फागोसाइटोसिसची यंत्रणा: टप्पे आणि टप्पे. शरीराच्या रोगप्रतिकारक प्रतिसादांमध्ये फागोसाइटोसिस
प्रतिकारशक्ती: उपयोजन यंत्रणा
पेशी आणि रेणू एकत्रितपणे कार्य करतात, रोगप्रतिकारक प्रतिसादाच्या विकासाच्या वेगवेगळ्या टप्प्यांवर एकमेकांना आधार देतात.
गैर-विशिष्ट यंत्रणा
परदेशी प्रतिजनाशी टक्कर होण्याच्या पहिल्या टप्प्यावर, एक विशिष्ट पॅथॉलॉजिकल संरक्षणात्मक प्रक्रिया सुरू केली जाते - जळजळ, फॅगोसाइटोसिससह, दाहक मध्यस्थांची मुक्तता - हिस्टामाइन, सेरोटोनिन, साइटोकिन्स इ. फागोसाइट्स (मॅक्रोफेजेस) प्रतिजन शोषून घेतात आणि टी- संपर्क साधतात. हेल्पर लिम्फोसाइट्स, त्यांना पृष्ठभागावर प्रतिजैविक निर्धारक सादर करतात. टी-हेल्पर्स टी-किलर आणि बी-लिम्फोसाइट्सच्या क्लोनचे पुनरुत्पादन (विशिष्ट प्रथिने पदार्थ स्रावित करणारे - इंटरल्यूकिन्स) ट्रिगर करतात जे पूर्व-अस्तित्वात असलेल्या स्टेम पेशींमधून दिलेल्या प्रतिजनासाठी विशिष्ट असतात ज्यांची भ्रूण कालावधीत सहिष्णुतेसाठी चाचणी केली जाते (बर्नेटचा क्लोनल सिलेक्शन सिद्धांत).
जळजळ (lat. inflammatio) ही एक जटिल, स्थानिक आणि सामान्य पॅथॉलॉजिकल प्रक्रिया आहे जी नुकसान (बदल) किंवा रोगजनक उत्तेजनाच्या क्रियेच्या प्रतिसादात उद्भवते आणि नुकसान उत्पादने काढून टाकण्याच्या उद्देशाने प्रतिक्रियांमध्ये (एक्स्युडेटिओ, इ.) प्रकट होते आणि शक्य असल्यास. , नंतर एजंट (चिडखोर), तसेच नुकसान झोनमध्ये या परिस्थिती (प्रसार इ.) साठी जास्तीत जास्त पुनर्प्राप्ती करण्यासाठी अग्रगण्य.जळजळ विकासाची योजना. हानीकारक घटकाच्या प्रभावाखाली, प्रो-इंफ्लॅमेटरी साइटोकिन्स मॅक्रोफेजद्वारे सोडले जातात, जे इतर पेशींना जळजळ होण्याच्या केंद्रस्थानी आकर्षित करतात, परिणामी एकत्रीकरण किंवा त्यांच्याद्वारे सक्रिय पदार्थ सोडल्यास, ऊतकांच्या अखंडतेचे उल्लंघन होते. .
फागोसाइटोसिस (फागो - खाऊन टाकणे आणि सायटोस - सेल) - एक प्रक्रिया ज्यामध्ये रक्ताच्या विशेष पेशी आणि शरीराच्या ऊती (फॅगोसाइट्स) संसर्गजन्य रोग आणि मृत पेशींचे रोगजनक पकडतात आणि पचवतात. हे दोन प्रकारच्या पेशींद्वारे चालते: ग्रॅन्युलर ल्युकोसाइट्स (ग्रॅन्युलोसाइट्स) रक्त आणि ऊतक मॅक्रोफेजमध्ये फिरतात. फॅगोसाइटोसिसचा शोध I. I. मेकनिकोव्हचा आहे, ज्याने स्टारफिश आणि डॅफ्नियावर प्रयोग करून, त्यांच्या शरीरात परदेशी शरीरे आणून ही प्रक्रिया उघड केली. उदाहरणार्थ, जेव्हा मेकनिकोव्हने डॅफ्नियाच्या शरीरात बुरशीचे बीजाणू ठेवले तेव्हा त्याच्या लक्षात आले की त्यावर विशेष मोबाइल पेशींनी हल्ला केला आहे. जेव्हा त्याने बरेच बीजाणू आणले तेव्हा पेशींना ते सर्व पचवायला वेळ मिळाला नाही आणि प्राणी मरण पावला. मेकनिकोव्ह यांनी शरीराला जीवाणू, विषाणू, बुरशीजन्य बीजाणू इ. फॅगोसाइट्सपासून संरक्षण करणार्या पेशी म्हणतात.मानवांमध्ये, व्यावसायिक फागोसाइट्सचे दोन प्रकार आहेत:न्यूट्रोफिल्स आणि मोनोसाइट्स (ऊतींमध्ये - मॅक्रोफेज)
फॅगोसाइटिक प्रतिक्रियाचे मुख्य टप्पे दोन्ही प्रकारच्या पेशींसाठी समान आहेत. फागोसाइटोसिस प्रतिक्रिया अनेक टप्प्यात विभागली जाऊ शकते:
1. केमोटॅक्सिस. फागोसाइटोसिस प्रतिक्रियामध्ये, अधिक महत्वाची भूमिका सकारात्मक केमोटॅक्सिसची असते. केमोएट्रॅक्टंट्स म्हणून, सूक्ष्मजीव आणि सक्रिय पेशींद्वारे स्रावित उत्पादने जळजळ (सायटोकाइन्स, ल्युकोट्रिएन बी4, हिस्टामाइन), तसेच पूरक घटक (C3a, C5a), रक्त गोठण्याचे प्रोटीओलाइटिक तुकडे आणि फायब्रिनोलिसिस घटक (फायब्रिनोलिसिस घटक) आहेत. , फायब्रिन), neuropeptides, तुकडे immunoglobulins, इ. तथापि, "व्यावसायिक" chemotaxins केमोकाइन गटाचे साइटोकिन्स आहेत.
इतर पेशींपेक्षा आधी, न्युट्रोफिल्स जळजळीच्या केंद्रस्थानी स्थलांतरित होतात आणि मॅक्रोफेज खूप नंतर येतात. न्यूट्रोफिल्स आणि मॅक्रोफेजसाठी केमोटॅक्टिक हालचालींचा दर तुलनात्मक आहे, आगमनाच्या वेळेतील फरक कदाचित त्यांच्या सक्रियतेच्या वेगवेगळ्या दरांशी संबंधित आहेत.
2. वस्तूला फागोसाइट्सचे चिकटणे.हे ऑब्जेक्टच्या पृष्ठभागावर (स्वतःचे किंवा त्याच्याशी संबंधित) सादर केलेल्या रेणूंसाठी रिसेप्टर्सच्या फॅगोसाइट्सच्या पृष्ठभागावरील उपस्थितीमुळे होते. जीवाणू किंवा यजमान जीवाच्या जुन्या पेशींच्या फागोसाइटोसिस दरम्यान, टर्मिनल सॅकराइड गट ओळखले जातात - ग्लूकोज, गॅलेक्टोज, फ्यूकोज, मॅनोज इ., जे फॅगोसाइटोसेड पेशींच्या पृष्ठभागावर सादर केले जातात. ओळख योग्य विशिष्टतेच्या लेक्टिन सारख्या रिसेप्टर्सद्वारे केली जाते, प्रामुख्याने मॅनोज-बाइंडिंग प्रोटीन आणि फॅगोसाइट्सच्या पृष्ठभागावर उपस्थित असलेल्या सिलेक्टिन्सद्वारे.
अशा प्रकरणांमध्ये जेव्हा फॅगोसाइटोसिसच्या वस्तू जिवंत पेशी नसतात, परंतु कोळसा, अभ्रक, काच, धातू इत्यादींचे तुकडे असतात, तेव्हा फॅगोसाइट्स प्रथम शोषणाच्या वस्तूला अभिक्रियासाठी स्वीकार्य बनवतात, त्याच्या घटकांसह त्यांच्या स्वतःच्या उत्पादनांसह गुंडाळतात. ते तयार करणारे बाह्य पेशी मॅट्रिक्स.
जरी फागोसाइट्स विविध प्रकारच्या "तयार नसलेल्या" वस्तू शोषून घेण्यास सक्षम असले तरी, ऑप्सोनायझेशन दरम्यान फागोसाइटिक प्रक्रिया सर्वात जास्त तीव्रतेपर्यंत पोहोचते, i. ऑप्सोनिन्सच्या वस्तूंच्या पृष्ठभागावर फिक्सेशन ज्यासाठी फॅगोसाइट्समध्ये विशिष्ट रिसेप्टर्स असतात - ऍन्टीबॉडीजच्या एफसी तुकड्यासाठी, पूरक प्रणालीचे घटक, फायब्रोनेक्टिन इ.
3. पडदा सक्रियकरण.या टप्प्यावर, वस्तू विसर्जनासाठी तयार केली जाते. प्रोटीन किनेज सी चे सक्रियकरण होते, इंट्रासेल्युलर डेपोमधून कॅल्शियम आयन सोडले जातात. सेल्युलर कोलोइड्सच्या प्रणालीमध्ये सोल-जेल संक्रमण आणि ऍक्टिन-मायोसिन पुनर्रचना यांना खूप महत्त्व आहे.
4. डुबकी मारणे. वस्तू गुंडाळत आहे
5. फागोसोमची निर्मिती.मेम्ब्रेन बंद होणे, सेलच्या आत फॅगोसाइट झिल्लीचा एक भाग असलेल्या वस्तूचे विसर्जन.
6. फागोलिसोसोमची निर्मिती.लाइसोसोमसह फागोसोमचे संलयन, परिणामी बॅक्टेरियोलिसिस आणि मृत पेशीचे विभाजन करण्यासाठी अनुकूल परिस्थिती निर्माण होते. फागोसोम्स आणि लाइसोसोम्सच्या अभिसरणाची यंत्रणा स्पष्ट नाही, बहुधा लाइसोसोम्स ते फागोसोम्समध्ये सक्रिय हालचाल आहे.
7. मारणे आणि विभाजन करणे.पचलेल्या पेशीच्या सेल भिंतीची भूमिका महान आहे. बॅक्टेरियोलिसिसमध्ये सामील असलेले मुख्य पदार्थ: हायड्रोजन पेरोक्साइड, नायट्रोजन चयापचय उत्पादने, लाइसोझाइम इ. प्रोटीसेस, न्यूक्लीज, लिपेसेस आणि इतर एन्झाईम्सच्या क्रियाकलापांमुळे जिवाणू पेशी नष्ट करण्याची प्रक्रिया पूर्ण होते, ज्याची क्रिया इष्टतम असते. pH मूल्ये.
8. निकृष्ट उत्पादनांचे प्रकाशन.
फागोसाइटोसिस हे असू शकते: पूर्ण (हत्या करणे आणि पचन यशस्वी झाले), अपूर्ण (अनेक रोगजनकांसाठी, फॅगोसाइटोसिस त्यांच्या जीवन चक्रातील एक आवश्यक टप्पा आहे, उदाहरणार्थ, मायकोबॅक्टेरिया आणि गोनोकोसीमध्ये).
पूरक सक्रियकरण.
पूरक प्रणाली प्रतिक्रियांचे बायोकेमिकल कॅस्केड म्हणून कार्य करते. पूरक तीन बायोकेमिकल मार्गांद्वारे सक्रिय केले जाते: शास्त्रीय, पर्यायी आणि लेक्टिन मार्ग. सर्व तीन सक्रियण मार्ग C3 कन्व्हरटेजचे वेगवेगळे रूपे तयार करतात (एक प्रथिने जे C3 क्लीव्ह करते). शास्त्रीय मार्ग (हा शोधला गेलेला पहिला होता, परंतु उत्क्रांतीनुसार नवीन आहे) प्रतिपिंडे सक्रिय करणे आवश्यक आहे (विशिष्ट रोगप्रतिकारक प्रतिसाद, अनुकूली प्रतिकारशक्ती), तर पर्यायी आणि लेक्टिन मार्ग प्रतिपिंडांच्या उपस्थितीशिवाय प्रतिजनांद्वारे सक्रिय केले जाऊ शकतात (विशिष्ट रोगप्रतिकारक शक्ती). प्रतिसाद, जन्मजात प्रतिकारशक्ती). तिन्ही प्रकरणांमध्ये पूरक सक्रियतेचा परिणाम सारखाच आहे: C3 कन्व्हर्टेज हायड्रोलायझेशन C3, C3a आणि C3b तयार करते आणि पूरक प्रणाली घटकांचे पुढील हायड्रोलिसिस आणि सक्रियकरण घटनांचे कॅस्केड बनवते. शास्त्रीय मार्गामध्ये, C3 कन्व्हर्टेज सक्रिय करण्यासाठी C4b2a कॉम्प्लेक्स तयार करणे आवश्यक आहे. हे कॉम्प्लेक्स C1 कॉम्प्लेक्सद्वारे C2 आणि C4 च्या क्लीव्हेजवर तयार होते. C1 कॉम्प्लेक्स, या बदल्यात, सक्रियतेसाठी वर्ग M किंवा G इम्युनोग्लोब्युलिनशी बांधले पाहिजे. C3b रोगजनकांच्या पृष्ठभागावर बांधले जाते, ज्यामुळे C3b-संबंधित पेशींमध्ये फॅगोसाइट्सची अधिक "रुची" निर्माण होते (ऑपसोनायझेशन). C5a हे एक महत्त्वाचे केमोएट्रॅक्टंट आहे जे नवीन रोगप्रतिकारक पेशींना पूरक सक्रियतेच्या क्षेत्राकडे आकर्षित करण्यास मदत करते. C3a आणि C5a या दोन्हींमध्ये अॅनाफिलोटॉक्सिक क्रियाकलाप आहे, ज्यामुळे थेट मास्ट पेशींचे विघटन होते (परिणामी, दाहक मध्यस्थांची मुक्तता). C5b मुळे C5b, C6, C7, C8 आणि पॉलिमरिक C9 यांचा समावेश असलेल्या मेम्ब्रेन अटॅक कॉम्प्लेक्स (MACs) ची निर्मिती सुरू होते. MAC हे पूरक सक्रियतेचे सायटोलाइटिक अंतिम उत्पादन आहे. MAC एक ट्रान्समेम्ब्रेन चॅनेल बनवते ज्यामुळे लक्ष्य सेलचे ऑस्मोटिक लिसिस होते. मॅक्रोफेजेस पूरक प्रणालीद्वारे लेबल केलेल्या रोगजनकांना अंतर्भूत करतात.
क्लासिक मार्ग
शास्त्रीय मार्ग C1 कॉम्प्लेक्सच्या सक्रियतेने ट्रिगर केला जातो (त्यात एक C1q रेणू आणि प्रत्येकी दोन C1r आणि C1s रेणू असतात). C1 कॉम्प्लेक्स C1q द्वारे वर्ग M आणि G प्रतिजनांशी संबंधित इम्युनोग्लोबुलिनशी जोडले जाते. Hexameric C1q हा न उघडलेल्या ट्यूलिपच्या पुष्पगुच्छाचा आकार आहे, ज्याच्या "कळ्या" प्रतिपिंडांच्या Fc प्रदेशात बांधू शकतात. हा मार्ग सुरू करण्यासाठी एकच IgM रेणू पुरेसा आहे, IgG रेणूंद्वारे सक्रियकरण कमी कार्यक्षम आहे आणि अधिक IgG रेणू आवश्यक आहेत.
C1q थेट रोगजनकाच्या पृष्ठभागावर बांधला जातो, ज्यामुळे C1q रेणूमध्ये रचनात्मक बदल होतात आणि C1r सेरीन प्रोटीसेसचे दोन रेणू सक्रिय होतात. ते C1 (सेरीन प्रोटीज देखील) कापतात. C1 कॉम्प्लेक्स नंतर C4 आणि C2 ला जोडले जाते आणि नंतर त्यांना C2a आणि C4b बनवते. C4b आणि C2a शास्त्रीय मार्ग C3 कन्व्हरटेज, C4b2a तयार करण्यासाठी रोगजनकाच्या पृष्ठभागावर एकमेकांना बांधतात. C3 कन्व्हर्टेज दिसल्याने C3 चे C3a आणि C3b मध्ये विभाजन होते. C3b, C2a आणि C4b सोबत, शास्त्रीय मार्गाचा C5 कन्व्हर्टेज बनतो.
पर्यायी मार्ग
रोगजनकांच्या पृष्ठभागावर थेट C3 च्या हायड्रोलिसिसमुळे पर्यायी मार्ग सुरू होतो. पर्यायी मार्गामध्ये घटक B आणि D यांचा सहभाग असतो. त्यांच्या मदतीने C3bBb हे एन्झाइम तयार होते. प्रथिने पी ते स्थिर करते आणि त्याचे दीर्घकालीन कार्य सुनिश्चित करते. पुढे, PC3bBb C3 सक्रिय करते, परिणामी, C5-कन्व्हर्टेज तयार होते आणि झिल्ली अटॅक कॉम्प्लेक्सची निर्मिती सुरू होते. टर्मिनल पूरक घटकांचे पुढील सक्रियकरण पूरक सक्रियकरणाच्या शास्त्रीय मार्गाप्रमाणेच होते.
पर्यायी मार्ग शास्त्रीय मार्गापेक्षा खालील प्रकारे भिन्न आहे: पूरक प्रणालीच्या सक्रियतेसाठी रोगप्रतिकारक कॉम्प्लेक्स तयार करण्याची आवश्यकता नसते; हे पहिल्या पूरक घटकांच्या सहभागाशिवाय होते - C1, C2, C4. हे देखील वेगळे आहे की ते प्रतिजन दिसल्यानंतर लगेच कार्य करते - त्याचे सक्रियक बॅक्टेरियल पॉलिसेकेराइड्स आणि लिपोपॉलिसॅकेराइड्स, व्हायरल कण, ट्यूमर पेशी असू शकतात.
लेक्टिन (मॅनोज) पूरक प्रणालीच्या सक्रियतेचा मार्ग
मन्नन (मन्नान मॅनोजचा एक पॉलिमर आहे)-संबंधित लेक्टिन मार्ग पूरक प्रणालीच्या शास्त्रीय सक्रियकरण मार्गाशी समरूप आहे. हा मार्ग मन्नन-बाइंडिंग लेक्टिन (MBL) वापरतो, जो शास्त्रीय C1q सक्रियकरण मार्गासारखाच एक प्रथिन आहे, जो विविध प्रकारचे रोगजनक ओळखण्यासाठी झिल्लीवरील मॅनोज अवशेष आणि इतर शर्करांशी जोडतो. MBL हे यकृताद्वारे तयार केलेल्या प्रथिनांच्या संकलित गटाशी संबंधित एक प्रथिने आहे आणि ते रोगजनक पृष्ठभागास बांधून पूरक कॅस्केड सक्रिय करू शकते. MBL हा 2-6 शिरोबिंदू रेणू आहे जो MASP-I (मन्नन-बाइंडिंग लेक्टिन असोसिएटेड सेरीन प्रोटीज, MBL-संबंधित सेरीन प्रोटीज) आणि MASP-II सह एक कॉम्प्लेक्स तयार करतो. MASP-I आणि MASP-II हे शास्त्रीय सक्रियण मार्गाच्या C1r आणि C1 सारखेच आहेत आणि त्यांचा सामान्य उत्क्रांती पूर्वज असू शकतो. जेव्हा कार्बोहायड्रेट-निर्धारित करणारे MBL शिरोबिंदू पॅथोजेनच्या फॉस्फोलिपिड बाईलेयरवर विशेषत: ओरिएंटेड मॅनोज अवशेषांशी बांधले जातात, तेव्हा MASP-I आणि MASP-II सक्रिय होतात आणि C4 प्रोटीन C4a आणि C4b मध्ये आणि C2 प्रोटीन C2a आणि C2b मध्ये C2a आणि C2b सह C2b नंतर C4 मध्ये क्लीव्ह करतात. C3 कन्व्हर्टेज तयार करून पृष्ठभागावरील रोगकारक, तर C4a आणि C2b केमोआट्रॅक्टंट म्हणून कार्य करतात.सेल्युलर प्रतिरक्षा प्रतिसाद
शरीरात प्रवेश केलेला विषाणू मॅक्रोफेजेसद्वारे एंडोसाइटोज होतो आणि नंतर एंडोप्लाज्मिक रेटिक्युलममध्ये अंशतः नष्ट होतो (1). परिणामी, परदेशी तुकडे तयार होतात, जे मॅक्रोफेज (2) च्या सेल पृष्ठभागावर उघड होतात. हे तुकडे मेम्ब्रेन प्रोटीन्स (MHC प्रोटीन्स) च्या विशेष गटाद्वारे "प्रस्तुत" केले जातात. व्हायरल फ्रॅगमेंटचे कॉम्प्लेक्स आणि प्रमुख हिस्टोकॉम्पॅटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स प्रोटीन [MHC (MHC)] विशिष्ट (T-सेल) रिसेप्टर्स वापरून टी-पेशींद्वारे ओळखले जाते आणि बांधले जाते. टी पेशींच्या अफाट संख्येपैकी, फक्त काही लोकांकडे योग्य रिसेप्टर (3) असतात. बंधनामुळे या टी पेशी सक्रिय होतात आणि त्यांच्या निवडक प्रती दिसतात (4, "क्लोनल सिलेक्शन"). विविध संप्रेरक-सदृश सिग्नलिंग प्रथिने, इंटरल्यूकिन्स [IL (IL), p पहा. ३७८]. ही प्रथिने रोगप्रतिकारक प्रणालीच्या पेशींद्वारे स्रावित केली जातात जी टी पेशींना बांधलेली असताना सक्रिय होतात. अशाप्रकारे, प्रस्तुत व्हायरल फ्रॅगमेंटसह सक्रिय मॅक्रोफेजेस IL-1 (5) स्राव करतात आणि टी पेशी IL-2 (6) तयार करतात, जे त्यांच्या स्वतःच्या क्लोनल कॉपी आणि टी-हेल्पर पेशींची प्रतिकृती उत्तेजित करतात.
क्लोन आणि सक्रिय टी पेशी त्यांच्या प्रकारानुसार भिन्न कार्ये करतात. सायटोटॉक्सिक टी पेशी (हिरव्या आकृतीमध्ये) व्हायरसने संक्रमित झालेल्या शरीराच्या पेशी ओळखण्यास आणि त्यांना बांधून ठेवण्यास सक्षम असतात आणि त्यांच्या MHC रिसेप्टर्सवर व्हायरसचे तुकडे वाहून नेतात (7). सायटोटॉक्सिक टी पेशी परफोरिन स्रावित करतात, एक प्रथिने जे बाधित संक्रमित पेशीच्या पडद्यामध्ये झिरपते, ज्यामुळे सेल लिसिस (8) होते.
याउलट, टी-हेल्पर्स (निळ्या आकृतीमध्ये) बी-सेल्सशी बांधले जातात, जे त्यांच्या पृष्ठभागावर MHC प्रोटीन (9) शी संबंधित विषाणूचे तुकडे असतात. यामुळे वैयक्तिक B पेशींचे निवडक क्लोनिंग होते आणि त्यांचा मोठ्या प्रमाणावर प्रसार होतो, इंटरल्यूकिन (10) बी पेशींची परिपक्वता उत्तेजित करते - प्लाझ्मा पेशींमध्ये रूपांतर (11) प्रतिपिंडांचे संश्लेषण आणि स्राव करण्यास सक्षम (12)
फागोसाइटोसिस (ग्रीक फागो - I devour and cytos - a cell मधून) सूक्ष्मजीवांसह प्रतिजैविक पदार्थांचे शोषण आणि पचन करण्याची प्रक्रिया आहे, ज्याला मेसोडर्मल उत्पत्तीच्या पेशी म्हणतात. फॅगोसाइट्स. I. I. मेकनिकोव्हने फागोसाइट्सचे विभाजन केले मॅक्रोफेजेस आणि मायक्रोफेजेस. सध्या, मॅक्रो- आणि मायक्रोफेजेस एकत्र आहेत मॅक्रोफेजची एकल प्रणाली (एसएमएफ). या प्रणालीमध्ये हे समाविष्ट आहे:
- टिश्यू मॅक्रोफेज - एपिथेलिओइड पेशी,
- स्टेलेट रेटिक्युलोएन्डोथेलियोसाइट्स (कुफ्फर पेशी),
- अल्व्होलर आणि पेरीटोनियल मॅक्रोफेजेस अल्व्होली आणि पेरीटोनियल पोकळीमध्ये स्थित आहेत,
- त्वचेची पांढरी प्रक्रिया एपिडर्मोसाइट्स (लॅन्गरहन्स पेशी), इ.
मायक्रोफेजमध्ये समाविष्ट आहे:
- न्यूट्रोफिल्स,
- इओसिनोफिल्स,
- बेसोफिल्स
मॅक्रोफेजची कार्येअत्यंत वैविध्यपूर्ण. परदेशी पदार्थावर प्रतिक्रिया देणारे ते पहिले आहेत, विशेष पेशी आहेत ज्या शरीरातील परदेशी पदार्थ शोषून घेतात आणि नष्ट करतात (मृत पेशी, कर्करोगाच्या पेशी, जीवाणू, विषाणू आणि इतर सूक्ष्मजीव, प्रतिजन, गैर-चयापचय अकार्बनिक पदार्थ). याव्यतिरिक्त, मॅक्रोफेज अनेक जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थ तयार करतात - एन्झाईम्स (लायसोझाइम, पेरोक्सिडेज, एस्टेरेससह), पूरक प्रथिने, इंटरल्यूकिन्स सारख्या इम्युनोमोड्युलेटर. इम्युनोग्लोब्युलिन (Am) आणि पूरक साठी रिसेप्टर्सच्या मॅक्रोफेजच्या पृष्ठभागावरील उपस्थिती, तसेच मध्यस्थांची एक प्रणाली, टी- आणि बी-लिम्फोसाइट्ससह त्यांचे परस्परसंवाद सुनिश्चित करते. त्याच वेळी, मॅक्रोफेज टी-लिम्फोसाइट्सचे संरक्षणात्मक कार्य सक्रिय करतात. पूरक आणि Am, तसेच हिस्टोकॉम्पॅटिबिलिटी सिस्टम एजी (एचएलए) साठी रिसेप्टर्सच्या उपस्थितीमुळे, मॅक्रोफेजेस प्रतिजनांच्या बंधनात आणि ओळखण्यात गुंतलेले असतात. अशा प्रकारे, फागोसाइट्सची तीन कार्ये आहेत:
- संरक्षक, संक्रामक एजंट, ऊतींचे क्षय उत्पादने इत्यादींच्या शरीराच्या शुद्धीकरणाशी संबंधित;
- फॅगोसाइट झिल्लीवरील लिम्फोसाइट्सला प्रतिजैनिक एपिटॉल्सच्या सादरीकरणामध्ये प्रतिनिधित्व करणारे;
- सेक्रेटरी, लाइसोसोमल एंजाइम आणि इतर जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थांच्या स्रावशी संबंधित - साइटोकिन्स, जी इम्युनोजेनेसिसमध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावतात.
खालील क्रमाने वाहते आहेत फागोसाइटोसिसचे टप्पे.
- केमोटॅक्सिस- वातावरणातील केमोएट्रॅक्टंट्सच्या रासायनिक ग्रेडियंटच्या दिशेने फागोसाइट्सची लक्ष्यित हालचाल. केमोटॅक्सिसची क्षमता केमोएट्रॅक्टंट्स (फॅगोसाइटोसिसच्या वस्तू) साठी विशिष्ट रिसेप्टर्सच्या पडद्यावरील उपस्थितीशी संबंधित आहे, जे जीवाणू, शरीराच्या ऊतींचे ऱ्हास उत्पादने इत्यादी असू शकतात.
- आसंजन(संलग्नक) देखील संबंधित रिसेप्टर्सद्वारे मध्यस्थी केली जाते, परंतु गैर-विशिष्ट भौतिक-रासायनिक परस्परसंवादाच्या नियमांनुसार पुढे जाऊ शकते. मॅक्रोफेजच्या पृष्ठभागावर कण शोषले जातात.
- एंडोसाइटोसिस(कॅप्चर) - सेल झिल्लीचे आक्रमण होते, परदेशी कण कॅप्चर होतो आणि प्रोटोप्लाझममध्ये त्याचे विसर्जन होते. एंडोसाइटोसिसच्या परिणामी, फागोसाइटिक व्हॅक्यूओल तयार होते - फागोसोम(म्हणजे, शोषलेल्या कणाभोवती प्रोटोप्लाझममधील बबल).
- इंट्रासेल्युलर पचन- फॅगोसाइटोज्ड वस्तूंच्या शोषणापासून सुरू होते. फागोसोम फॅगोसाइटच्या लाइसोसोममध्ये विलीन होतो, ज्यामध्ये डझनभर एंजाइम असतात आणि एन्झाईमद्वारे पकडलेल्या कणाचा फागोलिसोसोम (विनाश) तयार होतो. जेव्हा जीवाशी संबंधित कण स्वतःच शोषला जातो (उदाहरणार्थ, मृत पेशी किंवा त्याचे भाग, स्वतःचे प्रथिने), ते फॅगोलिसोसोम एन्झाईम्सद्वारे गैर-अँटीजेनिक पदार्थांमध्ये (अमीनो ऍसिड, फॅटी ऍसिडस्, न्यूक्लियोटाइड्स, मोनोसुगर) विभाजित केले जातात. जर एखादा परदेशी कण शोषला गेला असेल, तर फॅगोलिसोसोमचे एन्झाईम पदार्थाला नॉन-एंटीजेनिक घटकांमध्ये खंडित करू शकत नाहीत. अशा परिस्थितीत, अँटीजनच्या उर्वरित भागासह फॅगोलिसोसोम ज्याने त्याचे परकीयपणा टिकवून ठेवले आहे ते मॅक्रोफेजद्वारे टी- आणि बी-लिम्फोसाइट्समध्ये प्रसारित केले जाते, म्हणजेच, प्रतिकारशक्तीचा एक विशिष्ट दुवा चालू केला जातो.
गुप्त कार्यजैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थांच्या फागोसाइट्सद्वारे स्राव होतो - साइटोकाइन्स - हे इंटरल्यूकिन -1 आणि इंटरल्यूकिन -2 आहेत, जे सेल्युलर मध्यस्थ आहेत ज्यांचा फागोसाइट्स, लिम्फोसाइट्स, लिम्फोब्लास्ट्स आणि इतर पेशींच्या प्रसार, भिन्नता आणि कार्यावर नियामक प्रभाव पडतो. मॅक्रोफेजेस प्रोस्टॅग्लॅंडिन्स, ल्युकोट्रिएन्स, चक्रीय न्यूक्लियोटाइड्स सारख्या महत्त्वपूर्ण नियामक घटकांची निर्मिती आणि स्राव करतात ज्यात जैविक क्रियाकलापांच्या विस्तृत श्रेणी आहेत. याव्यतिरिक्त, मॅक्रोफेजेस बॅक्टेरियाच्या वाढीस प्रतिबंध करणारा पदार्थ, अँटीव्हायरल आणि सायटोटॉक्सिक क्रियाकलाप (ऑक्सिजन रॅडिकल्स O2-H2O2, लाइसोझाइम, इंटरफेरॉन इ.) सह अनेक उत्पादनांचे संश्लेषण आणि स्राव करतात.
फागोसाइटोसिस हे ऑप्सोनिन ऍन्टीबॉडीज द्वारे वर्धित केले जाते, कारण या ऍन्टीबॉडीजच्या रिसेप्टर्सच्या उपस्थितीमुळे फागोसाइटच्या पृष्ठभागावर बांधलेले किंवा प्रतिजन अधिक सहजपणे शोषले जाते. ऍन्टीबॉडीजद्वारे फॅगोसाइटोसिसच्या या वाढीस म्हणतात opsonization, म्हणजे फागोसाइट्सद्वारे कॅप्चर करण्यासाठी सूक्ष्मजीव तयार करणे. Opsonized antigens च्या Phagocytosis ला रोगप्रतिकारक म्हणतात.
phagocytosis च्या क्रियाकलाप वैशिष्ट्यीकृत करण्यासाठी ओळख फागोसाइटिक निर्देशांक.हे निर्धारित करण्यासाठी, एका फागोसाइटद्वारे शोषलेल्या जीवाणूंची संख्या सूक्ष्मदर्शकाखाली मोजली जाते. तसेच आनंद घ्या opsonophagocytic निर्देशांकरोगप्रतिकारक आणि नॉन-इम्यून सीरमसह प्राप्त झालेल्या फॅगोसाइटिक पॅरामीटर्सचे गुणोत्तर दर्शविते. फॅगोसाइटिक इंडेक्स आणि ऑप्सोनोफॅगोसाइटिक इंडेक्सचा उपयोग रोग प्रतिकारशक्ती आणि रोगप्रतिकारक स्थितीचे मूल्यांकन करण्यासाठी क्लिनिकल इम्यूनोलॉजीमध्ये केला जातो.
फागोसाइटोसिस जीवाणूविरोधी, अँटीफंगल आणि अँटीव्हायरल संरक्षणामध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते, शरीराचा परदेशी पदार्थांचा प्रतिकार राखतो. फागोसाइट्सचा लिम्फोसाइट्सवर सक्रिय आणि दडपशाही प्रभाव देखील असतो, ते रोगप्रतिकारक सहिष्णुतेच्या पुनरुत्थानात भाग घेतात, संसर्गविरोधी, प्रत्यारोपण आणि अँटीट्यूमर प्रतिकारशक्ती आणि काही प्रकारचे ऍलर्जी (एचआरटी) मध्ये भाग घेतात.
फागोसाइटोसिस ही मोठ्या मॅक्रोमोलेक्युलर कॉम्प्लेक्स किंवा कॉर्पस्क्युलर स्ट्रक्चर्सच्या सेलद्वारे शोषण्याची एक विशेष प्रक्रिया आहे. सस्तन प्राण्यांमधील "व्यावसायिक" फागोसाइट्स हे दोन प्रकारचे विभेदित पेशी आहेत - न्यूट्रोफिल्स आणि मॅक्रोफेज, जे HSCs पासून अस्थिमज्जामध्ये परिपक्व होतात आणि एक सामान्य मध्यवर्ती पूर्वज पेशी सामायिक करतात.न्युट्रोफिल्स परिधीय रक्तामध्ये फिरतात आणि रक्तातील ल्युकोसाइट्सचा महत्त्वपूर्ण भाग बनवतात - 60-70%, किंवा 1 लिटर रक्त प्रति 2.5-7.5x109 पेशी. सामान्यतः, न्युट्रोफिल्स रक्तवाहिन्यांना परिधीय ऊतींमध्ये सोडत नाहीत, परंतु चिकट रेणूंच्या जलद अभिव्यक्तीमुळे ते प्रथम "घाई" करतात (म्हणजेच, जळजळ होण्याच्या ठिकाणी) - VCAM-1 (VLA-4 एंडोथेलियल लिगँड) आणि इंटिग्रिन CDllb/CD18 (एंडोथेलियम ICAM-1 वर लिगँड). विशेष मार्कर - CD66a आणि CD66d (कार्सिनोमा-भ्रूण एजी) त्यांच्या बाह्य झिल्लीवर ओळखले गेले.
मोनोसाइट्स आणि मॅक्रोफेज. मोनोसाइट्स एक "मध्यवर्ती स्वरूप" आहेत, रक्तामध्ये ते ल्यूकोसाइट्सच्या एकूण संख्येच्या 5-10% आहेत. त्यांचा उद्देश ऊतींमध्ये गतिहीन मॅक्रोफेज बनणे आणि असणे आहे.
यकृत मॅक्रोफेज - कुफर पेशी, मेंदू - मायक्रोग्लिया, फुफ्फुस मॅक्रोफेज - अल्व्होलर आणि इंटरस्टिशियल, किडनी - मेसेन्जियल.
♦ मॅक्रोफेज झिल्ली रिसेप्टर्स.
O CD115 - मोनोसाइट कॉलनी उत्तेजक घटक (M-CSF) साठी Rc. हे ग्रॅन्युलोसाइट्स आणि मोनोसाइट्सच्या प्लुरिपोटेंट प्रिकर्सर सेलच्या पडद्यावर देखील असते आणि मोनोसाइट्सचे एकशक्तिमान पूर्ववर्ती असते, o चार रचना ज्ञात आहेत - मॅक्रोफेजच्या सेल झिल्लीवरील आरसी, मॅक्रोफेजच्या यंत्रणेद्वारे काय शोषून घेण्यास सक्षम आहे हे जोडते. फॅगोसाइटोसिस
CD14 - सीरम लिपोपोलिसेकेराइड-बाइंडिंग प्रोटीन्स (LBP) सह बॅक्टेरियल LPS च्या कॉम्प्लेक्ससाठी Rc, तसेच इतर मायक्रोबियल उत्पादनांसह LPS कॉम्प्लेक्स (उदाहरणार्थ, एंडोटॉक्सिन). - फॉस्फोलिपिड झिल्लीचे तुकडे आणि स्वतःचे खराब झालेले आणि मरणारे इतर घटक बांधण्यासाठी Rc. पेशी (Rc for " कचरा", स्कॅव्हेंजर रिसेप्टर्स). अशा, उदाहरणार्थ, "जुन्या" एरिथ्रोसाइट्ससाठी सीडी 163 - आरसी आहे. आरसी बंधनकारक मॅनोज. केवळ टिश्यू मॅक्रोफेजच्या झिल्लीवर उपस्थित असतात.
- पूरक साठी RC - CR3 (CDllb/CD18 इंटिग्रिन) आणि CR4 (CDllc/CD18 इंटिग्रिन). पूरक व्यतिरिक्त, ते अनेक जीवाणूजन्य उत्पादने देखील बांधतात: लिपोपॉलिसॅकेराइड्स, लीशमॅनिया लिपोफॉस्फोग्लायकन, बोर्डेटेला फिलामेंट्समधील हेमॅग्लुटिनिन, कॅन्डिडा आणि हिस्टोप्लाझ्मा या जननांच्या यीस्ट पेशींच्या पृष्ठभागाची रचना.
CD64 - IgG च्या "पूंछ" (Fc तुकड्या) साठी Rc - FcyRI (प्रथम प्रकारचा Fcy-Rc), मॅक्रोफेजद्वारे रोगप्रतिकारक संकुलांच्या फॅगोसाइटोसिसची शक्यता प्रदान करते. ते मोनोसाइट्स/मॅक्रोफेजचे झिल्ली मार्कर मानले जातात, कारण ते केवळ या पेशींवर व्यक्त केले जातात. FcyRI सह जोडणीच्या ताकदीच्या दृष्टीने IgG चे उपवर्ग खालील क्रमाने आहेत: IgG3 > IgGl > IgG4 > IgG2. o रिसेप्टर्स जे लिम्फोसाइटिक प्रतिकारशक्तीशी संवाद साधतात. आधीच नमूद केलेल्या CD64 सोबत, यामध्ये खालील गोष्टींचा समावेश होतो: - रोगप्रतिकारक लिम्फोसाइट्सद्वारे तयार केलेल्या साइटोकिन्ससाठी आर.सी. IFNy आणि ट्यूमर नेक्रोसिस फॅक्टर (TNF) साठी Rc ligands ला बंधनकारक केल्याने मॅक्रोफेज सक्रिय होते. याउलट, IL-10 साठी Rc द्वारे मॅक्रोफेज निष्क्रिय केले जाते. - CD40, B7, MHC-I / II - लिम्फोसाइट्सच्या पूरक झिल्लीच्या रेणूंसह संपर्कांसाठी पडदा रेणू, म्हणजे.
थेट इंटरसेल्युलर परस्परसंवादासाठी. न्यूट्रोफिल्समध्ये असे रिसेप्टर्स नसतात. फॅगोसाइटोसिसचे परिणाम. फॅगोसाइटने शोषलेल्या वस्तूभोवती त्याचा पडदा गुंडाळल्यानंतर आणि फॅगोसोम नावाच्या पडद्याच्या वेसिकलमध्ये बंद केल्यानंतर, पुढील घटना घडतात.
♦ फॅगोसाइटोज्ड सामग्रीचे विच्छेदन. ही प्रक्रिया सर्व फागोसाइट्समध्ये समान जैवरासायनिक यंत्रणेचे अनुसरण करते, o लाइसोसोम्स हे विशेष इंट्रासेल्युलर ऑर्गेनेल्स असतात ज्यात अंदाजे 4.0 च्या इष्टतम pH सह हायड्रोलाइटिक एन्झाईम्स (ऍसिड प्रोटीसेस आणि हायड्रोलेसेस) चा संच असतो. सेलमध्ये, लाइसोसोम फॅगोसोममध्ये विलीन होतात फॅगोलिसोसोममध्ये, जेथे शोषलेल्या पदार्थाच्या पचनाच्या प्रतिक्रिया होतात. 02-), सिंगल ऑक्सिजन (1O2), हायड्रॉक्सिल रॅडिकल (OH-), हायपोक्लोराइड (OC1-), नायट्रिक ऑक्साइड ( NO+). हे रॅडिकल्स फॅगोसाइटोसेड ऑब्जेक्टच्या नाशात देखील सामील आहेत.
♦ लिटिक एन्झाईम्सचा स्राव आणि इंटरसेल्युलर स्पेसमध्ये ऑक्सिडायझिंग रॅडिकल्स, जिथे त्यांचा जीवाणूनाशक प्रभाव देखील असतो (परंतु त्यांच्या स्वतःच्या ऊतींवर देखील परिणाम होतो).
न्यूट्रोफिल्स, आधीच नमूद केलेल्या पदार्थांव्यतिरिक्त, कोलेजेनेस, कॅथेप्सिन जी, जिलेटिनेज, इलास्टेस आणि फॉस्फोलिपेस A2 तयार करतात आणि स्राव करतात.
♦ साइटोकिन्सचे उत्पादन आणि स्राव. मायक्रोबियल उत्पादनांद्वारे सक्रिय केलेले मॅक्रोफेजेस आणि न्यूट्रोफिल्स, साइटोकिन्स आणि इतर जैविक दृष्ट्या सक्रिय मध्यस्थ तयार करण्यास सुरवात करतात, जे बाह्य पदार्थांच्या परिचयाच्या ठिकाणी पूर्व-प्रतिरक्षा दाह निर्माण करतात, ज्यामुळे लिम्फोसाइटिक रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया विकसित होण्याची शक्यता तयार होते.
O मॅक्रोफेजेस इंटरल्यूकिन्स तयार करतात (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12); ट्यूमर नेक्रोसिस फॅक्टर ए (टीएनएफए); प्रोस्टॅग्लॅंडिन; leukotriene B4 (LTB4); प्लेटलेट सक्रिय घटक (PAF).
o न्यूट्रोफिल्स TNFa, IL-12, केमोकाइन IL-8, LTB4 आणि PAT तयार करतात.
♦ एजीची प्रक्रिया आणि सादरीकरण - स्वतःच्या MHC-II रेणूंसह फॅगोसाइटोज्ड सामग्रीच्या क्लीव्हेजच्या उत्पादनांमधून पेशींच्या आत कॉम्प्लेक्सची निर्मिती आणि T द्वारे ओळखण्यासाठी Ag सादर करण्याच्या "उद्देशाने" सेल पृष्ठभागावर या कॉम्प्लेक्सची अभिव्यक्ती. - लिम्फोसाइट्स. ही प्रक्रिया केवळ मॅक्रोफेजद्वारे केली जाते.
साहित्यात फागोसाइटोसिसचे प्रमाण मोजण्यासाठी मोठ्या संख्येने पद्धती वर्णन केल्या आहेत. या पुस्तकाचे खंड आम्हाला त्या सर्वांचे तपशीलवार वर्णन करण्याची परवानगी देत नाही, म्हणून आम्ही केवळ काही वर्णन करण्यापुरतेच मर्यादित राहू.
साहित्य आणि उपकरणे
कार्य करण्यासाठी, आपल्याकडे असणे आवश्यक आहे:
सायट्रेटेडएक्सट्रोज अँटीकोआगुलंट: 8 ग्रॅम साइट्रिक ऍसिड. 22 ग्रॅम ट्रायसब्स्टिट्यूट सोडियम सायट्रेट (दोन-पाणी), 24.5 ग्रॅम ग्लुकोज 1 लिटर पाण्यात विरघळतात;
डेक्स्ट्रोसोडेक्सट्रान द्रावण: 4.5 ग्रॅम NaCl, 25 ग्रॅम ग्लुकोज, 30 ग्रॅम डेक्सट्रान (rel. mol. wt. 500,000) 1 l मध्ये;
अमोनियम क्लोराईड द्रावण: 9 भाग 0.83% अमोनियम क्लोराईड, 1 भाग Tris-HCl बफर pH 7.2 (20.6 g/l);
फिकॉलचे मिश्रण - विझोट्रास्ट: फिकॉलचे 9 ग्रॅम, व्हिझोट्रास्टचे 20 मिली, बिडस्टिल्ड एच 2 0 100 मिली, घनता 1.077;
β-glucuronidase साठी सब्सट्रेट: 31.5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronide आणि 100 μm Triton X 100 100 ml 0.05 M सोडियम एसीटेट बफर pH 5 मध्ये विसर्जित केले जातात;
मायलोपेरॉक्सिडेस डेफिशियन्सी अभिकर्मक: फिक्सेटिव्ह (90 मिली अॅबसोल्युट इथेनॉलसह 10 मिली 37% फॉर्मल्डिहाइड), सब्सट्रेट सोल्यूशन (100 मिली 30% ईडीटीए, 0.3 ग्रॅम बेंझिडाइन क्लोराईड, 0.038 ग्रॅम ZnS0 4 x7H 2 0, 0.0 मिली लिटर पाणी 3 C00Nax3H 2 0, 0.7 मिली 3% H 2 0 2); 1.0 M NaOH चा pH 6.0 वर आणा.
व्यावसायिक अभिकर्मक:
एफएसबी, हँकचे सोल्यूशन आणि ईगल-एमईएम माध्यम (स्टेट इन्स्टिट्यूट फॉर इम्यून प्रिपरेशन्स अँड न्यूट्रिएंट मीडिया, बर्लिन-वेइसेंसी, जीडीआर);
हेपरिन (5000 IU/mg) (Gedeon Richter, Hungary);
गोवाइन भ्रूणांचे सीरम (फ्लो लॅबोरेटरीज, यूएसए, दुसरी कंपनी वापरली जाऊ शकते);
Visotrast (VEB Fahlberg सूची, Magdeburg, GDR);
इन्फुकोल (VEB Serumwerk Bernburg, GDR);
डेक्सट्रान, फिकॉल (फार्मेसिया, स्वीडन);
कोलोइडल कार्बन Сl1/143a (वॅगनर, पेलिकनवेर्के, जर्मनी);
Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson and Bell, USA);
ट्रायटन एक्स 100 (सर्वा, जर्मनी, दुसरी कंपनी शक्य आहे);
ऑइल रेड ओ (अलाईड केमिकल कॉर्प., मॉरिसटाउन, एनवाय, यूएसए);
Iaranitrophenyl-β-glucuronide (सिग्मा, यूएसए);
Safranin O (फिशर सायंटिफिक लॅब., शिकागो, यूएसए);
पॉलीस्टीरिन मणी, नळ्या (नंक, डेन्मार्क);
ग्रिड F 905 (VEB Orvo Wolfen, GDR).
फॅगोसाइट्स मिळवणे
मानवी ग्रॅन्युलोसाइट्सच्या अलगावबद्दल आवश्यक माहिती "प्रतिरक्षा प्रणालीच्या पेशींचे पृथक्करण" या अध्यायात मिळू शकते; पेरीटोनियल मॅक्रोफेज मिळविण्यासाठी, "मॅक्रोफेज आणि मोनोसाइट्सची लागवड" आणि "स्प्लीओसाइट्सच्या निलंबनापासून मॅक्रोफेजचे अलगाव" विभाग पहा. या समस्येचा अनेक कामांमध्ये तपशीलवार विचार केला जातो.
याव्यतिरिक्त, खालील पद्धती देखील नमूद केल्या पाहिजेत:
डेक्स्ट्राँग्लुकोजच्या द्रावणात 8 मिली रक्त मिसळले जाते. नंतर 0.15 M NaCl (5 ml) मध्ये dextran 75 चे 6% द्रावण घाला. एरिथ्रोसाइट्सच्या अवसादनासाठी हे मिश्रण खोलीच्या तपमानावर 45-50 मिनिटे सोडले जाते. एस्पिरेट प्लाझ्मा. अवशिष्ट एरिथ्रोसाइट्स 0.83% अमोनियम क्लोराईड (35 मिली ते 15 मिली प्लाझ्मा) जोडून नष्ट केले जातात. 80g वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा, 0.15 M NaCl 0°C पर्यंत थंड झालेल्या अवक्षेपाला निलंबित करा. 800 ग्रॅम वर 10 मिनिटे अनेक अवक्षेपण आणि सेंट्रीफ्यूज एकत्र करा. पेशी बर्फावर 0.15 M NaCl मध्ये उत्तम प्रकारे ठेवल्या जातात (हे माध्यम बफर केलेल्या माध्यमापेक्षा अधिक योग्य आहे द्विसंयोजक केशन्स ज्यामुळे पेशी एकत्र चिकटतात);
जर फागोसाइटोसिसची वस्तु यीस्ट असेल तर, अमोनियम क्लोराईड उपचाराची पायरी वगळली जाऊ शकते, कारण लाल रक्तपेशी प्रक्रियेत व्यत्यय आणत नाहीत. मोनोन्यूक्लियर पेशी खालीलप्रमाणे मिळू शकतात: हेपरिनाइज्ड रक्त 15% ग्लुकोज असलेल्या गरुड माध्यमाच्या 1/3 प्रमाणात मिसळले जाते, फिकॉल - व्हिसोट्रास्टच्या मिश्रणाच्या थरावर स्तरित केले जाते आणि 400 ग्रॅमवर 20 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केले जाते. मोनोन्यूक्लियर पेशींचा अंश पाश्चर विंदुकाने एस्पिरेट केला जातो, पीबीएसने दोनदा धुतला जातो आणि ईगलच्या माध्यमात (1x10 7 पेशी/मिली) निलंबन तयार केले जाते.
फागोसाइटोसिससाठी कण तयारी
Staphylococcus aureus (SG 511 किंवा 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli आणि इतर एन्टरोबॅक्टेरिया, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae चे लाइव्ह कल्चर्स जास्त वापरले जातात. घन आणि द्रव पोषक माध्यमांवर सूक्ष्मजीव 24 तास (आवश्यक असल्यास, 48 तास) वाढतात. गोळा केलेले बायोमास 0.15 M NaCl ने तीन वेळा धुतले जाते. खूप जाड निलंबन 640 एनएम वर मोजले जाते, एकाग्रता कॅलिब्रेशन वक्र वरून निर्धारित केली जाते.
सूक्ष्मजीवांची एकाग्रता दाट पोषक माध्यमांवर चाळण्याच्या पद्धतींद्वारे देखील निर्धारित केली जाते; काही प्रकरणांमध्ये, सूक्ष्मजीवांची गणना मोजणी कक्षांमध्ये केली जाऊ शकते.
जिवंत जिवाणू संस्कृतींसोबत काम करताना, एकाच टप्प्यावर संस्कृतींचा नेहमी वापर करण्याची काळजी घेतली पाहिजे. 0.01% बोवाइन सीरम अल्ब्युमिनची जोडणी सूक्ष्मजीवांच्या अस्तित्वाला प्रोत्साहन देते. तयार केलेले निलंबन 1-2 तास स्थिर राहते.
मारले गेलेले सूक्ष्मजीव संवर्धन सामान्यतः 80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे गरम करून किंवा वाहत्या वाफेवर उपचार करून मिळवले जातात. मारले गेलेले सूक्ष्मजंतू 0.15 M NaCl सह तीन वेळा धुतले जातात, पुन्हा निलंबित केले जातात आणि निलंबनाची एकाग्रता निश्चित केली जाते.
बेकरचे यीस्ट तयार करणे: 0.5 ग्रॅम बेकरचे यीस्ट 0.15 M NaCl मध्ये निलंबित केले जाते आणि 30 मिनिटे उकळत्या पाण्याच्या बाथमध्ये ठेवले जाते. कापूस-गॉझ फिल्टरद्वारे फिल्टर करा. लाइव्ह यीस्ट वापरताना, 1.0% ग्लुकोजच्या व्यतिरिक्त ताज्या पेशी (4-5 दिवसांचे कल्चर) ईगलच्या माध्यमात तीन वेळा धुतात. सामान्यतः 10 8 आणि 10 9 पेशी/ml चे सेल सस्पेंशन वापरले जाते. घटक C5 मधील दोष शोधण्यासाठी यीस्टचा वापर चाचणी कण म्हणून केला जातो.
पॉलिस्टीरिन कणांचे निलंबन वापरणे: 1.091 μm व्यासासह पॉलीस्टीरिन कणांचे 10% जलीय निलंबन तयार करा. ते 0.15 M NaCl मध्ये 0.2% BSA सोल्यूशनसह 1 + 1 च्या प्रमाणात पातळ केले जाते, सेंट्रीफ्यूज केले जाते. 253 nm च्या तरंगलांबीवर, पॉलिस्टीरिन 1 μg/ml चे निलंबन 1.17x10 -3 चे शोषण देते.
लिपोपोलिसॅकराइडचे निलंबन वापरणे - खनिज तेलामध्ये तेल लाल O: 2 ग्रॅम तेल लाल एका पोर्सिलेन मोर्टारमध्ये 50 मिली डायसोडेसिल फॅथलेट (किंवा व्हॅसलीन तेल) मध्ये ट्रायट्यूरेटेड केले जाते. 500 ग्रॅम वर 20 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज. डायऑक्सिनच्या 10 मिलीलीटरमध्ये 10 μg सुपरनाटंट अंश जोडा, 525 एनएमच्या तरंगलांबीवर ऑप्टिकल घनता मोजा. रूपांतरण घटक 0.92 आहे. दुस-या टप्प्यावर, 40 मिलीग्राम लिपोपॉलिसॅकेराइड (ई. कोलाई 0.26 बी6, इ.) 0.15 एम NaCl च्या 3 मिलीमध्ये विरघळले जाते. नंतर या मिश्रणात डायसोडेसिल सल्फेटमधील तेलकट लाल O चे 1 मिली द्रावण जोडले जाते आणि मिश्रण 90 सेकंदांसाठी निलंबित केले जाते. निलंबन ताबडतोब वापरले जाते आणि गोठवले जाऊ शकते.
फॅगोसाइटोसिस प्रतिक्रिया सेट करण्यासाठी, औपचारिक एरिथ्रोसाइट्सचा वापर चाचणी कण म्हणून केला जाऊ शकतो.
बॅक्टेरियाचे फागोसाइटोसिस, जीवाणूनाशक
लाइव्ह बॅक्टेरिया सस्पेंशन प्रयोग: 3-10 सूक्ष्मजंतू/फॅगोसाइटचे प्रमाण सहसा वापरले जाते. एकूण 2 मिली वॉल्यूममध्ये, 1x10 6 फॅगोसाइट्स 3x10 6 - 1x10 7 सूक्ष्मजंतूंसह मिसळले जातात. प्रॅक्टिसमध्ये, 1 मिलीलीटर फागोसाइट सस्पेंशनमध्ये 1 मिली बॅक्टेरियल सस्पेंशन जोडले जाते, ज्यामध्ये हेपरिनचे 8 आययू जोडले जातात. परस्परसंवादाची वेळ सहसा 30 मिनिटे असते, काही प्रकरणांमध्ये ती जास्त असते. उष्मायनानंतर, 0.5 मिली मिश्रण घेतले जाते, हॅंकच्या द्रावणात 0.1% जिलेटिन द्रावणाचे 1.5 मिली, 0 डिग्री सेल्सिअस पर्यंत थंड केले जाते, जोडले जाते आणि 300 ग्रॅमवर 3-4 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केले जाते. पेपेनहाइमनुसार डाग असलेल्या अवक्षेपणापासून स्मीअर तयार केले जातात. 200 सेल पहा (शक्य असल्यास तीन वेळा). फॅगोसाइटोसिसची टक्केवारी मोजा. पेशींमध्ये असलेल्या जीवाणूंच्या संख्येनुसार, फागोसाइटोसिस क्रियाकलापांच्या निर्देशांकाची गणना केली जाते: फागोसाइटाइज्ड बॅक्टेरियाची संख्या फॅगोसाइटिक पेशींच्या टक्केवारीने गुणाकार केली जाते; फॅगोसाइटोसिसची तीव्रता 1 ते 4 पर्यंतच्या संख्येद्वारे व्यक्त केली जाते.
ग्रेड 1: I-4 बॅक्टेरियासह फॅगोसाइटोज्ड
ग्रेड 2: फॅगोसाइटोज्ड 5-7 जीवाणू
ग्रेड 3: फॅगोसाइटोज्ड 8-10 जीवाणू
ग्रेड 4: 10 पेक्षा जास्त जीवाणू प्रति सेल फॅगोसाइटोज्ड
जिवंत सूक्ष्मजंतूंच्या फॅगोसाइटोसिसची पातळी निर्धारित करताना, सेल सेडमेंट आणि सुपरनेटंट अंश स्वतंत्रपणे तपासले जातात. अभ्यास केलेल्या अपूर्णांकांपैकी 0.1 मिली घन पोषक माध्यमांवर चाळणी करून जिवंत सूक्ष्मजंतूंची संख्या निश्चित केली जाते. 24 (48) तास उष्मायन केले जाते जिवाणूनाशक क्रियाकलापांची गणना करताना, असे गृहीत धरले जाते की एक बनलेली वसाहत एका जिवंत सूक्ष्मजंतूशी संबंधित आहे.
जीवाणूनाशक क्रियाकलापांच्या निर्देशित अभ्यासासाठी, रुग्ण आणि निरोगी रक्तदात्यांचे रक्त प्रतिजैविक द्रावण (पेनिसिलिन आणि स्ट्रेप्टोमायसिन / एमएलचे 5000 आययू) जोडून आणि त्याशिवाय तपासले जाते आणि बॅक्टेरियाचे नियंत्रण देखील केले जाते. नमुना रचना: 0.3 मिली हँकचे द्रावण + 0.1 मिली सामान्य सीरम 5 रक्तदात्यांकडून घेतलेले रक्त + 0.5 मिली ल्यूकोसाइट सस्पेंशन (10 7 पेशी / मिली) + 0.1 मिली मायक्रोबियल सस्पेंशन (10 6 सूक्ष्मजीव/मिली). प्रति नमुन्यात प्रतिजैविकांचे द्रावण 0.02 मिली मध्ये जोडले जाते. 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात नमुने उबवा आणि 20 मिनिटे, 1.5 तास आणि 3 तासांनंतर सूक्ष्मजंतूंची संख्या निश्चित करा. हे करण्यासाठी, प्रत्येक नमुन्यातून 0.1 मिली घ्या, निवडलेल्या एलिकोट्सला हँकच्या द्रावणाने 10, 100 आणि 1000 वेळा पातळ करा आणि गरम केलेल्या आगरला लावा. काहीवेळा, विशेषत: प्रतिजैविक जोडले गेले असल्यास, सूक्ष्मजंतू अचूकपणे मोजण्यासाठी इंटरमीडिएट डायल्युशन तयार केले जातात (उदाहरणार्थ, 0.2 मिली नमुना हँकच्या 5 मिली द्रावणात मिसळला जातो, 450 ग्रॅमवर 5 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केला जातो, अवक्षेपण 1.9 मिली मध्ये विसर्जित केले जाते. PBS चे, आगर वर लागू). जर तुम्हाला बॅक्टेरियोलॉजिकल अभ्यासाचा कालावधी कमी करायचा असेल, तर तुम्ही ऍक्रिडाइन यलो स्टेनिंगचा वापर करून फ्लोरोसेन्सद्वारे सेलमधील सूक्ष्मजंतू निर्धारित करू शकता.
बेकरच्या यीस्टचे फॅगोसाइटोसिस: 0.15 M NaCl मध्ये 10 9 पेशी/मिली निलंबन तयार करा. रुग्णाच्या प्लाझ्माच्या 0.1 मिली निलंबनात 0.1 मिली मिसळा, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे उबवा, 0.2 मिली (10 6) पीएमएनएल घाला, 30 मिनिटे उष्मायन करा. अलिकोट्स 5 ते 30 मिनिटांच्या अंतराने घेतले जातात. 100 PMN मोजले जातात आणि प्रति सेल कॅप्चर केलेल्या यीस्ट कणांची संख्या निर्धारित केली जाते. खालील बदल ज्ञात आहेत: 50 µl चाचणी सीरम गिनी पिग सीरमच्या 50 µl मध्ये जोडले जाते (पूर्वी ते 1 + 1 च्या प्रमाणात ग्लुकोजसह ईगलच्या माध्यमाने पातळ केले जाते), 50-200 µl ल्युकोसाइट्सचे निलंबन ( 10 7 पेशी / एमएल) जोडले जाते, व्हॉल्यूम 450 μl पर्यंत समायोजित केले जाते आणि ग्लुकोजसह मध्यम सुईने 30 मिनिटे 37 डिग्री सेल्सियस तापमानात उबवले जाते. नंतर 50 μl यीस्ट सस्पेंशन (10 8 पेशी/मिली) घाला, मिक्स करा, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 40 मिनिटे उबवा. 50 μl L-75 Se-methionine (एकूण क्रियाकलाप 100 kBq) घाला, मिक्स करा आणि 37 °C वर 1 तास उबवा. 1000 ग्रॅम वर 5 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे पेशींचा अवक्षेप केला जातो, ते पीबीएसने दोनदा धुतले जातात, रेडिओएक्टिव्हिटी गामा काउंटरवर मोजली जाते. फॅगोसाइटोसेड यीस्टची टक्केवारी सूत्रानुसार मोजली जाते:
खनिज तेलामध्ये तेल लाल रंगाचे द्रावण वापरून फॅगोसाइटोसिस: ०.२ मिली कण सस्पेन्शन ०.८ मिली सेल सस्पेन्शन ३७ डिग्री सेल्सिअस पर्यंत गरम केले जाते. उष्मायनाच्या 5 मिनिटांनंतर, 0.15 M NaCl द्रावणाचे 6 मिली 0°C पर्यंत थंड केले जाते ज्यामध्ये 126 μg/l N-ethylmaleimide (कण पकडणे थांबवण्यासाठी) जोडले जाते. 250 ग्रॅम वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा. सुपरनेटंट अंश टाकून दिला जातो, NaCl आणि N-ethylmaleimide (वरील पहा) च्या द्रावणात अवक्षेपण पुन्हा केले जाते, पेशी दोनदा धुतल्या जातात. पेशी अल्ट्रासाऊंडसह लिस्ड केल्या जातात, तेल लाल सोडले जाते. डायऑक्सेन 1 मिली घाला. 500 ग्रॅम वर 15 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केले, शुद्ध डायऑक्सेनच्या विरूद्ध 525 एनएम तरंगलांबीवर ऑप्टिकल घनता मोजा. फॅगोसाइटोसिस (IF) ची डिग्री 10 7 पेशींद्वारे प्रति मिनिट शोषले जाणारे खनिज तेल (मिग्रॅ) म्हणून परिभाषित केले जाते. गणना करण्यासाठी आपण खालील सूत्र वापरू शकता:
मॅक्रोफेजच्या मोनोलेयरमध्ये फॅगोसाइटोसिसचा अभ्यास:
1. टप्पा: 2 मिली सेल सस्पेंशन (200,000 पेशी/मिली) निर्जंतुकीकरण पॉलीस्टीरिन ट्यूबमध्ये जोडले जातात. 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5 तास लसीकरण करा, नंतर ईगलच्या माध्यमाने धुवा. 10% निष्क्रिय (30 मिनिटे, 56 °C) गोवाइन भ्रूणांचे सीरम असलेले 2 मिली कल्चर माध्यम चाचणी ट्यूबमध्ये जोडले जाते, 37 °C तापमानावर उष्मायन केले जाते.
2. फेज A: सूक्ष्मजंतूंचे निलंबन (3-10/मॅक्रोफेज) सादर केले जाते, 37 °C तापमानात 30-60 मिनिटे उबवले जाते, नॉन-फॅगोसाइटोज्ड सूक्ष्मजंतू काढून टाकण्यासाठी माध्यमाच्या 3 मिली भागांसह नळ्या 6 वेळा धुवल्या जातात. 1 भाग ग्लेशियल ऍसिटिक ऍसिड आणि 3 भाग मिथेनॉलच्या मिश्रणाने त्वरित निराकरण करा. मे नुसार तयारी डाग - ग्रिनवाल्ड, पेशी मोजा.
फेज बी: इंट्रासेल्युलर जिवंत जीवाणूंचे निर्धारण. ऑपरेशन्सचा क्रम फिक्सेशन स्टेजच्या आधी फेज ए प्रमाणेच आहे. धुतल्यानंतर, माध्यमाचे सर्व ट्रेस काळजीपूर्वक काढून टाका. पेशी नष्ट केल्या जातात, ज्यासाठी बोवाइन सीरम अल्ब्युमिन (4°C) च्या 0.01% निर्जंतुकीकरण द्रावणात 2 मिली जोडले जाते, वारंवार हलवले जाते. 20 मिनिटांनंतर बहुतेक पेशी नष्ट होतात. सोडलेले जीवाणू दाट पोषक माध्यमांवर चाळणी करून निर्धारित केले जातात.
एरिथ्रोसाइट्सचे फॅगोसाइटोसिस: पीबीएसच्या 5 मिली मध्ये 4x10 7 फॅगोसाइट्स 5x10 7 चाचणी एरिथ्रोसाइट्ससह मिसळा. 0 डिग्री सेल्सिअस आणि सेंट्रीफ्यूजवर थंड झालेल्या 5 मिमी फॉस्फेट बफरमध्ये 2 मिली मिश्रण स्थानांतरित करा. 420 nm च्या तरंगलांबीवर सुपरनॅटंट अंशाची ऑप्टिकल घनता मोजा. कॅलिब्रेशन वक्र वापरून सेल-फ्री टप्प्यात हिमोग्लोबिन सामग्रीमध्ये घट झाल्यामुळे फॅगोसाइटोसिसची डिग्री निर्धारित केली जाते.
क्लिअरन्स निश्चित करण्यासाठी सरलीकृत पद्धत
उंदरांमध्ये क्लिअरन्स निश्चित करण्याचे उदाहरण: प्राण्यांना इंट्रापेरिटोनली इंट्रापेरिटोनली इंजेक्ट केले जाते 5x10 7 सूक्ष्मजंतू प्रति 100 ग्रॅम वजनाच्या (0.1 मिली//100 ग्रॅम). इष्टतम डोस प्रति 100 ग्रॅम वजनाच्या 10 6 ते 10 8 पर्यंत असू शकतो. 1-2 तासांच्या अंतराने, प्रायोगिक प्राण्यांच्या प्रत्येक गटातून 3 व्यक्तींची कत्तल केली जाते; प्रयोगाचा एकूण कालावधी 16 तास. निर्जंतुकपणे हृदयातून 0.5 मिली रक्त, पेरीटोनियल द्रवपदार्थ 1 मिली, फुफ्फुस, यकृत, प्लीहा आणि मूत्रपिंड स्राव करा. पाश्चर विंदुकाने अंगाच्या ऊतीमधून सिलेंडर कापले जातात. द्रव आणि घन पोषक माध्यमांवर संवर्धन करून सूक्ष्मजीवांची संख्या निश्चित करा.
उंदरांमध्ये क्लिअरन्स निश्चित करण्याचे उदाहरण: कोलाइडल चारकोल किंवा 51 [Cr] रॅम एरिथ्रोसाइट्ससह लेबल केलेले वापरले जातात. उंदरांना (प्रति अनुभव किमान 5 व्यक्ती) 0.01 मिली कोळशाच्या सस्पेंशनसह 16 मिलीग्राम प्रति 100 ग्रॅम वजनाने इंट्राव्हेनस इंजेक्शन दिले जातात. 2 मिनिटांच्या अंतराने 15 मिनिटांच्या आत, रेट्रोऑर्बिटल स्पेसमधून 0.025 मिली रक्त घेतले जाते. निवडलेले 0.025 मिली रक्त 0.1% Na 2 C0 3 च्या 2.0 मिली द्रावणात जोडले जाते. हेमोलिसिसनंतर, कॅलिब्रेशन वक्र वापरून कोळशाची एकाग्रता 675 एनएमच्या तरंगलांबीवर रंगीतपणे निर्धारित केली जाते.
t म्हणजे मिनिटातील वेळ, C हे नमुन्यातील कार्बनचे प्रमाण आहे.
फॅगोसाइटोसिसचे योग्य मूल्य:
फागोसाइट्सची कार्यात्मक तपासणी
डीग्रॅन्युलेशन निर्धारण (क्रियाकलाप मोजमाप (β-glucuropidase): 10 7 ल्यूकोसाइट्स प्लास्टिकच्या नळ्यांमध्ये 0.8 मिली पीबीएसमध्ये निलंबित केले जातात, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5 मिनिटे हलवले जातात. 0.2 मिली सेन्सिटाइज्ड एलपीएस, फ्लोरोक्रोमिक कण (एफसी 800) जोडा. बर्फावर मिनिटे, 250 ग्रॅम वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा सुपरनेटंट अंशातील एंझाइमची क्रिया तपासा 0.9 मिली सब्सट्रेट मिश्रणाचा 0.1 मिली तपासलेल्या अंशासह 18 तास उष्मायन करा 0.1 एम NaOH चे 2 मिली जोडा, ऑप्टिकल घनता मोजा तरंग 410 nm वर.
गणना:
(OD 410 x20)/(1.84x18) = 10 7 ल्युकोसाइट्सद्वारे 1 तासात सोडलेल्या पदार्थाच्या nmol ची संख्या, म्हणजेच degranulation ची डिग्री paranitrophenyl-β-glucuronide च्या nanomoles मध्ये व्यक्त केली जाते.
मायलोपेरॉक्सिडेसमधील दोषांचे निर्धारण करण्याची पद्धत: एच 2 0 2 च्या जैवरासायनिक निर्धाराने सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त होतात, जे फॅगोसाइटोसिस दरम्यान चयापचयातील बदल दर्शवितात. व्यावहारिक हेतूंसाठी, हेक्सोज-मोनोफॉस्फेट शंटचे सक्रियकरण, टेट्राझोलियम नायट्रोइन कमी करणे आणि पीएमएनएल प्रथिनांना एक्सोजेनस आयोडीनचे बंधन H 2 0 2 च्या निर्मितीशी संबंधित असणे खूप महत्वाचे आहे. अल्कोहोल आणि फॉर्मेलिनच्या मिश्रणासह 30 सेकंदांसाठी नियमित रक्त स्मीअर निश्चित केले जाते. डिस्टिल्ड पाण्याने धुऊन, पेरोक्सिडेजसाठी 30 सेकंदांसाठी डाग. पेरोक्सिडेस असलेल्या पेशींमध्ये, गडद निळ्या रंगात डागलेले समावेश शोधले जातात.
टेट्राझोलियम नायट्रो ब्लू (TNS) कमी करण्यासाठी चाचणी. THC सामान्य PMNL ने फॉर्मझानमध्ये कमी केले आहे. 0.1 मिली रक्त 0.1 मिली THC चे 0.1% द्रावण 0.15 M NaCl मध्ये मिसळा, 37 ° C वर 20 मिनिटे उष्मायन करा, पुन्हा चांगले मिसळा. पेशींमध्ये फॉर्मॅझनचा समावेश मायक्रोस्कोपीद्वारे निर्धारित केला जातो. परिणाम फॉर्मॅझन-पॉझिटिव्ह पेशींची टक्केवारी म्हणून व्यक्त केला जातो.
खालील पद्धत थोडी अधिक क्लिष्ट आहे: रुग्णाच्या रक्ताचा 1 थेंब कव्हरस्लिपवर लावला जातो. आर्द्र चेंबरमध्ये 37°C तापमानावर 20 मिनिटे उष्मायन करा, नंतर काच काळजीपूर्वक 0.15 M NaCl ने धुवा. THC माध्यमाचा 1 थेंब असलेल्या स्लाइडवर कव्हर स्लिप ठेवा (0.5 मिली सीरम + 0.3 मिली निर्जंतुकीकरण 0.15 M NaCl + 0.6 मिली THC, वर पहा). आर्द्र चेंबरमध्ये 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे उबवा, कव्हरस्लिप काढा आणि हवा कोरडी करा. 60 सेकंदांसाठी परिपूर्ण मिथेनॉलसह निराकरण करा आणि डिस्टिल्ड पाण्याने धुवा. safranin (1 ग्रॅम safranin + 100 ml डिस्टिल्ड वॉटर + 40 ml ग्लिसरीन) सह 5 मिनिटे डाग, धुवा. फॉर्मझान-पॉझिटिव्ह पेशी मोठ्या, स्फोटासारख्या असतात आणि त्यात निळे ग्रेन्युल असतात. सहसा, तयारीमध्ये सुमारे 30% फॉर्मॅझन-पॉझिटिव्ह पेशी आढळतात.
फागोसाइटोसिसचे मूल्यांकन करण्यासाठी वरील पद्धती खूप मोठ्या प्रमाणात प्रकाशनांचा सारांश आहेत. या मुद्द्यांवर अधिक तपशीलवार माहिती संबंधित कामांमध्ये आढळू शकते.
16. फागोसाइटिक प्रतिक्रिया.
फागोसाइटोसिस- विशेष फागोसाइट पेशींद्वारे सक्रिय शोषण, पचन आणि विदेशी कणांचे निष्क्रियीकरण.
फागोसाइटोसिसचे टप्पे:
केमोटॅक्सिस म्हणजे विशेष जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थ - केमोएट्रॅक्टंट्सच्या एकाग्रता ग्रेडियंटसह फागोसाइट्सची उद्देशपूर्ण हालचाल.
आसंजन - सूक्ष्मजंतूला चिकटून राहणे. Opsonins (AT, fibronectin, surfactant) सूक्ष्मजीवांना आच्छादित करतात आणि त्यांची गतिशीलता लक्षणीयरीत्या मर्यादित करतात.
एंडोसाइटोसिस (शोषण). परिणामी, आतमध्ये बंद असलेल्या फॅगोसाइटोसिसच्या वस्तूसह एक फागोसोम तयार होतो. लायसोसोम्स फागोसोमकडे धाव घेतात आणि त्याच्या परिमितीच्या बाजूने उभे राहतात.
पचन. लाइसोसोमसह फॅगोसोमचे संलयन फॅगोलिसोसोम तयार करण्यासाठी. पुढे, फॅगोसाइटोज्ड सूक्ष्मजीवांवर ऑक्सिजन-आश्रित (पेरोक्साइड, ऑक्सिजन सुपरऑक्साइड, सायटोक्रोम बी; उत्पादने तयार होतात ज्यांचा विषारी प्रभाव असतो, सूक्ष्मजीव आणि सभोवतालच्या संरचनांना नुकसान होते) आणि ऑक्सिजन-स्वतंत्र (लॅक्टोफेरिनसह ग्रॅन्युल, लायसोझीम इ.) उत्पादने तयार होतात. पेशींच्या भिंतीला हानी पोहोचवते आणि काही चयापचय प्रक्रियांमध्ये व्यत्यय आणतात) घटक.
फॅगोसाइटोसिसचा परिणाम.
पूर्ण - सूक्ष्मजीवांचा मृत्यू आणि नाश
अपूर्ण - कॅप्सूल किंवा दाट हायड्रोफोबिक सेल भिंतींनी सुसज्ज जीवाणू लाइसोसोमल एन्झाईम्सच्या कृतीसाठी प्रतिरोधक असतात; फागोसोम आणि लाइसोसोमचे संलयन अवरोधित करणे.
फागोसाइटिक पेशींचे प्रकार:
मॅक्रोफेजेस आणि डेंड्रिटिक पेशी - व्यावसायिक फागोसाइट्स आणि प्रतिजन-प्रस्तुत पेशी
मायक्रोफेजेस - पॉलीमॉर्फोन्यूक्लियर ल्युकोसाइट्स (न्यूट्रोफिल्स) - फक्त मध्यम फॅगोसाइटोसिस
रक्तातील मोनोसाइट्स सायटोटॉक्सिनच्या प्रभावाखाली ऊतकांमध्ये स्थलांतरित होतात आणि निवासी बनतात.
मॅक्रोफेज. यकृत - कुफर पेशी
फुफ्फुस - alveolar macrophages
सीएनएस - मायक्रोग्लियल पेशी
अस्थिमज्जा - ऑस्टियोक्लास्ट्स
मूत्रपिंड - मेसेन्जियल पेशी
फागोसाइटोज सूक्ष्मजीव आणि प्रक्रिया (पचन); टी पेशींना प्रतिजन उपस्थित करते.
एनके - नैसर्गिक हत्यारे - एएच वेगळे करत नाहीत, प्रतिपिंड-स्वतंत्र आहेत, केवळ पेशींच्या विरूद्ध कार्य करतात आणि केवळ सेल्युलर घटकांवर प्रतिक्रिया देतात.
फागोसाइटोसिसचे संकेतक:
फागोसाइटिक इंडेक्स (फॅगोसाइटिक क्रियाकलाप) - सूक्ष्मजीव कण असलेल्या न्यूट्रोफिल्सची टक्केवारी
फागोसाइटिक संख्या (फॅगोसाइटिक इंडेक्स) - एका फागोसाइटद्वारे शोषलेल्या सूक्ष्मजीवांची सरासरी संख्या.
17. विनोदी रोगप्रतिकारक प्रतिसाद.
ह्युमरल इम्यून रिस्पॉन्समध्ये तीन सेल प्रकार गुंतलेले असतात: मॅक्रोफेजेस (एजी-प्रेझेंटिंग सेल्स), टी-हेल्पर्स आणि बी-लिम्फोसाइट्स
एजी-प्रस्तुत पेशी phagocytose सूक्ष्मजीव आणि त्यावर प्रक्रिया, तुकड्यांमध्ये विभाजित (AG प्रक्रिया). AG चे तुकडे MHC रेणूसह AG-प्रस्तुत पेशीच्या पृष्ठभागावर उघड होतात. AG-रेणू MHC2 कॉम्प्लेक्स टी-हेल्परला सादर केले जाते. टी-हेल्परद्वारे कॉम्प्लेक्सची ओळख मॅक्रोफेजेसद्वारे IL-1 चे स्राव उत्तेजित करते.
टी-मदतनीस IL-1 च्या प्रभावाखाली, ते IL-2 आणि IL-2 साठी रिसेप्टर्सचे संश्लेषण करते, नंतरचे, ऑटोक्राइन यंत्रणेद्वारे, टी-मदतनीस तसेच CTL च्या प्रसारास उत्तेजन देते. अशा प्रकारे, एजी-प्रस्तुत सेलशी संवाद साधल्यानंतर, टी-हेल्पर जलद पुनरुत्पादनाद्वारे IL-2 च्या क्रियेला प्रतिसाद देण्याची क्षमता प्राप्त करतो. या घटनेचा जैविक अर्थ म्हणजे टी-हेल्पर्सचे संचय, जे या एजीला ऍन्टीबॉडीज तयार करणार्या प्लाझ्मा पेशींच्या आवश्यक पूलच्या लिम्फॉइड अवयवांमध्ये निर्मिती सुनिश्चित करतात.
बी-लिम्फोसाइट. त्याच्या सक्रियतेमध्ये B सेलच्या पृष्ठभागावरील Ig रेणूसह AG चा थेट संवाद समाविष्ट असतो. या प्रकरणात, बी-लिम्फोसाइट स्वतः एजीवर प्रक्रिया करते आणि त्याच्या पृष्ठभागावरील MHC2 रेणूच्या संबंधात त्याचा तुकडा सादर करते. हे कॉम्प्लेक्स समान प्रतिजन वापरून निवडलेल्या टी-हेल्परला ओळखते. बी-लिम्फोसाइटच्या पृष्ठभागावरील एजी-एमएचसी2 कॉम्प्लेक्सच्या टी-हेल्पर रिसेप्टरद्वारे ओळखल्याने टी-हेल्परद्वारे IL-2, IL-4, IL-5 आणि IFN-गामाचा स्राव होतो. ज्यापैकी बी-सेल गुणाकार करतो, प्लाझ्मा पेशींचा क्लोन बनवतो. प्लाझ्मा पेशी प्रतिपिंडांचे संश्लेषण करतात. एटी स्राव सक्रिय टी-हेल्परद्वारे स्रावित IL-6 द्वारे उत्तेजित केला जातो. प्रतिजन-स्वतंत्र भिन्नता नंतर काही परिपक्व बी-लिम्फोसाइट्स स्मृती पेशींच्या रूपात शरीरात फिरतात.
5 वर्ग: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM; IgD, IgE, IgG रेणू मोनोमर्सद्वारे, IgM पेंटॅमर्सद्वारे प्रस्तुत केले जातात, रक्ताच्या सीरममधील IgA रेणू एक मोनोमर आहे आणि उत्सर्जित द्रवांमध्ये (लाळ, अश्रु द्रव) ते एक डायमर आहे
IgG:गर्भाच्या शरीरात प्लेसेंटाद्वारे प्रवेश करते, गर्भामध्ये निष्क्रिय प्रतिकारशक्ती निर्माण होते हे सुनिश्चित करण्यासाठी, मुलाच्या जन्मानंतर, रक्ताच्या सीरममध्ये त्याची सामग्री कमी होते आणि 3-4 महिन्यांनी कमीतकमी एकाग्रतेपर्यंत पोहोचते, त्यानंतर ते वाढू लागते. त्याच्या स्वत: च्या IgG जमा झाल्यामुळे, 7 वर्षांनी सर्वसामान्य प्रमाण गाठले. विशिष्ट रोगजनकांच्या IgG ते Ag पर्यंत उच्च टायटर्स शोधणे हे सूचित करते की शरीर बरे होण्याच्या टप्प्यावर आहे किंवा विशिष्ट रोग अलीकडे हस्तांतरित झाला आहे.
IgM:इंट्रायूटरिन इन्फेक्शन झालेल्या नवजात मुलांमध्ये त्याची सामग्री लक्षणीयरीत्या वाढली आहे. विशिष्ट रोगजनकांच्या Ag मध्ये IgM ची उपस्थिती तीव्र संसर्गजन्य प्रक्रिया दर्शवते.
IgA:रक्ताच्या सीरममध्ये फिरते, आणि एपिथेलियमच्या पृष्ठभागावर देखील स्रावित होते., लाळ, अश्रु द्रव, दुधामध्ये असते. IgA रेणू रोगजनकांच्या तटस्थीकरण आणि एकत्रीकरणाच्या प्रतिक्रियांमध्ये गुंतलेले असतात. 2 किंवा 3 IgA मोनोमर्सशी संबंधित सेक्रेटरी घटकाच्या उपस्थितीमुळे IgA वर्ग (SIgA) चे सेक्रेटरी इम्युनोग्लोबुलिन सीरमपेक्षा वेगळे असतात.
IgD:विकसनशील बी-लिम्फोसाइट्सच्या पृष्ठभागावर आढळते, त्याची सामग्री जास्तीत जास्त 10 वर्षांपर्यंत पोहोचते, गर्भधारणेदरम्यान, श्वासनलिकांसंबंधी दमा, सिस्टेमिक ल्युपस एरिथेमॅटोसस आणि इम्युनोडेफिशियन्सी असलेल्या लोकांमध्ये टायटर्समध्ये थोडीशी वाढ दिसून येते.
IgE:गॅस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रॅक्टच्या श्लेष्मल त्वचामध्ये ब्रोन्कियल आणि पेरिटोनियल लिम्फ नोड्समधील प्लाझ्मा पेशींद्वारे संश्लेषित केले जाते. IgE ला रीजिन्स देखील म्हणतात, कारण ते अॅनाफिलेक्टिक प्रतिक्रियांमध्ये भाग घेतात, त्यांची उच्चारित साइटोफिलिसिटी असते.
इंट्रायूटरिन विकासाच्या 10 व्या आठवड्यापासून, IgM चे संश्लेषण सुरू होते, 12 व्या पासून - IgG, 30 व्या - IgA पासून, परंतु त्यांची एकाग्रता कमी आहे.
संसर्गादरम्यान अँटीबॉडीजचे संरक्षणात्मक कार्य:
Ab द्वारे एजी-बाइंडिंग केंद्र विविध एजीशी संवाद साधतात. अशाप्रकारे, एबीएस सर्व विशिष्ट संरक्षण प्रणाली सक्रिय करताना संक्रमणास प्रतिबंध करते किंवा रोगजनक काढून टाकते किंवा पॅथॉलॉजिकल प्रतिक्रियांच्या विकासास अवरोधित करते.
ऑप्सोनायझेशन (इम्यून फॅगोसाइटोसिस)- Abs (फॅब तुकड्यांद्वारे) शरीराच्या सेल भिंतीला बांधतात; Ab चा Fc तुकडा संबंधित फागोसाइट रिसेप्टरशी संवाद साधतो, जो फॅगोसाइटद्वारे तयार केलेल्या कॉम्प्लेक्सचे त्यानंतरच्या प्रभावी शोषणात मध्यस्थी करतो.
अँटीटॉक्सिक प्रभाव Abs बंधनकारक आणि अशा प्रकारे जीवाणू विष निष्क्रिय करू शकतात.
प्रशंसा सक्रियकरणएबी (आयजीएम, आयजीजी) एजी (सूक्ष्मजीव, ट्यूमर सेल) ला बांधल्यानंतर कॉम्प्लिमेंट सिस्टम सक्रिय करते, ज्यामुळे या पेशीच्या भिंतीला छिद्र पडून त्याचा नाश होतो, केमोटॅक्सिस, केमोकिनेसिस आणि रोगप्रतिकारक फॅगोसाइटोसिस वाढते.
तटस्थीकरण- जिवाणू किंवा विषाणूंना बांधणाऱ्या सेल रिसेप्टर्सशी संवाद साधून, ऍब यजमान जीवांच्या पेशींमध्ये सूक्ष्मजीवांना चिकटून जाणे आणि त्यांच्या प्रवेशास प्रतिबंध करू शकतो.
रोगप्रतिकारक संकुलांचे अभिसरण Abs विरघळणारे एजी बांधतात आणि रक्ताभिसरण संकुल तयार करतात, ज्याच्या मदतीने एजी शरीरातून, मुख्यत: मूत्र आणि पित्तसह बाहेर टाकले जाते.
प्रतिपिंड अवलंबून सायटोटॉक्सिसिटी- Ag opsonizing करून, Ab साइटोटॉक्सिक पेशींद्वारे त्यांचा नाश उत्तेजित करते. लक्ष्य ओळख प्रदान करणारे उपकरण हे Ab च्या Fc तुकड्यांसाठी रिसेप्टर्स आहे. मॅक्रोफेजेस आणि ग्रॅन्युलोसाइट्स ऑप्टोनाइज्ड लक्ष्य नष्ट करण्यास सक्षम आहेत.
अँटीबॉडीजचे गुणधर्म:
विशिष्टता- प्रतिपिंडांवर प्रतिजैविक निर्धारक आणि प्रतिपिंडावरील प्रतिजैविक रिसेप्टर्स (अँटीडेमिनंट्स) च्या उपस्थितीमुळे केवळ विशिष्ट प्रतिजनासह प्रतिपिंडांची प्रतिक्रिया करण्याची क्षमता.
व्हॅलेन्स- प्रतिपिंडावरील प्रतिनिर्धारकांची संख्या (सामान्यत: द्विसंधी);
आत्मीयता, आत्मीयतानिर्धारक आणि प्रतिनिर्धारक यांच्यातील कनेक्शनची ताकद आहे;
उत्सुकताप्रतिपिंड-प्रतिजन बाँडची ताकद आहे. व्हॅलेन्समुळे, एक प्रतिपिंड अनेक प्रतिजनांशी बांधील असतो;
विषमता- विषमता, तीन प्रकारच्या प्रतिजैविक निर्धारकांच्या उपस्थितीमुळे:
आयसोटाइपिक- इम्युनोग्लोबुलिनचे विशिष्ट वर्ग (IgA, IgG, IgM, इ.) च्या मालकीचे वैशिष्ट्य दर्शवा;
अॅलोटाइपिक- (इंट्रास्पेसिफिक स्पेसिफिकिटी) इम्युनोग्लोब्युलिनच्या ऍलेलिक प्रकारांशी संबंधित आहे (विषमजीवी प्राण्यांमध्ये भिन्न इम्युनोग्लोबुलिन असतात);
इडिओटिपिकल- इम्युनोग्लोबुलिनची वैयक्तिक वैशिष्ट्ये प्रतिबिंबित करतात (स्वयंप्रतिकारक प्रतिक्रिया होऊ शकतात).
वय वैशिष्ट्ये:
जन्मानंतरच्या काळात, मुलांच्या रक्तातील वेगवेगळ्या वर्गांच्या इम्युनोग्लोबुलिनच्या सामग्रीमध्ये एक अतिशय लक्षणीय गतिशीलता आहे. हे या वस्तुस्थितीमुळे आहे की आयुष्याच्या पहिल्या महिन्यांत, आईकडून ट्रान्सप्लेसेंटली हस्तांतरित केलेल्या वर्ग बी इम्युनोग्लोबुलिनचे विघटन आणि काढून टाकणे चालूच आहे.
पहिल्या 4-6 महिन्यांत, मातृ इम्युनोग्लोबुलिन पूर्णपणे नष्ट होतात आणि त्यांच्या स्वतःच्या इम्युनोग्लोबुलिनचे संश्लेषण सुरू होते.