जेव्हा विविध पर्यावरणीय वस्तूंवर (माती, पाणी, भाजीपाला इ.) हेल्मिंथ अंडी आढळतात तेव्हा त्यांची व्यवहार्यता दिसणे, महत्वाच्या रंगांनी डागणे, इष्टतम परिस्थितीत लागवड करणे आणि जैविक नमुना सेट करणे, उदा.

प्रयोगशाळेतील जनावरांना आहार देणे.

हेल्मिंथ्सच्या अंडी किंवा अळ्यांच्या व्यवहार्यतेचे निर्धारण. हेल्मिंथ अंडी प्रथम कमी वाढीवर सूक्ष्मदर्शकित केली जातात, नंतर उच्च वाढीवर. हेलमिंथ्सच्या विकृत आणि मृत अंड्यांमध्ये, कवच फाटलेले किंवा आतून वाकलेले आहे, प्लाझ्मा ढगाळ आहे, सैल आहे. खंडित अंड्यांमध्ये असमान आकाराचे क्लीवेज बॉल (ब्लास्टोमेर) असतात, अनियमित आकार, अनेकदा एका खांबावर हलवले जातात. कधीकधी असामान्य अंडी असतात, ज्यात बाह्य विकृती असतात, सामान्यपणे विकसित होतात. एस्केरिड्सच्या जिवंत अळ्यांमध्ये, सूक्ष्म ग्रॅन्युलॅरिटी केवळ शरीराच्या मध्यभागी असते, जसे ते मरतात, ग्रॅन्युलॅरिटी संपूर्ण शरीरात पसरते, मोठ्या चमकदार हायलाइन व्हॅक्यूल्स दिसतात - मोत्यांचे तथाकथित तार.

एस्कारिड्स, व्हिपवर्म्स, पिनवर्म्सच्या परिपक्व अंड्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, अळ्यांच्या सक्रिय हालचाली या तयारीला किंचित गरम करून (37 डिग्री सेल्सियसपेक्षा जास्त नसलेल्या तापमानापर्यंत) झाल्या पाहिजेत. एस्केरिस आणि व्हिपवर्म अळ्या अंड्याच्या कवचापासून वेगळ्या केल्यानंतर तयारीच्या कव्हर ग्लासवर विच्छेदक सुई किंवा चिमट्याने दाबून त्यांची व्यवहार्यता निरीक्षण करणे अधिक सोयीचे असते.

एस्कारिड्सच्या आक्रमक अळ्यांमध्ये, डोक्याच्या टोकाला एक टोपी बाहेर पडलेली दिसते आणि अंड्यातील विकास पूर्ण केलेल्या व्हिपवर्म्सच्या अळ्यांमध्ये, या ठिकाणी एक स्टाइलट जास्त प्रमाणात आढळते. हेल्मिंथ्सच्या मृत अळ्यांमध्ये, त्यांचे स्थान (अंड्यात किंवा बाहेर) लक्षात न घेता, शरीराचा क्षय दिसून येतो. या प्रकरणात, अळ्याची अंतर्गत रचना ढेकूळ किंवा दाणेदार बनते आणि शरीर ढगाळ आणि अपारदर्शक बनते. शरीरात व्हॅक्यूल्स आढळतात आणि क्यूटिकलवर ब्रेक आढळतात.

टेनिड ऑन्कोस्फियर्स (बोवाइन, पोर्सिन टेपवर्म इ.) ची व्यवहार्यता भ्रूणांच्या हालचालींद्वारे निर्धारित केली जाते जेव्हा ते पाचक एन्झाईम्सच्या संपर्कात येतात. कुत्र्याच्या गॅस्ट्रिक रस किंवा कृत्रिम पक्वाशया विषयी रस असलेल्या घड्याळाच्या काचेवर अंडी ठेवली जातात. नंतरची रचना: पॅनक्रियाटिन 0.5 ग्रॅम, सोडियम बायकार्बोनेट 0.09 ग्रॅम, डिस्टिल्ड वॉटर 5 मिली. अंडी असलेले घड्याळाचे चष्मे थर्मोस्टॅटमध्ये 36-38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 4 तास ठेवले जातात. या प्रकरणात, जिवंत भ्रूण शेलमधून बाहेर पडतात. जिवंत ऑन्कोस्फियर्सचे कवच आम्लीकृत पेप्सिनमध्ये आणि ट्रिप्सिनच्या अल्कधर्मी द्रावणात 6-8 तासांनंतर थर्मोस्टॅटमध्ये 38°C तापमानात विरघळतात.

जर टेनिड अंडी सोडियम सल्फाइडच्या 1% द्रावणात किंवा सोडियम हायपोक्लोराईडच्या 20% द्रावणात किंवा 36-38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात क्लोरीन पाण्याच्या 1% द्रावणात ठेवल्यास, प्रौढ आणि जिवंत भ्रूण पडद्यामधून बाहेर पडतात आणि ते करतात. 1 दिवस बदलू नका. अपरिपक्व आणि मृत ऑनकोस्फियर सुकतात किंवा फुगतात आणि झपाट्याने वाढतात, आणि नंतर 10 मिनिटांत - 2 तासांत "विरघळतात". टेनिड्सचे जिवंत भ्रूण देखील 1% सोडियम क्लोराईड द्रावण, 0.5% सोडियम बायकार्बोनेट द्रावण आणि पित्त 36-36 च्या मिश्रणात सक्रियपणे हलतात. ३८°से.

स्कोलेक्स इचिनोकोसीची व्यवहार्यता कमी हीटिंगसह निर्धारित केली जाते. हे करण्यासाठी, पाण्यात धुतलेले स्कोलेक्सेस किंवा ब्रूड कॅप्सूल एका काचेच्या स्लाइडवर एका छिद्रासह पाण्याच्या थेंबात ठेवल्या जातात, कव्हरस्लिपने झाकल्या जातात आणि 38-39 डिग्री सेल्सिअस तापमानात हीटिंग स्टेजसह सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासल्या जातात. हीटिंग टेबल नसल्यास, कोणत्याही उष्णता स्त्रोताचा वापर करून तयारी गरम केली जाते. त्याच वेळी, व्यवहार्य स्कोलेक्स सक्रियपणे हलतात, शोषकांना कमी करतात किंवा आराम देतात, प्रोबोस्किस लांब आणि लहान करतात. जर स्कोलेक्सेस खोलीच्या तपमानावर फिलिसिलीनच्या 0.5-1% जलीय द्रावणात ठेवले तर सर्व व्यवहार्य स्कोलेक्स लवकर बाहेर पडतील आणि मरतील. व्यवहार्य नसलेले स्कोलेक्स बाहेर पडत नाहीत.

वनस्पती आणि जलस्रोतांच्या इतर वस्तूंमधून गोळा केलेल्या फॅसिओलिया अॅडोलेस्कॅरियाची व्यवहार्यता तापविण्याच्या अवस्थेसह सूक्ष्मदर्शकाखाली सलाईनमध्ये ग्लास स्लाइडवर तपासली जाते. गरम झाल्यावर, सिस्टमधील ट्रेमाटोड अळ्या हलू लागतात.

बौने टेपवर्मच्या अंड्याची व्यवहार्यता गर्भावरील हुकच्या स्थानाद्वारे निर्धारित केली जाते.

पिग्मी टेपवॉर्मच्या जिवंत अंड्यांमध्ये, प्रोटोप्लाझमच्या आळशी लोलक सारखी हालचाल आणि आकड्यांच्या पार्श्व जोडीच्या टोकदार टोकांचे जवळजवळ अगोचर विस्तार आणि शिफ्ट मधल्या जोडीपासून दूर होतात.

गर्भाच्या प्रोटोप्लाझमचे आकुंचन आणि जर्मिनल हुक गर्भाला प्रथम ऑन्कोस्फियरच्या कवचातून आणि नंतर अंड्याच्या बाहेरील कवचातून मुक्त होण्यास मदत करतात.

जिवंत अंड्यामध्ये, आकड्यांचा मध्य जोड आणि बाजूकडील जोड्या समांतरपणे मांडल्या जातात; काही अंड्यांमध्ये, पार्श्व जोड्यांचे ब्लेड एकत्र आणले जातात आणि हुकच्या मधल्या जोडीच्या तुलनेत 45° पेक्षा कमी कोनात स्थित असतात.

मरणारा भ्रूण आकुंचन पावतो आणि आळशीपणे आकड्या अलगद ढकलतो. मृत गर्भामध्ये, आकड्यांची हालचाल थांबते, आणि ते एका विकृतीमध्ये व्यवस्थित केले जातात, काहीवेळा शेजारच्या जोडीच्या बाजूकडील आकड्या एका उजव्या, ओबटुस किंवा तीव्र कोनात अलग केल्या जातात.

कधीकधी गर्भाच्या सुरकुत्या, ग्रॅन्युलॅरिटीची निर्मिती दिसून येते. तापमानात तीव्र बदलादरम्यान ऑन्कोस्फियरच्या हालचाली दिसण्यावर अधिक अचूक पद्धत आधारित आहे: 5-10 ते 38-40 डिग्री सेल्सियस पर्यंत.

अपरिपक्व नेमाटोड्सची व्यवहार्यता ठरवण्यासाठी आर्द्र चेंबरमध्ये (पेट्री डिश) अभ्यास केला पाहिजे, 24-30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात आयसोटोनिक सोडियम क्लोराईडच्या द्रावणात तयार केलेल्या 3% फॉर्मेलिनच्या द्रावणात ascaris अंडी, 3% मध्ये whipworm अंडी ठेवा. 30-35 डिग्री सेल्सिअस तापमानात हायड्रोक्लोरिक ऍसिडचे द्रावण, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात आयसोटोनिक सोडियम क्लोराईड द्रावणात पिनवर्म अंडी. पेट्री डिशेस आठवड्यातून 1-3 वेळा चांगले हवेसाठी उघडले पाहिजे आणि फिल्टर पेपर पुन्हा ओलावा. स्वच्छ पाणी.

हेल्मिन्थ अंड्याच्या विकासाचे निरीक्षण आठवड्यातून किमान 2 वेळा केले जाते. 2-3 महिन्यांत विकासाच्या चिन्हांची अनुपस्थिती त्यांची गैर-व्यवहार्यता दर्शवते. हेल्मिंथ अंड्याच्या विकासाची चिन्हे म्हणजे प्रथम क्रशिंगचे टप्पे, अंड्यातील सामग्रीचे स्वतंत्र ब्लास्टोमेरमध्ये विभागणे. पहिल्या दिवसादरम्यान, 16 पर्यंत ब्लास्टोमेर विकसित होतात, जे दुसऱ्या टप्प्यात जातात - मोरुला इ.

हुकवर्म अंडी एका काचेच्या सिलेंडरमध्ये (50 सेमी उंच आणि 7 सेमी व्यासाच्या) स्टॉपरने बंद केली जातात. निर्जंतुकीकरण वाळू, कोळसा आणि हुकवर्म अंडी असलेली विष्ठा यांचे मिश्रण, अर्ध-द्रव सुसंगततेसाठी पाण्याने पातळ केलेले, काचेच्या नळीचा वापर करून काळजीपूर्वक सिलेंडरच्या तळाशी ओतले जाते. 25-30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात अंधारात स्थायिक झाल्यानंतर 1-2 दिवसांदरम्यान, अंड्यांमधून रॅबडीटोइड अळ्या बाहेर पडतात आणि 5-7 दिवसांनंतर ते आधीच फिलेरीफॉर्म होतात: अळ्या सिलेंडरच्या भिंतींवर रेंगाळतात, जिथे ते अगदी उघड्या डोळ्यांनाही दिसतात. पाण्यामध्ये नैसर्गिकरित्या विकसित होणारी ट्रेमेटोड अंडी, जसे की opisthorchis, diphylobotriid, fasciol इत्यादी, घड्याळाच्या काचेवर, पेट्री डिशवर किंवा दुसर्या भांड्यात ठेवल्या जातात, एक लहान थर ओतला जातो. साधे पाणी. फॅसिओला अंडी लागवड करताना, अंधारात ते जलद विकसित होतात हे लक्षात घेतले पाहिजे, तर 9-12 दिवसांत 22-24 डिग्री सेल्सियस तापमानात जिवंत अंड्यांमध्ये मिरासिडियम तयार होते. जेव्हा मायक्रोस्कोपी अंडी विकसित करणे trematodes miracidium हालचाली स्पष्टपणे दृश्यमान आहेत. फॅसिओला मिरासिडियम अंड्याच्या कवचातून फक्त प्रकाशात बाहेर पडतो. मशागत करताना १५-२० दिवसांनी पाणी बदलले जाते.

हुकवर्म अळ्या आणि स्ट्राँगलॉइड प्राण्यांच्या कोळशासह पेट्री डिशमध्ये आगरवर लागवड करतात. 5-6 दिवस 26-30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात थर्मोस्टॅटमध्ये राहिल्यानंतर, अळ्या आगरवर पसरतात आणि जीवाणूंचा मार्ग (फुलबॉर्न पद्धत) मागे सोडतात.

हरडा आणि मोरीची पद्धत (1955). रॅकमध्ये ठेवलेल्या टेस्ट ट्यूबमध्ये 7 मिली डिस्टिल्ड वॉटर जोडले जाते. लाकडी काठीने 0.5 ग्रॅम विष्ठा घ्या आणि फिल्टर पेपरवर (15X150 मिमी) डाव्या काठावरुन 5 सेमी अंतरावर स्मीअर बनवा (हे ऑपरेशन प्रयोगशाळेच्या टेबलच्या पृष्ठभागाचे संरक्षण करण्यासाठी कागदाच्या शीटवर केले जाते). नंतर स्मीअर असलेली पट्टी ट्यूबमध्ये घातली जाते जेणेकरून डाव्या टोकाला स्मीअरपासून मुक्त नळीच्या तळाशी पोहोचते. वरचे टोक सेलोफेनच्या तुकड्याने झाकलेले असते आणि लवचिक बँडने घट्ट गुंडाळलेले असते. टेस्ट ट्यूबवर विषयाचा क्रमांक आणि आडनाव लिहा. या अवस्थेत, नळ्या 28 डिग्री सेल्सियस तापमानात 8-10 दिवसांसाठी साठवल्या जातात. संस्कृतीचा अभ्यास करण्यासाठी, सेलोफेन कव्हर काढून टाका आणि काढून टाका आणि चिमट्याने फिल्टर पेपरची पट्टी काढा. या प्रकरणात काळजी घेणे आवश्यक आहे, कारण थोड्या संख्येने संसर्गजन्य अळ्या फिल्टर पेपरच्या वरच्या टोकापर्यंत किंवा चाचणी नळीच्या भिंतीकडे जाऊ शकतात आणि सेलोफेनच्या पृष्ठभागाखाली प्रवेश करू शकतात.

नळ्या गरम मध्ये ठेवल्या जातात पाण्याचे स्नान 50 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर 15 मिनिटे, त्यानंतर सामग्री हलविली जाते आणि अळ्यांच्या अवसादनासाठी 15-मिली ट्यूबमध्ये पटकन ओतले जाते. सेंट्रीफ्यूगेशननंतर, सुपरनॅटंट काढून टाकले जाते, आणि अवक्षेपण एका काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केले जाते, कव्हरस्लिपने झाकलेले असते आणि कमी मोठेीकरण अंतर्गत सूक्ष्मदर्शक असते.

फिलारिफॉर्म लार्वाच्या विभेदक निदानासाठी, टेबलमध्ये सादर केलेला डेटा वापरणे आवश्यक आहे. 13.

हेल्मिंथ्सच्या अंडी आणि अळ्या डागण्याच्या पद्धती. बहुतेक प्रकरणांमध्ये मृत उती जिवंत लोकांपेक्षा जलद रंग ओळखतात. हेलमिन्थॉलॉजीमध्ये हेलमिन्थ्सच्या अंडी आणि अळ्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी या वैशिष्ट्यांचा वापर केला जातो. तथापि, काही प्रकरणांमध्ये, काही पेंट्स मृतांच्या तुलनेत जिवंत ऊतींद्वारे अधिक चांगले समजतात.

तक्ता 13. A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp च्या फिलामेंटस लार्वाचे विभेदक निदान.

जिवंत आणि मृत अंडी आणि अळ्या यांच्या फरक ओळखण्यासाठी, खालील रंग आणि पद्धती वापरल्या जातात.

मेथिलीन ब्लू ल्युकोबेसचा वापर जिवंत आणि मृत ऊतींवर डाग लावण्यासाठी केला जातो. जिवंत पेशी किंवा ऊतक मिथिलीन निळा रंगहीन ल्युकोबेसमध्ये कमी करते; मृत ऊतकांमध्ये ही क्षमता नसते आणि म्हणून रंग प्राप्त होतो.

Ascaris अंडी रंगविण्यासाठी, आपण कॉस्टिक अल्कली (मिथिलीन निळा 0.05 ग्रॅम, कॉस्टिक सोडा 0.5 ग्रॅम, लैक्टिक ऍसिड 15 मिली) सह लॅक्टिक ऍसिडच्या द्रावणात मिथिलीन ब्लू वापरू शकता. जिवंत अंड्यांचा रंग कळत नाही, मृत अंड्यांचे भ्रूण डागलेले असतात निळा रंग.

अपरिपक्व राउंडवर्म आणि व्हिपवर्म अंड्यांवर डाग लावण्याची पद्धत लागू होत नाही; पिगमेंटेड शेलवर डाग पडतात आणि त्यामुळे अंड्यातील जंतू सेलवर डाग पडलेला आहे की नाही हे दिसत नाही.

1:10 000 च्या एकाग्रतेमध्ये ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू पेंटच्या मुख्य द्रावणासह एस्केरिस लार्व्हाचा डाग खालीलप्रमाणे केला जातो: एस्केरिस अंडी असलेल्या द्रवाचा एक थेंब आणि पेंटच्या मुख्य द्रावणाचा एक थेंब काचेच्या स्लाइडवर लावला जातो. . तयारी कव्हरस्लिपने झाकलेली असते, जी विच्छेदन सुईने हलके टॅप करून ऑब्जेक्टवर घट्ट दाबली जाते. सूक्ष्मदर्शकाखाली, उबवलेल्या अळ्यांची संख्या आणि त्यांच्या डागांची मात्रा पाहिली जाते, त्यानंतर 2-3 तासांनंतर त्याच तयारीची पुन्हा तपासणी केली जाते. केवळ 2 तास डाग न झालेल्या विकृत अळ्या जिवंत मानल्या जातात. मृत अळ्या जेव्हा डाग पडतात तेव्हा शेल तुटते (अंशतः किंवा पूर्णपणे).

एस्केरिडिया पक्ष्यांच्या अंड्यांचे व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी आयोडीनच्या द्रावणाने डाग पडण्याची शक्यता दर्शविली जाते. या प्रकरणात, आयोडीनचे 5% अल्कोहोल द्रावण रंग म्हणून वापरले जाते. जेव्हा ते तयार करण्यासाठी लागू केले जाते तेव्हा मृत एस्केरिडिया अंड्यांचे भ्रूण 1-3 सेकंदात डागले जातात. नारिंगी रंग. ओपिस्टोर्किस आणि ऑन्कोस्फियर्सची मृत अंडी बैल टेपवर्मटोलुइडीन ब्लू (1:1000) च्या द्रावणाने आणि बोवाइन टेपवर्मच्या मृत ऑन्कोस्फियर्स - ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू (1:10,000) च्या द्रावणाने डागलेले. त्याच वेळी, मृत आणि जिवंत दोन्ही अंडींचे भ्रूण आणि शेल रंग घेतात. म्हणून, डाग पडल्यानंतर, अंडी आणि ऑन्कोस्फियर्स शुद्ध पाण्यात धुतले जातात आणि त्याव्यतिरिक्त सॅफरॅनिन (10% अल्कोहोल सोल्यूशनसह 1:10,000 पातळ केलेले) सह डागले जातात. अल्कोहोल शेल्समधून डाई काढून टाकते आणि सॅफरॅनिन त्यांना लाल रंग देते. परिणामी, जिवंत अंडी लाल रंगाची असतात, मृत अंड्यांचा गर्भ निळा असतो आणि कवच लालच राहतो. बोवाइन टेपवर्म ऑन्कोस्फियर्सचे मृत भ्रूण काही मिनिटांतच चमकदार लाल होतात किंवा गुलाबी रंग safranin किंवा ब्लू ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू 1:4000 च्या पातळतेवर किंवा इंडिगो कारमाइन 1:1000-1:2000 च्या पातळतेवर.

जिवंत भ्रूण 2-7 तासांनंतरही या रंगांच्या प्रभावाखाली बदलत नाहीत.

पिग्मी टॅपवर्म अंड्याची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, खालील पेंट्स वापरण्याची शिफारस केली जाते: 1) चमकदार क्रेसिल निळा (1: 8000) - 1 तासानंतर, मृत अंड्यांचे ऑन्कोस्फियर विशेषतः तेजस्वीपणे डागलेले असते, जे फिकटपणाच्या विरूद्ध अगदी स्पष्टपणे दिसते. किंवा उर्वरित अंड्याची रंगहीन पार्श्वभूमी; 2) safranin: 2 तास उघडल्यावर 1:8000 आणि 3-5 तासांसाठी 1:5000 च्या पातळतेवर; 3) पायरोगॅलिक ऍसिडचे 50% द्रावण 1:2 च्या पातळतेवर - 29-30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 1 तास उघडल्यावर (तापमान जितके कमी असेल तितकी डाग पडण्याची प्रक्रिया जास्त असेल).

ब्रॉड टेपवर्मचे लाइव्ह प्लेरोसेरकॉइड्स 5-20 मिनिटांसाठी तटस्थ तोंडाच्या जलीय द्रावणाने (1:1000) चांगले डागलेले असतात. सतत गुलाबी रंग मिळविण्यासाठी जो 5 दिवसांच्या आत अदृश्य होत नाही आणि प्लेरोसेरकॉइड्सच्या गतिशीलतेवर परिणाम करत नाही, सामान्यतः 10 मिनिटे पुरेसे असतात. अळ्या स्वच्छ पाहून रंगाचे प्रमाण नियंत्रित केले जाते आयसोटोनिक द्रावणसोडियम क्लोराईड, ज्यासाठी plerocercoids वेळोवेळी पेंटमधून काढले जातात. मृत प्लेरोसेरकॉइड्सवर डाग ठेवण्यासाठी मिथिलीन ब्लू वापरण्याचा सल्ला दिला जातो.

आर.ई. चोबानोव्ह इ. (1986) यांनी अंडी आणि हेल्मिंथ्सच्या अळ्यांची व्यवहार्यता ठरवण्यासाठी एक पद्धत प्रस्तावित केली आहे ज्यामध्ये रंग म्हणून लागवडीदरम्यान प्राप्त झालेल्या रुब्रिन रंगद्रव्याचा वापर केला जातो. मूस बुरशीचेपेनिसिलियम रुब्रम. हे करण्यासाठी, 3% जलीय डाई द्रावण वापरा.

अंडी आणि अळ्यांना रंग देण्याची प्रक्रिया 1.5 तासांनंतर पूर्ण होते. पिनवर्म्स, बोवाइन आणि ड्वार्फ टेपवॉर्म्स, अँकिलोस्टोमाइड्स, ट्रायकोस्ट्रॉन्गिलिड्सची अव्यवहार्य अंडी तीव्र गुलाबी रंग प्राप्त करतात, अॅन्किलोस्टोमिड्स आणि ट्रायकोस्ट्रॉन्गिलिड्स लाल होतात. एस्केरिस आणि व्हिपवर्म अंड्यांमध्ये कमी चमकदार रंग दिसून येतो, कारण, आतड्यांमधून बाहेर उभे राहून, त्यांच्याकडे आधीपासूनच आहे. गडद तपकिरी रंग: व्यवहार्य अंडी आणि अळ्यांवर डाग पडत नाहीत.

ट्रेमेटोड अंड्यांमधून मिरॅकडिया सोडण्यास उत्तेजित करण्यासाठी भौतिक-रासायनिक पद्धती. S.M. जर्मन आणि S.A. Beer (1984) द्वारे ओपिस्टोर्चिया आणि डिक्रोसेलियम अंड्यांचे अंडी प्रतिक्रिया माध्यमात उघड करून त्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी पद्धती विकसित केल्या होत्या. जर ते जिवंत असतील तर मिरासिडियम बाहेर पडते. या पद्धती मिरासिडियम हॅचिंग ग्रंथीच्या भौतिक-रासायनिक सक्रियतेवर आणि लार्वाच्या मोटर क्रियाकलापांना उत्तेजन देण्यावर आधारित आहेत. ट्रेमाटोड अंडी एका विशेष प्रतिक्रिया माध्यमात सलग पध्दतींच्या संयोजनात उघड करून उत्तेजन प्राप्त केले जाते - तापमानात फरक निर्माण करणे, अंडी निलंबन कोरडे करणे, चाचणी ड्रॉपमध्ये कमकुवत द्रव प्रवाहाचा संपर्क, जे अंड्यांमधून मिरॅसिडिया मोठ्या प्रमाणात सोडण्यात योगदान देतात.

हर्मन, बिअरच्या पद्धतीद्वारे ओपिस्टोर्च अंड्यांच्या व्यवहार्यतेचे निर्धारण. पाण्यात अंड्यांचे निलंबन (टॅप, सेटल केलेले) 10-12 डिग्री सेल्सियस पर्यंत पूर्व-थंड केले जाते. त्यानंतरच्या सर्व ऑपरेशन्स खोलीच्या तपमानावर (18-22 डिग्री सेल्सियस) केल्या जातात. 100-400 अंडी असलेल्या निलंबनाचा एक थेंब (सुमारे 0.05 मिली) सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये जोडला जातो. टेस्ट ट्युब एका रॅकमध्ये 5-10 मिनिटांसाठी ठेवल्या जातात ज्यामुळे अंडी बाहेर पडतात. नंतर, फिल्टर पेपरच्या अरुंद पट्टीने, जास्तीचे पाणी पूर्णपणे काढून टाकेपर्यंत काळजीपूर्वक चोखले जाते. माध्यमाचे 2 थेंब चाचणी ट्यूबमध्ये जोडले जातात, हलवले जातात, त्यातील सामग्री एका काचेच्या स्लाइडवर विंदुकाने हस्तांतरित केली जाते आणि 5-10 मिनिटे सोडली जाते, किंचित हलवून (किंवा हेअर ड्रायरच्या खाली ठेवली जाते) ज्यामुळे कमकुवत द्रव प्रवाह तयार होतो. अभ्यासा अंतर्गत निलंबन ड्रॉप. हे ऑपरेशन, जे मोलस्कच्या आतड्यांसंबंधी पेरिस्टॅलिसिसचे अनुकरण करते, आपल्याला मिरासिडियाचे प्रकाशन सक्रिय करण्यास अनुमती देते. त्यानंतर, निलंबनामध्ये माध्यमाचे आणखी 2 थेंब जोडले जातात आणि नंतर पारंपारिक प्रकाश सूक्ष्मदर्शक (X200) वापरून तयारीची सूक्ष्मदर्शकीय तपासणी केली जाते. या वेळी, व्यवहार्य मिरासिडिया असलेल्या अंडींनी झाकण उघडले पाहिजे, तर अळ्या सक्रियपणे वातावरणात बाहेर पडतात. त्यात इथेनॉलच्या उपस्थितीमुळे, मिरासिडियम 3-5 मिनिटांत स्थिर होते आणि नंतर मध्यम रंगाने डागले जाते. परिणामी, मिरासिडिया सहजपणे शोधले जातात आणि मोजले जातात.

प्रतिक्रिया माध्यमाची तयारी. हे माध्यम 0.05 M Tris-HCi बफरमध्ये 8.0-9.5 च्या इष्टतम pH परिस्थितीत तयार केले जाते. बफरमध्ये इथेनॉल 10-13% पर्यंत जोडले जाते आणि एक डाई (safranin, methylene blue आणि pH रेंजमध्ये काम करणारे इतर) द्रव किंचित रंगीत होईपर्यंत (उदाहरणार्थ, safranin साठी त्याची अंतिम एकाग्रता 1:50,000 असेल). तुम्ही दुसरा बफर वापरू शकता जो अल्कधर्मी pH श्रेणीमध्ये कार्य करतो, जसे की 0.05 M फॉस्फेट (pH 8.5). म्हणून, माध्यमात 96% इथेनॉल आहे - 12 भाग; रंग ( आई दारू) - 1-10 भाग; 0.05 M tris-HC! बफर (पीएच 8.5-9.5) - 100 भागांपर्यंत. मध्यम उदाहरण: 96% इथेनॉलचे 12 भाग, सॅच्युरेटेड सॅफरॅनिन द्रावणाचा 1 भाग, उर्वरित 100 भागांपर्यंत - 0.05 एम ट्रिस-एचसीएल बफर, पीएच 9.5.

हर्मन, बीअर, स्ट्रॅटनच्या पद्धतीद्वारे डायक्रोसेलियम अंड्याच्या व्यवहार्यतेचे निर्धारण. 100-150 ट्रेमेटोड अंडी असलेल्या निलंबनाचा एक थेंब अंडी सेट करण्यासाठी 1-2 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ठेवला जातो. नंतर फिल्टर पेपरच्या पट्टीने द्रव काळजीपूर्वक वाळवला जातो. पाश्चर पिपेटसह प्रतिक्रिया माध्यमाचे 1-2 थेंब घाला आणि 2-3 मिनिटे 28-30 डिग्री सेल्सियस तपमानावर वॉटर बाथमध्ये उबवा. माध्यमाची रचना: बुटानॉलचे 6 भाग, 0.4% सोडियम क्लोराईड द्रावणाचे 94 भाग किंवा डिस्टिल्ड पाण्यात 0.3% पोटॅशियम क्लोराईड द्रावण. माध्यमातील अंडी एका काचेच्या स्लाइडवर विंदुकाने हस्तांतरित केली जातात आणि खोलीच्या तपमानावर (18-22 डिग्री सेल्सिअस) 1.5-2 तास सोडली जातात, तर दर 25-30 मिनिटांनी (जसे ते सुकतात) 1-2 थेंब (0.05) घाला. ml) डिस्टिल्ड पाण्यात बुटानॉलचे द्रावण. त्यानंतर, तयारी 100-200-पट वाढीवर सूक्ष्मदर्शी केली जाते. रिलीझ केलेल्या मिरासिडियासह उघडलेल्या अंडींच्या संख्येद्वारे व्यवहार्यता निश्चित केली जाते. बुटानॉल अंड्याच्या कवचाच्या छिद्रांमधून आत प्रवेश करते, मिरासिडियापर्यंत पोहोचते आणि त्यांना सक्रिय करते. चिन्हांकित तापमानात उष्मायन ही प्रक्रिया वाढवते. 3-7% च्या एकाग्रतेतील बुटानॉल अंड्यातून बाहेर पडलेल्या मिरासिडियमसाठी हानिकारक आहे. चाचणी ट्यूबमधून एका काचेच्या स्लाइडवर अंड्यांचे निलंबन स्थानांतरित केल्याने, मिरासिडियम बाहेर पडेपर्यंत (30-40 मिनिटांनंतर), अस्थिरतेमुळे ब्युटानॉलची एकाग्रता सुरक्षित पातळीवर (1.5-0.5%) कमी होते. 0.1-0.5% (किंवा 0.05-0.4% च्या एकाग्रतेवर पोटॅशियम क्लोराईड) च्या एकाग्रतेमध्ये सोडियम क्लोराईडची उपस्थिती सोडियम मिरॅसिडियमची क्रिया निर्धारित करते. ओपिस्टॉर्चच्या लहान पारदर्शक अंड्यांपेक्षा उलट, डायक्रोसेलियमच्या अंड्यांमध्ये गडद रंगाचे कवच असते; त्यांना स्पष्टपणे दृश्यमान झाकण असते, जे मिरासिडियम सोडल्यानंतर उघडते. म्हणून, डायक्रोसेलियम अंड्यांचे व्यवहार्यतेचे मूल्यांकन मिरासिडियावर डाग पडून आणि मोजण्याऐवजी उघडलेल्या अंडी मोजून केले जाते.

हेल्मिंथ्सच्या अंडी आणि अळ्यांच्या अभ्यासासाठी ल्युमिनेसेंट पद्धत.

हेल्मिंथोलॉजिकल प्रॅक्टिसमध्ये प्रथमच, 1955 मध्ये ल्युमिनेसेंट मायक्रोस्कोपी पद्धती लागू करण्यात आल्या. असे नोंदवले गेले की ल्युमिनेसेंट मायक्रोस्कोपीमुळे अंड्याचे नुकसान न करता जिवंत आणि मृत वस्तूंमध्ये फरक करणे शक्य होते. फ्लोरोसेन्ससाठी, अतिनील किरणांचा वापर केला जात नाही, परंतु पारंपारिक सूक्ष्मदर्शक आणि काचेच्या स्लाइडसह दृश्यमान प्रकाशाचा निळा-वायलेट भाग; OI-18 इल्युमिनेटरसाठी रंग फिल्टरचा एक विशेष संच वापरला गेला.

असे आढळून आले की राउंडवर्म्स, पिनवर्म्स, पिग्मी टेपवर्म्स, बोवाइन टेपवर्म्स, ब्रॉड टेपवर्म्स आणि इतर हेल्मिंथ्सची जिवंत आणि मृत अंडी वेगळ्या प्रकारे चमकतात. ही घटना रंगांचा वापर न करता प्राथमिक ल्युमिनेसेन्स दरम्यान आणि फ्लोरोक्रोम्स (ऍक्रिडाइन ऑरेंज, कॉरिफोस्फीन, प्रिम्युलिन, ऑरोलिन, बर्लेरिन सल्फेट, ट्रिपफ्लाविन, रिव्हानॉल, क्विनॅक्राइन इ.) सह डाग केल्यावर दिसून येते.

रंगविरहित जिवंत नॉन-सेगमेंटेड राउंडवर्म अंडी पिवळसर छटासह चमकदार हिरव्या चमकतात; मृत अंड्यांमध्ये, कवच गडद हिरव्या भ्रूणापेक्षा जास्त उजळ हिरवा प्रकाश उत्सर्जित करतो; अळ्या असलेल्या राउंडवर्म अंड्यांमध्ये, फक्त कवच दिसते, तर मृतांमध्ये, शेल आणि अळ्या दोन्ही चमकदार पिवळ्या असतात.

पिनवर्म्स आणि पिग्मी टेपवॉर्म्सची रंगविरहित आणि खंडित नसलेली जिवंत अंडी हिरवा-पिवळा प्रकाश सोडतात; मृत अंड्यांमध्ये, कवच गडद हिरव्या भ्रूण वस्तुमानाच्या पार्श्वभूमीवर तीव्रतेने चमकते. दुय्यम ल्युमिनेसेन्ससह (जेव्हा 30 मिनिटांपासून 2 तासांपर्यंत 1:10 OOO आणि 1:50 OOO च्या सौम्यतेवर ऍक्रिडाइन केशरी रंगाचे असते), जिवंत आणि मृत नेमाटोड्स, ट्रेमेटोड्स आणि सेस्टोड्सचे कवच वेगळ्या पद्धतीने ल्युमिनेसेस करतात.

जिवंत आणि मृत Ascaris lumbricoides, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum चे कवच नारिंगी-लाल होते. जिवंत Asc च्या भ्रूण. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum आणि oncospheres of bovine tapeworm luminesce मंद गडद हिरव्या किंवा राखाडी-हिरव्या रंगात. या हेल्मिंथ अंड्यांचे मृत भ्रूण "ज्वलंत" केशरी-लाल प्रकाश सोडतात. जिवंत पिनवर्म अळ्या आणि टॉक्सोकार (अंड्यांची कवच) मंद राखाडी-हिरवा प्रकाश उत्सर्जित करतात, जेव्हा ते मरतात तेव्हा रंग डोक्याच्या टोकापासून हलका हिरवा, नंतर पिवळा, नारिंगी आणि शेवटी चमकदार नारिंगी होतो.

एस्केरिड्स आणि व्हीपवर्म्सच्या मृत अंड्यांमध्ये फ्लोरोक्रोम्स - कोरीफॉस्फिलम, प्रिम्युलिन - डागल्यावर, लिलाक-पिवळ्या ते तांबे-लाल रंगाची चमक दिसून येते. व्यवहार्य अंडी चमकत नाहीत, परंतु गडद हिरवी होतात. पॅरागोनिमस वेस्टरमनी आणि क्लोनोर्चिस सायनेन्सिस या ट्रेमेटोड्सची जिवंत अंडी ऍक्रिडाइन केशरी रंगाच्या डागानंतर चमकत नाहीत, तर मृत अंडी पिवळसर हिरवा प्रकाश टाकतात.

हेल्मिंथ लार्वाची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी ल्युमिनेसेन्स पद्धत देखील वापरली जाऊ शकते. तर, अॅक्रिडाइन ऑरेंज (1:2000) लार्व्हा स्ट्राँगाइलेटच्या द्रावणासह फ्लोरोक्रोमाइज्ड, राब्दिटा ग्लो: जिवंत - हिरवा (टिंटसह), मृत - चमकदार केशरी प्रकाश. 10 मिनिटांसाठी फ्लुरोसिन आयसोथियोसायनेट, ऑरामाइन इ.च्या द्रावणाने उपचार केल्यावर ट्रायचिनेलाच्या जिवंत अळ्या चमकत नाहीत किंवा कमकुवत चमक देत नाहीत. फ्लोरोक्रोमाइज्ड मृत अळ्या (1:5000 च्या एकाग्रतेवर) चमकदार चमक देतात.

शेलमधून बाहेर पडणारे जिवंत मिरासिडिया सिलियाच्या अगदी सहज लक्षात येण्याजोग्या हलक्या पिवळ्या कोरोलासह एक मंद निळसर प्रकाश उत्सर्जित करतात, परंतु मृत्यूनंतर 10-15 मिनिटांनंतर ते चमकदार "जळणारे" हलके हिरवे आणि नंतर केशरी-लाल प्रकाशात दिसतात.

थेट पद्धती: हेलमिंथ स्वतः ओळखणे, त्यांचे तुकडे, अंडी, विष्ठेतील अळ्या, मूत्र, पक्वाशया विषयी स्राव, थुंकी, अनुनासिक आणि योनिमार्गातील श्लेष्मा, सबंग्युअल स्पेसची सामग्री, बायोप्सी केलेल्या ऊतींचे तुकडे.

निदान करताना, सर्व प्रकारच्या हेल्मिंथमध्ये राहणाऱ्या अंडी किंवा अळ्या कोणत्याही एका पद्धतीद्वारे ओळखणे अशक्य आहे. पचन संस्थाव्यक्ती अशा प्रकारे, फ्लोटेशन पद्धत वापरताना, ट्रेमाटोड अंडी आणि काही प्रकरणांमध्ये, अनफर्टील्ड राउंडवर्म अंडी पृष्ठभागाच्या फिल्ममध्ये (उच्च विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणामुळे) तरंगत नाहीत. विष्ठेमध्ये, पिनवर्म अंडी, टेनिड ऑन्कोस्फीअर्स शोधणे फारच दुर्मिळ आहे, जे विशेष संशोधन पद्धतींद्वारे शोधले जातात: पिनवर्म्स आणि टेनिइड्ससाठी पेरिअनल फोल्ड्समधून स्क्रॅपिंग, ट्रेमेटोड्ससाठी अवसादन पद्धती (ओपिस्टोर्च अंडी इ.). म्हणून, हेल्मिन्थियासिससाठी रुग्णाच्या लक्ष्यित तपासणीसाठी, रेफरलमधील डॉक्टरांनी कोणत्या हेलमिन्थवर मुख्य लक्ष (निदान) दिले पाहिजे हे सूचित केले पाहिजे, जे प्रयोगशाळेच्या सहाय्यकास या प्रकारचे हेलमिन्थ ओळखण्यासाठी योग्य तंत्र निवडण्यास अनुमती देईल. पासून विष्ठा घेतली वेगवेगळ्या जागास्वच्छ काचेच्या ताटात कमीतकमी 50 ग्रॅम (चमचे) विष्ठा शौचाच्या एक दिवसानंतर प्रयोगशाळेत पाठवावी आणि प्रवेशाच्या दिवशी तपासणी केली पाहिजे.

दुसर्‍या दिवसापर्यंत विष्ठा ठेवणे आवश्यक असल्यास, ते थंड ठिकाणी (0-4 डिग्री सेल्सियस) ठेवले जाते किंवा संरक्षकांपैकी एकाने भरले जाते.

अभ्यासापूर्वी, विष्ठा एका काठीने मिसळली जाते जेणेकरून हेल्मिन्थ अंडी एकूण वस्तुमानात समान रीतीने वितरीत केली जातात.

कोणत्याही हेल्मिंथ अंडी तयार करताना आढळल्यास, पाहणे थांबविले जात नाही, कारण. दुहेरी किंवा तिहेरी आक्रमण असू शकते.

हेल्मिंथियासिसच्या उपचारांच्या परिणामकारकतेचे परीक्षण हेल्मिंथ अंडीसाठी 2-3 आठवड्यांत किंवा उपचारानंतर 2-3 महिन्यांत विष्ठेची तपासणी करून, आढळलेल्या हेलमिन्थवर अवलंबून असते.

मॅक्रोस्कोपिक पद्धतींचा वापर संपूर्ण लैंगिकदृष्ट्या परिपक्व हेलमिंथ किंवा विष्ठेतील त्यांचे तुकडे उघड्या डोळ्यांनी किंवा हाताने धरलेल्या भिंगाने शोधण्यासाठी केला जातो.

अनेकदा मलविसर्जनानंतर विष्ठेच्या पृष्ठभागावर, आपण सक्रियपणे रांगणारे पिनवर्म पाहू शकता; विष्ठा roundworm सह उत्सर्जित; कधीकधी लोक स्वतःच हेल्मिंथ्सचा स्त्राव लक्षात घेतात. डिफिलोबोथ्रियासिस असलेल्या रूग्णांमध्ये, टेपवर्मच्या स्ट्रोबिलाचे तुकडे ("नूडल्स" च्या रूपात) बाहेर उभे राहू शकतात आणि ज्यांना टेनिड्स (डुकराचे मांस किंवा बोवाइन टेपवर्म) ची लागण झाली आहे त्यांच्यामध्ये, हेलमिंथचे भाग ("पांढर्या कट्स" च्या रूपात. ) बर्‍याचदा विष्ठा सोडतात ("पांढरे कट" स्वरूपात) किंवा ते सक्रियपणे गुदद्वारातून बाहेर पडतात.

मॅक्रोस्कोपिक पद्धत यासाठी मुख्य आहे विभेदक निदानटेनिइडोसिस आणि टेनिअर्हिन्कोसिस (सर्वेक्षणाच्या संयोजनात).

विशेष मॅक्रोस्कोपिक पद्धतींपैकी, मल अनुक्रमिक धुण्याची पद्धत वापरली जाते.

एकसमान निलंबन मिळविण्यासाठी विष्ठा पाण्यात मिसळली जाते, त्यानंतर, चांगल्या प्रकाशात, काळ्या फोटोग्राफिक क्युवेट्समध्ये किंवा पेट्री डिशमध्ये गडद पार्श्वभूमीवर वेगळ्या छोट्या भागांमध्ये त्यांची काळजीपूर्वक तपासणी केली जाते. सर्व संशयास्पद पांढरे कण, हेल्मिंथच्या तुकड्यांच्या संशयास्पद मोठ्या फॉर्मेशन्स चिमटा किंवा विच्छेदन सुईने काढले जातात आणि दोन काचेच्या स्लाइड्समधील भिंगाखाली तपासले जातात. लहान हेलमिंथ किंवा सेस्टोड्सचे डोके भिंगाखाली ग्लिसरीनच्या थेंबात किंवा सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जातात.

डुकराचे मांस, बोवाइन टेपवर्म, रुंद टेपवर्मच्या विभागांचे निदान करण्यासाठी ही पद्धत वापरताना, धुतलेले भाग दोन ग्लासमध्ये ठेवले जातात आणि भिंगाखालील प्रकाश किंवा सूक्ष्मदर्शकाच्या कमी विस्ताराकडे पाहून प्रजाती निश्चित केली जाते. गर्भाशयाची रचना (डुकराच्या टेपवर्मच्या परिपक्व विभागात, 8- 12 बाजूकडील शाखा, आणि बुल टेपवर्ममध्ये 18-32, अधिक वेळा 28-32, विस्तृत टेपवर्ममध्ये, विभाग विस्तीर्ण असतात आणि गर्भाशयात असते. "रोसेट" च्या रूपात केंद्र). जर गर्भाशय खराबपणे दिसत असेल तर ते प्रथम 50% ग्लिसरीन द्रावणात काही काळ धरून ठेवता येते, त्यानंतर निर्जन गर्भाशयाच्या खोड देखील स्पष्टपणे दिसतात.

निघून गेलेल्या डोक्याच्या संरचनेनुसार हे सेस्टोड्स निर्धारित करताना, ते काचेच्या स्लाइड्स (किंवा कव्हरस्लिपने झाकलेले) दरम्यान ग्लिसरॉलच्या एका थेंबात मानेने काळजीपूर्वक ठेवलेले असतात आणि न पिळता, कमी मोठेपणावर सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जातात.

सूक्ष्म पद्धतीसाधे, जटिल आणि विशेष मध्ये विभागलेले.

सोप्या पद्धती आहेत मूळ स्मीअर, लुगोलच्या सोल्युशनसह नेटिव्ह स्मीअर, काटोनुसार सेलोफेनच्या खाली जाड स्मीअरच्या पद्धती, वळणे (शुल्मनच्या मते) आणि पेरिअनल स्क्रॅपिंग.

जटिल पद्धती अधिक कार्यक्षम आहेत आणि तयारीमध्ये अंडी एकाग्रतेवर आधारित आहेत. त्यामध्ये लिक्विड अभिकर्मकांसह विष्ठेवर पूर्व-उपचार करणे समाविष्ट आहे, परिणामी हेलमिन्थ अंडी द्रवाच्या पृष्ठभागावर एकतर अवक्षेपित होतात किंवा तरंगतात.

जटिल पद्धतींमध्ये समृद्धी पद्धतींचा समावेश आहे:

अ) फ्लोटेशन (जेव्हा अंड्यांचे विशिष्ट गुरुत्व खारट द्रावणाच्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणापेक्षा कमी असते आणि अंडी पृष्ठभागाच्या फिल्ममध्ये तरंगतात);

b) अवसादन (जेव्हा अंड्यांचे विशिष्ट गुरुत्व मीठ द्रावणाच्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणापेक्षा जास्त असते आणि अंडी गाळात स्थिर होतात).

हेल्मिंथ्स, सिस्ट्स आणि प्रोटोझोआच्या वनस्पतिवत् स्वरूपाची अंडी आणि अळ्या शोधण्याच्या विशेष पद्धती म्हणजे स्क्रॅपिंग, फ्लोटेशन, सेडिमेंटेशन, लार्वोस्कोपी, प्रोटोझोस्कोपी, पित्ताचा अभ्यास आणि विष्ठा, थुंकी इत्यादींच्या डागांच्या पद्धती.

विष्ठा तपासण्यासाठी सोप्या पद्धती

मूळ स्मीअर. वितरीत केलेल्या भागाच्या वेगवेगळ्या भागातून लाकडी काठीने मलमूत्राचा एक छोटा कण घेतला जातो, 50% ग्लिसरॉल द्रावणाच्या थेंबात काचेच्या स्लाइडवर चांगले घासले जाते आणि 2-3 काचेच्या स्लाइड्सवर एक पातळ स्मीअर बनवले जाते. सूक्ष्मदर्शकाखाली किमान 3 तयारी तपासल्या जातात. पद्धतीचा तोटा: थोड्या प्रमाणात सामग्री पाहिली जाते, म्हणून ती स्वतंत्र पद्धत म्हणून वापरली जात नाही.

वळण पद्धत(शुल्मन). 2.0-3.0 ग्रॅम विष्ठा एका ग्लासमध्ये ठेवली जाते, काचेच्या रॉडने 5 पट खारट किंवा डिस्टिल्ड वॉटरसह पूर्णपणे ढवळून, 2-3 मिनिटे जलद हालचाली करा आणि मिश्रणातून त्वरीत काठी काढून टाका. स्टिकच्या शेवटी मिश्रणाचा एक थेंब काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केला जातो आणि मायक्रोस्कोप केला जातो. केंद्रापसारक शक्तीच्या तत्त्वामुळे काठीवर अंडी आणि अळ्या जमा होतात.

सेलोफेनसह काटो जाड स्मीअर पद्धत. रासायनिक अभिकर्मक: 100% ग्लिसरॉल, 6% फिनॉल द्रावण (100 मिली पाणी + 6 ग्रॅम फिनॉल), 3% मॅलाकाइट ग्रीन द्रावण (2.5 मिली डिस्टिल्ड वॉटर + 75 मिली मॅलाकाइट ग्रीन).

कार्यरत द्रावण तयार करणे: 100 मिली 6% फिनॉल द्रावण + 100 मिली शुद्ध ग्लिसरीन + 1.2 मिली 3% मॅलाकाइट ग्रीन द्रावण.

सेलोफेन पट्ट्या तयार करणे: सेलोफेन पट्ट्या कापल्या जातात, ज्याचा आकार काचेच्या स्लाइडशी संबंधित असतो. सेलोफेन हायड्रोफिलिक असणे आवश्यक आहे (जळणारे सेलोफेन योग्य आहे; जर ते वितळले तर ते अनुपयुक्त आहे). कार्यरत समाधानामध्ये 5 हजार पट्ट्यांपर्यंत प्रक्रिया केली जाऊ शकते. कार्यरत द्रावणात वापरासाठी तयार होईपर्यंत सेलोफेन पट्ट्यांचा एक्सपोजर वेळ किमान 24 तासांचा असतो.

संशोधन प्रगती. 50 मिलीग्राम विष्ठा (मोठ्या वाटाण्याच्या आकाराची) एका काचेच्या स्लाइडवर लावली जाते, वैयक्तिक स्टिकने (काच, लाकडी) घासली जाते, सेलोफेन पट्टीने झाकलेली असते आणि एकसमान जाड स्मीअर मिळेपर्यंत रबर स्टॉपरने वर घासली जाते. . औषध एका तासासाठी खोलीच्या तपमानावर किंवा थर्मोस्टॅटमध्ये 40 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 20-30 मिनिटे आणि सूक्ष्मदर्शक पद्धतीने वाळवले जाते (खोलीच्या तापमानात एक्सपोजरची वेळ 5-6 तास किंवा त्याहून अधिक वाढू शकते).

कार्यक्षमतेच्या दृष्टीने, ही पद्धत फ्लोटेशन पद्धतीकडे जाते, परंतु तीव्र आणि मध्यम तीव्रतेचे आक्रमण प्रकट करते.

हे स्वतंत्र निदान पद्धत म्हणून वापरले जाते आणि लोकसंख्येच्या मोठ्या प्रमाणावर तपासणीसाठी शिफारस केली जाते.

क्लिनिकल डायग्नोस्टिक प्रयोगशाळांमध्ये, डॉक्टरांच्या निर्देशानुसार विशिष्ट निदानांच्या अनुपस्थितीत हेल्मिंथ्सचे निदान करण्यासाठी एक एकीकृत पद्धत म्हणून वापरली जाते.

लुगोलच्या सोल्युशनसह पेरिअनल स्क्रॅपिंग आणि नेटिव्ह स्मीअरच्या पद्धती विशेष पद्धतींवरील विभागात वर्णन केल्या आहेत.

अत्याधुनिक विष्ठा संवर्धन पद्धती

संवर्धन पद्धती हेल्मिंथ अंड्यांचे विशिष्ट गुरुत्वाकर्षण आणि वापरलेल्या मीठाच्या द्रावणातील फरकावर आधारित आहेत.

फ्लोटेशन पद्धत लागू करताना, खालील मीठ द्रावण वापरले जाऊ शकतात:

1. लीड नायट्रेट PbNO3 (लीड नायट्रेट) चे द्रावण 1.5 घनतेसह. 1 लिटर पाण्यात प्रति पदार्थ 650 ग्रॅम दराने तयार. मीठ एका मुलामा चढवलेल्या भांड्यात गरम पाण्यात विरघळले जाते, स्टोव्हवर गरम केले जाते आणि पूर्णपणे विरघळत नाही तोपर्यंत सतत ढवळत राहते. द्रावण फिल्टर करणे आवश्यक नाही. द्रावण अभ्यासाच्या दिवशी तयार केले जाते, कारण कालांतराने ते अवक्षेपित होते आणि 24 तासांनंतर त्याची घनता कमी होऊ लागते. मोठ्या संख्येने, नंतर अभ्यासापूर्वी पुढील दिवसांत ते गरम केले जाते, गाळ ढवळत आहे. द्रावणाची तयारी फ्युम हूडमध्ये केली जाते, कारण लीड नायट्रेट हे हेवी मेटल मीठ आहे.

2. अमोनियम नायट्रेट NH4NO3 (ग्रॅन्युलर किंवा सामान्य अमोनियम नायट्रेट) चे 1.3 घनतेचे द्रावण मागील प्रमाणेच तयार केले जाते, परंतु प्रति 1 लिटर पदार्थाच्या 1500 ग्रॅम दराने. गरम पाणी.

3. सोडियम नायट्रेट NaNO3 किंवा सोडियम नायट्रेटचे 1.38-1.4 घनतेचे द्रावण प्रति 1 लिटर गरम पाण्यात 1000 ग्रॅम पदार्थाच्या दराने तयार केले जाते.

4. सोडियम थायोसल्फेट Na2S2O3×5H2O (सोडियम हायपोसल्फेट) चे 1.4 घनतेचे द्रावण प्रति 1 लिटर गरम पाण्यात 1750 ग्रॅम पदार्थाच्या दराने तयार केले जाते.

5. सोडियम सल्फेट Na2SO4 (एप्सम सॉल्ट) चे 1.26-1.28 घनतेचे द्रावण प्रति 1 लिटर गरम पाण्यात 920 ग्रॅम पदार्थाच्या दराने तयार केले जाते.

6. 1.82 घनतेसह झिंक क्लोराईड ZnCl2 (झिंक क्लोराईड) चे द्रावण प्रति 1 लिटर गरम पाण्यात 2000 ग्रॅम पदार्थाच्या दराने तयार केले जाते. थंड केलेले द्रावण क्रिस्टलाइज होत नाही.

7. सोडियम क्लोराईड NaCl (सामान्य मीठ) चे संतृप्त द्रावण 1.18-1.2 घनतेसह. वर! एल पाण्यात, उकळत्या पाण्याच्या मुलामा चढवलेल्या बादलीमध्ये भागांमध्ये 400-420 ग्रॅम मीठ घाला, पूर्णपणे विसर्जित होईपर्यंत सतत ढवळत रहा. द्रावण थंड झाल्यावर, सोडियम क्लोराईडचे स्फटिक अवक्षेपित होतात.

फ्लोटेशन सोल्यूशन्सचे विशिष्ट गुरुत्वाकर्षण खोलीच्या तपमानावर द्रावण पूर्णपणे थंड झाल्यावरच एरोमीटरने मोजले जाते.

पिग्मी टेपवर्म, व्हिपवर्म, हुकवर्म, एस्केरिस आणि ब्रॉड टेपवर्मची अंडी शोधण्यासाठी फ्लोटेशन पद्धती सर्वात प्रभावी आहेत.

पृष्ठभागाची फिल्म वायर लूप किंवा काचेच्या स्लाइडसह काढली जाऊ शकते.

संतृप्त सोडियम क्लोराईड द्रावणात, चित्रपटाची तपासणी 30-40 मिनिटांनंतर, अमोनियम नायट्रेट द्रावणात - 10-20-30 मिनिटांनंतर केली जाऊ शकते.

वायर लूपसह फिल्म काढताना, कमीतकमी 8 थेंब तपासले जातात.

चित्रपटातून स्लाइड काढल्या जातात अधिक अंडीवायर लूपपेक्षा. काच फ्लोटेशन सोल्यूशनच्या द्रवाच्या संपर्कात असणे आवश्यक आहे, जे पिपेटसह बीकरमध्ये जोडले जाते. स्थायिक झाल्यानंतर, काच काढला जातो, काचेवर ओले पृष्ठभाग वर ठेवा मोठा आकारआणि सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले. वापरण्यापूर्वी स्लाइड्स कमी करणे आवश्यक आहे.

संशोधनासाठी, तुमच्याकडे असणे आवश्यक आहे: काचेच्या स्लाइड्स, रासायनिक कप, वायर लूप, क्युवेट्स, पेट्री डिश, पिपेट्स, नाशपाती, काच किंवा लाकडी काठ्या.

संशोधन प्रगती. 5 ग्रॅम विष्ठा फ्लोटेशन सोल्यूशनच्या 10 पट प्रमाणात ओतली जाते (शक्यतो 1.38-1.40 च्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणासह), पूर्णपणे ढवळून, विरघळणारे मोठे कण वरून काढून टाकले जातात आणि 10-15 मिनिटांसाठी निलंबन सोडले जाते. नंतर फिल्म एकतर काचेच्या स्लाइडवर लूपने किंवा काचेच्या स्लाइडसह काढली जाते. विष्ठा पातळ करण्यासाठी, 30-50 मिली क्षमतेचे कप घेणे चांगले आहे, सोल्यूशन फ्लश कडांनी ओतणे (किंवा 2-3 मिमी खाली भरणे) आणि मिश्रण एका स्लाइडने झाकणे आणि नंतर फ्लोटेशन सोल्यूशन घाला. स्लाइडच्या संपर्कात येईपर्यंत पिपेट. 10-20 मिनिटांनंतर, काच त्वरीत काढून टाकला जातो आणि त्यावर उरलेली फिल्म कव्हर ग्लासशिवाय मायक्रोस्कोपिकली स्कॅन केली जाते.

सेटलिंग-सेडिमेंटेशन पद्धती

जिओहेल्मिंथ्स, विष्ठेतील बायोहेल्मिंथ्सची अंडी शोधण्यासाठी आणि ओपिस्टोर्कियासिससाठी विशेष संशोधन पद्धती म्हणून अवसादन पद्धती वापरल्या जातात.

गोर्याचेव्ह-झोलोतुखिन पद्धत(गोर्याचेव्हची सरलीकृत पद्धत). रासायनिक ग्लासमध्ये 3-4 मिली पाण्यात सुमारे 1.5 ग्रॅम विष्ठा ढवळली जाते. परिणामी निलंबन कापसाचे किंवा रेशमाचे तलम पारदर्शक कापड दोन थरांद्वारे सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये फिल्टर केले जाते, त्यात असलेल्या संतृप्त सोडियम क्लोराईडच्या 4-5 मिली द्रावणाच्या वर काळजीपूर्वक थर लावले जाते. टेस्ट ट्युब एका रॅकमध्ये 15-20 तासांसाठी ठेवल्या जातात, या काळात, भारी ट्रेमेटोड अंडी स्थिर होतात. दोन स्पष्टपणे सीमांकित स्तर मिळवा. गाळाची सूक्ष्म तपासणी केली जाते.

इथर-फॉर्मेलिन पद्धत.हे सर्व आतड्यांसंबंधी आक्रमणांचे निदान करण्यासाठी आणि प्रोटोझोआ आणि ओपिस्टोर्चिया अंडीसाठी एक विशेष पद्धत म्हणून वापरले जाते.

उपकरणे: 3000 आरपीएम वर सेंट्रीफ्यूज; सेंट्रीफ्यूज ग्रॅज्युएटेड ट्यूब, फनेल; मेटल स्ट्रेनर (चहा) किंवा दोन-स्तर पट्टी; काचेच्या स्लाइड्स आणि कव्हरस्लिप्स; लाकडी (किंवा काचेच्या) काठ्या; कापूस, पट्टी.

रासायनिक अभिकर्मक: 10% फॉर्मेलिन द्रावण (1 भाग फार्मास्युटिकल फॉर्मेलिन द्रावण आणि 4 भाग डिस्टिल्ड वॉटर); इथाइल इथर (वैद्यकीय).

10% फॉर्मेलिन द्रावणातील 7 मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतले जाते आणि 1 ग्रॅम विष्ठा ठेवली जाते (इतकी विष्ठा की चाचणी ट्यूबमधील द्रावण 8 मिली पर्यंत वाढते). एकसंध मिश्रण तयार होईपर्यंत विष्ठेमध्ये फॉर्मेलिन मिसळले जाते आणि नंतर ते धातूच्या गाळणीतून (किंवा दोन-थर कापसाचे किंवा रेशमाचे तलम पारदर्शक कापड, मलमपट्टी) दुसर्या सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतले जाते (जर विष्ठा गाळणीवर राहिली तर गाळणीला फॉर्मेलिनने धुवावे लागेल). या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, स्टॉपरमध्ये 2 मिली इथर घाला आणि 30 सेकंद जोमाने हलवा.

मिश्रण एका मिनिटासाठी 3000 rpm वर सेंट्रीफ्यूज केले जाते (1500 rpm वर दोन मिनिटांसाठी शक्य आहे). इथर-फॉर्मेलिनच्या प्रतिक्रियेमुळे, प्रथिनांचे कोग्युलेशन चाचणी ट्यूबच्या शीर्षस्थानी कॉर्कच्या स्वरूपात होते आणि हेलमिन्थ अंडी उपसतात. कोग्युलंट लेयर काढून टाकला जातो, सुपरनॅटंटचा निचरा केला जातो, रेसिपीटेट काचेच्या स्लाइडवर थेट टेस्ट ट्यूबमधून किंवा पाश्चर पिपेटच्या सहाय्याने लागू केले जाते, कव्हर स्लिपने झाकले जाते आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली पाहिले जाते.

इथर-एसिटिक पर्जन्य पद्धत. हेल्मिन्थ अंड्यांचे इथर-एसिटिक पर्जन्याचे तत्त्व म्हणजे 10% जलीय द्रावणासह मलच्या नमुन्यांची अनुक्रमिक प्रक्रिया. ऍसिटिक ऍसिडआणि ईथर. ऍसिटिक ऍसिड इतरांपेक्षा चांगले आहे रासायनिक संयुगेविष्ठा नमुना emulsifies. हे न पचलेल्या कणांमध्ये प्रवेश करते, ज्यामध्ये प्रामुख्याने फायबर असते, जे, जेव्हा उत्तम सामग्रीसेंट्रीफ्यूगेशन नंतर अवक्षेपण करून संशोधनात व्यत्यय आणणे. ट्यूबमध्ये ईथरची त्यानंतरची भर पडणे आणि ढवळणे यामुळे ट्यूबच्या सामग्रीमधून ऍसिटिक ऍसिड बाहेर काढले जाते आणि त्यात गर्भित केलेल्या मल कणांसह. इथर आणि ऍसिटिक ऍसिडच्या मिश्रणाचे विशिष्ट गुरुत्व पाण्याच्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणापेक्षा कमी असल्याने, या पदार्थांसह उपचार केलेले स्टूलचे नमुने वर तरंगतात आणि हेल्मिन्थ अंडी, ज्यांचे विशिष्ट गुरुत्व मोठे असते, स्थिर होते.

इथर-ऍसिटिक पर्जन्यवृष्टीनंतर मिळणारे अवक्षेपाचे प्रमाण इथर-फॉर्मेलिन पर्जन्यवृष्टीच्या तुलनेत 3-4 पट कमी असते. हे त्यामध्ये हेल्मिंथ अंडी शोधण्यात मोठ्या प्रमाणात सुविधा देते आणि 0.5-1 ग्रॅमच्या नमुन्यासह संपूर्ण गाळाचा अभ्यास करण्यास आपल्याला अनुमती देते. इथर-एसिटिक पद्धतीची विषाक्तता 5 पट कमी आहे.

संशोधन प्रगती. एसिटिक ऍसिडच्या 10% द्रावणातील 7 मिली ग्रॅज्युएटेड सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतले जाते आणि विष्ठेचा 1 ग्रॅम नमुना जोडला जातो (म्हणजेच, विष्ठेचे प्रमाण ज्यावर ऍसिटिक ऍसिडचे द्रावण 8 मिली पर्यंत वाढते). काचेच्या किंवा लाकडी काठीने नीट ढवळून घ्यावे. कापसाचे किंवा रेशमाचे तलम पारदर्शक कापडाचे दोन थर असलेल्या फनेलमधून दुसर्या सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये गाळा. इमल्सेटमध्ये 2 मिली इथाइल इथर (म्हणजे 10 मिली पर्यंत) जोडले जातात. चाचणी नळ्या रबर स्टॉपरने बंद केल्या जातात (हे पेनिसिलिनच्या कुपीतून शक्य आहे) आणि 15 सेकंदांसाठी हलवल्या जातात. स्टॉपर काढून टाकल्यानंतर, नळ्या एका मिनिटासाठी 3000 rpm वर 2 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केल्या जातात. ट्यूबमधून सुपरनॅटंट टाकून दिले जाते. काही प्रकरणांमध्ये, तयार केलेला मल प्लग सुपरनॅटंटच्या स्त्रावमध्ये हस्तक्षेप करतो. या प्रकरणात, कॉर्क एका काचेच्या किंवा लाकडी रॉडने चाचणी ट्यूबच्या भिंतीपासून वेगळे केले जाते. संपूर्ण प्रक्षेपण एका काचेच्या स्लाइडवर पिपेट केले जाते आणि कमी मोठेपणावर कव्हरस्लिपच्या खाली सूक्ष्मदर्शक केले जाते. वर्षाव सहसा लहान आणि रंगहीन असतो. हेल्मिंथ अंडी, विशेषत: लहान फ्ल्यूक अंडी, चांगली आढळतात.

रासायनिक अवसादन पद्धत. अभ्यासाचे तत्त्व 1.15 च्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणासह खारट द्रावणात विष्ठेच्या नमुन्यातून अंड्यांचे अवसादन यावर आधारित आहे. पद्धतीचे सार चाचणी ट्यूबच्या थेट सेंट्रीफ्यूगेशनमध्ये आहे ज्यामध्ये एसिटिक ऍसिडच्या 1% द्रावणात इमल्सिफाइड स्टूल प्लग सोडियम नायट्रेट (एसपी. वजन 1.16) च्या द्रावणावर स्तरित केला जातो. खारट द्रावणाचे उच्च विशिष्ट गुरुत्वाकर्षण आणि रासायनिक अभिक्रियेद्वारे बाहेर पडणारे फुगे, एकसंध विष्ठेच्या थरात प्रवेश करून, त्याचे अवसादन रोखतात. हेल्मिंथ अंडी थोड्या प्रमाणात फायबरसह अवक्षेपित होतात. 10% ऍसिटिक ऍसिड आणि इथरने उपचार करून गाळ उरलेल्या डेट्रिटसपासून साफ ​​केला जाऊ शकतो. या प्रकरणात, फक्त एक हेलमिन्थ अंडी उरते, जे त्यांची ओळख मोठ्या प्रमाणात सुलभ करते.

संशोधन प्रगती. 1.15 च्या विशिष्ट गुरुत्वाकर्षणासह 6 मिली सोडियम नायट्रेट द्रावण एका ग्रॅज्युएटेड सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतले जाते. 7 मिली 1% ऍसिटिक ऍसिड द्रावण दुसर्या चाचणी ट्यूबमध्ये घाला. विष्ठेचा नमुना सादर केला जातो (0.5 ग्रॅमच्या नमुन्यासाठी 7.5 मिली पर्यंत आणि 1.0 ग्रॅमच्या नमुन्यासाठी 8 मिली पर्यंत). काचेच्या रॉडने नमुना पूर्णपणे मिसळा. सोडियम नायट्रेटच्या द्रावणावर कापसाचे किंवा रेशमाचे तलम पारदर्शक कापड एक थर असलेल्या फनेलमधून गाळा. स्तरित फिल्टर असलेली ट्यूब 5 मिनिटांसाठी 1500-2000 rpm वर सेंट्रीफ्यूज केली जाते. नळी वेगाने उलटी करून सुपरनॅटंट टाकून द्या. टेस्ट ट्यूबमध्ये 3-4 मिली एसिटिक ऍसिडचे 10% द्रावण आणि 0.5 मिली इथर घाला, रबर स्टॉपरने बंद करा आणि हलवा. 1 मिनिटासाठी सेंट्रीफ्यूगेशन पुन्हा करा. सुपरनॅटंट टाकून द्या. अवक्षेपण एका काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केले जाते, कव्हरस्लिपने झाकलेले असते आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जाते.

बिले, ड्युओडेनल सामग्री, थुंकी, रक्त, लघवी आणि स्नायूंचा हेल्मिंथोलॉजिकल अभ्यास

ड्युओडेनल सामग्री आणि पित्त मध्ये अंडी आणि हेल्मिंथ्सच्या अळ्या शोधणे. पित्त आणि पक्वाशया विषयी सामग्रीचा अभ्यास यकृत आणि पित्ताशयाच्या हेल्मिन्थियासिसच्या संशयासह केला जातो (ओपिस्टोर्चियासिस, क्लोनोर्चियासिस, डायक्रोसेलियासिस) आणि ड्युओडेनम(स्ट्राँगलोइडायसिस).

संशोधन प्रगती. ड्युओडेनल सामग्री आणि पित्त (भाग A, B, C) नेहमीच्या पद्धतीने प्रोबिंग वापरून मिळवले जातात. भाग बी साठी, तपासणीद्वारे 33% सोल्यूशन सादर करून पित्ताशयाचा प्रतिक्षेप प्राप्त करण्याची शिफारस केली जाते. मॅग्नेशियम सल्फेट. तपासलेल्या द्रवातून, त्यात तरंगणारे फ्लेक्स निवडले जातात आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली पाहिले जातात आणि नंतर ते सल्फ्यूरिक इथरच्या समान प्रमाणात मिसळले जातात. मिश्रण पूर्णपणे हलवले जाते आणि सेंट्रीफ्यूज केले जाते. सुपरनॅटंट टाकून दिले जाते आणि संपूर्ण अवक्षेपण सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जाते.

पू आणि श्लेष्माच्या अनुपस्थितीत, पित्त आणि पक्वाशया विषयी सामग्री इथरमध्ये मिसळल्याशिवाय केंद्रीत केली जाते.

थुंकीची तपासणी. हेल्मिंथोलॉजिकल प्रॅक्टिसमध्ये, थुंकीची तपासणी केली जाते प्रयोगशाळा निदानपॅरागोनिमोसिस कधीकधी, स्किस्टोसोम अंडी, एस्केरिस लार्वा, इचिनोकोकल मूत्राशयाचे घटक आढळतात.

काचेच्या स्लाइडवर थुंकीपासून मूळ स्मीअर तयार केला जातो, ज्याची सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासणी केली जाते.

थुंकीत पू भरपूर प्रमाणात असल्याने, ते कॉस्टिक सोडा किंवा कॉस्टिक पोटॅशियमच्या 0.5% द्रावणात मिसळले जाते, 5 मिनिटे हलवले जाते आणि सेंट्रीफ्यूज केले जाते. गाळाची सूक्ष्म तपासणी केली जाते.

रक्त अभ्यास. एखाद्या रुग्णाला फिलेरियासिस असल्याचा संशय असल्यास रक्ताची तपासणी केली जाते.

या वस्तुस्थितीमुळे काही प्रकारच्या फिलेरियासिस (लोयासिस, वुचेरीओसिस सबपेरिओडिक स्ट्रेनमुळे) मध्ये अळ्या (मायक्रोफिलारिया) असतात. परिधीय रक्तफक्त दिवसा, आणि काहींसह (ब्रुगियासिस, नियतकालिक ताणामुळे व्हुहेरिओसिस) - केवळ रात्री, अनुक्रमे, यावेळी ते विश्लेषणासाठी रक्त घेतात.

रक्ताचे नमुने घेण्याचे तंत्र, तयारी तयार करणे (पातळ स्मीअर आणि जाड थेंब), त्यांचे डाग (रोमानोव्स्कीच्या मते) आणि अभ्यास हे मलेरियाच्या प्रयोगशाळेच्या निदानाप्रमाणेच आहेत.

मायक्रोफिलेरिया वेगळे प्रकारशरीराची लांबी, रुंदी, वक्रता, टोपीची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती, पुच्छाच्या टोकाचा आकार, शरीरातील आण्विक पदार्थाचे स्थान आणि अळ्यांच्या पुच्छ प्रदेशात फरक आहे.

संशोधन प्रगती. मूत्र कमीतकमी 30 मिनिटांसाठी सेटल केले जाते, नंतर वरचा थर काढून टाकला जातो, 10-15 मिली गाळ सोडला जातो, जो सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतला जातो आणि 1-2 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केला जातो. सुपरनेटंट काढून टाकल्यानंतर, अवक्षेप एका काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केला जातो आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासला जातो.

मसल बायोप्टी स्टडी

ट्रायचिनोस्कोपी पद्धत. जेव्हा ट्रायचिनोसिसचा संशय येतो तेव्हा रुग्णाच्या स्नायूंच्या बायोप्सीच्या नमुन्यांचा अभ्यास करण्याची आवश्यकता उद्भवते.

बायोप्सी सामान्य नियमांनुसार केली जाते. डेल्टॉइड स्नायूची सहसा बायोप्सी केली जाते. पॅथोएनाटोमिकल तपासणी दरम्यान, डायफ्राम, अन्ननलिका, जीभ, मस्तकी आणि आंतरकोस्टल स्नायू, लिंब फ्लेक्सर्स, नेत्रगोलकाच्या स्नायूंची बायोप्सी करणे शक्य आहे, कारण ते ट्रायचिनेला अळ्यामुळे सर्वात जास्त प्रभावित होतात.

प्रयोगशाळेत, स्नायूचा बायोप्सी केलेला तुकडा खूप लहान तुकड्यांमध्ये (मायक्रोटोम) कापला जातो, जो दोन ग्लासमध्ये ठेवला जातो, स्नायू तंतू चिरडतात आणि सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जातात. सध्या, विशेष सूक्ष्मदर्शक, ट्रायचिनेलोस्कोप, या उद्देशासाठी मोठ्या प्रमाणावर वापरले जातात.

ट्रायचिनोसिसच्या बाबतीत, स्नायू तंतूंच्या बाजूने ट्रायचिनोस्कोपी केल्याने अंडाकृती आकाराचे (लिंबूसारखे) ट्रायचिनोसिस कॅप्सूल स्पष्टपणे दिसून येतात. मानवी कॅप्सूलचा सरासरी आकार 0.4 x 0.26 मिमी आहे. कॅप्सूलमध्ये, नियमानुसार, 2.5 वळणांमध्ये सर्पिलपणे दुमडलेला एक ट्रायचिनेला असतो. आक्रमणाच्या उच्च तीव्रतेसह, एका कॅप्सूलमध्ये 2 किंवा 3 अळ्या असू शकतात. कॅप्सूलला लागून असलेले स्नायू तंतू त्यांचे ट्रान्सव्हर्स स्ट्रायेशन गमावतात आणि एकसंध स्वरूप धारण करतात.

त्याच प्रकारे मांसाचे परीक्षण केले जाते मांस उत्पादनेज्यामुळे संसर्ग झाला.

स्नायू पचन पद्धत. पद्धत अधिक प्रभावी आहे.

संशोधन प्रगती. अभ्यास केलेले स्नायू बारीक चिरून 1:15-20 च्या प्रमाणात कृत्रिम जठरासंबंधी रसाने भरले जातात. परिणामी मिश्रण 12-16 तासांसाठी 37°C तापमानावर थर्मोस्टॅटमध्ये ठेवले जाते. या कालावधीनंतर, गाळाची सूक्ष्म तपासणी केली जाते, ज्यामध्ये पचलेल्या स्नायू तंतूंच्या अवशेषांमध्ये मुक्त ट्रायचिनेला अळ्या आढळतात.

कृत्रिम गॅस्ट्रिक रस फार्मसीमध्ये खरेदी केला जाऊ शकतो किंवा प्रयोगशाळेत तयार केला जाऊ शकतो. हे करण्यासाठी, 1 लिटर डिस्टिल्ड पाण्यात 10 मिली एकाग्र हायड्रोक्लोरिक ऍसिड घाला; वापरण्यापूर्वी, 1 लिटर पातळ केलेल्या ऍसिडमध्ये 30 ग्रॅम पेप्सिन जोडले जाते.

परिमाणात्मक संशोधन पद्धती

आक्रमणाची तीव्रता निश्चित करण्यासाठी, विविध अँथेल्मिंटिक औषधांच्या प्रभावीतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी, जंतनाशकाची गुणवत्ता निश्चित करण्यासाठी, चालू असलेल्या मोठ्या प्रमाणात उपचारात्मक आणि प्रतिबंधात्मक उपायांचे निरीक्षण करण्यासाठी परिमाणात्मक संशोधन पद्धती वापरल्या जातात.

हेल्मिंथ अंड्यांचे परिमाणात्मक निर्धारण दोन पद्धतींनी केले जाते: स्टॉल पद्धत आणि क्रॅसिलनिकोव्ह आणि व्होल्कोवा (1974) पद्धत.

स्टॉल पद्धत. अभ्यास करण्यासाठी, तुमच्याकडे मायक्रोस्कोप, 56 आणि 60 मिली मार्क असलेले ग्लास फ्लास्क, मोजण्याचे सिलेंडर, काचेचे मणी, फ्लास्कसाठी एक रबर स्टॉपर, ग्रॅज्युएटेड पिपेट्स, ग्लास स्लाइड्स आणि 0.4% सोडियम हायड्रॉक्साइड द्रावण असणे आवश्यक आहे.

संशोधन प्रगती. फ्लास्कमध्ये डेसिनॉर्मल सोडियम हायड्रॉक्साइड द्रावण (अंदाजे 0.4% एकाग्रता) 56 मिली मार्कपर्यंत मोजणाऱ्या सिलेंडरसह घाला आणि द्रव पातळी 60 मिली मार्कपर्यंत (म्हणजे 4 मिली विष्ठा) येईपर्यंत विष्ठा घाला. मिश्रण 1 मिनिटासाठी काचेच्या मण्यांनी पूर्णपणे हलवले जाते, रबर स्टॉपरने भांडे बंद करा (आपण स्टिकने देखील मिसळू शकता). झटकून टाकल्यानंतर ताबडतोब, 0.075 मिली मिश्रण एका ग्रॅज्युएटेड विंदुकाने गोळा केले जाते (त्यात 0.005 मिली विष्ठा असते), एका काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केले जाते आणि तयारीतील अंडींची संख्या सूक्ष्मदर्शकाखाली मोजली जाते. 1 ग्रॅम विष्ठेमध्ये अंड्यांची संख्या निश्चित करण्यासाठी, आढळलेली संख्या 200 ने गुणाकार केली जाते.

उपचारापूर्वी आणि नंतर रुग्णामध्ये आढळलेल्या तयारीतील अंड्यांच्या संख्येची तुलना, आपल्याला जंतनाशकाच्या प्रभावीतेचा न्याय करण्यास अनुमती देते.

स्टॉलची पद्धत सोपी आहे, सर्व हेल्मिंथियासिसमध्ये तुलनात्मक परिणाम देते, ज्याचे रोगजनक रुग्णाच्या आतड्यांमध्ये पद्धतशीरपणे अंडी स्राव करतात. तथापि, पद्धतीचा तोटा म्हणजे त्याची तुलनेने कमी संवेदनशीलता, विशेषत: आक्रमणाच्या कमी तीव्रतेवर.

क्रॅसिलनिकोव्ह-व्होल्कोवा पद्धत. या पद्धतीचे परीक्षण करताना, किमान 1 ग्रॅम विष्ठा एका काचेच्या फ्लास्कमध्ये किंवा मोठ्या टेस्ट ट्यूबमध्ये 1% लोटस सोल्यूशन (किंवा 1.5% अतिरिक्त द्रावण) 1:10 च्या प्रमाणात मिसळली जाते. एकसंध निलंबन तयार होईपर्यंत निलंबन पूर्णपणे हलवले जाते, त्यानंतर 0.1 मिली निलंबन (0.01 ग्रॅम विष्ठेच्या समतुल्य) त्वरीत ग्रॅज्युएटेड विंदुकाने गोळा केले जाते आणि काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केले जाते. 50% मध्ये किमान एक दिवस वय असलेल्या कव्हर ग्लास किंवा सेलोफेन प्लेट (20 x 30 मिमी) सह तयार केले जाते. जलीय द्रावणग्लिसरीन

संपूर्ण तयारीमध्ये अंडींची संख्या मोजा. 1 ग्रॅम विष्ठेमध्ये अंड्याची संख्या मोजण्यासाठी, परिणामी संख्या 100 ने गुणाकार करणे आवश्यक आहे.

स्टॉल पद्धतीपेक्षा या पद्धतीचे अनेक फायदे आहेत. प्रथम, ते अधिक संवेदनशील आहे आणि कमी प्रमाणात आक्रमणासह हेल्मिंथ शोधण्यास अनुमती देते. दुसरे म्हणजे, मोठ्या प्रमाणावर तपासणी करणे खूप सोयीचे आहे, कारण डिटर्जंट सोल्यूशन्स, हेल्मिन्थ अंड्यांचे संरक्षक असल्याने, अगदी ताजे नसलेल्या सामग्रीचा अभ्यास करणे शक्य करते. तथापि, डिटर्जंट द्रावणात थेट विष्ठा जमा करणे ही एक पूर्व शर्त आहे.

परिमाणवाचक संशोधनासाठी, फ्लोटिंग अंडीच्या तत्त्वावर आधारित वर्णन केलेल्या कोणत्याही युनिफाइड गुणात्मक पद्धतींचा वापर केला जाऊ शकतो. परंतु या प्रकरणात, त्याच प्रमाणात विष्ठा, त्याच प्रमाणात फ्लोटेशन द्रावण विश्लेषणासाठी घेतले पाहिजे. खालील तक्त्यानुसार, 1 ग्रॅम विष्ठेमध्ये अंड्यांची संख्या जाणून आक्रमणाच्या डिग्रीची गणना केली जाऊ शकते.

हेल्मिन्थ अंड्याच्या संख्येवर अवलंबून आक्रमणाची तीव्रता

1 ग्रॅम विष्ठेमध्ये

सेरोलॉजिकल डायग्नोसिस

रक्ताच्या सीरममधील विशिष्ट प्रतिपिंडांच्या शोधावर आधारित या पद्धती निदान आणि तपासणीसाठी वापरल्या जातात.

सेरोलॉजिकल पद्धतींमध्ये हे समाविष्ट आहे:

रिंग पर्जन्य प्रतिक्रिया (आरसीपी) (ट्रायचिनोसिस, सिस्टिरकोसिस);

सर्दीमध्ये चाचणी नलिकांमध्ये रिंग पर्जन्य प्रतिक्रिया (ट्रायचिनोसिस, सिस्टिरकोसिस);

जिवंत अळ्यांवर मायक्रोप्रीसिपिटेशन प्रतिक्रिया (ट्रिचिनोसिस, एस्केरियासिस);

अप्रत्यक्ष hemagglutination (RIHA) ची प्रतिक्रिया (trichinosis, echinococcosis, alveococcosis, cysticercosis, इ.);

लेटेक्स एग्ग्लुटिनेशन रिएक्शन (आरएएल) (इचिनोकोकोसिस, अल्व्होकोकोसिस, ट्रायचिनोसिस, टेनियारिन्होज इ.);

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरसीसी) (ट्रायचिनोसिस, इचिनोकोकोसिस, सिस्टिसेकोसिस);

एंजाइम-लेबल केलेल्या ऍन्टीबॉडीज (आरईएमए) ची प्रतिक्रिया (इचिनोकोकोसिस, ऑन्कोसेरसियासिस, स्किस्टोसोमियासिस, ट्रायचिनोसिस, टॉक्सोकारियासिस);

एलिसा (ट्रायचिनोसिस, ओपिस्टोर्चियासिस, टॉक्सोकारियासिस, टॉक्सोप्लाज्मोसिस इ.).

सेरोलॉजिकल प्रतिक्रिया सेट करण्यासाठी, मानक प्रतिजन तयार केले जातात किंवा ते स्वतंत्रपणे तयार केले जातात (उदाहरणार्थ, मेंढीच्या इचिनोकोकल मूत्राशयापासून), एलिसा साठी विशेष चाचणी प्रणाली तयार केली जातात.

विशेष पद्धतीएन्टरोबायोसिस, टॅनिअर्हिन्कोसिस, टेनिआसिस वर संशोधन

perianal folds पासून स्क्रॅपिंग. पेरिअनल फोल्ड्समधून स्क्रॅपिंग मिळविण्यासाठी, आपण लाकडी स्पॅटुला, सेलोफेन पट्टी, सेल्युलोज पेपर किंवा टेप, विशेष चिकट थर असलेल्या डोळ्याच्या काड्या वापरू शकता:

अ) लाकडी स्पॅटुला (स्पॅटुला म्हणजे चपटा मॅच किंवा स्टिक) स्क्रॅपिंग ग्लिसरीनच्या 1% द्रावणाने (किंवा 0.5% द्रावण) ओलावणे पिण्याचे सोडा), गुदद्वाराच्या संपूर्ण परिघाभोवती पेरिअनल फोल्डच्या पृष्ठभागावरून हलके स्क्रॅपिंग केले जाते. परिणामी स्क्रॅपिंग कव्हरस्लिपच्या काठासह स्पॅटुलाच्या टोकापासून एका काचेच्या स्लाइडवर 50% ग्लिसरॉल द्रावणाच्या थेंबात स्थानांतरित केले जाते, त्याच कव्हरस्लिपने झाकलेले आणि मायक्रोस्कोप केले जाते. पद्धतीचा गैरसोय म्हणजे अंडी शोधण्याची कमतरता आणि चिडचिड करणारा प्रभाव;

ब) टॉरगुशिन पद्धतीनुसार, फ्लश तयार केला जातो कापूस घासणेग्लिसरीनच्या 50% द्रावणाने ओलसर केलेल्या लाकडी किंवा इतर स्पॅटुलावर आणि ग्लिसरीनच्या एका थेंबात काचेच्या स्लाइडवर स्मीअर तयार करा;

c) केव्होर्कोवा पद्धतीनुसार, सुमारे 5 मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ओतले जाते उकळलेले पाणी, त्यात कापूस बांधून एक स्पॅटुला (स्टिक) ठेवा. सामग्री घेण्यापूर्वी, चाचणी ट्यूबच्या आतील भिंतीवर स्वॅब किंचित पिळला जातो, पेरिअनल फोल्ड्स त्याद्वारे पुसले जातात आणि स्वॅबसह स्पॅटुला चाचणी ट्यूबमध्ये घातली जाते. चाचणी ट्यूबमधील टॅम्पॉन पूर्णपणे हलविला जातो, वॉश 3 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केला जातो आणि परिणामी प्रक्षेपण सूक्ष्मदर्शकाखाली तपासले जाते;

ड) ग्रॅहमच्या मते चिकट टेपने स्क्रॅपिंग. चिकट टेपचा एक तुकडा (मुलांच्या सर्जनशीलतेसाठी चिकट थर असलेली पारदर्शक पॉलिथिलीन टेप, परंतु ऑपरेटिंग फिल्म एलपीओ -1, एलपीओ -2 वापरणे चांगले आहे) 8-10 सेमी लांब पेरिअनल फोल्ड्सला चिकट थराने चिकटवले जाते. त्वचेच्या, टोकांना धरून ठेवा आणि नंतर एका चिकट थराने विषयाच्या काचेवर हस्तांतरित करा (काचेच्या कडांच्या पलीकडे पसरलेल्या टेपचे टोक कापले गेले आहेत), चष्मा क्रमांकित केला जातो आणि रुग्णाचा डेटा आणि काचेची संख्या जर्नलमध्ये नोंदविली जाते. प्रयोगशाळेत, टेप एका टोकाला लांब अंतरावर सोलून काढला जातो, त्याखाली व्हॅसलीन तेल किंवा ग्लिसरीनचे 1-2 थेंब टाकले जातात (ऑप्टिकल दोष दूर करण्यासाठी) आणि सूक्ष्मदर्शक;

e) काचेच्या डोळ्याच्या काड्यांसह स्क्रॅपिंग, ज्याच्या पृष्ठभागावर विशेष चिकट रचना असते. डोळ्याच्या काड्या एका विशेष ट्रायपॉडमध्ये स्थापित केल्या आहेत. स्पॅटुलाच्या सपाट भागाला पेरिअनल ओपनिंगच्या त्वचेशी संपर्क करून सामग्री घेतली जाते. मग काठी वाहतुकीसाठी ट्रायपॉडमध्ये पुन्हा निश्चित केली जाते. मायक्रोस्कोपी थेट दोन्ही बाजूंच्या स्पॅटुलावर (स्लाइड्स आणि कव्हरस्लिपशिवाय) कमी मोठेपणावर कॅसेटमध्ये प्री-माउंटिंगसह केली जाते (आयपीस x 10, वस्तुनिष्ठ x 8). कामाच्या शेवटी, काड्या साबणाच्या द्रावणात उकळवून निर्जंतुक केल्या जातात आणि ट्रायपॉड आणि कॅसेट अल्कोहोलने हाताळले जातात आणि साबणाच्या सोडाच्या द्रावणाने धुतले जातात. गोंद रचना: क्लियोल - 10 ग्रॅम, एरंडेल तेल- 2.5 ग्रॅम, इथाइल इथर - 5 ग्रॅम, इथाइल अल्कोहोल 96% - 2.5 ग्रॅम.

स्पॅटुला गोंदाच्या द्रावणात बुडविले जातात, नंतर खोलीच्या तपमानावर हवेत वाळवले जातात. पृष्ठभागावर तयार झालेली चिकट फिल्म अनेक दिवस टिकते.

एन्टरोबायोसिससाठी मुलांच्या लोकसंख्येची आणि टेनिडोसेससाठी प्रौढ लोकसंख्येची सामूहिक तपासणी करण्यासाठी ही पद्धत सोयीस्कर आहे.

टेनिअर्हिन्कोसिस आणि टेनियासिससाठी स्क्रॅपिंग पद्धतीव्यतिरिक्त, सर्वेक्षण पद्धत आणि वर वर्णन केलेली मॅक्रोस्कोपिक पद्धत (जेव्हा सेगमेंट्स आढळतात) देखील वापरली जातात.

स्ट्राँगलोइडायसिससाठी विशेष संशोधन पद्धती

इथर-एसिटिक पद्धत अंडी शोधण्यासाठी वापरली जाते (वर पहा) आणि बर्मन पद्धत मलमधील अळ्या शोधण्यासाठी वापरली जाते.

बर्मन पद्धत. रेचक घेतल्यानंतर ताज्या विष्ठेची तपासणी करा. विष्ठेचा 5 ग्रॅम नमुना धातूच्या चाळणीवर (जाळी आत कापसाचे किंवा रेशमाचे तलम पारदर्शक कापडाचे दोन थर लावलेली असते) एका काचेच्या फनेलमध्ये ट्रायपॉडमध्ये ठेवली जाते. फनेलच्या खालच्या टोकाला (बर्मनचे उपकरण) क्लॅम्प असलेली रबर ट्यूब लावली जाते.

विष्ठेसह जाळी उचलली जाते आणि 40-50 डिग्री सेल्सियस पर्यंत गरम केलेले पाणी फनेलमध्ये ओतले जाते जेणेकरून जाळीचा खालचा भाग पाण्यात बुडविला जाईल आणि विष्ठा पूर्णपणे पाण्याने झाकली जाईल. 2-4 तासांनंतर, रबर ट्यूबवरील क्लॅम्प त्वरीत उघडला जातो आणि द्रव सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये खाली येतो. सेंट्रीफ्यूगेशन नंतर (1-2 मिनिटे) वरचा भागद्रव त्वरीत निचरा केला जातो आणि 1 मिलीच्या प्रमाणात अवक्षेपण एका पातळ थरात काचेच्या स्लाइडवर आणि सूक्ष्मदर्शकाच्या कमी विस्ताराखाली सूक्ष्मदर्शकपणे लावले जाते.

IMP आणि TM पद्धत. नटाच्या आकाराच्या विष्ठेचा एक भाग रासायनिक बीकरमध्ये ठेवला जातो, उबदार 40 डिग्री सेल्सिअस सलाईनने ओतला जातो जेणेकरून विष्ठा एका द्रावणाने झाकली जाईल, 20 मिनिटे सोडली जाईल. 20 मिनिटांनंतर, द्रव पेट्री डिशमध्ये ओतला जातो आणि एमबीएस द्विनेत्री सूक्ष्मदर्शकाखाली पाहिला जातो.

स्ट्राँगलोइडायसिसच्या निदानासाठी, विशेषत: उपचारांच्या प्रभावीतेवर लक्ष ठेवण्यासाठी, ड्युओडेनल सामग्रीच्या अभ्यासासह बर्मन पद्धत एकत्र करण्याची शिफारस केली जाते.

नेमाटोडॉसिससाठी विशेष संशोधन पद्धती

निमॅटोसेस

एस्केरियासिस

विश्लेषणामध्ये, बागकाम, फलोत्पादनाच्या वृत्तीकडे लक्ष वेधले जाते. कच्च्या भाज्या, या भाज्यांपासून बनवलेले सलाड खाणे.

एस्केरियासिसच्या सुरुवातीच्या टप्प्याचे नैदानिक ​​​​अभिव्यक्ती शरीरातील ऍलर्जीक बदलांमुळे होते. एस्केरियासिसचा प्रारंभिक किंवा स्थलांतरित लार्व्हा टप्पा बहुतेक वेळा शरीराचे तापमान 38 ° आणि त्याहून अधिक तापाच्या उपस्थितीत, फुफ्फुसाच्या नुकसानाच्या लक्षणांसह आणि गंभीर रक्त इओसिनोफिलियाच्या उपस्थितीत होतो. बहुतेक प्रकरणांमध्ये, मुलांमध्ये, रोगाची पहिली चिन्हे म्हणजे अस्वस्थता, अशक्तपणा, वारंवार डोकेदुखी, घाम येणे आणि कधीकधी स्नायू आणि सांधेदुखी. बर्‍याचदा तीव्र किंवा मध्यम खाज सुटणे सह भरपूर प्रमाणात urticaria-प्रकार पुरळ उठते. फुफ्फुसातील अस्थिर कणांच्या उपस्थितीसाठी क्ष-किरण अभ्यासाद्वारे प्रारंभिक टप्प्याचे निदान पुष्टी केली जाते. इओसिनोफिलिक घुसखोरीलेफलर. ताज्या थुंकीच्या स्मीअरमध्ये इओसिनोफिलिक पेशी, लाल रक्तपेशी, चारकोट-लेडेन क्रिस्टल्स आणि एस्केरिस लार्वा दिसतात.

एस्केरियासिसच्या आतड्यांसंबंधी काल्पनिक अवस्थेत, गॅस्ट्रोइंटेस्टाइनल आणि ऍस्थेनिक सिंड्रोम, एन्टरोकोलिटिकच्या प्रकटीकरणांचे संयोजन आहे. वेदना लक्षणे. मुलांमध्ये, अनेकदा वजन कमी होते, कधीकधी लक्षणीय. मळमळ, वाढलेली लाळ, चिडचिड, धारणा सायकोमोटर विकास, कमी बुद्धिमत्ता.

आतड्यांसंबंधी st च्या प्रयोगशाळा निदानासाठी

एरशोवा आय.बी., Osychnyuk L.M., मोचालोवा ए.ए., राज्य संस्था "Lugansk राज्य वैद्यकीय विद्यापीठ”, मुलांच्या संसर्गासह बालरोग विभाग.
लेख "वास्तविक संसर्गशास्त्र", क्रमांक 2 (3), 2014 या जर्नलमध्ये प्रकाशित झाला होता.
माहिती संसाधन "पब्लिशिंग हाऊस Zaslavsky" www.mif-ua.com

लेखात हेल्मिंथिक आक्रमणांचे निदान करण्याच्या पद्धतींचे वर्णन केले आहे: सूक्ष्मदर्शक, एन्झाइम इम्युनोसे, सेरोलॉजिकल, पॉलिमरेझ चेन रिअॅक्शन, बायोरेसोनान्स डायग्नोस्टिक्स, हेमोस्कॅनिंग, तसेच इन्स्ट्रुमेंटल (अल्ट्रासाऊंड आणि क्ष-किरण तपासणी, गणना टोमोग्राफी) आणि प्रयोगशाळा, ज्यांचे अप्रत्यक्ष महत्त्व आहे. क्लिनिकल विश्लेषणरक्त तपासणी, यकृत चाचणी, डिस्बैक्टीरियोसिससाठी स्टूल चाचणी). पद्धतींचे फायदे, त्यांचे तोटे आणि प्राप्त केलेल्या डेटाची विश्वासार्हता वर्णन केली आहे. हेल्मिंथ्सच्या संसर्गाचा धोका ओळखण्यासाठी रुग्णांना प्रश्नावली प्रस्तावित केली जाते. पद्धतींचे फायदे, त्यांचे तोटे आणि प्राप्त केलेल्या डेटाची विश्वासार्हता वर्णन केली आहे. हेल्मिंथ्सच्या संसर्गाचा धोका ओळखण्यासाठी रुग्णांना प्रश्नावली प्रस्तावित केली जाते.

हेल्मिंथ्सचा मानवी शरीरावर नकारात्मक प्रभाव पडतो. ते ऍलर्जी, पॉलीहायपोविटामिनोसिस, मॅक्रो- आणि मायक्रोइलेमेंटोसेस, अशक्त हेमॅटोपोइसिस ​​आणि रक्तवहिन्यासंबंधी पारगम्यता आणि हार्मोनल असंतुलन यांना कारणीभूत ठरतात. हेल्मिंथियासिस क्रॉनिक रोगांच्या निर्मितीमध्ये योगदान देतात (पित्ताशयाचा दाह, पित्ताशयाचा दाह, स्वादुपिंडाचा दाह, कोलायटिस, मधुमेह, श्वासनलिकांसंबंधी दमा, एटोपिक त्वचारोग), मानसिक-भावनिक विकार ( तीव्र थकवा, चिडचिड, चिंता, मुलांमध्ये अतिक्रियाशीलता), अशक्तपणा, इ. दीर्घकाळापर्यंत हेल्मिंथिक आक्रमणाने, दुय्यम इम्युनोडेफिशियन्सी विकसित होऊ शकते.

लोकसंख्येतील हेल्मिंथियासबद्दल डॉक्टरांची सतर्कता सध्या अपुरी आहे आणि ओळखल्या जाणार्‍या संक्रमित रूग्णांच्या उपचारांमध्ये प्रतिबंध कमी केला जातो.

हेल्मिन्थियासिसचे निदानक्लिनिकल एपिडेमियोलॉजिकल आणि प्रयोगशाळा डेटावर आधारित. अस्थेनिक सिंड्रोम, वारंवार येणारी अर्टिकेरिया, त्वचा आणि श्लेष्मल झिल्ली यांचे पुनरुत्पादन बिघडणे, एटोपिक त्वचारोगाचा उपचार करणे कठीण आणि ब्रॉन्को-ऑब्स्ट्रक्टिव्ह सिंड्रोम, पॉलीलिम्फॅडेनोपॅथी आणि हेपॅटोस्प्लेनोमेगाली अज्ञात उत्पत्तीची, एडिनॉइड वनस्पती II-III पदवी, "भौगोलिक" जीभ, कमी किंवा निवडक भूक, अस्थिर मल, हेल्मिंथ्सची उपस्थिती दर्शवू शकते.

येथे सेरोलॉजिकल अभ्यासहेल्मिंथ्समध्ये ऍन्टीबॉडीजची उपस्थिती निश्चित करा (विश्वसनीयता - सुमारे 60%): जर इचिनोकोकोसिस, सिस्टिरकोसिस, ट्रायचिनोसिस, टॉक्सोकेरियासिसचा संशय असेल तर, अप्रत्यक्ष हेमॅग्लुटिनेशन, लेटेक्स एग्ग्लुटिनेशन, कॉम्प्लिमेंट फिक्सेशन, इम्युनोफ्लोरेसेन्स प्रतिक्रिया मोठ्या प्रमाणावर वापरल्या जातात.
सर्व प्रकरणांमध्ये नाही, विशिष्ट ऍन्टीबॉडीज निर्धारित करण्याच्या पद्धतींमध्ये पुरेशी विशिष्टता आणि विश्वासार्हता असते. हेलमिंथची प्रतिजैविक रचना केवळ प्रजातींवरच नव्हे तर स्टेजवर देखील अवलंबून असते; अंड्यापासून ते विकासाच्या जटिल चक्रातून जात आहे प्रौढ, helminths antigenic रचना बदलू. याव्यतिरिक्त, इम्युनोडायग्नोस्टिक प्रतिक्रियांमध्ये सोमॅटिक ऍन्टीबॉडीजचा वापर केला जातो आणि यजमान शरीरात, ऍन्टीबॉडीज मुख्यतः हेल्मिंथ उत्सर्जन आणि स्राव यांच्या विरूद्ध तयार होतात. शरीराचे गैर-विशिष्ट संवेदना, ट्रेमेटोड्स, प्रोटोझोआ आणि मानवांच्या काही प्रतिजनांची समानता, विश्वासार्हपणे निदान केलेल्या टायटर्समध्ये खोट्या सकारात्मक प्रतिक्रियांचे उच्च प्रमाण तयार करतात.

वापरून helminths निश्चित करण्यासाठी पद्धत पॉलिमरेज साखळी प्रतिक्रिया अत्यंत विशिष्ट आणि अतिसंवेदनशील आहे, परंतु उच्च किंमत आणि जटिलतेमुळे, उदाहरणार्थ, मुलांच्या संस्थेतील मुलांच्या गटाची तपासणी करणे आवश्यक असताना त्याची तपासणी केली जाऊ शकत नाही.

शरीरातील हेल्मिंथ्सच्या उपस्थितीवर रोगप्रतिकारक शक्ती नेहमीच प्रतिक्रिया देत नाही (ओळखते आणि नष्ट करते). याचे कारण असे की काही हेलमिंथमध्ये मजबूत आणि रासायनिक प्रतिरोधक कॅप्सूल असते किंवा ते ओळखता येत नसलेल्या पदार्थाने लेपित केलेले असते. रोगप्रतिकार प्रणाली; दाहक प्रतिक्रियांपासून सर्वाधिक संरक्षित असलेल्या ऊतींमध्ये स्थानिकीकृत, उदाहरणार्थ, मध्ये पाठीचा कणा; त्यांच्यातील अनेक प्रजाती पाचक मुलूखांमध्ये अँटी-एंझाइम तयार करतात, जे त्यांना मृत्यूपासून वाचवतात; दीर्घायुष्य असावे (वर्षानुवर्षे, आणि कधी कधी स्वतःच्या मृत्यूपर्यंत); शुद्ध कार्बोहायड्रेट्सच्या ग्लायकोलिसिसवर आहार द्या; सक्शन कप, हुक इ. अशी उपकरणे आहेत जी शरीराच्या आत स्थिर होण्यास हातभार लावतात; बर्याच प्रजातींमध्ये लैंगिक पुनरुत्पादन होते, ज्यामध्ये अनुवांशिक माहितीची देवाणघेवाण होते, ज्यामुळे विषम लोकसंख्या वाढते, असुरक्षा कमी होते; ताब्यात घेणे उच्चस्तरीयप्रजनन क्षमता

येथे प्रचंड कंपनसंख्या असलेल्या (ध्वनिलहरी) , अवयवांची एक्स-रे तपासणी उदर पोकळी , गणना टोमोग्राफी हेल्मिंथियासिसची अप्रत्यक्ष चिन्हे ओळखणे शक्य आहे: हेपॅटोस्प्लेनोमेगाली, यकृत आणि प्लीहाचा असमान पॅरेन्कायमा लहान हायपरकोइक सिग्नलमुळे, प्लीहाच्या हिलममध्ये वाढलेले लिम्फ नोड्स आणि स्वतः हेल्मिंथ्स (इचिनोकॉसी, आतड्यांसंबंधी हेल्मिंथ्स इ.).

हेमोस्कॅनिंग - शक्तिशाली डार्क-फील्ड मायक्रोस्कोप वापरून रक्ताचा गुणात्मक अभ्यास, आपण रक्त पेशींची स्थिती (आकार, आकार, क्रियाकलाप, रंग इ.), विशिष्ट नसलेल्या घटक आणि पदार्थांची उपस्थिती पाहू शकता - हे सर्व प्रत्यक्ष किंवा अप्रत्यक्षपणे शरीरात हेल्मिंथ्सची उपस्थिती दर्शवते. मायक्रोस्कोपमध्ये अंगभूत व्हिडिओ कॅमेरा वापरून मॉनिटर स्क्रीनवर प्रतिमा प्रदर्शित केली जाते. या निदान पद्धतीची उच्च विश्वसनीयता आहे.

अप्रत्यक्ष प्रयोगशाळा चिन्हे helminthiasesअशक्तपणा, बेसोफिलिया, इओसिनोफिलिया, एस्पार्टेट एमिनोट्रान्सफेरेजची पातळी वाढू शकते. तर, टॉक्सोकेरियासिससह, इओसिनोफिल्सची ल्युकेमॉइड प्रतिक्रिया (20% पेक्षा जास्त) पर्सिस्टंटच्या पार्श्वभूमीवर आढळून येते. ऍलर्जी सिंड्रोम(गंभीर खाज सुटणे आणि प्रतिकारासह atopic dermatitis पारंपारिक थेरपी, तीव्र ब्रोन्कियल दमा). डिस्बैक्टीरियोसिससाठी विष्ठेच्या विश्लेषणामध्ये सामान्य ई. कोलाईचा प्रतिबंध देखील संभाव्य हेल्मिंथियासिस दर्शवू शकतो.

हेल्मिन्थियासिसचा प्रसार लक्षात घेता, आम्ही सुचवितो प्रश्नावलीहेल्मिंथ्सच्या संसर्गाचा धोका निश्चित करण्यासाठी.

• गोड्या पाण्यात पोहणे.
• साबण आणि गरम पाण्याने खाण्यापूर्वी हात धुवू नका.
• असत्यापित स्त्रोतांकडून पिण्याचे पाणी.
• मांसाच्या पट्ट्यासह घरगुती स्वयंपाकात वापरण्याची डुकराची चरबी खा.
• खारट मासे खा.
• कमी शिजलेले मांस (रक्तासह) खा.
• नॉन-फॅक्टरी हलके खारट कॅविअर खा.
• कोंबडीची अंडी साबणाने धुवू नका.
• वापरण्यापूर्वी केळी, संत्री, टेंगेरिन धुवू नका.
• आपल्या बागेला खत घालून खत द्या.
• सरळ बागेतून भाज्या खा.
• फळे आणि बेरी सरळ बागेतून खा.
• पडलेल्या फळांचे सेवन करा.
• सॅलडसाठी उकळत्या पाण्याने सर्व हिरव्या भाज्या ओतू नका.
• यार्डमधून घेतलेल्या वाळूमध्ये गाजर साठवा.
• गवतावर अनवाणी चालावे.
• कुटुंबातील सदस्यांना हेल्मिंथिक संसर्ग झाला होता.
• कुटुंबात कुत्रा किंवा मांजर आहे.

प्रत्येक उत्तरासाठी होय"- 2 गुण," कधी कधी"- एक," नाही»- ०. ०-५ गुणांसह, संसर्गाची संभाव्यता नगण्य आहे, ६-१२ - संभाव्य संसर्ग, १३-२५ - उच्च संभाव्यता, २५ पेक्षा जास्त गुण - खूप जास्त. शेवटच्या दोन परिणामांसह, नियमित तपासणी आणि शक्यतो प्रतिबंधात्मक उपचार आवश्यक आहेत.

हेल्मिन्थियासिसचे नैदानिक ​​​​अभिव्यक्ती नेहमीच विशिष्ट नसल्यामुळे आणि सुरुवातीच्या टप्प्यात विशिष्ट नसल्यामुळे, आम्ही रुग्णांसाठी एक प्रश्नावली ऑफर करतो स्व-निदान helminthiases.

• सकाळी गुदद्वारात खाज सुटते.
• सकाळी दात घासताना मळमळ होते.
• बोटे किंवा पायाची बोटे सोलणे, त्वचेच्या थरांना घसरणे.
• त्वचेवर ऍलर्जीक पुरळ, खाज सुटणे.
• पापण्यांमध्ये सोलणे आणि सूज येणे.
• वाढलेली थकवा, सुस्ती, तंद्री.
• भुकेची वाढलेली भावना.
• ओटीपोटात अस्वस्थतेची भावना.
• वजन कमी होणे.
• अनेक जुनाट अवयव रोगांची उपस्थिती अन्ननलिका, सांधे, ब्रॉन्कोपल्मोनरी प्रणाली.
• खराब आरोग्य, अधिकृत निदानाचा अभाव, दीर्घकाळ अप्रभावी उपचार.
• तापमानात वेळोवेळी वाढ, स्नायू आणि सांधेदुखीसह.

उत्तर " होय"चालू किमान 2-3 प्रश्नांसाठी बोलतो उच्च संभाव्यताहेल्मिन्थ संक्रमण.

निष्कर्ष

1. चालू सध्याचा टप्पा 100% विश्वासार्ह असलेल्या हेल्मिंथियासिसच्या चाचणीसाठी प्रयोगशाळा पद्धती नाहीत.

2. पॉलिमरेझ साखळी प्रतिक्रियाआणि बायोरेसोनन्स डायग्नोस्टिक्स.

ग्रंथलेखन

विष्ठेची तपासणी

मायक्रोस्कोपी प्रथम लो मॅग्निफिकेशन (X80) वर चालते. सर्वात सोपी प्रकाशाच्या मजबूत अपवर्तनाने बदलली जाऊ शकते आणि काही प्रजाती त्यांच्या हालचालीने किंवा आकारात बदल करू शकतात. कमी मॅग्निफिकेशनमध्ये दिसणारी वस्तू 400 किंवा 600 च्या मॅग्निफिकेशनवर तपासली जाते. अनुभवाच्या अनुपस्थितीत, स्मीअर्स ताबडतोब उच्च मॅग्निफिकेशनवर पाहणे आवश्यक आहे, जे तथापि, तयारीचा अभ्यास करण्यासाठी वेळ लक्षणीय वाढवते. उच्च मोठेपणावर स्मीअर पाहणे मजबूत प्रकाशात केले पाहिजे, ते कंडेन्सरने समायोजित केले पाहिजे.

विभेदक चिन्हे विशिष्ट प्रकारमूळ स्मीअरमधील अमीबा म्हणजे शरीराचा आकार आणि आकार, न्यूक्लियसची दृश्यमानता, स्यूडोपोडियाच्या निर्मितीचे स्वरूप, हालचाल, साइटोप्लाझमचे एक्टो- आणि एंडोप्लाझममध्ये विभाजन, समावेशाचे स्वरूप (फॅगोसाइटोसेड एरिथ्रोसाइट्स, इ.). फ्लॅगेलेट प्रजातींमध्ये फरक करताना - शरीराचा आकार आणि आकार, फ्लॅगेलाची संख्या, हालचालीचे स्वरूप, अनड्युलेटिंग झिल्लीची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती. बॅलेंटिडियाची विशिष्ट वैशिष्ट्ये म्हणजे आकार, शरीराचा आकार, हालचाल, सिलिया, सायटोस्टोम इ.

जिवंत अवस्थेतील प्रोटोझोआच्या वनस्पतिवत् होणार्‍या स्वरूपाचे मुख्य वेगळे वैशिष्ट्य म्हणजे हालचाल. स्मीअरमध्ये सापडले विविध प्रकारचेनिश्चित रचना - वनस्पती फायबर, स्नायू तंतू, बीजाणू, बुरशी इ. प्रोटोझोलॉजिकल निदानामध्ये ते विचारात घेतले जाऊ नयेत.

मूळ स्मीअर पद्धत सोपी आणि कोणत्याही प्रयोगशाळेत प्रवेश करण्यायोग्य आहे. हे फॅगोसाइटोसेड एरिथ्रोसाइट्ससह डिसेंटेरिक अमीबाचे टिश्यू फॉर्म शोधताना, अमीबिक डिसेंट्रीचे पूर्णपणे अचूक निदान करण्यास अनुमती देते आणि जेव्हा बॅलेंटिडिया आणि जिआर्डिया आढळतात तेव्हा बॅलेंटिडियासिस आणि जिआर्डिआसिसचे निदान केले जाते.

लुगोलच्या सोल्युशनसह smears डागणे . हा डाग सिस्टद्वारे प्रोटोझोआचे निदान करण्यासाठी वापरला जातो. हे औपचारिक, अर्ध-निर्मित आणि मऊ विष्ठेच्या अभ्यासासाठी वापरले जाते.

स्मीअर तयार करण्यासाठी, लाकडी काठीचा शेवट विष्ठेमध्ये घाण केला जातो आणि आयोडीन द्रावणाच्या थेंबात (जे - 1.0 ग्रॅम, केजे - 2 ग्रॅम, डिस्टिल्ड वॉटर - 100 मिली) धुऊन एकसमान इमल्शन होईपर्यंत काचेच्या स्लाइडवर लावले जाते. प्राप्त. तयारी कव्हरस्लिपने झाकलेली असते आणि 3-5 मिनिटांनंतर. सूक्ष्म प्रसारित प्रकाशात अभ्यास करण्यासाठी स्मीअर पुरेसे पारदर्शक असणे आवश्यक आहे.

अवशेषांमध्ये न पचलेले अन्न, बीजाणू, बुरशी, आयोडोफिलिक बॅक्टेरिया प्रोटोझोअन सिस्ट, तपकिरी किंवा हिरवट-पिवळ्या रंगात रंगवलेले, काटेकोरपणे परिभाषित केलेल्या, प्रत्येक प्रजातीच्या आकार, आकार, कडांच्या वेगळ्या बाह्यरेखा, गुळगुळीत, पारदर्शक, दुहेरी-ची उपस्थिती या वैशिष्ट्यांद्वारे ओळखले जातात. सर्किट झिल्ली, सायटोप्लाझमची सामग्री, तसेच अस्पष्ट संरचनेसह न्यूक्लीची उपस्थिती. अमिबा सिस्टमध्ये, तपकिरी (गडद तपकिरी) रंगात डागलेले ग्लायकोजेन व्हॅक्यूओल्स दिसतात. या व्हॅक्यूल्सच्या रंगाची डिग्री आणि त्यांच्या सीमांची रूपरेषा त्यांच्या परिपक्वतेनुसार, समान प्रजातींच्या प्रोटोझोअन सिस्टमध्ये बदलते.

७.७. हेल्मिंथ्सच्या अंडी आणि अळ्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी पद्धती

हेल्मिंथ अंड्यांचे व्यवहार्यता त्यांच्या स्वरूपावरून, महत्त्वाच्या रंगांनी डागण्याद्वारे, चांगल्या परिस्थितीत लागवड करून आणि जैविक नमुना सेट करून निर्धारित केले जाते.

७.७.१. देखावा द्वारे हेल्मिंथ्सच्या अंडी किंवा अळ्यांच्या व्यवहार्यतेचे निर्धारण

हेल्मिंथ अंडी प्रथम कमी वाढीवर सूक्ष्मदर्शकित केली जातात, नंतर उच्च वाढीवर. विकृत आणि मृत हेल्मिंथ अंड्यांमध्ये, कवच फाटलेले किंवा आतील बाजूस वाकलेले आहे, प्लाझ्मा ढगाळ आहे, सैल आहे. खंडित अंड्यांमध्ये, क्लीवेज बॉल्स (ब्लास्टोमेर) आकारात असमान असतात, आकारात अनियमित असतात, बहुतेकदा एका ध्रुवावर हलवले जातात. कधीकधी असामान्य अंडी असतात, ज्यात बाह्य विकृती असतात, सामान्यपणे विकसित होतात. एस्कारिड्सच्या जिवंत अळ्यांमध्ये फक्त शरीराच्या मध्यभागी बारीक दाणे असते, जसे ते मरतात, ते संपूर्ण शरीरात पसरतात, मोठ्या चमकदार हायलिन व्हॅक्यूल्स दिसतात, तथाकथित "मोत्याचे तार".

एस्कारिड्स, व्हिपवर्म्स, पिनवर्म्सच्या परिपक्व अंड्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, अळ्यांच्या सक्रिय हालचाली या तयारीला किंचित गरम करून (37 डिग्री सेल्सियसपेक्षा जास्त नसलेल्या तापमानापर्यंत) झाल्या पाहिजेत. एस्केरिस आणि व्हिपवर्म अळ्या अंड्याच्या कवचापासून वेगळ्या केल्यानंतर तयारीच्या कव्हर ग्लासवर विच्छेदक सुई किंवा चिमट्याने दाबून त्यांची व्यवहार्यता निरीक्षण करणे अधिक सोयीचे असते.

आक्रमक एस्केरिड अळ्यांमध्ये, डोकेच्या टोकाला टोपी सोललेली असते आणि अंड्यातील विकास पूर्ण केलेल्या व्हीपवर्म अळ्यांमध्ये, या ठिकाणी एक स्टाईल मोठ्या प्रमाणात आढळते. हेल्मिंथ्सच्या मृत अळ्यांमध्ये, त्यांचे स्थान (अंड्यात किंवा बाहेर) लक्षात न घेता, शरीराचा क्षय दिसून येतो. या प्रकरणात, अळ्याची अंतर्गत रचना ढेकूळ किंवा दाणेदार बनते आणि शरीर ढगाळ आणि अपारदर्शक बनते. शरीरात व्हॅक्यूल्स आढळतात आणि क्यूटिकलवर ब्रेक आढळतात.

टेनिड ऑन्कोस्फियर्स (बोवाइन, पोर्सिन टेपवर्म इ.) ची व्यवहार्यता भ्रूणांच्या हालचालींद्वारे निर्धारित केली जाते जेव्हा ते पाचक एन्झाईम्सच्या संपर्कात येतात. कुत्र्याच्या गॅस्ट्रिक रस किंवा कृत्रिम पक्वाशया विषयी रस असलेल्या घड्याळाच्या काचेवर अंडी ठेवली जातात. नंतरची रचना: पॅनक्रियाटिन - 0.5 ग्रॅम, सोडियम बायकार्बोनेट - 0.09 ग्रॅम, डिस्टिल्ड वॉटर - 5 मिली. अंडी असलेले घड्याळाचे चष्मे थर्मोस्टॅटमध्ये 36 - 38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 4 तास ठेवले जातात. या प्रकरणात, जिवंत भ्रूण पडद्यातून सोडले जातात. जिवंत ऑन्कोस्फियर्सचे कवच देखील आम्लीकृत पेप्सिनमध्ये आणि ट्रिप्सिनच्या क्षारीय द्रावणात 6-8 तासांनंतर थर्मोस्टॅटमध्ये 38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात विरघळतात.

जर टेनिड अंडी सोडियम सल्फाइडच्या 1% द्रावणात किंवा सोडियम हायपोक्लोराईटच्या 20% द्रावणात किंवा क्लोरीनच्या 1% द्रावणात 36 - 38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात ठेवल्यास, परिपक्व आणि जिवंत भ्रूण कवचातून बाहेर पडतात. 1 दिवसात बदल. अपरिपक्व आणि मृत ऑनकोस्फियर सुकतात किंवा फुगतात आणि नाटकीयरित्या वाढतात आणि नंतर 10 मिनिट ते 2 तासांच्या आत "विरघळतात". टेनिइड्सचे जिवंत भ्रूण देखील 1% सोडियम क्लोराईड द्रावण, 0.5% सोडियम बायकार्बोनेट द्रावण आणि पित्त 36 - 38 डिग्री सेल्सिअस तापमानात सक्रियपणे हलतात.

वनस्पती आणि जलस्रोतांच्या इतर वस्तूंमधून गोळा केलेल्या फॅसिओलिया अॅडोलेस्कॅरियाची व्यवहार्यता तापविण्याच्या अवस्थेसह सूक्ष्मदर्शकाखाली सलाईनमध्ये ग्लास स्लाइडवर तपासली जाते. गरम झाल्यावर, सिस्टमधील ट्रेमाटोड अळ्या हलू लागतात.

पिग्मी टॅपवॉर्मच्या अंड्याची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, आयोनिना एनएसची पद्धत सर्वात सोपी आहे: जिवंत अंड्यांमध्ये, भ्रूणाच्या आकड्यांचा मध्य जोड एकतर बाजूकडील समांतर असतो किंवा नंतरचा कोन कमी पायावर असतो. मध्यकासह 45 ° पेक्षा. मृत अंड्यांमध्ये, बाजूकडील जोड्या 45 ° पेक्षा जास्त मध्यभागी असलेल्या पायथ्याशी एक कोन बनवतात किंवा हुक यादृच्छिकपणे विखुरलेले असतात (त्यांची जोडलेली व्यवस्था नष्ट होते); कधीकधी गर्भाची सुरकुत्या, ग्रॅन्युलॅरिटी तयार होते. तापमानात तीव्र बदल दरम्यान ऑन्कोस्फियरच्या हालचालींच्या देखाव्यावर अधिक अचूक पद्धत आधारित आहे: 5 - 10 ° ते 38 - 40 ° से.

अपरिपक्व नेमाटोड अंड्यांची व्यवहार्यता ठरवण्यासाठी आर्द्र चेंबरमध्ये (पेट्री डिशेस) अभ्यास केला पाहिजे, 24 - 30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात आयसोटोनिक सोडियम क्लोराईडच्या द्रावणात तयार केलेल्या 3% फॉर्मेलिनच्या द्रावणात ascaris अंडी ठेवणे आवश्यक आहे, whipworm अंडी 3% मध्ये ठेवा. % हायड्रोक्लोरिक ऍसिड द्रावण 30 - 35 डिग्री सेल्सियस तापमानात; पिनवर्म अंडी आयसोटोनिक सोडियम क्लोराईड द्रावणात 37 ° से. पेट्री डिशेस आठवड्यातून 1 ते 2 वेळा चांगले हवेसाठी उघडले पाहिजे आणि फिल्टर पेपर पुन्हा स्वच्छ पाण्याने ओलावा.

हेल्मिन्थ अंड्याच्या विकासाचे निरीक्षण आठवड्यातून किमान 2 वेळा केले जाते. 2-3 महिन्यांत विकासाच्या चिन्हांची अनुपस्थिती त्यांची गैर-व्यवहार्यता दर्शवते. हेल्मिंथ अंड्याच्या विकासाची चिन्हे म्हणजे प्रथम क्रशिंगचे टप्पे, अंड्यातील सामग्रीचे स्वतंत्र ब्लास्टोमेरमध्ये विभागणे. पहिल्या दिवसात, 16 पर्यंत ब्लास्टोमेर विकसित होतात, जे दुसऱ्या टप्प्यात जातात - मोरुला इ.

हुकवर्म अंडी एका काचेच्या सिलेंडरमध्ये (50 सेमी उंच आणि 7 सेमी व्यासाच्या) स्टॉपरने बंद केली जातात. निर्जंतुकीकरण वाळू, कोळसा आणि हुकवर्म अंडी असलेली विष्ठा यांचे मिश्रण, अर्ध-द्रव सुसंगततेसाठी पाण्याने पातळ केलेले, काचेच्या नळीचा वापर करून काळजीपूर्वक सिलेंडरच्या तळाशी ओतले जाते. 25 - 30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात अंधारात स्थायिक झाल्यानंतर 1 - 2 दिवसांदरम्यान, अंड्यांमधून रॅबडाइट सारखी अळ्या बाहेर पडतात आणि 5 - 7 दिवसांनंतर ते आधीच फिलेरीफॉर्म होतात: अळ्या सिलेंडरच्या भिंतींवर रेंगाळतात, जिथे ते उघड्या डोळ्यांनाही दिसतात.

पाण्यामध्ये नैसर्गिकरित्या विकसित होणारी ट्रेमेटोड अंडी, जसे की ओपिस्टोर्चिस, डिफिलोबोथ्राइड्स, फॅसिओल्स आणि इतर, घड्याळाच्या काचेवर, पेट्री डिशवर किंवा दुसर्या भांड्यात ठेवली जातात आणि सामान्य पाण्याचा एक छोटा थर ओतला जातो. फॅसिओला अंडी लागवड करताना, अंधारात ते जलद विकसित होतात हे लक्षात घेतले पाहिजे, तर 9-12 दिवसांनी 22-24 डिग्री सेल्सियस तापमानात जिवंत अंड्यांमध्ये मिरासिडियम तयार होते. ट्रेमेटोड अंडी विकसित करण्याच्या मायक्रोस्कोपीमध्ये, मिरासिडियम हालचाली स्पष्टपणे दृश्यमान असतात. फॅसिओला मिरासिडियम अंड्याच्या कवचातून फक्त प्रकाशात बाहेर पडतो.

पूर्ण जन्माची पद्धत. हुकवर्म आणि स्ट्राँगलायड अळ्यांची लागवड प्राण्यांच्या कोळशासह पेट्री डिशमध्ये आगरवर केली जाते. थर्मोस्टॅटमध्ये 25 - 30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5 - 6 तास ठेवल्यानंतर, अळ्या आगरवर पसरतात आणि जीवाणूंचा मार्ग मागे सोडतात.

हरडा आणि मोरीची पद्धत. रॅकमध्ये ठेवलेल्या टेस्ट ट्यूबमध्ये 7 मिली डिस्टिल्ड वॉटर जोडले जाते. लाकडी काठीने 0.5 ग्रॅम विष्ठा घ्या आणि फिल्टर पेपरवर (15 x 150 मिमी) डाव्या काठावरुन 5 सेमी अंतरावर स्मीअर बनवा (हे ऑपरेशन प्रयोगशाळेच्या टेबलच्या पृष्ठभागाचे संरक्षण करण्यासाठी कागदाच्या शीटवर केले जाते). नंतर स्मीअर असलेली पट्टी ट्यूबमध्ये घातली जाते जेणेकरून डाव्या टोकाला स्मीअरपासून मुक्त नळीच्या तळाशी पोहोचते. वरच्या टोकाला सेलोफेनच्या तुकड्याने झाकून घ्या आणि लवचिक बँडने घट्ट गुंडाळा. टेस्ट ट्यूबवर नंबर, विषयाचे नाव लिहा. या अवस्थेत, चाचणी नलिका 28 डिग्री सेल्सियस तापमानात 8-10 दिवसांसाठी साठवल्या जातात. अळ्यांचा अभ्यास करण्यासाठी, सेलोफेन कव्हर काढून टाका आणि काढून टाका आणि चिमट्याने फिल्टर पेपरची पट्टी काढा. या प्रकरणात काळजी घेणे आवश्यक आहे, कारण थोड्या संख्येने संसर्गजन्य अळ्या फिल्टर पेपरच्या वरच्या टोकापर्यंत किंवा चाचणी नळीच्या भिंतीकडे जाऊ शकतात आणि सेलोफेनच्या पृष्ठभागाखाली प्रवेश करू शकतात.

नळ्या 50 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर 15 मिनिटांसाठी गरम पाण्याच्या आंघोळीमध्ये ठेवल्या जातात, त्यानंतर त्यातील सामग्री हलवली जाते आणि 15 मिली लार्व्हा सेडिमेंटेशन ट्यूबमध्ये पटकन ओतली जाते. सेंट्रीफ्यूगेशननंतर, सुपरनॅटंट काढून टाकले जाते, आणि अवक्षेपण एका काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केले जाते, कव्हरस्लिपने झाकलेले असते आणि कमी मोठेीकरण अंतर्गत सूक्ष्मदर्शक असते.

फिलारीफॉर्म लार्वाच्या विभेदक निदानासाठी, तक्ता 3 मधील डेटा वापरणे आवश्यक आहे.

तक्ता 3

ए. ड्युओडेनेल, एन. अमेरिकन, एस. स्टेरकोरालिस, ट्रायकोस्ट्रॉन्जिलस एसपी.

अळ्या	परिमाण	वैशिष्ट्यपूर्ण वैशिष्ट्ये
A. ड्युओडेनल	शरीराची लांबी सुमारे 660 मायक्रॉन, कॅप - 720 एनएम	टोपीचे स्ट्राइशन कमी उच्चारलेले असते, तोंडाचा बाहेरील भाग कमी लक्षात येतो, शरीराचा पुढचा भाग (परंतु टोपी नाही) बोथट असतो, आतड्याच्या नळीचा व्यास अन्ननलिकेच्या बल्बपेक्षा लहान असतो, पुच्छाचा टोक बोथट असतो.
N. अमेरिकन	शरीराची लांबी सुमारे 590 μm, टोपी - 660 nm	आवरण स्पष्टपणे स्ट्रेट केलेले आहे, विशेषत: शरीराच्या पुच्छ भागामध्ये, तोंडाचा प्रक्षेपण गडद दिसतो, शरीराचा पुढचा भाग (परंतु म्यान नाही) अरुंद टोकासारखा गोलाकार असतो. चिकन अंडी, अन्ननलिकेच्या बल्बसारख्या व्यासाच्या आतड्यांसंबंधी नळीचा पुढचा भाग, शेपटीचे टोक अगदी टोकदार आहे
एस. स्टेरकोरालिस	शरीराची लांबी सुमारे 500 µm	म्यान नसलेली अळी, अन्ननलिका शरीराच्या अर्ध्या लांबीची असते, शेपटी कुंद किंवा फांद्या असते
ट्रायकोस्ट्राँगिलस एसपी.	शरीराची लांबी सुमारे 750 मायक्रॉन	आतड्याचा लुमेन सरळ नसून झिगझॅग असतो, पुच्छाचा टोक गोलाकार असतो आणि त्याला बटणाचा आकार असतो

७.७.२. हेल्मिंथ्सच्या अंडी आणि अळ्या डागण्याच्या पद्धती

बहुतेक प्रकरणांमध्ये मृत उती जिवंत लोकांपेक्षा जलद रंग ओळखतात. हेलमिन्थॉलॉजीमध्ये हेलमिन्थ्सच्या अंडी आणि अळ्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी या वैशिष्ट्यांचा वापर केला जातो. तथापि, काही प्रकरणांमध्ये, काही पेंट्स मृतांच्या तुलनेत जिवंत ऊतींद्वारे अधिक चांगले समजतात.

जिवंत आणि मृत अंडी आणि अळ्या यांच्या भिन्नता निश्चित करण्यासाठी, खालील रंग आणि पद्धती वापरल्या जातात.

मेथिलीन ब्लू ल्युकोबेस बहुतेकदा जिवंत आणि मृत ऊतींना डाग देण्यासाठी वापरला जातो. जिवंत पेशी किंवा ऊतक मिथिलीन निळा रंगहीन ल्युकोबेसमध्ये कमी करते; मृत ऊतकांमध्ये ही क्षमता नसते आणि म्हणून रंग प्राप्त होतो.

अंड्याच्या स्थितीचा निकष म्हणजे गर्भाचा डाग, परंतु शेल नाही. ही क्षमता अंड्याच्या मृत्यूच्या परिस्थितीशी संबंधित आहे. मृत अंड्यातील तंतुमय कवच त्याचे अर्ध-पारगम्य गुणधर्म गमावत नाही अशा प्रकरणांमध्ये, ते रंग पास करणार नाही, म्हणून, मृत गर्भावर डाग पडत नाही. रंगीत गर्भ नेहमी अंड्याचा मृत्यू दर्शवतो.

Ascaris अंडी रंगविण्यासाठी, आपण कॉस्टिक अल्कली (मिथिलीन ब्लू 0.05 ग्रॅम, कॉस्टिक सोडा 0.5 ग्रॅम, लैक्टिक ऍसिड - 15 मिली) सह लैक्टिक ऍसिडच्या द्रावणात मिथिलीन ब्लू वापरू शकता. जिवंत अंडी रंग ओळखत नाहीत; मृत अंड्यांचे भ्रूण निळे होतात. Ascaris लार्वा 1:10,000 च्या एकाग्रतेमध्ये ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू पेंटच्या मूलभूत द्रावणाने डागलेले असतात: एस्केरिस अंडी असलेल्या द्रवाचा एक थेंब आणि मूळ पेंट सोल्यूशनचा एक थेंब काचेच्या स्लाइडवर लावला जातो. तयारी कव्हरस्लिपने झाकलेली असते, जी काचेच्या स्लाइडच्या विरूद्ध विच्छेदन सुईने हलकी टॅपिंगसह घट्ट दाबली जाते. सूक्ष्मदर्शकाखाली, उबवलेल्या अळ्यांची संख्या आणि त्यांच्या डागांची डिग्री पाहिली जाते; ज्यानंतर 2 ते 3 तासांनंतर त्याच औषधाचे पुन्हा पुनरावलोकन केले जाते. केवळ विकृत अळ्या ज्यावर 2 तास डाग पडत नाहीत त्यांना जिवंत मानले जाते. मृत अळ्या एकतर अंड्यातून बाहेर पडत नाहीत किंवा कवच फुटल्यावर डाग पडतात (अंशतः किंवा पूर्ण).

एस्केरिडिया पक्ष्यांच्या अंड्यांचे व्यवहार्यता ठरवताना, 5% सह तयारी डाग करणे शक्य आहे. अल्कोहोल सोल्यूशनआयोडीन ते औषध लागू केले जाते तेव्हा, 1 - 3 सेकंद मृत ascarid अंडी च्या भ्रूण. केशरी रंगवलेले आहेत.

ओपिस्टॉर्किसची मृत अंडी आणि बोवाइन टेपवर्मचे ऑन्कोस्फियर टोल्युइडिन ब्लू (1:1000) च्या द्रावणाने डागलेले असतात आणि बोवाइन टेपवर्मचे मृत ऑन्कोस्फियर ब्रिलियंट-क्रेसिल ब्लू (1:10000) च्या द्रावणाने डागलेले असतात. त्याच वेळी, मृत आणि जिवंत दोन्ही अंडींचे भ्रूण आणि शेल रंग घेतात. त्यामुळे, डाग पडल्यानंतर, अंडी आणि ऑन्कोस्फियर्स शुद्ध पाण्यात धुतले जातात आणि त्याव्यतिरिक्त सॅफ्रॅनिनने (1:10,000 अल्कोहोल, 10 डिग्री सेल्सिअस तापमानात) डागले जातात. अल्कोहोल शेल्समधील डाई काढून टाकते आणि सॅफरॅनिनचे डाग लाल होतात. परिणामी, जिवंत अंडी लाल होतात; मृत भ्रूण असलेली अंडी - निळ्या रंगात आणि शेल लाल राहते. बोवाइन टॅपवॉर्मच्या ऑन्कोस्फियर्सचे मृत भ्रूण त्वरीत, काही मिनिटांत, 1:4000 च्या सौम्यतेने चमकदार लाल किंवा गुलाबी किंवा सॅफ्रॅनिनने चमकदार-क्रेसिल निळ्या रंगाने, किंवा 1:1000 - 1 च्या पातळतेवर इंडिगो कार्माइनने डागलेले असतात. :2000. जिवंत भ्रूण 2-7 तासांनंतरही या रंगांच्या प्रभावाखाली बदलत नाहीत.

पिग्मी टेपवर्म अंडीची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, खालील पेंट्स वापरण्याची शिफारस केली जाते:

1. ब्रिलियंट क्रेसिल निळा (1:8000) - 1 तासानंतर, मृत अंड्यांचे ऑन्कोस्फियर विशेषतः तेजस्वीपणे डागलेले असते, जे उर्वरित अंड्याच्या फिकट किंवा रंगहीन पार्श्वभूमीच्या विरूद्ध अगदी स्पष्टपणे दिसते.

2. सफारानिन (2 तासांसाठी 1:8000 आणि 3 ते 5 तासांसाठी 1:5000).

3. पायरोगॅलिक ऍसिडचे 50% द्रावण 1:2 च्या डायल्युशनमध्ये - 29 - 30 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 1 तास उघडल्यावर (तापमान जितके कमी असेल तितकी डाग पडण्याची प्रक्रिया जास्त असेल).

७.७.३. हेल्मिंथ्सच्या अंडी आणि अळ्यांच्या अभ्यासासाठी ल्युमिनेसेंट पद्धत

ल्युमिनेसेंट मायक्रोस्कोपीमुळे अंड्याचे नुकसान न करता जिवंत आणि मृत वस्तूंमध्ये फरक करणे शक्य होते. फ्लोरोसेन्ससाठी वापरले जात नाही अल्ट्रा-व्हायोलेट किरण, आणि दृश्यमान प्रकाशाचा निळा-वायलेट भाग, सामान्य सूक्ष्मदर्शक आणि काचेच्या स्लाइडसह; OI-18 इल्युमिनेटरमध्ये रंग फिल्टरचा एक विशेष संच जोडला जातो.

राउंडवर्म्स, पिनवर्म्स, पिग्मी टेपवर्म्स, बोवाइन टेपवर्म्स, ब्रॉड टेपवर्म्स आणि इतर हेल्मिंथ्सची जिवंत आणि मृत अंडी वेगळ्या प्रकारे चमकतात. ही घटना रंगांचा वापर न करता प्राथमिक ल्युमिनेसेन्स दरम्यान आणि फ्लोरोक्रोम्स (ऍक्रिडाइन ऑरेंज, कॉरिफोस्फीन, प्रिम्युलिन, ऑरोलिन, बर्लेरिन सल्फेट, ट्रिपफ्लाविन, रिव्हानॉल, क्विनॅक्राइन इ.) सह डाग केल्यावर दिसून येते.

डाग नसलेली, थेट नॉन-सेगमेंटेड राउंडवर्म अंडी पिवळसर छटासह चमकदार हिरवी चमकतात; मृत अंड्यांमध्ये, कवच गडद हिरव्या भ्रूण भागापेक्षा जास्त उजळ हिरवा प्रकाश सोडतो; अळ्या असलेल्या राउंडवर्म अंड्यांमध्ये, फक्त कवच दिसते, तर मृतांमध्ये, शेल आणि अळ्या दोन्ही चमकदार पिवळ्या असतात.

पिनवर्म्स आणि ड्वार्फ टेपवॉर्म्सची पिगमेंट नसलेली आणि नॉन-सेगमेंटेड जिवंत अंडी हिरवा-पिवळा प्रकाश सोडतात; मृत अंड्यांमध्ये, कवच गडद हिरव्या भ्रूण वस्तुमानाच्या पार्श्वभूमीवर तीव्रतेने चमकते.

दुय्यम ल्युमिनेसेन्ससह (1:10000 आणि 1:50000 च्या पातळतेवर 30 मिनिटांपासून 2 तासांपर्यंत ऍक्रिडाइन केशरी डागताना), जिवंत आणि मृत नेमाटोड्स, ट्रेमेटोड्स आणि सेस्टोड्सचे कवच वेगळ्या पद्धतीने ल्युमिनेसेस करतात.

एस्केरिड्स, टॉक्सोकारा, पिनवर्म्स, पिग्मी टेपवर्म्स, उंदीर टेपवर्म्स, बुल टेपवर्म्स, टेपवर्म्सच्या जिवंत आणि मृत अंड्यांचे कवच केशरी-लाल होते. निस्तेज गडद हिरव्या किंवा राखाडी-हिरव्या रंगात अस्केरिस, टॉक्सास्कॅरिस, उंदीर टेपवर्म, रुंद टेपवर्म आणि बोवाइन टेपवर्म ल्युमिनेसेसच्या ऑन्कोस्फियरच्या जिवंत अंडींचे भ्रूण. या हेल्मिंथ्सच्या अंड्यांचे मृत भ्रूण "जळत" केशरी-लाल रंग उत्सर्जित करतात. जिवंत पिनवर्म अळ्या आणि टॉक्सोकार्स (अंड्यांची कवच) मंद राखाडी-हिरवा प्रकाश उत्सर्जित करतात, जेव्हा ते मरतात तेव्हा रंग डोक्याच्या टोकापासून "जळत" हलका हिरवा, नंतर पिवळा, नारिंगी आणि शेवटी चमकदार नारिंगी होतो.

जेव्हा फ्लोरोक्रोम्स - कॉरीफॉस्फिलम, प्रिम्युलिन, एस्केरिड्स आणि व्हिपवर्म्सची मृत अंडी लिलाक-पिवळ्या ते तांबे-लाल रंगात चमक दाखवतात. व्यवहार्य अंडी चमकत नाहीत, परंतु गडद हिरवी होतात.

ट्रेमाटोड्सची जिवंत अंडी (पॅरागोनिमस आणि क्लोनोर्चिस) ऍक्रिडाइन केशरी रंगाच्या डागानंतर चमकत नाहीत आणि मृत अंड्यांमधून पिवळसर-हिरवा रंग येतो.

हेल्मिंथ लार्वाची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी ल्युमिनेसेन्स पद्धत देखील वापरली जाऊ शकते. तर, अॅक्रिडाइन ऑरेंज (1:2000) लार्व्हा स्ट्राँगाइलेटच्या द्रावणासह फ्लोरोक्रोमाइज्ड, राब्दिटा ग्लो: जिवंत - हिरवा (टिंटसह), मृत - चमकदार केशरी प्रकाश.

कवचातून बाहेर पडणारा जिवंत मिरासिडिया सिलियाच्या अगदी सहज लक्षात येण्याजोगा हलका पिवळा कोरोला असलेला मंद निळसर प्रकाश उत्सर्जित करतो, परंतु मृत्यूनंतर 10-15 मिनिटांनी ते तेजस्वी "ज्वलंत" हलका हिरवा आणि नंतर केशरी-लाल प्रकाशात दिसतात.

७.७.४. जैविक परख पद्धत

उदाहरणार्थ, एस्केरिस अंडी (एस्केरिस डुकर, मानव, टॉक्सोकारा, टॉक्सास्कॅरिस इ.) ची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी प्रति प्राणी (गिनीपिग, उंदीर), विकसित अळ्या असलेली किमान 100 - 300 अंडी आवश्यक आहेत. आयसोटोनिक सोडियम क्लोराईड द्रावणातील एस्केरिसची अंडी उंदीर किंवा गिनी पिगच्या तोंडातून पिपेट केली जातात. 6-7 दिवसांनंतर, जनावराची कत्तल केली जाते, उघडली जाते आणि त्याच्या यकृत आणि फुफ्फुसांची स्वतंत्रपणे एस्केरिस अळ्याच्या उपस्थितीसाठी तपासणी केली जाते. हे करण्यासाठी, यकृत आणि फुफ्फुसांचे कात्रीने लहान तुकडे केले जातात आणि बर्मन किंवा सुप्रयागा पद्धतीनुसार (विभाग 6.1.2) तपासणी केली जाते.

जर प्राण्यांना जिवंत आक्रमक अंड्यांचा संसर्ग झाला असेल, तर यकृत आणि फुफ्फुसात शवविच्छेदन करताना, स्थलांतरित एस्केरिस अळ्या आढळतात.

संसर्गाच्या बाबतीत, प्रयोगशाळेतील प्राण्यांच्या विष्ठेतील फॅसिओला अंडी सशांमध्ये 2 महिन्यांनंतर, गिनी डुकरांमध्ये - 50 दिवसांनी, उंदरांमध्ये - 35-40 दिवसांनी आढळू शकतात.

जलद प्रतिसादासाठी, प्रयोगशाळेतील प्राणी 20-30 दिवसांनंतर उघडले जातात आणि यकृताची तपासणी तरुण फॅसिओल्सच्या उपस्थितीसाठी केली जाते.

पिग्मी टेपवर्म अंड्यांची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, त्यांना पूर्वी संक्रमित नसलेल्या पांढऱ्या उंदरांना खायला देण्याची शिफारस केली जाते, त्यानंतर 92-96 तासांनंतर प्राण्यांचे शवविच्छेदन केले जाते आणि आतड्यांसंबंधी विली किंवा आतड्यांतील लुमेनमधील सेस्टोड्समध्ये सिस्टिसरकॉइड्स आढळतात.

ओपिस्टोर्चिस अंड्याची व्यवहार्यता निश्चित करण्यासाठी, मिरासिडियम हॅचिंग ग्रंथीच्या भौतिक-रासायनिक सक्रियतेवर आणि अळ्याच्या मोटर क्रियाकलापांच्या उत्तेजनावर आधारित (जर्मन S.M., Beer S.A., 1984) पद्धतीची शिफारस केली जाते, ज्यामुळे अंडी उघडतात. झाकण आणि प्रायोगिक परिस्थितीत मिरासिडियमचे सक्रिय प्रकाशन.

पाण्यात ओपिस्टोर्चिस अंड्यांचे निलंबन 10 - 12 डिग्री सेल्सिअस तापमानात पूर्व-थंड केले जाते (पुढील सर्व ऑपरेशन्स 19 - 20 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर केल्या जातात). 100-150 अंडी असलेल्या निलंबनाचा 1 थेंब सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये जोडला जातो. चाचणी ट्यूब 5-10 मिनिटांसाठी ट्रायपॉडमध्ये ठेवली जाते. यावेळी, सर्व अंडी तळाशी बुडण्याची वेळ असते. नंतर, फिल्टर पेपरच्या पट्टीने, जास्तीचे पाणी काळजीपूर्वक काढून टाकले जाते आणि चाचणी ट्यूबमध्ये एका विशेष माध्यमाचे 2 थेंब जोडले जातात. माध्यम 0.005 M Tris-HCl बफरमध्ये तयार केले जाते; 12 - 13% इथेनॉल द्रावण आणि डाई (मॅजेन्टा, सॅफ्रानिन, इओसिन, मिथिलीन ब्लू, इ.) बफरमध्ये जोडले जातात. चाचणी ट्यूब हलविली जाते, त्यातील सामग्री पिपेटसह काचेच्या स्लाइडवर हस्तांतरित केली जाते आणि 10 मिनिटे सोडली जाते, थोडीशी थरथरते. नंतर सूचित माध्यमाचे 2 थेंब घाला. ही तयारी 20x मॅग्निफिकेशनवर पारंपारिक प्रकाश सूक्ष्मदर्शकाखाली मायक्रोस्कोपीसाठी तयार आहे.

या वेळी, व्यवहार्य अळ्याचे झाकण उघडते आणि मिरासिडियम सक्रियपणे सूचित माध्यमात प्रवेश करते. त्यात इथेनॉलच्या उपस्थितीमुळे, ते 2-5 मिनिटांनंतर स्थिर होतात आणि नंतर रंगाने डागतात. ते सहजपणे शोधले जाऊ शकतात आणि मायक्रोस्कोपी अंतर्गत मोजले जाऊ शकतात.