitaminosis, tăng sinh vi lượng và vĩ mô, suy giảm khả năng tạo máu và tính thấm thành mạch, và mất cân bằng nội tiết tố. Helminthiases góp phần hình thành các bệnh mãn tính (viêm túi mật, sỏi đường mật, viêm tụy, viêm đại tràng, Bệnh tiểu đường, hen phế quản, viêm da dị ứng), rối loạn tâm thần ( mệt mỏi mãn tính, cáu kỉnh, lo lắng, tăng động ở trẻ em), thiếu máu, vv Với sự xâm nhập kéo dài của giun sán, suy giảm miễn dịch thứ phát có thể phát triển.

Sự cảnh giác của các bác sĩ về bệnh giun sán trong người dân hiện không đủ và việc phòng ngừa bị giảm xuống việc điều trị những bệnh nhân bị nhiễm trùng đã được xác định.

Chẩn đoán bệnh giun sán dựa trên dữ liệu dịch tễ học lâm sàng và phòng thí nghiệm. Các dấu hiệu như hội chứng suy nhược, mày đay tái phát, suy giảm khả năng tái tạo da và niêm mạc, viêm da dị ứng khó điều trị và hội chứng tắc nghẽn phế quản, bệnh đa hạch và gan lách to không rõ nguồn gốc, thực vật adenoid độ II-III, lưỡi "địa lý", giảm hoặc ăn có chọn lọc, phân không ổn định, có thể cho thấy sự hiện diện của giun sán.

Tại nghiên cứu huyết thanh học xác định sự hiện diện của kháng thể đối với giun sán (độ tin cậy - khoảng 60%): nếu nghi ngờ nhiễm echinococcosis, cysticercosis, trichinosis, toxocariasis, ngưng kết máu gián tiếp, ngưng kết mủ, cố định bổ thể, phản ứng miễn dịch huỳnh quang được sử dụng rộng rãi.
Không phải trong mọi trường hợp, các phương pháp xác định kháng thể đặc hiệu đều có đủ độ đặc hiệu và độ tin cậy. Thành phần kháng nguyên của giun sán không chỉ phụ thuộc vào loài, mà còn phụ thuộc vào giai đoạn; trải qua một chu kỳ phát triển phức tạp từ trứng đến người lớn, giun sán thay đổi thành phần kháng nguyên. Ngoài ra, các kháng thể soma được sử dụng trong các phản ứng chẩn đoán miễn dịch, và trong cơ thể vật chủ, các kháng thể được tạo ra chủ yếu chống lại sự bài tiết và bài tiết của giun sán. Sự nhạy cảm không đặc hiệu của cơ thể, sự giống nhau của một số kháng nguyên của sán lá, động vật nguyên sinh và người tạo ra một tỷ lệ cao các phản ứng dương tính giả ở các hiệu giá dưới mức chẩn đoán đáng tin cậy.

Phương pháp xác định giun sán bằng phản ứng chuỗi polymerase có độ đặc hiệu cao và độ nhạy cao, nhưng do chi phí cao và phức tạp nên không thể sàng lọc khi, ví dụ, một nhóm trẻ từ cơ sở trẻ em cần được khám.

Hệ thống miễn dịch không phải lúc nào cũng phản ứng (nhận biết và tiêu diệt) với sự hiện diện của giun sán trong cơ thể. Điều này là do một số loài giun sán có một viên nang kháng hóa chất và mạnh hoặc được phủ một chất không thể nhận biết được. Hệ thống miễn dịch; khu trú trong các mô được bảo vệ tốt nhất khỏi các phản ứng viêm, ví dụ, ở tủy sống; nhiều loài tiết ra chất chống lại enzym trong đường tiêu hóa, giúp cứu chúng khỏi cái chết; có tuổi thọ cao (trong nhiều năm, và đôi khi cho đến khi bản thân người đó qua đời); ăn vào quá trình đường phân của cacbohydrat tinh khiết; có các thiết bị như cốc hút, móc, v.v., góp phần cố định bên trong cơ thể; ở nhiều loài có sinh sản hữu tính, trong đó xảy ra sự trao đổi thông tin di truyền làm tăng quần thể dị hợp, giảm tính dễ bị tổn thương; sở hữu cấp độ cao khả năng sinh sản.

Tại siêu âm , Kiểm tra X-quang các cơ quan khoang bụng , Chụp cắt lớp vi tính Có thể nhận biết các dấu hiệu gián tiếp của bệnh giun sán: gan lách to, nhu mô gan và lá lách không đồng đều do các tín hiệu phản âm nhỏ, các hạch to ở hông lá lách và các ổ giun sán (giun xoắn, các đám rối của giun đường ruột, v.v.).

Hemoscanning - một nghiên cứu định tính về máu bằng kính hiển vi trường tối mạnh, bạn có thể thấy trạng thái của các tế bào máu (hình dạng, kích thước, hoạt động, màu sắc, v.v.), sự hiện diện của các yếu tố và chất không cụ thể - tất cả điều này trực tiếp hoặc gián tiếp cho biết sự hiện diện của giun sán trong cơ thể. Hình ảnh được hiển thị trên màn hình điều khiển bằng máy quay video tích hợp trong kính hiển vi. Phương pháp chẩn đoán này có độ tin cậy cao.

Phòng thí nghiệm gián tiếp dấu hiệu bệnh giun sán có thể bị thiếu máu, tăng bạch cầu ưa kiềm, tăng bạch cầu ái toan, tăng nồng độ aspartate aminotransferase. Vì vậy, với bệnh giun đũa chó, một phản ứng bạch cầu ái toan của bạch cầu ái toan (hơn 20%) được phát hiện dựa trên nền tảng dai dẳng hội chứng dị ứng(viêm da dị ứng với ngứa dữ dội và kháng liệu pháp truyền thống, hen phế quản nặng). Sự ức chế của E. coli bình thường trong phân tích phân để tìm vi khuẩn gây rối loạn sinh học cũng có thể cho thấy khả năng mắc bệnh giun sán.

Với sự phổ biến của bệnh giun sán, chúng tôi đề nghị bảng câu hỏiđể xác định nguy cơ nhiễm giun sán.

• Bơi trong nước ngọt.
• Không rửa tay trước khi ăn bằng xà phòng và nước nóng.
• Uống nước từ các nguồn chưa được kiểm chứng.
• Ăn mỡ lợn tự làm với những miếng thịt.
• Ăn cá muối.
• Ăn thịt chưa nấu chín (có lẫn máu).
• Ăn trứng cá muối nhẹ không phải do nhà máy sản xuất.
• Không rửa trứng gà bằng xà phòng.
• Không rửa chuối, cam, quýt trước khi sử dụng.
• Bón phân cho khu vườn của bạn.
• Ăn rau ngay từ vườn.
• Ăn trái cây và quả mọng trực tiếp từ vườn.
• Tiêu thụ quả rụng.
• Không nên trụng qua tất cả rau xanh với nước sôi để làm salad.
• Bảo quản cà rốt trong cát lấy từ sân.
• Đi chân trần trên cỏ.
• Các thành viên trong gia đình bị nhiễm giun sán.
• Gia đình có một con chó hoặc một con mèo.

Cho mọi câu trả lời Đúng"- 2 điểm," thỉnh thoảng" - một, " Không»- 0. Với số điểm 0-5, khả năng lây nhiễm không đáng kể, 6-12 - khả năng lây nhiễm, 13-25 - khả năng cao, hơn 25 điểm - rất cao. Với hai kết quả cuối cùng, việc kiểm tra thường xuyên và có thể là điều trị dự phòng là cần thiết.

Vì các biểu hiện lâm sàng của bệnh giun sán không phải lúc nào cũng đặc hiệu và ở giai đoạn đầu không đặc hiệu, chúng tôi đưa ra một bảng câu hỏi cho bệnh nhân tự chẩn đoán bệnh giun sán.

• Có ngứa ở hậu môn vào buổi sáng.
• Buồn nôn vào buổi sáng khi đánh răng.
• Bong tróc các ngón tay hoặc ngón chân, có lớp da bong tróc.
• Phát ban dị ứng trên da, ngứa da.
• Lột và sưng ở mí mắt.
• Tăng mệt mỏi, thờ ơ, buồn ngủ.
• Tăng cảm giác đói.
• Cảm giác khó chịu ở bụng.
• Giảm cân.
• Sự hiện diện của nhiều bệnh nội tạng mãn tính đường tiêu hóa, khớp, hệ thống phế quản phổi.
• Sức khỏe kém, không có chẩn đoán chính thức, điều trị kéo dài không hiệu quả.
• Nhiệt độ tăng theo chu kỳ, kèm theo đau cơ và khớp.

Câu trả lời " Đúng" trên ít nhất cho 2-3 câu hỏi nói về xác suất cao nhiễm giun sán.

KẾT LUẬN

1. Bật giai đoạn hiện tại không có phương pháp phòng thí nghiệm nào để kiểm tra giun sán đáng tin cậy 100%.

2. Polymerase Phản ứng dây chuyền và chẩn đoán nguồn gốc sinh học.

THƯ MỤC

Kiểm tra phân

Kính hiển vi lần đầu tiên được thực hiện ở độ phóng đại thấp (X80). Đơn giản nhất có thể được thay thế bằng khúc xạ ánh sáng mạnh hơn, và một số loài do chuyển động hoặc thay đổi hình dạng của chúng. Một vật thể nhìn thấy ở độ phóng đại thấp được kiểm tra ở độ phóng đại 400 hoặc 600. Nếu không có kinh nghiệm, nên xem ngay các vết bẩn ở độ phóng đại cao, tuy nhiên, điều này làm tăng đáng kể thời gian nghiên cứu pha chế. Xem vết bẩn ở độ phóng đại cao nên được thực hiện trong ánh sáng mạnh hơn, điều chỉnh nó bằng một tụ điện.

dấu hiệu khác biệt một số loại amoebas trong phết tế bào gốc là hình dạng và kích thước của cơ thể, khả năng hiển thị của nhân, bản chất của sự hình thành giả trứng, sự di chuyển, sự phân chia tế bào chất thành ecto- và endoplasm, bản chất của thể vùi (hồng cầu thực bào, vân vân.). Khi phân biệt các loài trùng roi - kích thước và hình dạng của cơ thể, số lượng trùng roi, bản chất của sự di chuyển, sự có hay không của một lớp màng nhấp nhô. Các tính năng cụ thể của balantidia là kích thước, hình dạng cơ thể, chuyển động, lông mao, cytostome, v.v.

Đặc điểm phân biệt chính của các hình thức sinh dưỡng của động vật nguyên sinh ở trạng thái sống là di chuyển. Tìm thấy trong vết bẩn các loại hình thành cố định - sợi thực vật, sợi cơ, bào tử, nấm, v.v. Chúng không nên được tính đến trong chẩn đoán nguyên sinh.

Phương pháp phết tế bào gốc rất đơn giản và có thể truy cập được đối với bất kỳ phòng thí nghiệm nào. Nó cho phép, khi tìm thấy các dạng mô của amip lỵ có hồng cầu thực bào, chẩn đoán chính xác tuyệt đối về bệnh lỵ amip, và khi phát hiện bệnh Balantidia và giardia, chẩn đoán bệnh Balantidiasis và bệnh giardia được thực hiện.

Nhuộm vết bẩn bằng dung dịch Lugol . Nhuộm này dùng để chẩn đoán xác định nguyên sinh bằng nang. Nó được sử dụng trong nghiên cứu phân chính thức, bán hình thành và nhão.

Để chuẩn bị vết bẩn, phần cuối của một thanh gỗ bị dính phân và rửa sạch trong một giọt dung dịch iốt (J - 1,0 g, KJ - 2 g, nước cất - 100 ml), bôi lên lam kính cho đến khi tạo thành nhũ tương đồng nhất. thu được. Việc chuẩn bị được bao phủ bởi một tấm bìa và sau 3-5 phút. vi mô. Vết bẩn phải đủ trong suốt để nghiên cứu dưới ánh sáng truyền qua.

Trong số những tàn tích thức ăn khó tiêu, bào tử, nấm, bào tử đơn bào vi khuẩn ưa iốt, sơn màu nâu hoặc màu vàng lục, được phân biệt bằng một đặc điểm xác định chặt chẽ, đặc trưng cho từng loài về hình dạng, kích thước, đường viền rõ ràng của các cạnh, sự hiện diện của một đôi mịn, trong suốt, màng mạch, nội dung của tế bào chất, cũng như sự hiện diện của nhân có cấu trúc không rõ ràng. Trong nang amip, có thể nhìn thấy các không bào glycogen có màu nâu (nâu sẫm). Mức độ màu sắc của các không bào này và đường viền ranh giới của chúng khác nhau trong các nang đơn bào của cùng một loài, tùy thuộc vào sự trưởng thành của chúng.

7.7. Phương pháp xác định khả năng sống của trứng và ấu trùng giun sán

Khả năng tồn tại của trứng giun sán được xác định bởi sự xuất hiện của chúng, bằng cách nhuộm bằng thuốc nhuộm quan trọng, bằng cách nuôi cấy trong điều kiện tối ưu và bằng cách thiết lập một mẫu sinh học.

7.7.1. Xác định khả năng tồn tại của trứng hoặc ấu trùng giun sán theo bề ngoài

Đầu tiên, trứng giun xoắn được soi bằng kính hiển vi ở độ phóng đại thấp, sau đó ở độ phóng đại cao. Trong trứng giun sán bị biến dạng và chết, vỏ bị rách hoặc cong vào trong, huyết tương đục, lỏng. Ở trứng đã phân đoạn, bóng phân cắt (blastomere) có kích thước không bằng nhau, hình dạng không đều và thường lệch về một cực. Đôi khi có những trứng bất thường, có dị tật bên ngoài, phát triển bình thường. Ở ấu trùng giun đũa còn sống, dạng hạt mịn chỉ có ở phần giữa cơ thể, khi chúng chết đi sẽ lan ra khắp cơ thể, xuất hiện các không bào hyalin bóng lớn, gọi là "chuỗi ngọc".

Để xác định khả năng tồn tại của trứng trưởng thành của giun đũa, giun roi, giun kim, cần thực hiện chuyển động tích cực của ấu trùng bằng cách đun nóng nhẹ chế phẩm (đến nhiệt độ không quá 37 ° C). Sẽ thuận tiện hơn khi quan sát khả năng tồn tại của ấu trùng giun đũa và giun đũa sau khi chúng được phân lập khỏi vỏ trứng bằng cách dùng kim hoặc nhíp chọc vào kính đậy của chế phẩm.

Ở ấu trùng xâm nhập của giun đũa, người ta thường thấy một cái nắp đã tróc ra ở phần đầu, và ở ấu trùng của trùng roi đã hoàn thành quá trình phát triển trong trứng, người ta tìm thấy một chiếc mũ ở nơi này ở độ phóng đại cao. Ấu trùng giun sán chết, bất kể vị trí của chúng (trong trứng hay bên ngoài nó), nhận thấy sự phân hủy của cơ thể. Trong trường hợp này, cấu trúc bên trong của ấu trùng trở nên vón cục hoặc dạng hạt, và cơ thể trở nên đục và trắng đục. Không bào được tìm thấy trong cơ thể, và các vết vỡ được tìm thấy trên lớp biểu bì.

Khả năng tồn tại của các cầu khuẩn teniid (bò, sán dây lợn, v.v.) được xác định bởi sự di chuyển của phôi khi chúng tiếp xúc với các enzym tiêu hóa. Trứng được đặt trên kính đồng hồ có dịch dạ dày của chó hoặc dịch tá tràng nhân tạo. Thành phần của thuốc sau: pancreatin - 0,5 g, natri bicarbonat - 0,09 g, nước cất - 5 ml. Kính đồng hồ có trứng được đặt trong tủ nhiệt 36 - 38 ° C trong 4 giờ. Trong trường hợp này, các phôi sống được giải phóng khỏi màng. Vỏ của các quả cầu sống cũng hòa tan trong pepsin đã axit hóa và trong dung dịch kiềm của trypsin sau 6-8 giờ trong máy điều nhiệt ở 38 ° C.

Nếu đặt trứng chín trong dung dịch natri sulfua 1% hoặc dung dịch natri hypoclorit 20%, hoặc trong dung dịch nước clo 1% ở 36 - 38 ° C, phôi trưởng thành và sống sẽ thoát ra khỏi vỏ và không thay đổi trong 1 ngày. Các tế bào nội tạng chưa trưởng thành và chết co lại hoặc sưng và to ra một cách đột ngột và sau đó "tan biến" trong vòng 10 phút đến 2 giờ. Phôi sống của teniids cũng tích cực di chuyển trong hỗn hợp dung dịch natri clorua 1%, dung dịch natri bicarbonat 0,5% và mật ở 36 - 38 ° C.

Khả năng tồn tại của sán lá gan lớn được thu thập từ thực vật và các đối tượng khác của thủy vực được kiểm tra bằng cách kiểm tra chúng trên lam kính trong nước muối dưới kính hiển vi có giai đoạn gia nhiệt. Khi bị đốt nóng, ấu trùng sán lá trong nang bắt đầu di chuyển.

Để xác định khả năng tồn tại của trứng của sán dây lùn, phương pháp của Ionina N.S. là đơn giản nhất: ở trứng sống, cặp móc giữa của phôi hoặc song song với cặp bên, hoặc cặp móc sau tạo thành một góc ở gốc nhỏ hơn hơn 45 ° với đường trung bình. Ở những quả trứng chết, các cặp bên tạo thành một góc ở gốc với một cặp trung vị hơn 45 °, hoặc các cặp móc nằm rải rác ngẫu nhiên (sự sắp xếp cặp đôi của chúng bị mất); đôi khi có sự nhăn nheo của phôi, sự hình thành của hạt. Một phương pháp chính xác hơn là dựa trên sự xuất hiện của các chuyển động của oncosphere khi nhiệt độ thay đổi mạnh: từ 5 - 10 ° đến 38 - 40 ° C.

Cần nghiên cứu xác định khả năng sống của trứng giun tròn chưa trưởng thành trong buồng ẩm (đĩa Petri), đặt trứng giun đũa vào dung dịch formalin 3% được pha trong dung dịch natri clorua đẳng trương ở nhiệt độ 24 - 30 ° C, cho trứng giun đũa vào dung dịch 3. dung dịch axit clohydric% ở nhiệt độ 30 - 35 ° C; trứng giun kim trong dung dịch natri clorua đẳng trương ở 37 ° C. Nên mở đĩa petri 1 đến 2 lần một tuần để thông khí tốt hơn và làm ẩm lại giấy lọc bằng nước sạch.

Việc quan sát sự phát triển của trứng giun sán được thực hiện ít nhất 2 lần một tuần. Việc không có dấu hiệu phát triển trong vòng 2-3 tháng cho thấy khả năng tồn tại của chúng. Dấu hiệu nhận biết sự phát triển của trứng giun sán trước hết là giai đoạn nghiền nát, phân chia các chất chứa trong trứng thành các phôi bào riêng biệt. Trong những ngày đầu tiên, có tới 16 phôi bào phát triển, chúng chuyển sang giai đoạn thứ hai - phôi dâu, v.v.

Trứng giun móc được nuôi trong ống trụ thủy tinh (cao 50 cm, đường kính 7 cm) đậy kín bằng nút. Một hỗn hợp gồm cát, than và phân vô trùng có thể tích bằng nhau với trứng giun móc, được pha loãng với nước đến độ sệt bán lỏng, được cẩn thận đổ lên đáy ống đong bằng ống thủy tinh. Trong thời gian 1 - 2 ngày sống trong bóng tối ở nhiệt độ 25 - 30 ° C, ấu trùng rhabditoid nở ra từ trứng, và sau 5 - 7 ngày, chúng trở thành dạng filariform: ấu trùng bò lên thành hình trụ, nơi chúng có thể nhìn thấy bằng mắt thường.

Trứng sán lá phát triển tự nhiên trong nước, chẳng hạn như opisthorchis, diphyllobothriids, sán lá gan nhỏ, và những loài khác, được đặt trên kính đồng hồ, đĩa Petri hoặc trong một bình khác và đổ một lớp nhỏ nước thông thường. Khi nuôi cấy trứng sán lá gan lớn, cần lưu ý rằng chúng phát triển nhanh hơn trong bóng tối, trong khi magie được hình thành trong trứng sống ở nhiệt độ 22–24 ° C sau 9–12 ngày. Khi soi kính hiển vi trứng sán lá đang phát triển, có thể nhìn thấy rõ các chuyển động của vi khuẩn. Fasciola magicidium chỉ xuất hiện từ vỏ trứng khi có ánh sáng.

Phương pháp Fulleborn. Ấu trùng giun móc và giun lươn được nuôi cấy trên thạch trong đĩa Petri với than động vật. Sau khi giữ trong tủ điều nhiệt ở nhiệt độ 25 - 30 ° C trong 5 - 6 giờ, ấu trùng lây lan trên thạch, để lại đường dẫn vi khuẩn.

Phương pháp của Harada và Mori. 7 ml nước cất được cho vào các ống nghiệm đặt trong giá đỡ. Lấy 0,5 g phân bằng que gỗ và làm vết bẩn trên giấy lọc (15 x 150 mm) cách mép trái 5 cm (thao tác này được thực hiện trên tờ giấy để bảo vệ bề mặt bàn thí nghiệm). Sau đó, dải có vết bẩn được đưa vào trong ống sao cho đầu bên trái không có vết bẩn chạm đến đáy ống. Dùng giấy bóng kính che đầu trên và dùng dây thun quấn chặt lại. Trên ống nghiệm ghi số hiệu, tên môn học. Ở trạng thái này, các ống nghiệm được bảo quản trong 8 - 10 ngày ở nhiệt độ 28 ° C. Để nghiên cứu ấu trùng, lấy và gỡ bỏ lớp giấy bóng kính và dùng nhíp lấy một dải giấy lọc. Cần cẩn thận trong trường hợp này, vì một số lượng nhỏ ấu trùng nhiễm bệnh có thể di chuyển lên đầu trên của giấy lọc hoặc thành ống nghiệm và xâm nhập vào dưới bề mặt của giấy bóng kính.

Các ống này được đặt trong nồi cách thủy nóng ở 50 ° C trong 15 phút, sau đó lắc đều và nhanh chóng đổ vào ống lắng ấu trùng 15 ml. Sau khi ly tâm, phần nổi phía trên được loại bỏ và kết tủa được chuyển sang một lam kính, được phủ bằng một tấm bìa và được soi dưới độ phóng đại thấp.

Để chẩn đoán phân biệt ấu trùng filariform, cần sử dụng dữ liệu trong Bảng 3.

bàn số 3

CÁC CHẨN ĐOÁN KHÁC BIỆT CỦA CÁC LỚP LỌC CỦA A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, trICHOStrONGYLUS SP.

Ấu trùng	Kích thước	Tính năng đặc trưng
A. duodenale	Chiều dài cơ thể khoảng 660 micron, nắp - 720 nm	Các vân của nắp ít rõ rệt, phần nhô ra của miệng ít được chú ý hơn, phần cuối của thân trước (nhưng không phải là phần nắp) bị cùn, đường kính của ống ruột nhỏ hơn bầu thực quản, phần cuối của đuôi bị cùn.
N. americanus	Chiều dài cơ thể khoảng 590 μm, nắp - 660 nm	Bẹ có vân rõ rệt, đặc biệt ở phần đuôi của thân, miệng có màu sẫm, đầu trước của thân (nhưng không phải là bẹ) tròn như một đầu hẹp. trứng gà, phần trước của ống ruột có đường kính như bầu thực quản, đầu đuôi nhọn.
S. stercoralis	Chiều dài cơ thể khoảng 500 µm	Ấu trùng không có bẹ, thực quản dài bằng nửa thân, đuôi cùn hoặc phân nhánh.
Trichostrongylus sp.	Chiều dài cơ thể khoảng 750 micron	Lòng ruột không thẳng mà ngoằn ngoèo, đầu đuôi tròn và có dạng nút.

7.7.2. Phương pháp nhuộm trứng và ấu trùng giun sán

Trong hầu hết các trường hợp, mô chết cảm nhận màu sắc nhanh hơn mô sống. Những đặc điểm này được sử dụng trong nghiên cứu giun sán để xác định khả năng tồn tại của trứng và ấu trùng giun sán. Tuy nhiên, trong một số trường hợp, một số loại sơn được các mô sống cảm nhận tốt hơn các loại sơn đã chết.

Để xác định sự khác biệt của trứng và ấu trùng sống và chết, các loại sơn và phương pháp sau được sử dụng.

Methylene blue leucobase thường được sử dụng để nhuộm các mô sống và chết. Tế bào hoặc mô sống khử xanh methylene thành leucobase không màu; mô chết không có khả năng này và do đó có màu.

Tiêu chuẩn để xác định trạng thái của trứng là sự nhuộm màu của phôi chứ không phải vỏ. Khả năng này liên quan đến điều kiện chết của trứng. Trong những trường hợp vỏ xơ trong trứng chết không bị mất tính bán thấm thì sẽ không qua được thuốc nhuộm, do đó phôi chết sẽ không bị nhuộm màu. Phôi có màu luôn cho biết trứng đã chết.

Để tạo màu cho trứng giun đũa, bạn có thể dùng xanh methylen trong dung dịch axit lactic với kiềm ăn da (xanh methylen 0,05 g, xút 0,5 g, axit lactic - 15 ml). Trứng sống không cảm nhận được màu sắc; phôi của trứng chết chuyển sang màu xanh lam. Ấu trùng giun đũa được nhuộm bằng dung dịch cơ bản là sơn màu xanh lam-cresyl nồng độ 1: 10.000 như sau: nhỏ một giọt dung dịch có trứng giun đũa và một giọt dung dịch sơn cơ bản lên lam kính. Chế phẩm được đậy bằng một tấm bìa, được ép chặt vào lam kính bằng cách gõ nhẹ bằng kim mổ. Dưới kính hiển vi, số lượng ấu trùng nở ra và mức độ nhuộm màu của chúng được quan sát; sau đó cùng một loại thuốc được xem xét lại sau 2 đến 3 giờ. Chỉ những ấu trùng chưa thành hình chưa nhuộm màu trong 2 giờ mới được coi là còn sống. Ấu trùng chết hoặc không trồi ra khỏi trứng, hoặc bị ố vàng khi vỏ bị vỡ (một phần hoặc toàn bộ).

Khi xác định khả năng sống của trứng chim ascaridia, có thể nhuộm chế phẩm 5%. dung dịch rượu iốt. Khi nó được áp dụng cho thuốc, các phôi của trứng giun đũa chết trong 1 - 3 giây. được nhuộm màu da cam.

Trứng chết của sán dây bò và nội cầu của sán dây bò được nhuộm bằng dung dịch màu xanh lam toluidine (1: 1000), và các khối cầu chết của sán dây bò được nhuộm bằng dung dịch màu xanh lam rực rỡ (1: 10000). Đồng thời, phôi và vỏ của cả trứng chết và trứng sống đều có màu sắc. Vì vậy, sau khi nhuộm, trứng và các quả cầu được rửa trong nước tinh khiết và nhuộm thêm safranin (ở độ pha loãng 1: 10.000 cồn, 10 ° C). Rượu loại bỏ chất nhuộm màu khỏi vỏ và safranin nhuộm màu đỏ. Kết quả là trứng sống chuyển sang màu đỏ; trứng có phôi chết - có màu xanh lam và vỏ vẫn còn màu đỏ. Phôi chết của các tế bào sinh dục của sán dây bò nhanh chóng, trong vòng vài phút, được nhuộm màu đỏ tươi hoặc hồng với safranin hoặc xanh lam với xanh-cresyl rực rỡ ở độ pha loãng 1: 4000, hoặc với carmine màu chàm ở độ pha loãng 1: 1000 - 1 : 2000. Phôi sống không thay đổi dưới ảnh hưởng của các màu này ngay cả sau 2 - 7 giờ.

Để xác định khả năng tồn tại của trứng sán dây lùn, nên sử dụng các loại sơn sau:

1. Màu xanh creasyl rực rỡ (1: 8000) - sau 1 giờ, vỏ trứng chết có màu đặc biệt rực rỡ, nổi bật so với nền nhạt hoặc không màu của phần còn lại của quả trứng.

2. Safranin (1: 8000 trong 2 giờ và 1: 5000 trong 3 đến 5 giờ).

3. Dung dịch axit pyrogallic 50% pha loãng 1: 2 - khi phơi trong 1 giờ ở nhiệt độ 29 - 30 ° C (nhiệt độ càng thấp thì quá trình nhuộm càng lâu).

7.7.3. Phương pháp phát quang để nghiên cứu trứng và ấu trùng giun sán

Kính hiển vi huỳnh quang giúp phân biệt vật thể sống và vật chết mà không làm hỏng trứng. Không được sử dụng cho huỳnh quang tia cực tím, và phần màu xanh tím của ánh sáng khả kiến, bằng kính hiển vi thông thường và lam kính; một bộ lọc màu đặc biệt được thêm vào đèn chiếu sáng OI-18.

Trứng sống và chết của giun đũa, giun kim, sán dây lùn, sán dây bò, sán dây và các loại giun sán khác phát quang khác nhau. Hiện tượng này được quan sát thấy cả trong quá trình phát quang sơ cấp mà không sử dụng thuốc nhuộm và khi nhuộm bằng fluorochromes (acridine da cam, corifosphine, primulin, auroline, berlerin sulfate, tripaflavin, rivanol, quinacrine, v.v.).

Trứng giun đũa sống không phân mảnh, không phân mảnh có màu xanh lục sáng pha chút vàng; ở trứng chết, phần vỏ phát ra ánh sáng màu lục sáng hơn nhiều so với phần phôi có màu xanh đậm; trong trứng giun đũa có ấu trùng chỉ xuất hiện vỏ, còn khi chết cả vỏ và ấu trùng đều có màu vàng tươi.

Trứng sống không có sắc tố và không phân đoạn của giun kim và sán dây lùn phát ra ánh sáng màu vàng lục; ở những quả trứng đã chết, vỏ phát quang mạnh trên nền của một khối phôi màu xanh đậm.

Với sự phát quang thứ cấp (khi nhuộm acridine da cam ở độ pha loãng 1: 10000 và 1: 50000 từ 30 phút đến 2 giờ), vỏ của tuyến trùng sống và chết, sán lá và cestodes phát quang khác nhau.

Vỏ trứng sống và chết của giun đũa, giun đũa, giun kim, sán dây, sán dây chuột, sán dây bò, sán dây chuyển sang màu đỏ cam. Phôi trứng sống của giun đũa, giun đũa, sán dây chuột, sán dây rộng và trên vỏ bọc của sán dây bò phát quang có màu xanh lục sẫm hoặc xanh xám. Phôi chết của trứng của những con giun sán này phát ra màu đỏ cam "cháy". Ấu trùng giun kim còn sống và giun đũa (vỏ trứng) phát ra ánh sáng xanh xám, khi chết, màu sắc chuyển từ đầu đốt sang xanh nhạt "cháy", sau đó là vàng, cam, cuối cùng là cam sáng.

Khi được nhuộm bằng fluorochromes - coryphosphyllum, primulin, trứng chết của giun đũa và trùng roi sẽ phát sáng từ màu vàng hoa cà đến màu đỏ đồng. Trứng sống được không phát quang mà chuyển sang màu xanh đậm.

Trứng sống của sán lá (Paragonimus và Clonorchis) không phát quang sau khi nhuộm màu cam acridine, và có màu vàng xanh do trứng chết.

Phương pháp phát quang cũng có thể được sử dụng để xác định khả năng tồn tại của ấu trùng giun sán. Vì vậy, fluorochrom hóa bằng dung dịch acridine da cam (1: 2000) ấu trùng của Strongylate, rhabdita phát sáng: sống - xanh lá cây (có pha màu), chết - sáng cam sáng.

Các vi khuẩn sống chui ra khỏi vỏ phát ra ánh sáng xanh mờ với tràng hoa màu vàng nhạt của lông mao, nhưng 10-15 phút sau khi chết, chúng xuất hiện dưới dạng ánh sáng "cháy" sáng màu xanh lục, sau đó là ánh sáng đỏ cam.

7.7.4. phương pháp khảo nghiệm sinh học

Ví dụ, để xác định khả năng sống của trứng giun đũa (giun đũa lợn, người, giun đũa chó, giun đũa chó, v.v.) trên mỗi động vật (lợn guinea, chuột), cần ít nhất 100 - 300 trứng có ấu trùng phát triển. Trứng giun đũa trong dung dịch natri clorua đẳng trương được dùng pipet hút qua miệng chuột hoặc chuột lang. Sau 6-7 ngày, con vật được giết mổ, mổ bụng và kiểm tra gan, phổi riêng để tìm ấu trùng giun đũa. Để làm điều này, gan và phổi được cắt thành nhiều mảnh nhỏ bằng kéo và kiểm tra theo phương pháp Berman hoặc Supryaga (mục 6.1.2).

Nếu động vật bị nhiễm trứng sống xâm lấn, thì khi khám nghiệm tử thi ở gan và phổi, người ta tìm thấy ấu trùng giun đũa di cư.

Trong trường hợp nhiễm bệnh, trứng sán lá gan lớn trong phân của động vật thí nghiệm có thể được phát hiện ở thỏ sau 2 tháng, ở chuột lang - sau 50 ngày, ở chuột - sau 35-40 ngày.

Để có phản ứng nhanh hơn, các động vật thí nghiệm được mở sau 20-30 ngày và kiểm tra gan để tìm sự hiện diện của sán lá gan nhỏ.

Để xác định khả năng sống của trứng sán dây, người ta cũng nên cho chuột nhắt trắng chưa bị nhiễm bệnh trước đó ăn, sau đó mổ tử thi con vật sau 92–96 giờ và phát hiện cysticercoids trong nhung mao ruột hoặc ấu trùng trong lòng ruột.

Để xác định khả năng tồn tại của trứng opisthorchis, một phương pháp được khuyến nghị (German S.M., Beer S.A., 1984), dựa trên sự hoạt hóa lý hóa của tuyến nở của vi khuẩn và kích thích hoạt động vận động của ấu trùng, dẫn đến việc mở trứng. nắp và sự giải phóng hoạt tính của chất magicidium trong điều kiện thí nghiệm.

Hỗn dịch trứng opisthorchis trong nước được làm lạnh trước đến 10 - 12 ° C (tất cả các thao tác tiếp theo được thực hiện ở nhiệt độ phòng 19 - 20 ° C). Nhỏ 1 giọt huyền phù chứa 100-150 trứng vào ống ly tâm. Ống nghiệm được đặt trong giá ba chân trong 5 - 10 phút. Trong thời gian này, tất cả trứng có thời gian chìm xuống đáy. Sau đó, dùng một dải giấy lọc, cẩn thận hút hết nước thừa và nhỏ vào ống nghiệm 2 giọt môi trường đặc biệt. Môi trường được chuẩn bị trong đệm Tris-HCl 0,005 M; Dung dịch etanol 12 - 13% và thuốc nhuộm (đỏ tươi, safranin, eosin, xanh metylen, v.v.) được thêm vào dung dịch đệm. Lắc ống nghiệm, dùng pipet chuyển lượng chứa trong ống nghiệm sang lam kính và để yên trong 10 phút, lắc nhẹ. Sau đó thêm 2 giọt môi trường được chỉ định. Việc chuẩn bị đã sẵn sàng để soi dưới kính hiển vi ánh sáng thông thường ở độ phóng đại 20x.

Trong thời gian này, nắp của ấu trùng còn sống sẽ mở ra, và chất magie chủ động xâm nhập vào môi trường được chỉ định. Do sự hiện diện của etanol trong đó, chúng bị bất động sau 2-5 phút và sau đó được nhuộm bằng thuốc nhuộm. Chúng có thể dễ dàng được phát hiện và đếm dưới kính hiển vi.