Чинний

МЗК 4.2.2939-11

МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ

4.2. МЕТОДИ КОНТРОЛЮ. БІОЛОГІЧНІ ТА МІКРОБІОЛОГІЧНІ ФАКТОРИ

Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для лабораторій територіального, регіонального та федерального рівнів

Дата введення: з моменту затвердження

1. Розроблені Федеральним казенним закладом охорони здоров'я "Російський науково-дослідний протичумний інститут "Мікроб" Росспоживнагляду (В.В.Кутирьов, І.М.Шарова, Н.А.Осіна, Є.С.Казакова, Є.А.Плотнікова, С .А.Піонтковський, Т.Ю.Красовська, Д.В.Уткін, С.А.Щербакова);Федеральним казенним установою охорони здоров'я "Іркутський науково-дослідний протичумний інститут" Росспоживнагляду (С.В.Балахонов, Т.І.Іннокентьєва, М.В.Чеснокова, А.В.Мазепа, С.А.Татарников);Федеральним казенним закладом охорони здоров'я "Ставропольський науково-дослідний протичумний інститут" Росспоживнагляду (А.Н.Куліченко, О.В.Малецька, Т.В.Таран , А.П.Бейєр, А.В.Таран);Федеральним казенним закладом охорони здоров'я "Волгоградський науково-дослідний протичумний інститут" Росспоживнагляду (В.В.Алексєєв, А.В.Ліпницький, В.А.Антонов, Д.В. Вікторов);Федеральним казенним закладом охорони здоров'я "Ростовський-на-Дону науково-дослідний протичумний інститут" Росспоживнагляду (Н.В.Павлович, Н.Л.Пічуріна, Н.В.Аронова, Н.Н.Онопрієнко, М.В.Цимбалістова, А.С.Водоп'янов); Федеральним казенним закладом охорони здоров'я "Протичумний центр" Росспоживнагляду (В.Є.Безсмертний, С.М.Іванова); Федеральною бюджетною установою охорони здоров'я "Федеральний центр гігієни та епідеміології" Росспоживнагляду (В.Г.Сеннікова, М.В.Зароченцев, В.В.Мордвінова); Федеральною державною установою науки "Державний науковий центр прикладної мікробіології та біотехнології" Росспоживнагляду (І.А.Дятлов, А.Н.Мокрієвич, С.Ф.Бікетов, М.В.Храмов, Н.І.Лунєва); Федеральною державною бюджетною установою "ДІБК ім. Л.А.Тарасевича" МОЗсоцрозвитку (І.В.Борисевич, Л.В.Саяпіна).

3. Затверджено Керівником Федеральної служби з нагляду у сфері захисту прав споживачів та благополуччя людини, Головним державним санітарним лікарем Російської Федерації Г.Г.Оніщенком 14 липня 2011 р.

1. Область застосування

1. Область застосування

1.1. Дані методичні вказівки визначають порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для лабораторій територіального, регіонального та федерального рівнів, форми та методи їх взаємодії, номенклатуру та обсяг дослідження, вимоги до лабораторій, спеціалістів та персоналу, що беруть участь у виконанні досліджень, матеріально-технічному забезпеченню досліджень, до біологічної безпеки проведення робіт

1.2. Ці методичні вказівки призначені для фахівців бактеріологічних лабораторій установ, що здійснюють державний санітарно-епідеміологічний нагляд за туляремією в Російській Федерації, лікувально-профілактичних та протичумних установ.

2. Нормативні посилання

2.1. Федеральний закон від 3 *.03.1999 N 52-ФЗ "Про санітарно-епідеміологічний благополуччя населення".
______________
Федеральний закон від 30.03.1999 N 52-ФЗ "Про санітарно-епідеміологічний благополуччя населення". - Примітка виробника бази даних.

2.2. Постанова Уряду Російської Федерації від 29.10.2007 N 720* "Про внесення змін до пункту 5 Положення про ліцензування діяльності, пов'язаної з використанням збудників інфекційних захворювань", затвердженого постановою Уряду Російської Федерації від 22.01.2007 N 31*.
________________
* Документ втратив чинність на підставі постанови Уряду Російської Федерації від 16 квітня 2012 року N 317

2.3. Постанова Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 24.02.2009 N 11 "Про подання позачергових донесень про надзвичайні ситуації в галузі суспільної охорони здоров'я санітарно-епідеміологічного характеру" (зареєстровано в Мін'юсті Російської Федерації 10.04.2009 N 137

2.4. Наказ Міністерства охорони здоров'я та соціального розвитку Російської Федерації від 7.07.2009 N 415н "Про затвердження кваліфікаційних вимог до фахівців з вищою та післявузівською медичною та фармацевтичною освітою у сфері охорони здоров'я" (зареєстрований у Мін'юсті Російської Федерації 09.07.2009 N 14

2.6. СП 1.2.036-95 "Порядок обліку, зберігання, передачі та транспортування мікроорганізмів I-IV груп патогенності" (утв. постановою Держкомсанепіднагляду Російської Федерації від 28.08.1995 N 14).

2.7. СП 3.1.7.2642-10 "Профілактика туляремії" (утв. Постановою Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 31.05.2010 N 61 "Про затвердження СП 3.1.7.2642-10". Зареєстровано в Мін'юсті РФ 75).

2.8. СП 1.3.1285-03 "Безпека роботи з мікроорганізмами I-II груп патогенності (небезпеки)" (утв. постановою Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 15.04.2003 N 42 "Про введення в дію санітарно-епідеміологічних правил СП8-3. 03 ". Зареєстровано в Мін'юсті Російської Федерації від 10.05.2003 N 4545).

2.9. СП 1.3.1318-03* "Порядок видачі санітарно-епідеміологічного висновку про можливість проведення робіт із збудниками інфекційних захворювань людини І-ІV груп патогенності (небезпеки), генно-інженерно-модифікованими мікроорганізмами, отрутами біологічного походження та гельмінтами" (утв. державного санітарного лікаря Російської Федерації від 30.04.2003 N 85 "Про введення в дію санітарно-епідеміологічних правил СП 1.2.1318-03". Зареєстровано у Мін'юсті Російської Федерації 19.05.2003 N 4558).
______________
* Ймовірно помилка оригіналу. Слід читати: СП 1.2.1318-03. - Примітка виробника бази даних.

2.12. СП 3.4.2318-08 "Санітарна охорона території Російської Федерації" (утв. постановою Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 22.01.2008 N 3 "Про затвердження санітарно-епідеміологічних правил СП 3.4.2318-08".) Зареєстровано .2008 N 11459).

2.13. СанПіН 2.1.7.2790-10 "Санітарно-епідеміологічні вимоги до поводження з медичними відходами" (утв. Постановою Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 9.12.2010 N 163. Зареєстровано в Мін'юсті Російської Федерації 17.12.2)

2.14. СанПіН 2.1.3.2630-10 "Санітарно-епідеміологічні вимоги до організацій, які здійснюють медичну діяльність" (утв. Постановою Головного державного санітарного лікаря Російської Федерації від 18.05.2010 N 58. Зареєстровано в Мін'юсті Російської Федерації 9.08.201.8)

2.15. Санітарні правила щодо влаштування, обладнання та змісту експериментально-біологічних клінік (віваріїв) (утв. головним державним санітарним лікарем СРСР від 6.04.73 N 1045-73).

2.16. МУ 3.1.2007-05 "Епідеміологічний нагляд за туляремією".

2.17. МУ 3.3.2.2124-06 "Контроль діагностичних поживних середовищ за біологічними показниками для збудників чуми, холери, сибірки, туляремії".

2.18. МУК 4.2.2316-08 "Методи контролю бактеріологічних поживних середовищ".

2.19. МУ 1.3.2569-09 "Організація роботи лабораторій, які використовують методи ампліфікації нуклеїнових кислот під час роботи з матеріалом, що містить мікроорганізми І-ІV груп патогенності".

2.20. МУ 4.2.2495-09 "Визначення чутливості збудників небезпечних бактеріальних інфекцій (чуми, сибірки, холери, туляремії, бруцельозу, сапа та меліоїдозу) до антибактеріальних препаратів".

3. Перелік скорочень

ЛПС - ліпополісахарид

ЛПУ – лікувально-профілактичний заклад

ТзОВ - особливо небезпечні інфекції

СП – санітарно-епідеміологічні правила

СанПіН - санітарно-епідеміологічні правила та нормативи

МУ – методичні вказівки

ПБА – патогенний біологічний агент

МФА - метод флуоресціюючих антитіл

ІФА – імуноферментний аналіз

ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція

РА – реакція аглютинації

РНГА – реакція непрямої гемаглютинації

РТНГА - реакції гальмування непрямої гемаглютинації

РНАт – реакція нейтралізації антитіл

МІС - магноімуносорбенти

РЛА – реакція латекс-аглютинації

ЇХ - імунохроматографія

ІХ-тест - імунохроматографічний тест

4. Загальні положення

Характеристика хвороби та збудника туляремії

Туляремія - зоонозна системна природно-осередкова бактеріальна інфекційна хвороба, що характеризується симптомами загальної інтоксикації, лихоманкою, запальними змінами в області воріт інфекції, регіонарним лімфаденітом, схильністю до затяжної течії.

Основними резервуарами та джерелами збудника туляремії в природних умовах є дикі тварини (близько 50 видів), головним чином різні види гризунів та зайці. На території природних вогнищ туляремії можуть заражатися вівці, свині, велика рогата худоба. Резервуаром і переносниками збудника є також кровосисні членистоногі: іксодові та гамазові кліщі, комарі, ґедзі, блохи. Хвора людина на епідеміологічну небезпеку не становить.

Як і для всіх зоонозів, для туляремії характерна множинність механізмів (аспіраційний, контактний, фекально-оральний, трансмісивний), а також шляхів та факторів передачі. Відповідно до Міжнародної статистичної класифікації хвороб та проблем, пов'язаних зі здоров'ям (Десятий перегляд. Женева, 2003, (МКБ-10), та по локалізації основного патологічного процесу розрізняють такі форми туляремії:

А21.0 - ульцерогландулярну (виразково-бубонну);

А21.1 - окулогландулярну (око-бубонну);

А21.2 - легеневу;

А21.3 – шлунково-кишкову (абдомінальну);

А21.7 – генералізовану;

А21.8 - інші форми туляремії (ангінозно-бубонну);

5.1.1. Вимоги до лабораторій лікувально-профілактичних установ, які здійснюють дослідження на туляремію

Лікувально-профілактичні установи, лабораторії яких здійснюють діагностичні дослідження на туляремію, повинні мати ліцензію на провадження діяльності, пов'язаної з використанням збудників ІІІ-ІV груп патогенності (небезпеки).

Лабораторії ЛПУ повинні мати санітарно-епідеміологічний висновок про можливість проведення робіт з мікроорганізмами ІІІ-ІV груп патогенності (небезпеки) ), генно-інженерно-модифікованими мікроорганізмами, отрутами біологічного походження та гельмінтами.

Облік, зберігання, передача та транспортування виділених культур холерних вібріонів (підозрілих) повинні здійснюватися відповідно до чинних нормативних документів про порядок обліку, зберігання, передачі та транспортування мікроорганізмів І-ІV груп патогенності.



Проведення досліджень на всіх етапах – відбір проб, їх зберігання, доставка до лабораторії, реєстрація, порядок дослідження, видача результатів, взаємодія з установами Росспоживнагляду – має відповідати вимогам чинних нормативних та розпорядчих документів.



Дослідження на туляремію можуть виконувати фахівці не молодше 18 років з вищою та середньою медичною, біологічною освітою, які закінчили курси підготовки за спеціальністю "Бактеріологія" з освоєнням методів безпечної роботи зі збудниками інфекційних хвороб III-IV груп патогенності (небезпеки), що мають допуск до роботи з ПБА III-IV груп патогенності виходячи з наказу керівника установи. Фахівці, які проводять діагностичні дослідження на туляремію, повинні мати необхідні професійні навички відповідно до номенклатури проведених досліджень (додаток 8).

Фахівці, які здійснюють діяльність, пов'язану з використанням збудників інфекційних хвороб, повинні підвищувати кваліфікацію не рідше одного разу на п'ять років та мати сертифікат спеціаліста.









Контроль якості діагностичних досліджень на туляремію в лабораторіях ЛПЗ включає:












Правила ведення документації





Для забору матеріалу та проведення діагностичних досліджень на туляремію у бактеріологічних лабораторіях ЛПЗ мають бути:





Персонал повинен бути забезпечений спецодягом та засобами індивідуального захисту (для відбору проб клінічного матеріалу та проведення імуносерологічних реакцій).

5.1.2. Номенклатура та обсяг досліджень

У ЛПЗ проводять відбір клінічного матеріалу від осіб з підозрою на туляремію, хворих на різні форми туляремії та вакцинованих, а також секційного матеріалу від померлих осіб.

У бактеріологічних лабораторіях ЛПЗ проводять дослідження сироваток крові від хворих на туляремію та вакцинованих проти туляремії осіб імуносерологічними та алергологічними методами:

1) виявлення антитіл у парних сироватках;

2) проведення реакції лізису лейкоцитів.

Лікар-інфекціоніст ЛПЗ здійснює оцінку алергологічного статусу хворих шляхом постановки алергічної проби з тулярином.

5.1.3. Порядок лабораторної діагностики туляремії у лабораторіях лікувально-профілактичних установ

Відбір та транспортування проб клінічного матеріалу

Матеріал від хворих забирає медичний персонал ЛПЗ при надходженні хворого до початку лікування антибактеріальними препаратами. Забір проб здійснюють два медичні працівники, один з яких лікар-інфекціоніст або терапевт (хірург), підготовлений з питань діагностики особливо небезпечних інфекцій та дотримання вимог біологічної безпеки при роботі з клінічним матеріалом, підозрілим на вміст збудників інфекційних хвороб І-ІІ груп патогенності. Матеріал від вакцинованих осіб забирає медичний персонал ЛПЗ

Секційний матеріал забирають медичні працівники патолого-анатомічних відділень (або ЛШМЕ) у присутності спеціаліста з особливо небезпечних інфекцій, керуючись діючими методичними вказівками щодо організації та проведення первинних протиепідемічних заходів у випадках виявлення хворого (трупа), підозрілого на захворювання на інфекційні хвороби, що викликають області санітарно-епідеміологічного благополуччя населення, з дотриманням регламентованих вимог біологічної безпеки під час роботи з патогенними біологічними агентами І-ІІ груп.

Для направлення до бактеріологічних лабораторій установ Росспоживнагляду забирають:

від хворих людей залежно від клінічної форми хвороби: вміст бубона, матеріал із зіва, з кон'юнктиви ока, виразки, що відокремлюється, мокротиння, кров;

від померлих людей: збільшені лімфатичні вузли, змінені ділянки легень та селезінки, трахеї;

від вакцинованих людей кров.

Забір проб усіх видів матеріалу здійснюють у стерильну скляну або пластикову посуд, відповідну обсягу проб.

Пунктат із бубонаберуть до 14-20 діб хвороби шприцом ємністю щонайменше 5 мл. Шкіру на ділянці, наміченій для проколу, обробляють 70% спиртом, а потім змащують 5% розчином йоду і знову протирають 70% спиртом. Голку вводять з таким розрахунком, щоб її вістря досягло центральної частини бубона, після чого, відтягнувши вщент поршень, повільно виймають голку. Вміст переносять у стерильну пробірку з пробкою, що загвинчується. Можна перед взяттям матеріалу ввести в бубон 0,3-0,5 мл стерильного 0,9% розчину натрію хлориду і потім відібрати вміст. При бубоні, що розкрився, забирають матеріал окремо з периферичної щільної частини і відокремлюване нориці.

Перед взяттям відокремлюваного виразки, папули, везикули або відкинутого струпапередін'єкційною серветкою, що дезінфікує, обережно очищають шкіру навколо ураженого місця, при необхідності стерильною марлевою серветкою видаляють некротичні маси, гній. Прокочуючи тампон по рановій поверхні від центру до периферії протягом 5-10 абсорбують матеріал на тампон. Тампон з матеріалом поміщають у пробірку чи транспортне середовище. При використанні шприца голку вводять біля краю везикули (пустули) і потім просувають до середини. У виразок пунктують щільний край.

Мокротузбирають у спеціальні широкогорлі контейнери з кришкою, що загвинчується.

Відокремлюване слизової зівазабирають натще або через 3-4 години після їжі. Акуратно притискаючи язик шпателем, вводять тампон між дужками мигдаликів і язичком (не можна торкатися тампоном губ, щік, язика) і збирають матеріал із задньої поверхні глотки, мигдаликів і ділянок запалення або виразки слизової оболонки. Тампон з матеріалом поміщають у стерильну пробірку або пробірку з транспортним або живильним середовищем.

Кровдля досліджень беруть із дотриманням правил асептики та заходів індивідуального захисту. Кров забирають з ліктьової вени в кількості 10-20 мл одноразовим шприцом і переносять у пробірку для посіву на живильні середовища та зараження біопробних тварин, в пробірку з антикоагулянтом (4% розчин цитрату натрію відносно 1:10 до об'єму крові або 6% -й розчин ЕДТА щодо 1:20 до об'єму крові) для ПЛР-аналізу, пробірку для отримання сироватки для імуносерологічних реакцій.

Для постановки кров'яно-крапельної реакції аглютинації та реакції лейкоцитолізу кров беруть із пальця.

Відокремлюване кон'юнктиви окаслід забирати до 17 діб хвороби за допомогою стерильного тампона, попередньо зволоженого 0,9% розчином натрію хлориду. Проби з кожного ока збирають окремими тампонами двома-трьома круговими рухами по слизовій оболонці ока. Тампон з матеріалом поміщають у стерильну пробірку чи транспортне середовище. За наявності рясного гнійного відокремлюваного стерильним сухим ватним тампоном беруть гній із внутрішньої поверхні нижньої повіки рухом до внутрішнього кута очної щілини. Необхідно стежити, щоб вії не торкалися тампона (притримувати повіку рукою). Доставка матеріалу в лабораторію протягом 1 години, якщо використовуються спеціальні транспортні середовища - протягом доби.

Ємності з пробами маркують, обробляють зовні дезінфікуючим розчином, упаковують у поліетиленовий пакет із застібкою-блискавкою та поміщають у контейнер для транспортування біологічного матеріалу на дослідження. Контейнер з упакованим матеріалом опечатують та відправляють до лабораторії з нарочним спеціально виділеним транспортом. Поверхня столу після пакування проб обробляють дезінфікуючим розчином.

На проби, що доставляються в лабораторію, заповнюють напрямок (приклад.1), в якому вказують: адресу установи, в яку направляється проба (проби); прізвище, ім'я, по батькові хворого (померлого); стать, вік, місце проживання, дату захворювання, дату звернення по медичну допомогу, дату госпіталізації, попередній діагноз; особливості епідеміологічного анамнезу; чи проводилася хворому до взяття матеріалу антибактеріальна терапія (коли, які використовувалися препарати, у якій дозі); вид матеріалу, взятого для бактеріологічного дослідження; мета дослідження; дату та годину забору матеріалу; адресу, за якою слід повідомити результати бактеріологічного дослідження; найменування установи, посада, прізвище та ініціали особи, яка направляє пробу (проби), підпис; час доставки проби; посаду, прізвище та ініціали, що прийняв проби.

Матеріал транспортують до лабораторії у сумці-холодильнику. У разі відсутності умов зберігання матеріалу на холоді час від моменту взяття матеріалу до початку дослідження не повинно перевищувати 5-6 год.



Постановку та облік імуносерологічних реакцій проводять у бактеріологічній лабораторії ЛПЗ відповідно до інструкцій щодо застосування діагностичних препаратів. У динаміці захворювання досліджують парні сироватки з інтервалом 7-10 днів. Діагностично достовірним є 4-кратне та більше збільшення титру антитіл.

Гіперчутливість у хворих та вакцинованих осіб визначають in vitro

Постановку та облік результатів алергічної проби з тулярином (алерген рідкий туляремійний, суспензія для нашкірного скарифікаційного нанесення) у осіб, заражених або підозрілих на зараженість туляремією, здійснює лікар-інфекціоніст ЛПЗ відповідно до інструкції щодо застосування препарату.

Слід пам'ятати, що алергічна проба залишається позитивною у осіб, які перехворіли на туляремію.

5.1.4. Оформлення результатів дослідження

Реєстрацію результатів серологічного та алергічного дослідження сироваток на туляремію у бактеріологічних лабораторіях ЛПЗ здійснюють відповідно до облікових форм, встановлених в установі. Видача відповідей для історій хвороб – за уніфікованими формами.

5.1.5. Порядок взаємодії лікувально-профілактичних установ з організаціями Росспоживнагляду

5.2. Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті (місті та адміністративних районах суб'єкта, об'єднаних за територіальною ознакою) у суб'єкті Російської Федерації

5.2.1. Вимоги до лабораторій філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації, що здійснює дослідження на туляремію

Наявність дозвільних та регламентуючих роботу документів

ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації, на базі філій якого функціонують бактеріологічні лабораторії, повинен мати ліцензію на провадження діяльності, пов'язаної з використанням збудників II-IV (або III-IV) груп патогенності (небезпеки).

Лабораторії філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації, які виконують дослідження на туляремію, повинні мати санітарно-епідеміологічний висновок про можливість проведення робіт з мікроорганізмами III-IV груп патогенності (небезпеки) відповідно до діючих СП про порядок видачі санітарно-епідеміологічного висновку про можливість проведення робіт із збудниками інфекційних хвороб людини І-ІV груп патогенності (небезпеки), генно-інженерно-модифікованими мікроорганізмами, отрутами біологічного походження та гельмінтами.

Лабораторії філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації повинні бути акредитовані на технічну компетентність у встановленому порядку відповідно до чинної законодавчої бази Російської Федерації.

Облік, зберігання, передача та транспортування проб клінічного матеріалу повинні здійснюватися відповідно до діючих СП про порядок обліку, зберігання, передачі та транспортування мікроорганізмів І-ІV груп патогенності.

Утилізація відходів повинна здійснюватись відповідно до чинних санітарно-епідеміологічних вимог до поводження з медичними відходами.



Вимоги до фахівців та персоналу, які беруть участь у виконанні досліджень на туляремію

Дослідження на туляремію можуть виконувати фахівці не молодше 18 років з вищою та середньою медичною, біологічною освітою, які закінчили курси підготовки за спеціальністю "Бактеріологія" з освоєнням методів безпечної роботи зі збудниками інфекційних хвороб III-IV груп патогенності (небезпеки), що мають допуск до роботи з ПБА III-IV груп виходячи з наказу керівника установи. Фахівці, які проводять діагностичні дослідження на туляремію, повинні мати необхідні професійні навички відповідно до номенклатури проведених досліджень (додаток 8).

Фахівці, які здійснюють діяльність, пов'язану з використанням збудників інфекційних хвороб, повинні мати сертифікат спеціаліста та підвищувати кваліфікацію не рідше ніж один раз на п'ять років.

Вимоги щодо забезпечення безпеки роботи персоналу

Кожна лабораторія, яка виконує дослідження на туляремію, повинна мати пакет документів, що визначають режим безпечної роботи працівників з урахуванням характеру робіт, особливостей технології, властивостей мікроорганізмів. Документи мають бути погоджені з комісією з контролю за дотриманням вимог біологічної безпеки, спеціалістами з охорони праці, протипожежними заходами та затверджені керівником установи. Результати перевірок знань правил техніки безпеки персоналу під час проведення робіт фіксуються у спеціальному журналі.

Усі працівники повинні виконувати вимоги щодо забезпечення безпеки роботи з матеріалом, підозрілим або зараженим збудниками інфекційних хвороб ІІІ-ІV груп патогенності (небезпеки), відповідно до чинних нормативних документів.

Співробітники установи, які залучаються до епізоотологічного обстеження ензоотичної території, мають бути вакциновані проти туляремії з подальшим контролем рівня імунітету та реєстрацією результатів у спеціальному журналі.

Порядок організації внутрішнього контролю за якістю лабораторних досліджень

Контроль якості діагностичних досліджень на туляремію у лабораторіях включає:

контроль якості діагностичних препаратів та тест-систем, дистильованої води, хімічних реактивів та дезінфікуючих засобів;

своєчасне перевірення засобів вимірювань, атестацію випробувального обладнання;

контроль якості стерилізації лабораторного посуду;

контроль роботи парових та сухоповітряних стерилізаторів;

контроль роботи бактерицидних ламп;

контроль температурного режиму холодильників;

контроль температурного режиму термостатів;

перевірку стану повітря виробничих приміщень та боксів, температурного режиму, вологості;

перевірку санітарного стану приміщень, включаючи умови збирання, дезінфекції, контроль змивів із поверхонь та обладнання.

Результати контролю фіксують у спеціальних журналах.

Правила ведення документації

Ведення лабораторної документації, включаючи реєстраційні та робочі журнали, здійснюють відповідно до вимог чинних нормативно-методичних документів.

Вимоги до матеріальних ресурсів, необхідних для виконання діагностичних досліджень на туляремію

Для проведення діагностичних досліджень на туляремію у бактеріологічних лабораторіях філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" мають бути в наявності:

діагностичні препарати, тест-системи, зареєстровані у порядку (прилож.3);

хімічні реактиви (прил.4);

прилади, обладнання, витратні матеріали (прил.5, 6).

Рекомендується для забору матеріалу мати комплект медичний (укладку універсальну для забору матеріалу від людей та з об'єктів довкілля для дослідження на особливо небезпечні інфекційні хвороби).

Персонал повинен бути забезпечений спецодягом та засобами індивідуального захисту.

5.2.2. Номенклатура та обсяг досліджень

Лабораторії філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальних утвореннях у суб'єкті Російської Федерації при здійсненні епідеміологічного нагляду проводять контроль стану протитуляремійного імунітету у вакцинованих людей.

Дослідження здійснюють у наступному обсязі:

1) виявлення антитіл;

2) постановка реакції лізису лейкоцитів.

Якщо лабораторія ЛПЗ не виконує серологічні дослідження на туляремію, сироватку хворих або з підозрою на це захворювання досліджують у філії ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації (за домовленістю).

5.2.3. Порядок лабораторної діагностики туляремії у лабораторіях філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації

Стан імунітету у вакцинованих перевіряють через 5 років після вакцинації та надалі - 1 раз на 2 роки.

Контроль стану протитуляремійного імунітету здійснюють за допомогою алергологічного (реакція лейкоцитолізу) або одного із серологічних методів дослідження (РА, реакція об'ємної агломерації, РНГА, ІФА). При цьому краще використовувати серологічні методи дослідження. Матеріалом дослідження є кров і сироватка крові вакцинованого. При необхідності можна використовувати кров'яно-краплинну реакцію, яка дозволяє видати відповідь протягом 5 хв і може бути поставлена ​​із сухою краплею крові.

Від хворих чи осіб із підозрою на туляремію у поступовій динаміці захворювання досліджують парні сироватки з інтервалом 7-10 днів. Діагностично достовірним є 4-кратне та більше збільшення титру антитіл.

Гіперчутливість у вакцинованих та хворих осіб визначають in vitroу реакції лейкоцитолізу відповідно до діючих методичних вказівок з епідеміологічного нагляду за туляремією.

5.2.4. Оформлення результатів дослідження

Реєстрацію результатів досліджень у лабораторіях філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації здійснюють відповідно до облікових форм, встановлених в установі. Видача відповідей – за уніфікованими формами.

5.2.5. Порядок взаємодії філій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" в муніципальній освіті в суб'єкті Російської Федерації з іншими організаціями Росспоживнагляду

Інформація про результати лабораторної діагностики туляремії в лабораторії філії ФБУЗ Центр гігієни та епідеміології у суб'єкті Російської Федерації передається відповідно до чинних нормативних документів.

5.3. Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації

5.3.1. Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації, у структурі яких відсутні відділи та лабораторії особливо небезпечних інфекцій

Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для лабораторій філіалів та лабораторій у суб'єкті Російської Федерації (розділ 5.2).

5.3.2. Порядок організації та проведення лабораторної діагностики туляремії для лабораторій особливо небезпечних інфекцій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації

5.3.2.1. Вимоги до лабораторій особливо небезпечних інфекцій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації, які здійснюють дослідження на туляремію.

Наявність дозвільних та регламентуючих роботу документів

ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації, на базі яких функціонують лабораторії особливо небезпечних інфекцій, що виконують дослідження на туляремію, повинні мати ліцензію на провадження діяльності, пов'язаної з використанням збудників II-IV груп патогенності (небезпеки).

Лабораторії ТОВ ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації, які здійснюють дослідження на туляремію, повинні мати санітарно-епідеміологічний висновок про можливість проведення робіт з мікроорганізмами II-IV груп патогенності (небезпеки) відповідно до діючих СП про порядок видачі санітарно-епідеміологічного висновки про можливість проведення робіт із збудниками інфекційних хвороб людини І-ІV груп патогенності (небезпеки), генно-інженерно-модифікованими мікроорганізмами, отрутами біологічного походження та гельмінтами.

Лабораторії ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації повинні бути акредитовані на технічну компетентність у встановленому порядку відповідно до чинної законодавчої бази Російської Федерації.

Облік, зберігання, передача та транспортування виділених підозрілих культур збудника туляремії та/або проб клінічного матеріалу повинні здійснюватися відповідно до діючих СП про порядок обліку, зберігання, передачі та транспортування мікроорганізмів І-ІV груп патогенності.

Утилізація відходів має здійснюватися відповідно до регламентованих санітарно-епідеміологічних вимог до поводження з медичними відходами.

Проведення досліджень на всіх етапах: відбір проб, їх зберігання, доставка в лабораторію, реєстрація, порядок дослідження, видача результатів, взаємодія з організаціями Росспоживнагляду повинні відповідати вимогам нормативних документів, що діють.

Вимоги до фахівців та персоналу, які беруть участь у виконанні досліджень на туляремію

Дослідження на туляремію можуть виконувати фахівці не молодше 18 років з вищою та середньою медичною, біологічною освітою, які закінчили курси підготовки за спеціальністю "Бактеріологія" з основами безпечної роботи з патогенними біологічними агентами (ПБА) І-ІІ груп, які мають допуск до роботи з ПБА ІІ. -IV груп виходячи з наказу керівника установи. Фахівці, які проводять дослідження туляремію, повинні мати необхідні професійні навички (приклад.8).

Фахівці, які здійснюють діяльність, пов'язану з використанням збудників інфекційних хвороб, повинні мати сертифікати та підвищувати кваліфікацію не рідше ніж один раз на п'ять років.

Вимоги щодо забезпечення безпеки роботи персоналу

Кожна лабораторія, яка здійснює дослідження на туляремію, повинна мати пакет документів, що визначають режим безпечної роботи працівників з урахуванням характеру робіт, особливостей технології, властивостей мікроорганізмів. Документи мають бути погоджені з комісією з контролю за дотриманням вимог біологічної безпеки, спеціалістами з охорони праці, протипожежними заходами та затверджені керівником установи. Результати перевірок знань правил техніки безпеки персоналу під час проведення робіт фіксуються у спеціальному журналі.

Фахівці, які здійснюють епізоотологічне обстеження ензоотичної по туляремії території та її лабораторне забезпечення, мають бути вакциновані проти туляремії з подальшим контролем рівня імунітету та реєстрацією результатів у спеціальному журналі.

Усі працівники повинні виконувати вимоги щодо забезпечення безпеки роботи з матеріалом, підозрілим або зараженим збудниками інфекційних хвороб І-ІІ груп патогенності (небезпеки) відповідно до чинних нормативних документів.

Порядок організації внутрішнього контролю за якістю лабораторних досліджень

Контроль якості діагностичних досліджень на туляремію в лабораторіях ТОВ ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" включає:

контроль якості поживних середовищ, діагностичних препаратів та тест-систем, дисків з антибактеріальними препаратами, дистильованої води, хімічних реактивів та дезінфікуючих засобів;

своєчасне перевірення засобів вимірювань, атестацію випробувального обладнання;

контроль якості стерилізації лабораторного посуду;

контроль роботи парових та сухоповітряних стерилізаторів;

контроль роботи бактерицидних ламп;

контроль температурного режиму холодильників;

контроль температурного режиму термостатів;

перевірку стану повітря виробничих приміщень та боксів, температурного режиму, вологості;

перевірку санітарного стану приміщень, включаючи умови збирання, дезінфекції, контроль змивів із поверхонь та обладнання.

Результати контролю фіксують у спеціальних журналах.

Правила ведення документації

Ведення лабораторної документації, включаючи реєстраційні та робочі журнали, здійснюють щодня відповідно до вимог чинних методичних документів.

Вимоги до матеріальних ресурсів, необхідних для виконання діагностичних досліджень на туляремію

Для проведення діагностичних досліджень на туляремію в лабораторіях мають бути:

живильні середовища, зареєстровані у порядку (прилож.2);

діагностичні препарати, тест-системи, антибактеріальні препарати, зареєстровані у порядку (прилож.3, 7);

хімічні реактиви (прил.4);

прилади, обладнання, витратні матеріали (прил.5, 6);

комплект медичний (укладання універсальне для забору матеріалу від людей та з об'єктів навколишнього середовища для дослідження на особливо небезпечні інфекційні хвороби).

Поживні середовища підлягають обов'язковому контролю згідно з діючими методичними вказівками щодо контролю діагностичних поживних середовищ за біологічними показниками (для збудника туляремії).

5.3.2.2. Номенклатура та обсяг досліджень.

Лабораторії ТОВ ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єктах Російської Федерації, проводять:

дослідження матеріалу від хворих та померлих з підозрою на туляремію;

дослідження матеріалу від осіб, які підлягають обстеженню на туляремію відповідно до вимог епіднагляду (за згодою);

дослідження проб, зібраних під час епізоотологічного обстеження території;

дослідження проб із об'єктів навколишнього середовища;

ідентифікацію виділених культур збудника туляремії за скороченою схемою;

контроль якості та інгібуючих властивостей поживних середовищ.

Діагностичні дослідження матеріалу здійснюють у наступному обсязі:

а) індикація збудника в нативному матеріалі методами експрес- та прискореної діагностики (МФА, ПЛР, ІФА, РА, РНГА, РНАт, селективне концентрування на МІС з подальшою постановкою ІФА);

б) постановка біологічної проби;

в) посів на живильні середовища для виділення чистої культури збудника;

г) виявлення антитіл до збудника туляремії;

д) ідентифікація виділеної культури за скороченою схемою.

5.3.2.3. Порядок діагностичних досліджень на туляремію у лабораторіях особливо небезпечних інфекцій ФБУЗ "Центр гігієни та епідеміології" у суб'єкті Російської Федерації.

Порядок дослідження клінічного матеріалу

Відбір матеріалу здійснюють відповідно до п.5.1.

Для виявлення збудника туляремії використовують діагностичні препарати та складні агарові або жовткові середовища з додаванням цистеїну, тканинних екстрактів, дефібринованої крові, глюкози, зареєстровані в установленому порядку. Кожна серія агару має бути перевірена на чутливість до зростання туляремійного мікроба згідно з чинними нормативно-методичними документами. Для придушення росту сторонньої мікрофлори використовують пеніцилін (100 од./мл), ампіцилін (100 од./мл), поліміксин (50-100 мкг/мл), кефзол (або цефалексин), амфотерицин В (або амфоглюкамін), ристом та деякі інші антибактеріальні препарати.

Об'єкти з посівами інкубують за температури 37 °С. Перегляд посівів здійснюють через 24-48 год (далі - щодня протягом 10 діб від моменту посіву).

Підготовку проб для ПЛР здійснюють відповідно до вимог методичних вказівок щодо організації роботи лабораторій, що використовують методи ампліфікації нуклеїнових кислот при роботі з матеріалом, що містить мікроорганізми I-IV груп патогенності.

Дослідження матеріалу від хворої людини (трупа)

І етап:

приготування мазків, забарвлення фіксованих мазків за Грамом, Романовським-Гімзе, імуноглобулінами флюоресцентними туляремійними;

постановка ПЛР;

постановка імуносерологічних реакцій для виявлення антигенів та антитіл до збудника туляремії (РА, МФА, РНГА, РНАт, ІФА та ін.);

постановка реакції лейкоцитолізу (кров хворого);

зараження біопробних тварин (морські свинки внутрішньочеревно; білі миші внутрішньочеревно або підшкірно (кров, пунктат бубона), підшкірно (мокрота, мазок із зіва, бубон, що відокремлюється, відокремлюване виразки, кон'юнктиви);

посів на щільні живильні середовища (кров, пунктат бубона);

посів на щільні живильні середовища з інгібіторами сторонньої флори (мокрота, мазок із зіва, субстрат з бубона, що розкрився, виразки, що відокремлюється, кон'юнктиви).

ІІ етап(2-6 год від початку дослідження):

облік результатів МФА, ІФА, ПЛР;

облік результатів РА, РПГА та РНАт через 18-24 год;

видача попередньої позитивної відповідіна підставі наявності в мазках дрібних коккоподібних паличок грамнегативних або бузкового кольору при фарбуванні по Романовському-Гімзі, їх специфічного світіння при фарбуванні мазка імуноглобулінами флуоресцентними туляремійними, позитивного результату ПЛР, позитивних імуносерологічних.

III етап(48-72 год від початку дослідження):

перегляд посівів нативного матеріалу на агарових платівках;

бактеріоскопія мазків із підозрілих колоній (забарвлення за Грамом);

постановка ІХ-тесту для експрес-ідентифікації туляремійного мікроба з матеріалом із підозрілих колоній;

відсівання підозрілих колоній туляремійного мікроба на живильний агар для виділення чистої культури;

видача підтвердження попередньої позитивної відповідіна підставі наявності характерного зростання на щільних живильних середовищах, наявності в мазках з колоній дрібних грамнегативних коккоподібних паличок, позитивного ІХ-тесту для експрес-ідентифікації туляремійного мікроба.

IV етап(3-5-ту добу від початку дослідження):

після накопичення чистої культури постановка тестів на її ідентифікацію. Ідентифікацію виділеної культури проводять за такими тестами:

морфологія клітини, характер забарвлення за Грамом та імуноглобулінами флуоресцентними туляремійними;

характер зростання на живильних середовищах FT-arape або на згорнутому жовтковому середовищі Мак-Коя;

відсутність зростання на простих живильних середовищах (м'ясопептонному агарі та/або бульйоні);

аглютинація культур специфічною туляремійною сироваткою або постановка РЛА з виділеною культурою;

експрес-ідентифікація туляремійного мікроба з використанням ІХ-тесту;

виявлення видоспецифічних ДНК-мішеней методом ПЛР;

розтин полеглих біопробних тварин, посів органів та крові на щільні живильні середовища, приготування та перегляд мазків-відбитків органів, постановка ПЛР із суспензіями органів.

V етап(5-15-ту добу від початку дослідження):

облік результатів ідентифікації культур;

перегляд посівів матеріалу від полеглих біопробних тварин;

розтин та дослідження забитих біопробних тварин;

видача остаточної позитивної відповідіпроводиться на підставі виділення чистої культури туляремійного мікроба з посівів нативного матеріалу, його ідентифікації за морфологічними, культуральними властивостями, позитивних результатів імуносерологічних реакцій, наявності ДНК збудника, а також на підставі виділення ідентичних культур від загиблих або забитих лабораторних тварин.

Друга група. Високосприйнятливі, але малочутливі ссавці (заражаються при попаданні в організм поодиноких мікробних клітин збудника туляремії, хворіють важко, але швидко звільняються від мікроба, набуваючи стійкого імунітету). До цієї групи належать польова миша, всі види щурів і ховрахів, білки, бурундуки, бобри, їжаки, вихухоль, кутора, білозубка та деякі інші види ссавців.

Третя група. Малосприйнятливі та практично нечутливі ссавці. До них належить більшість хижих ссавців та сільськогосподарських тварин.

Схема дослідження польового матеріалу

Лабораторне дослідження польового матеріалу починають відразу після його надходження. Допускається його короткочасне зберігання (трохи більше 20 год) при температурі від 4 до 6 °З. При розтині звірків дома збору можливе зберігання органів прокуратури та доставка в лабораторію в консерванті. Консервантами можуть служити вазеліно-парафінова суміш (1 частина парафіну і 10 частин вазелінової олії змішують і стерилізують 45 хв прогріванням на киплячій водяній бані), 5% розчин кухонної солі, крім того, використовують глибоке заморожування в рідкому азоті та ін. У консервантах і за низької температури органи тварин можна зберігати протягом місяця.

Дослідження проводять біологічними, бактеріоскопічними (світлова та люмінесцентна мікроскопія), бактеріологічними (посів на живильні середовища, виділення чистих культур та їх ідентифікація), молекулярно-генетичним (ПЛР-аналіз) та імуносерологічними (РА, РЛА, РНГА, РНАт, РНА методами. Схема дослідження матеріалу залежить від групи чутливості тварин та від того, в якому вигляді доставлений матеріал.

Дрібних ссавців, здобутих у природі знаряддями лову чи живими, досліджують груповим шляхом, об'єднуючи однією пробу органи кількох звірків (5-10) однієї виду і спійманих щодо одного місці.

Для дослідження відбирають шматочки селезінки, печінки, лімфатичні вузли, кров або змив з грудної порожнини. Матеріал досліджують біологічним, молекулярно-генетичним та імуносерологічними методами.

Суспензію органів використовують для зараження біопробних тварин та виявлення антигенів та ДНК збудника туляремії. Сироватку крові або "змиви" з грудної порожнини досліджують на наявність антитіл до збудника туляремії.

Трупи звірят, загиблих у природі, що загинули в лабораторії, або тварин, у яких при розтині виявлено патолого-анатомічні зміни, характерні для туляремії, піддають індивідуальному дослідженню. Шматочки селезінки, печінки, нирок, лімфатичні вузли, кістковий мозок досліджують біологічним, бактеріологічним, молекулярно-генетичним та імуносерологічними методами.

В умовах встановленої епізоотії при дослідженні тварин першої групи можна обмежитись посівом органів на живильні середовища та бактеріоскопією мазків з органів, зберігаючи частину їх на холоді до отримання результатів досліджень. У сумнівних випадках вдаються до біологічного методу. Тварин другої та третьої груп біологічним методом досліджують обов'язково.

Імовірність виявлення збудника туляремії в органах тварин першої групи при мікроскопічному дослідженні (краще використовувати люмінесцентну мікроскопію) значно вища, ніж при бактеріоскопії мазків із органів трупів тварин другої групи.

Домашні тварини(велика рогата худоба, свині, вівці, північні олені) відносяться до видів, малочутливих до туляремії (третя група). При їх дослідженні використовують головним чином імуносерологічні методи (РА, РНГА, ІФА), рідше внутрішньошкірну пробу з тулярином. Бактеріологічний та біологічний методи застосовують тільки при обстеженні загиблих, забитих або хворих тварин. Досліджують насамперед лімфатичні вузли та селезінку. При серологічному дослідженні слід враховувати можливість виявлення перехресних реакцій із бруцелами та мікробною флорою кишечника тварин. Доцільно дослідити сироватки свійських тварин, принаймні у двох серологічних реакціях. Позитивні реакції у РНГА слід контролювати у РТНГА.

Погадки хижих птахів і послід хижих ссавціврекомендується досліджувати індивідуально. Загибель туляремійного мікроба в погадках і послідах відбувається швидко (в першу добу; при негативних температурах, можливо, повільніше), у зв'язку з чим біологічне та бактеріологічні дослідження цього матеріалу недоцільні. Проби погадок і посліду використовують для пошуку антигену збудника туляремії імуносерологічними методами та ДНК методом ПЛР.

Кровососущих комах та інших безхребетних твариндосліджують груповим методом, в одну пробу поєднують комах або безхребетних тварин одного виду (роду) та здобутих з одного місця.

Дорослих іксодових кліщів поєднують до 50 особин.

Личинок поєднують по 100-200 екземплярів, німф - по 50-100 залежно від ступеня їх вгодованості. Промивання личинок та німф іксодових кліщів у спирті не проводять, т.к. це може зашкодити аналізу.

Блох, гамазових кліщів, вошей сортують за видами (родами), а також за видами звірків, з яких вони були зібрані, поміщають у стерильні пробірки і далі піддають обробці за тією ж методикою, що личинок та німф іксодових кліщів.

Кровососущих двокрилих комах присипають парами ефіру обмеження рухливості. У ґедзі попередньо відстригають кінцівки і крила, комарів і мошок досліджують цілком. В один аналіз включають до 25-50 ґедзів або до 100 комарів, або до 250 мошок.

Гідробіонтів - потічників, бокоплавів, дафній, циклопів та інших.перед дослідженням промивають у кількох порціях води та 1-2 порціях стерильної дистильованої води. У тварин, що мають чохлики або раковинки, останні наскільки можна видаляють. Тварин об'єднують у групи по 5-10-50 екземплярів залежно від розмірів особин окремих видів.

Виявлення туляремійного мікроба або його ДНК в організмі безхребетних найбільше ефективно при використанні біологічного методу та ПЛР. Також можливе виявлення специфічного антигену туляремійного ЛПС за допомогою ІХ-тесту.

Проби води(100-200 мл) беруть із різних водойм: річок, струмків, ставків, озер, боліт, колодязів тощо. Найбільш ефективним є дослідження води в поіменно-болотних осередках туляремії в зимовий час. Проби беруться в затіненому місці, на глибині 10-20 см від поверхні стоячої або слабопроточної води. З кожної точки слід брати по 2 проби. Відбирають проби у місцях проживання звірків (біля кормових столиків, нір, хаток бобрів чи ондатр). Для концентрування збудника використовують фільтрування, центрифугування, магнітні сорбенти та інші прийоми. Для дослідження використовують біологічний метод (білої миші вводять підшкірно до 1 мл, а морській свинці – до 5 мл води), молекулярно-генетичний та імуносерологічні методи, спрямовані на виявлення ДНК та антигенів збудника туляремії.

Виникла помилка

Платіж не було завершено через технічну помилку, кошти з вашого рахунку
не були списані. Спробуйте почекати кілька хвилин і знову повторити платіж.

Віварій є важливою частиною науково-дослідних інститутів, лабораторій та інших установ, де проводять дослідження тварин. Для віварію зовсім не придатні підвальні або непристосовані приміщення (сараї, прибудови тощо) з великою вологістю та протягами. Будівлю віварію, як і розплідника для розведення тварин, слід будувати на піднесеному та сухому місці, з прилеглою до нього земельною ділянкою. У віварії має бути достатньо сонячного світла, ділянку, прилеглу до приміщень, захищають від вітру. Територію віварію обносять глухим парканом; у безпосередній близькості до основного приміщення влаштовують вольєри.

Будівля віварію складається з основних приміщень, у яких містять лабораторних тварин, та підсобних. У кожній кімнаті віварію повинні бути тварини одного виду. Як правило, великих лабораторних тварин (мавпи, собаки) утримують у різних кімнатах, також окремо містять кішок. Дрібних тварин (морські свинки, щури, миші) розміщують зазвичай у одному приміщенні. Собак і кроликів можна містити поза приміщенням, у клітинах під навісом або у вольєрах.

Важливою та необхідною частиною віварію є підсобні приміщення: кухня, кімната для персоналу, карантин, ізолятор, мийка. Кухню для приготування кормів обладнають плитою та холодильником з підведенням гарячої та холодної води. Кухню розміщують в одному будинку віварію поруч із коморами для корму. Кімнату обслуговуючого персоналу обладнають індивідуальними шафками для зберігання спецодягу та спецвзуття. До неї має прилягати душова установка для персоналу віварію. Всіх тварин, які надходять у віварій, переводять в основне відділення тільки після перебування в карантині. Приміщення карантину має бути ізольовано та мати все необхідне для догляду за тваринами. Поряд з цим необхідно мати ізолятор для хворих або підозрілих щодо захворювання лабораторних тварин, а також приміщення для розтину трупів. Передбачається приміщення для миття, дезінфекції та сушіння клітин та іншого інвентарю віварію, а також спецодягу співробітників. У віварії повинна бути піч для спалювання трупів і ванна для купання тварин.

Необхідною частиною віварію є клініка для тварин. У клініку поміщають після операцій зазвичай собак; вони перебувають у ній до того часу, поки вийдуть із тяжкого стану після виконаного втручання. Клініку обладнають спеціальними клітинами чи клітинами звичайного типу; у ній мають бути гаряча та холодна вода, газ, аптечка з необхідними лікарськими препаратами для виходжування тварин. Залежно від характеру досліджень, що проводяться, клініку обладнають спеціальними верстатами для фіксації тварин.

Підлоги віварію, особливо основного відділення, повинні бути водонепроникними та мати ухил до стоків каналізації. Підлоги покривають пластиком, плиткою метлахской, бетонують або в крайньому випадку асфальтують. Стіни на висоту 2 м від підлоги покривають глазурованою плиткою, пластиком або фарбують олійною фарбою. Система каналізації повинна мати широкі стоки, що дозволяють уникнути засмічення, покриті металевими ґратами. Стічні води перед надходженням у загальну каналізацію необхідно знешкоджувати.

У приміщеннях віварію, крім природної вентиляції (кватирки, фрамуги, вікна, що відкриваються), влаштовують припливно-витяжну вентиляцію з багаторазовим обміном повітря. Опалення віварію має бути центральним, необхідно запобігати появі вогкості та підтримувати температуру в межах 12-18°.

Залежно від профілю науково-дослідної установи (експериментальна хірургія, нормальна та патологічна фізіологія, мікробіологія, токсикологія тощо) при плануванні віварію слід передбачити необхідні спеціальні додаткові приміщення. У ряді випадків виділяють ізольовані приміщення для утримання лабораторних тварин, заражених культурами збудників особливо небезпечних інфекцій та радіоактивними речовинами, з операційною при кожному з цих приміщень. Кожне приміщення повинно мати холодильник та необхідне обладнання для зараження тварин та розкриття трупів.

Керувати віварієм повинен спеціаліст-зоотехнік, який пройшов підготовку у галузі лабораторного тваринництва.

Собаки. При клітинному утриманні собак в основному відділенні віварію не повинно бути скупченості, тому що при цьому створюються несприятливі санітарно-епідеміологічні умови з небезпекою швидкого поширення інфекції на велику групу тварин. Собак краще поміщати в окремі невеликі кімнати з пристроєм у кожній із них 5-6 клітин.

При необхідності збирання сечі собак поміщають у так звані обмінні клітини, підлога яких влаштована з сітки та рухомого лотка зі стоком.

Собаки з беззвучним гавканням. Оскільки вміст великої кількості собак пов'язаний з певними труднощами через шум, який створюють тварини, що гавкають, у ряді випадків вдаються до перев'язки поворотних нервів на шиї з обох сторін, внаслідок чого денервуються голосові зв'язки і собаки втрачають здатність гавкати.

Техніка операції. Оперують тварин під морфінним знеболенням з додаванням місцевої анестезії (0,5 або 0,25% розчином новокаїну) або ефірним наркозом. Розріз шкіри завдовжки 8-10 см проводять по серединній лінії шиї від нижнього краю щитовидного хряща вниз. Розсікають фасцію разом із шкірним м'язом шиї. Тупо роз'єднують обидві грудино-під'язикові м'язи, лівий м'яз відсувають назовні (рис. 1). У клітковину між лівим грудино-під'язичним м'язом і трахеєю вводять розчин новокаїну. Поворотна гілка блукаючого нерва проходить у вузькій щілині між трахеєю та стравоходом і прилягає до задньо-бічної поверхні трахеї. Нерв виявляють у клітковині на рівні 6-10-го кільця трахеї, виводять у рану тупим гачком і перетинають або резецирують протягом 1 см. Гачки витягають і лівий грудино-під'язиковий м'яз укладають на місце. Таким же шляхом перетинають зворотну гілку блукаючого нерва праворуч. Необхідно враховувати, що на рівні верхніх кілець трахеї зворотна гілка блукаючого нерва ділиться на кінцеві гілки та приймає розсипний тип. Перетнути при операції всі дрібні нервові гілочки не вдається, і операція може не дати бажаного результату.

У собак після перерізання поворотних нервів спостерігаються явища дихальної недостатності, що робить їх не придатними для складних експериментальних операцій (Л. М. Нагібін та ін., 1967; Н. А. Супер та ін., 1967).

Кішки. Утримувати кішок у віварії важко, оскільки вони не переносять клітин. Для кішок відводять спеціальну кімнату, де вони мають свободу переміщення. У умовах вони можуть жити у віварії тривалий час. Кімната має бути світлою, теплою, добре вентильованою, з полицями для сидіння кішок. На підлозі кімнати влаштовують відхоже місце, що є ящиком, заповненим сухим піском, торфом, тирсою. Скриньку слід часто очищати, запах у кімнаті може бути усунений перманганатом калію.

Кролики та дрібні лабораторні тварини. Тварин містять у клітинах, розміщених на стелажах, змонтованих у вигляді батарей, або комплектах клітин, розташованих на колесах. Клітини встановлюють на стелажах з відривом 30-50 див від стін, нижній ряд клітин має розташовуватися 50- 70 див від підлоги. Між стелажами залишають прохід не менше 1 м. Поверхи клітин на стелажах або батареях ізолюють один від одного водонепроникним матеріалом, що унеможливлює попадання екскрементів на розташовані нижче клітини.

Залежно від виду тварини рекомендуються такі розміри клітин (В. Н. Іванов, 1967): для мишей (10-20 тварин) -200X300Х150 мм, для щурів (10-15 тварин) - 334X450X200 мм, для морських свинок (5-10 тварин) - 486X450X200 мм, для кроликів (1-2 залежно від віку та породи)-486X450X300 мм.

Клітини роблять з різних матеріалів: жерсті, дроту, сталі,
фанери, пластику і т. д. Вони повинні бути міцними та економічними, легко очищатися, бути стійкими до дезінфікуючих речовин та термічної обробки. Клітини з нержавіючої сталі є найбільш прийнятними для роботи з радіоактивними ізотопами.

Рис. 1. Операція виділення та перетину гілок поворотних нервів для створення беззвучного гавкоту у собак.
1-ліва частка щитовидної залози; 2 - вікова гілка блукаючого нерва; 3 - лівий грудино-під'язичний м'яз (відтягнутий гачком); 4 – стравохід; 5-трахея.

Кімната, де розташовуються клітини з тваринами, має добре вентилюватись, відносна вологість повітря має бути в межах 40-45%. Навіть за наявності припливно-витяжної вентиляції з метою зниження вмісту в повітрі аміаку та продуктів життєдіяльності тварин рекомендується застосовувати торф'яні підстилки або тирсу з додаванням суперфосфату. Процес збирання клітин може бути автоматизований; прибирання здійснюється 1-2 рази на добу.

На передній стінці клітини встановлюють годівницю, автопоїлку і вішають табличку, на яку заносять основні дані про тварину, вид оперативного втручання і т.д.

Кроликів та морських свинок нерідко утримують поза приміщеннями віварію. Для цього використовують клітини, розташовуючи їх у кілька ярусів, під загальним дахом. Зовнішній вміст сприяє вирощуванню здорових, більш стійких до різних захворювань кроликів і переважно поширене в розплідниках.

Тема 4. Використання лабораторних тварин у діагностичних дослідженнях. Цілі використання лабораторних тварин у вірусології

Завдання до наступного заняття

Підбиття підсумків заняття

Завдання

1. Знайти під світловим мікроскопом у препаратах та замалювати:

а) цитоплазматичні тільця-вмикання;

б) внутрішньоядерні тільця-вмикання;

в) віріони вірусу віспи у забарвленні за Морозовим.

2. Ознайомитись із пристроєм та принципом роботи електронного мікроскопа.

3. Дешифрувати електронні мікрофотографії віріонів різних вірусів (дати їх схематичний рисунок).

Самостійна робота студентів

Студенти знайомляться із пристроєм світлового, люмінесцентного та електронного мікроскопів (у лабораторії), замальовують схему будови електронного мікроскопа. Знайомляться із підготовкою препаратів для електронної мікроскопії. Переглядають готовий препарат у люмінесцентному мікроскопі. Замальовують схему прямого та непрямого методу РІФ.

Контрольні питання:

1. Влаштування електронного мікроскопа.

2. Методи підготовки препаратів до перегляду в електронному мікроскопі.

3. Люмінесцентну мікроскопію (РІФ) прямий та непрямий методи.

4. Значення електронної та люмінесцентної мікроскопії у вірусологічних дослідженнях.

Мета заняття:ознайомити студентів з вимогами до видів лабораторних тварин, їх карантинування, утримання, годування, мічення.

Обладнання та матеріали:набір інструментів у стерилізаторі (ножиці, голки, шприци, пінцети, корнцанги), лабораторні тварини, ватяні спиртові тампони фарби для мічення, ефір, ксилол, мультимедійне обладнання, плакати та презентації MS Office Power Pointна тему заняття.

Пояснення викладача:Більшість вірусів різних таксономічних груп можуть відрізнятися один від одного на основі патогенності для лабораторних тварин різних видів або віку.

4.1 Види лабораторних тварин.Найбільш широко у вірусологічних лабораторіях застосовують мишей, білих щурів, кроликів, морських свинок, хом'яків, курчат. У молодих мишей експериментально відтворюють грип, альфа- та флавівірусні інфекції, ящур (на новонароджених мишенятах) та ін. Вони сприйнятливі до багатьох вірусів, їх легко розводити та з ними зручно працювати. Краще використовувати мишей інбредних ліній, тому що вони майже однаково реагують на той чи інший вірус. У щурів також створюють інбредні лінії, але ці тварини стійкіші до певних вірусних інфекцій, ніж миші. Онкогенність деяких вірусів широко вивчається на золотистих хом'ячках. Для вірусологічних дослідів зазвичай використовують гладкошерстих морських свинок масою 250-300 г.

Ту чи іншу інфекцію іноді вивчають на тваринах кількох видів, що мають різну чутливість до даного вірусу, що дозволяє диференціювати віруси, що викликають клінічно подібні симптоми хвороби (наприклад, ящур, везикулярний стоматит, везикулярна екзантема та везикулярна хвороба свиней).

За генетичними якостями лабораторних тварин ділять на чотири групи:

1) тварини змішаного походження, одержані від різних тваринників, такі тварини гетерогенні;

2) тварини, одержані безпосередньо з одного джерела, проте генетично такі тварини варіабельні;

3) інбредні лінії тварин. Їх отримують у результаті парування брата з сестрою чи батьків із дітьми принаймні щонайменше 20 поколінь. При такому методі розведення досягається зростаючий ступінь гомозиготності.

4) однорідні гібриди F1. Високий ступінь гетерозиготності, характерний для кожного гібрида, пов'язаний тут з генетичною одноманітністю, яка відповідає ступеню гомозиготності батьківських ліній. Як правило, однорідні гібриди F1 менш мінливі, ніж обидві батьківські лінії. Тварини-мутанти мають окремо виражений спадковий фактор, який зумовлює видиме відхилення від нормальної форми.

Негативна сторона виділення вірусу на лабораторних тварин – можливість діагностичних помилок внаслідок активації прихованого носьбіта вірусу. У цьому випадку розвиток симптомів хвороби після введення матеріалу не наслідок дії введеного вірусу, а результат самої процедури, що порушує попередню рівновагу в організмі. У цей час проявляється вірус або інший інфекційний агент, що довго персистує в організмі. Виражається це різкими неврологічними симптомами (повороти вздовж довгої осі тіла).

Наявність прихованої вірусної інфекції може також виражатись зменшенням або зникненням чутливості тварин до досліджуваного вірусу внаслідок явища інтерференції. Можливий і протилежний ефект, а саме – явище синергізму в дії вірусів, що іноді дає результати, важкі для правильної інтерпретації.

Для деяких вірусологічних робіт, наприклад, при виділенні вірусу з нез'ясованими хвороботворними властивостями, необхідно використовувати гнотобіоти. Термін «гнотобіоти» поєднує дві категорії тварин: безмікробних (стерильних), які не містять жодних життєздатних мікробів, і гнотофор – носіїв одного (моногнотофори), двох (дігнотофори) або більше (полігнотофори) мікроорганізмів. В даний час безмікробні тварини за динамікою зростання діляться на три групи: I - мавпи, поросята, курчата ростуть краще за звичайних тварин або нарівні з ними; II - щури, миші, собаки, кішки ростуть нарівні зі звичайними тваринами; III - морські свинки, кролики, козенята, ягнята ростуть гірше звичайних тварин.

Стерильних птахів отримують за допомогою інкубації яєць зі стерильною шкаралупою у стерильному інкубаторі, лабораторних тварин – шляхом кесаревого розтину або гістеректомії. Містять тварин у стерильних ізоляторах. Повітря, вода та корм повинні бути стерильними.

Особливе значення серед гнотобіотів займають СПФ-тварини (Specific pathogen free), які вільні лише від патогенних мікроорганізмів. В їхньому організмі є всі необхідні для нормальної життєдіяльності бактерії та віруси, які у сукупності створюють групу так званої резидентної (корисної) мікрофлори. В даний час отримані лабораторні СПФ-тварини - щури, морські свинки, кролики, поросята, птахи та ін.

4.2. Цілі використання лабораторних тварин.В даний час лабораторних тварин використовують у вірусології для:

- Виявлення вірусу в патматеріалі;

– первинного виділення вірусу із патматеріалу;

- Нагромадження вірусної маси;

- підтримання вірусу в лабораторії в активному стані;

– титрування вірусу;

– одержання гіперімунних сироваток;

– як тест-об'єкт у реакції нейтралізації.

У вірусології використовують кроликів, морських свинок, білих щурів, білих мишей, золотистих хом'ячків. Однак лише деякі віруси вдається культивувати на тваринах перерахованих видів. У багатьох випадках для тих же цілей використовують інших чутливих до цього вірусу тварин: курей, голубів, кошенят, цуценят тощо. Так, біопробу при діагностиці віспи птахів ставлять на курях, віспи овець – на вівцях, чуми свиней – на підсвинках.

4.3 Вимоги до лабораторних тварин.Комплектуючи групи тварин для вірусологічних досліджень, необхідно виконувати такі вимоги:

– тварина має бути чутливою до цього вірусу;

- Вік його має велике значення для культивування багатьох вірусів. Більшість вірусів краще розмножується в організмі молодих та навіть новонароджених тварин. Наприклад, для біопроби на сказ і ящур використовують мишей-сосунів, на ларинготрахеїт птахів - курчат. Але водночас зараження дорослих кроликів вірусом хвороби Ауески веде до появи яскравих та специфічних клінічних ознак захворювання;

– стандартна чутливість досягається підбором тварин певного віку та однакових за масою;

– лабораторні тварини мають бути здоровими. Тварини, які у віварій вірусологічної лабораторії, мають бути привезені з благополучного з інфекційних захворювань господарства. Їх містять ізольовано, тобто в карантині (білих мишей та щурів 14 днів, а решту тварин 21 день). У цей час за тваринами ведуть щоденне клінічне спостереження. За підозри на наявність інфекційної хвороби тварин піддають лабораторному дослідженню. У разі встановлення інфекційного захворювання серед тварин всю партію, що надійшла, знищують.

4.4. Зміст лабораторних тварин.Віварій для лабораторних тварин повинен мати основне приміщення для тварин, мийну (з боксом, сушильними та стерилізаційними установками), кухню для приготування корму з одним принаймні столом, обладнаним для приготування корму, і холодильником для продуктів, що швидко псуються, комору, операційну, гардероб і санітарне приміщення для обслуговуючого персоналу. Приміщення мають бути чистими. Стіни та підлоги легко дезінфікуються. Запаси корму слід зберігати у спеціальних приміщеннях. У місцях утримання досвідчених тварин бажано мати гігрометр та термометр.

Мишей, щурів, хом'яків та морських свинок у період досвіду рекомендується містити у скляних банках з кришкою із дротяної сітки або перфорованого листового заліза. Це полегшує спостереження за ними, а банки легко чистити та дезінфікувати. Можна містити тварин у металевих клітинах, які легко дезінфікувати.

Як підстилку застосовують матеріали, які адсорбують вологу і можуть бути використані тваринами для будівництва гнізда: стружку для мишей, щурів, хом'яків, морських свинок, тхорів, курей; тирсу для великих мишей, щурів, хом'яків, тхорів, курей; солому для хом'яків, морських свинок, кроликів, собак, курей; м'якіну для мишей, щурів; сіно для мишей, щурів, хом'яків, тхорів, курей; пісок для курей. Слід використовувати таку підстилку, яка утворює якнайменше пилу, оскільки остання може призвести до захворювання органів дихання. Будь-яку підстилку необхідно заздалегідь стерилізувати при 100 °С протягом 30 хв.

Приміщення для лабораторних тварин періодично дезінфікують, особливо перед розміщенням нової партії тварин. Це відноситься і до предметів догляду за тваринами (лопати, скребки, волоті та ін), які стикаються з гноєм та різними покидьками з приміщення. Після закінчення кожного досвіду клітини обов'язково обробляють дезінфікуючими розчинами, чому має передувати чищення як клітин, так і приміщення.

Посуд для корму та води щодня змочують дезінфікуючим розчином, після чого миють та споліскують чистою водою. Приміщення обробляють 1% розчином натрію їдкого, який використовують протягом доби. Дезковрики просочують свіжим розчином кожні 2 дні. Для дезінфекції предметів догляду, миття підлог та посуду рекомендується використовувати 3% розчин хлораміну, який повинен бути застосований протягом 2 годин.

Лабораторних тварин розміщують так, щоб, з одного боку, було забезпечено функціонування всіх систем організму в межах фізіологічної норми, з іншого – виключено взаємне перезараження та поширення інфекції за межі віварію. Тварин утримують у віварії з урахуванням їхньої фізіологічної потреби у освітленості та температурі. Так, мишам, щурам потрібні напівтемрява і температура повітря близько 20 ° С, морським свинкам, кроликам і курям - денне світло і температура в межах 16-23, 14-18 і не нижче 0 ° С відповідно. Щільність посадки має становити приблизно 1 г маси лабораторних тварин на 1 см 2 дна клітини. Тварин забезпечують регулярним та повноцінним годуванням та постійно питною водою.

Якщо віварій один, заражених тварин містять ізольовано від здорових і з останніх починають прибирання приміщення та годування. Для догляду за зараженими тваринами використовують окремий інвентар та годівниці. Краще мати два віварії: для утримання здорових та заражених тварин.

Обслуговуючий персонал при роботі у віварії користується спецодягом: халатом, гумовими рукавичками, фартухом, взуттям, що не промокає. У віварії щодня дезінфікують інвентар та проводять вологе прибирання із застосуванням дезінфікуючих речовин. Після закінчення експерименту клітини дезінфікують, загиблих тварин знешкоджують спалюванням у печах або автоклавуванням.

До групи для проведення досвіду підбирають тварин з однаковими показниками маси, температури, складу крові тощо. При цьому враховують сприйнятливість тварин до різних вірусів. Відібраних тварин мітять, розподіляють по банкам чи клітинам, відзначають дату постановки досвіду, його номер, заражаючу чи профілактичну дозу препарату і, якщо необхідно, як мічені тварини. Останнє важливо, коли в одній банці чи клітці знаходяться тварини кількох груп.

Таблиця 1

Маса тварин у різному віці

РД-АПК 3.10.07.02-09

МІНІСТЕРСТВО СІЛЬСЬКОГО ГОСПОДАРСТВА
РОСІЙСЬКОЇ ФЕДЕРАЦІЇ

Москва 2009

Розроблено: канд. с.-г. наук, ст. наук. співр. П.М. Виноградовим, канд. техн. наук С.С. Шевченка, О.Л. Сєдовим, Є.С. Гарафутдінова, М.Ф. Малигіним (НВЦ «Гіпронісільгосп»); д-р вет. наук, проф. В.Г. Тюріним (ДНУ ВНДІВСГЕ)

ВНЕСЕНИ: НВЦ «Гіпронісільгосп».

ЗАТВЕРДЖЕНО І ВВЕДЕНО В ДІЮ: заступником Міністра сільського господарства Російської Федерації А.І. Бєляєвим 1 грудня 2009 р.

РОЗРОБЛЕНІ ВПЕРШЕ.

Дата введення 15.12.2009

1. Загальні положення

1.1. Ці методичні рекомендації поширюються на всі науково-дослідні організації та навчальні заклади АПК Росії незалежно від їх організаційно-правової форми, що використовують у своїй роботі лабораторних (експериментальних, піддослідних) тварин.

Відповідно до Федерального закону «Про технічне регулювання» (прийнятий Державною Думою 15 грудня 2002 р. і схвалений Радою Федерації 18 грудня 2002 р.) до прийняття відповідних регламентів технічне регулювання у сфері вживання ветеринарно-санітарних заходів здійснюється відповідно до Закону Російської Федерації « Про ветеринарію» (затверджено 14 травня 1993 р., № 4979-1).

1.2. Методичні рекомендації поширюються як на об'єкти, що знову проектуються, для утримання та роботи з лабораторними тваринами - експериментально-біологічні клініки, віварії та ін., так і на діючі та реконструйовані.

1.3. Об'єкти для утримання та роботи з лабораторними тваринами є науково-допоміжними підрозділами науково-дослідних організацій, навчальних закладів та створюються для утримання та при необхідності для розведення лабораторних тварин, що використовуються в експериментальних роботах та дослідженнях. На цих об'єктах може проводитися також самостійна розробка окремих наукових питань.

1.4. Викладені в даних методичних рекомендаціях нормативи та вимоги щодо проектування, будівництва та експлуатації об'єктів для утримання лабораторних тварин спрямовані на безпеку персоналу та населення, що працює з тваринами, в цілому від виникнення антропозаонозів та інших захворювань.

1.5. Розробка, погодження, затвердження та склад проектної документації на будівництво об'єктів для утримання лабораторних тварин здійснюються відповідно до вимог СНіП 11.01-2003.

1.6. Об'єкт для утримання лабораторних тварин (далі віварій) розміщується в окремій будівлі (комплексі будівель) або на верхніх поверхах лабораторних корпусів ветеринарних державних наукових установ, а також на території навчальних закладів.

1.7. Віварії повинні бути забезпечені водою питної якості, у тому числі гарячою, електроенергією, обладнані каналізацією (труби діаметром не менше 100 мм), припливною та витяжною вентиляцією, опаленням, охоронною та пожежною сигналізацією, мати зручні під'їзні шляхи.

1.8. Відстань між окремою будівлею віварію і спорудами науково-дослідних установ, до складу яких входить справжній віварій, має бути не менше відстані протипожежних розривів, встановлених чинними правилами пожежної безпеки в Російській Федерації.

1.9. Будинки віваріїв, що окремо стоять, повинні бути обгороджені глухим парканом і відокремлені від житлового масиву санітарно-захисною зоною. Територія має бути озеленена.

Розміри санітарно-захисної зони визначаються вимогами СаНПіН 2.2.1/2.1.1.1200-03.

1.10. Розміри санітарно-захисної зони для віваріїв, розташованих в адміністративних, виробничих будівлях, що окремо стоять, і мають ізольований вихід, узгоджуються в кожному конкретному випадку з органами державного санітарного та ветеринарного нагляду.

2. Склад, взаєморозташування та норми площі приміщень віваріїв

2.1. До складу кожного віварію повинні бути включені приміщення, запроектовані відповідно до чинних будівельних норм та правил з дотриманням діючих ветеринарно-санітарних вимог та зоогігієнічних нормативів, у тому числі:

кімната обслуговуючого персоналу з індивідуальними шафками для спецодягу;

приміщення для прийому та карантинування новонароджених у віварій тварин;

ізолятор;

приміщення для утримання піддослідних тварин (окремі для кожного виду) або (за погодженням з органами державного ветеринарного та санітарного нагляду) поділені на секції за видами тварин;

стерилізаційна або бокс для роботи дослідників із незараженими тваринами, з приміщенням для розтину тварин та холодильником для тимчасового зберігання трупів;

ізольовані приміщення для утримання піддослідних тварин, заражених культурами збудників особливо небезпечних інфекцій або радіоактивними речовинами (роздільно) з операційною при кожному ізольованому приміщенні, що має холодильник та необхідне обладнання для зараження та розкриття тварин;

кормокухня для приготування кормів (має бути обладнана плитою та холодильником);

дезінфекційно-мийне відділення для миття гарячою водою, дезінфекції та сушіння клітин та іншого інвентарю;

склад чистого (знезараженого) запасного інвентарю: клітин, напувалок та ін;

санітарний блок (душова та туалет);

приміщення, обладнане піччю для спалювання трупів тварин;

загальна холодильна камера для зберігання трупів тварин;

склад кормів;

склад підстилки;

в окремому приміщенні або окремо розташованому будинку - технічний вузол для кондиціонерів, вентиляційних, електротехнічних та інших спеціальних установок.

2.2. У кожному віварії має бути приміщення для прийому тварин, що надходять. У віваріях, у яких містять дрібних гризунів, перед приймальним відділенням встановлюється утеплений тамбур, в який в'їжджає та розвантажується машина з тваринами, що прибули.

При розміщенні віварію на верхніх поверхах лабораторних корпусів приймальне відділення та утеплений тамбур розташовуються на першому поверсі лабораторного корпусу та зв'язуються з віварієм ліфтом, який використовується тільки для підйому лабораторних тварин.

2.3. Приміщення прийому є кімнатою площею 12,5 - 18 м2 з природним і штучним освітленням відповідно до вимог .

Висота всіх приміщень віварію становить 3 - 3,5 м.

2.4. Приміщення карантину складається з кількох ізольованих кімнат площею 12,5 - 18 м2 та ізолюється від приміщень, в яких утримуються тварини, які пройшли карантин та надходять для проведення експериментів.

2.5. До приміщень карантину примикає приміщення ізолятора для хворих тварин та тварин з підозрою на захворювання. Площа кімнат ізолятора аналогічна площам кімнат для карантину.

2.6. Приміщення, призначені для утримання піддослідних тварин, можуть виходити в один загальний коридор або розташовуватися між двома коридорами та мати виходи до кожного з них. При однокоридорному плануванні «брудні» та «чисті» служби розташовують у різних кінцях коридору.

При двокоридорній системі по одному коридору («чистому») надходять корми, які пройшли карантин тварини, входять перед початком роботи з тваринами співробітники в чистому спецодязі та змінному взутті. Іншим («брудним») коридором видаляють нез'їдені корми і гній, виносять трупи тварин, виходять співробітники після роботи з тваринами.

При неможливості ізоляції «брудних» і «чистих» потоків допускається використання одного й того самого приміщення для тієї чи іншої мети за умови, що воно дезінфікуватиметься щоразу після проходження по ньому «брудного» потоку.

2.7. Площа приміщень утримання окремих видів піддослідних тварин становить 12,5 - 18 м2; площа приміщення утримання піддослідних тварин, розділена на секції, визначається розрахунком.

2.8. Площа стерилізаційної або боксу для роботи дослідників із незараженими тваринами визначається розрахунком, виходячи зі специфіки передбачуваної роботи.

2.9. Площі ізольованих приміщень для роботи з піддослідними тваринами, зараженими збудниками особливо небезпечних інфекцій, і для роботи з піддослідними тваринами, зараженими радіоактивними речовинами, а також площі операційних при кожному ізольованому приміщенні визначаються розрахунком, виходячи з умов технологічного та спеціального обладнання, що застосовується для проведення необхідних маніпуляцій.

2.10. Загальна площа приміщень, займана кормокухнею, дезінфекційно-мийним відділенням та складом чистого запасного інвентарю, повинна становити приблизно 50 % від загальної площі приміщень, зайнятих тваринами (у великих віваріях цей відсоток може бути дещо зменшений).

Кормокухня складається з двох суміжних приміщень, призначених для переробки та приготування кормів. Кожне приміщення повинне мати вихід у коридор.

Дезінфекційно-мийне відділення (одне або кілька) складається з двох кімнат, з'єднаних прохідним автоклавом або прохідною сухожаровою камерою.

Влаштування дезінфекційно-мийного відділення має передбачати різну послідовність його роботи:

за наявності інфікованого матеріалу - попередню стерилізацію інвентарю та підстилки з подальшим механічним очищенням останнього в іншому приміщенні;

стерилізацію після механічного очищення клітин та інвентарю, коли немає небезпеки наявності зараженого матеріалу.

Незалежно від розміщення віварію (в окремій будівлі або на верхньому поверсі лабораторного корпусу) у дезінфекційно-мийному відділенні слід передбачати сміттєпровід для видалення брудної підстилки та механізований підйом матеріалів та обладнання.

Склад чистого інвентарю та обладнання розміщується поряд з дезінфекційно-мийним відділенням.

2.11. Для зберігання підстилки (стружки, тирса, торф та ін.) виділяються два приміщення: одне для простерилізованої та упакованої у використовувану даним віварієм тару, інше - для зберігання новопридбаної підстилки.

2.12. При проектуванні приміщень віварію необхідно забезпечити максимальну ізоляцію:

всіх його приміщень від інших підрозділів, що входять до складу науково-дослідної установи;

приміщень ізолятора та карантину від інших приміщень віварію;

між годівницею, приміщеннями для тварин та дезінфекційно-мийним відділенням.

2.13. У кожному даному випадку площа, займана кормокухнею, дезінфекційно-мийним відділенням і складом чистого запасного інвентарю, встановлюється залежно від устаткування, ступеня механізації виробничих процесів і видів корму для піддослідних тварин.

Розміри площ перелічених вище приміщень вказуються в завданні на проектування.

3. Ветеринарно-санітарні та технологічні вимоги до будівельних рішень приміщень віварію та інженерного обладнання

Світильники та освітлювальна арматура закритого типу повинні бути доступні для вологого очищення.

3.5. Приміщення віварію, в яких містяться лабораторні тварини, обладнуються примусовою припливно-витяжною системою вентиляції, що забезпечує кратність повітрообміну та температурно-вологісний режим відповідно до даних, наведених у табл. .

Вид тварин	Температура, °С		Відносна вологість, %		Максимально допустима концентрація у повітрі
	коливання		коливання		аміаку, мг/л	вуглекислоти за обсягом, %
Морські свинки

3.6. Температурно-вологий режим в інших приміщеннях віварію повинен забезпечуватися відповідно до даних, наведених у табл. .

Приміщення	Температура в холодний та перехідний період року, °С	Кратність повітрообміну (об'ємів за годину)
1. Для персоналу
2. Для прийому тварин
3. Для досліджень
4. Мийне-стерилізаційне
5. Для присипання (евтаназії)
6. Викривальне
7. Утилізаційне		За розрахунком
	За нормами технологічного проектування для відповідного виду тварин, звірів, птиці
Примітки. 1 Відносна вологість повітря у виробничих приміщеннях, зазначених у пунктах 1 та 3, не повинна перевищувати 75 %, у пунктах 2, 4 – 7 – 80 % та бути не нижче 30 %. Відносна вологість повітря у приміщеннях утримання сільськогосподарських тварин визначається відповідними нормами (методичними рекомендаціями) технологічного проектування. 2 Температура внутрішнього повітря виробничих приміщень, за винятком приміщень для утримання тварин, у теплий період року (при температурі зовнішнього повітря 10 °С і вище) повинна бути не більше ніж на 3 °С вищою за середню температуру зовнішнього повітря в 13 годин найспекотнішого місяця.

3.7. У теплий період року в приміщеннях слід передбачати природне надходження зовнішнього повітря через вікна, що відкриваються.

3.8. Приміщення, перелічені у пункті , повинні бути обладнані каналізацією, мати підведення гарячої та холодної води.

3.9. Віварії повинні бути обладнані локальною системою каналізації, що включає в себе всі щаблі механічної та біологічної очистки, у зв'язку з потенційною небезпекою відходів, що утворюються в процесі роботи віварію.

3.10. Системи каналізації слід проектувати розділеними для виробничих, господарсько-побутових та зливових стоків.

Кількість та характеристика виробничих стічних вод від миття та дезінфекції технологічного обладнання (клітин та інвентарю) та огороджувальних конструкцій (підлог та стін) приймаються по технологічній частині проекту. Кількість побутових стоків слід приймати відповідно до СНиП 2.04.01-85*.

3.11. Для відведення та збору стічних вод після миття та дезінфекції технологічного обладнання та підлог слід передбачати влаштування лотків, перекритих знімними дірчастими плитами та трапами. Ухил лотків має бути не менше 0,02.

3.12. При проектуванні системи локальної каналізації віваріїв слід дотримуватися таких вимог:

стічні води з приміщень для спалювання трупів підлягають стерилізації в манжусах гострим паром при температурі 120 ° С протягом 30 хв або пароструминної установці при температурі 110 ° С протягом 10 хв; за наявності особливо небезпечних інфекцій стічні води стерилізують при 140° та 130°С протягом 20 та 60 хв відповідно;

виробничо-побутові стоки від миття підлог та миття та дезінфекції технологічного обладнання повинні збиратися у спеціальний приймач, а перед спуском у каналізацію дезінфікуватися хлорсодержащими препаратами;

зливові стоки з території віваріїв, що окремо стоять, неблагополучних у ветеринарно-санітарному відношенні, підлягають дезінфекції хімічними препаратами;

механічні і біологічні опади стічних вод, що утворюються, піддаються спалюванню.

3.13. Магістральні короби припливно-витяжної вентиляції, електроживлення, труби водопроводу та каналізації повинні розташовуватись у спеціальних нішах коридорів та мати вільний доступ для проведення огляду та ремонту.

3.14. Ізольовані приміщення для утримання піддослідних тварин, заражених культурами збудників особливо небезпечних інфекцій або радіоактивними речовинами, та приміщення ізолятора обладнуються локальними системами вентиляції з фільтрами, що забезпечують 100% очищення та дезінфекцію повітря, що викидається. Система вентиляції повинна забезпечувати у цих приміщеннях знижений (на 3 - 5 мм рт. ст.) тиск атмосферного повітря по відношенню до інших приміщень віварію. Вентиляція у цих приміщеннях за рахунок відчинення вікон заборонена.

4. Обладнання віварію та умови розміщення тварин

4.1. Миші, щури, хом'яки, морські свинки та кролики розміщуються в клітинах, що встановлюються на металевих стелажах.

4.2. Настінні або інші конструкції стелажі повинні бути зі знімними кронштейнами та рухомими полицями, що дозволяє переобладнати їх під клітини різних габаритних розмірів з різними видами лабораторних тварин.

4.3. Для розрахунку виробничих площ необхідно виходити з наступних нормативів розміщення тварин у клітинах (табл.).

Вид тварин	Мінімальна площа дна клітини на одну тварину, см2	Кількість тварин
		максимально допустиме у клітці	на 1 м2 площі підлоги приміщення
			65 дорослих або 240 молодняків
			20 дорослих або 100 молодняків
Морські свинки

Примітки.

1. Для зразкового визначення виробничої площі слід виходити з розрахунку, що на 1 см2 площі дна клітини має припадати 1 г маси тварини.

2. Стелажі розміщуються в основному вздовж стін та повинні займати приблизно 40 % виробничої площі.

4.4. Собаки розміщуються в окремих кабінах (боксах) суворо індивідуально. Розміри боксу повинні відповідати довжині та зростанню тварин.

Розміри боксу для великих собак живою масою понад 22,5 кг – 1,2×1,8 м = 2,2 м2, середніх масою 16 – 22,5 кг – 1,2×1,5 м = 1,8 м2, невеликих масою 4,5 – 16 кг – 0,9×1,2 м = 1,1 м2. Зазор між лозинами 4,5 - 5,5 см, діаметр металевих лозин 0,5 - 0,6 см. Бічні стінки - суцільні. На нижню стінку (підлогу) укладають дерев'яні щити.

Годування та напування - у боксі. Вольєри для вигулу влаштовують індивідуальні, з розрахунку до 2 м2 на одну тварину. Час вигулу – не менше 2 разів на добу, тривалість – не менше 20 хв. Слід передбачати окремий секційний зміст самців від самок, цуценят та агресивних тварин.

4.5. На території віварію для собак будують спеціальні приміщення, обладнані кабінами. До кабін прилаштовують вольєри (вигули). У кожного собаки має бути свій вольєр.

Розміри кабіни, м: довжина – 2; ширина – 1,5; висота передньої стінки - 2,5 та задньої - 1,5 - 2; висота дверей кабіни – 1,7, ширина – 0,7. Над дверима кабіни встановлюють засклену раму. Внизу дверей, встановлених у задній стінці кабіни, що є передньою стінкою вольєра, роблять лаз у вольєр розмірами 40×50 см, який на зиму завішують щільною тканиною для захисту від холоду.

Розміри вольєра, м: довжина – 3, ширина – 2, висота – 2,2. У передній стінці роблять двері розмірами 1,8×0,7 м.

4.6. Кішки розміщуються у вольєрах по п'ять голів, де передбачається влаштування полиць (лежаків), достатніх за площею для розміщення всіх тварин. Площа вольєра на одну кішку 0,5 м2. Перед входом у вольєр обладнується сітчастий тамбур.

4.7. У разі розміщення у віваріях для наукових цілей сільськогосподарських тварин та птиці приміщення для них споруджуються відповідно до чинних норм технологічного проектування з дотриманням зоогігієнічних нормативів, викладених у цих нормах.

5. Прийом тварин у віварій

5.1. Поповнення віварію тваринами та птицею проводиться зі спеціалізованих розплідників, благополучних з інфекційних захворювань.

Придбання тварин та птахів в інших організаціях та у приватних осіб допускається за відсутності можливості закупівлі їх у розплідниках та наявності при кожній купівлі ветеринарного свідоцтва про благополуччя організації (господарства, приватної особи) з інфекційних захворювань.

5.2. Прийом тварин у віварій провадиться за наявності ветеринарного свідоцтва або супровідних документів з розплідника.

5.3. Отримані з розплідника тварини розміщуються в ізольованих секціях терміном на три дні для адаптації до нових умов. Наступні терміни ізоляції чи карантину цих тварин визначаються залежно та умовами утримання тварин, характеру майбутніх експериментів, відстані, умов перевезення та інших.

5.4. Для тварин, отриманих не з розплідників, встановлюються такі терміни їхнього карантину:

для мишей та щурів – 14 днів, морських свинок та кроликів – 21, собак та котів – 30, для решти тварин та птахів – 21 день.

В окремих випадках при використанні в експериментах вагітних самок, новонароджених та молодих тварин, а також у короткострокових дослідах тривалість карантину може бути скорочена за умови розміщення цих тварин у ізольованих приміщеннях та відповідного спостереження.

5.5. У період карантину за тваринами ведеться щоденне клінічне спостереження: термометрія та реєстрація загального стану тварин у спеціальному журналі.

5.6. У карантинних та експериментальних секціях тварини поміщаються у чисті, заздалегідь продезінфіковані (проавтоклавовані) клітини.

5.7. Догляд за тваринами, які перебувають у будівлі карантину, здійснюється персоналом, закріпленим за цими приміщеннями.

5.8. Забороняється виносити з карантинних приміщень до інших приміщень та секцій для експериментальних тварин корму, спецодяг та інвентар.

5.9. Протягом періоду карантину проводиться періодична зміна клітин. Після закінчення карантину клітини, що звільнилися, і інвентар передаються в дезінфекційно-мийне відділення.

Чищення та миття клітин та іншого інвентарю з карантинних секцій можуть проводитись у загальному дезінфекційно-мийному відділенні віварію тільки після попереднього знезараження. Відходи також мають знезаражуватися чи спалюватись. Методи дезінфекції, дезінсекції та режим автоклавування встановлюються у кожному конкретному випадку залежно від специфіки роботи установи.

5.10. У період адаптації або карантину тварини з підозрою на інфекційні захворювання зазнають бактеріологічного дослідження. При підтвердженні інфекційного захворювання миші, щури, хом'яки, морські свинки і кролики всієї партії, що надійшла, знищуються, а щодо собак, кішок та інших тварин терміни карантину продовжуються в залежності від встановленого захворювання.

5.11. Приміщення карантину після кожної партії переданих на експеримент тварин і після кожного випадку виявлення інфекційних захворювань зазнають ретельної дезінфекції.

5.12. У разі виникнення масових захворювань серед тварин, що спостерігалися на карантині, або при виявленні в період експериментів окремих випадків інфекційних захворювань, особливо небезпечних для лабораторних тварин та людини, у віварії проводиться комплекс профілактичних заходів. У цьому випадку проведення дослідів на тваринах тимчасово припиняється.

5.13. Після закінчення терміну карантину тварини перетворюються на експериментальні секції.

6. Режим роботи та основні правила утримання тварин

6.1. У кожному окремому приміщенні рекомендується містити тварини лише одного виду. Якщо за умовами експерименту необхідний спільний вміст лабораторних тварин різних видів в одній секції, їх слід розміщувати на різних стелажах.

6.2. На кожній клітині (боксі, вольєрі тощо) повинна бути етикетка із зазначенням даних про тварину та терміни експерименту.

6.3. Лабораторні тварини та птиці містяться в клітинах із суцільним дном на підстилці або у клітинах із сітчастим дном – підлогою. В якості підстилки застосовуються тирсу, стружка або підстилковий торф. Підстилка заздалегідь автоклавується або витримується в сухожаровій шафі (при 150 - 180 ° С 15 - 20 хв). Товщина шару підстилки у клітині 5 – 10 мм. При утриманні тварин у клітинах з сітчастим дном підстилка насипається в піддон (деко), що знаходиться під сітчастою підлогою.

6.4. Вся робота з догляду та утримання лабораторних тварин будується відповідно до розпорядку дня та регламенту робіт, затверджених керівником цієї установи. У розпорядку дня передбачається час на санітарну обробку приміщення та обладнання, роздачу кормів та проведення експериментальних робіт та маніпуляцій.

6.5. Годування лабораторних тварин здійснюється відповідно до існуючих норм.

6.6. Корми та напівфабрикати зберігаються у спеціально відведеному для цієї мети приміщенні. Видача кормів провадиться в установленому порядку.

У кормокухні віварію допускається зберігання не більше ніж двох-триденного запасу кормів. При годівлі тварин гранульованими кормами та за наявності в клітинах бункерів-годівниць дозволяється авансове отримання кормів зі складу на сім-десять днів.

6.7. Для зберігання запасу кормів на кормокухні та в коморі віварію обладнуються спеціальні ларі (металеві або оббиті зсередини бляхою). Продукти, що швидко псуються, зберігаються в холодильнику. Доставка кормів зі складу проводиться спеціально виділеним персоналом (робітниками, які не зайняті безпосередньо доглядом за тваринами).

6.8. Розподіл кормів за кімнатами-секціями проводиться спеціально виділеним для цих цілей робітником або персоналом кухні в продезінфікованому посуді (тарі), закріпленому за кожною секцією. Списання кормів здійснюється в установленому порядку відповідно до фактичної наявності тварин кожного дня.

6.9. Вхід у кормокухню персоналу, який здійснює догляд за лабораторними тваринами, та сторонніх осіб забороняється.

6.10. Постачання лабораторних тварин питною водою виробляється з водопроводу, якість води має відповідати СаНПіН 2.1.4.1074-01.

6.11. Пророщування зерна на зелену масу для підживлення лабораторних тварин проводиться у спеціально відведених для цього приміщеннях. Допускається згодовування тварин кореневої маси рослин за відсутності в ній цвілі.

6.12. Роздача кормів та напування тварин повинні здійснюватися тільки після закінчення прибирання приміщення, чищення або зміни клітин та винесення з секцій брудного обладнання, піддонів з підстилкою та інших матеріалів, що підлягають дезінфекції або утилізації.

6.13. Чищення клітин та прибирання кімнат проводиться за допомогою інвентарю, суворо закріпленого за кожною кімнатою.

6.14. При періодичній зміні клітин тварини 1 - 2 рази на тиждень пересідають у заздалегідь продезінфіковані клітини з підготовленою підстилкою, годівницями та напувалками. Брудні клітини разом з підстилкою, годівницями та напувалками передаються в дезінфекційно-мийне відділення для їх подальшої обробки.

6.15. Чищення клітин здійснюється щодня. При цьому забруднена підстилка та інші відходи з клітин збираються у спеціальні металеві бачки з кришками. Бачки щільно закриваються і передаються до дезінфекційно-мийного відділення.

6.16. При використанні клітин із сітчастим дном та ізольованими від клітин піддонами останні періодично (не рідше одного разу на тиждень) замінюються новими. Брудні піддони з підстилкою передаються в дезінфекційно-мийне відділення для їхньої подальшої обробки.

6.17. При обслуговуванні одним робітником кількох видів лабораторних тварин спочатку обробляються клітини з морськими свинками, потім клітини з мишами, пацюками та кроликами, в останню чергу – приміщення, де утримуються собаки та кішки.

6.18. Мити та дезінфікувати клітини, годівниці та напувалки безпосередньо в секціях забороняється.

6.19. Перед закінченням робочого дня в секціях проводиться вологе прибирання підлоги з використанням 1%-ного розчину хлораміну або іншої дезінфікуючої речовини. Не рідше ніж один раз на місяць проводиться санітарний день, протягом якого здійснюється прибирання всіх приміщень. Порядок проведення санітарного дня визначається завідувачем віварію.

6.20. Дезінфекція, чищення та миття клітин, годівниць, напувалок та іншого інвентарю проводиться робітниками, спеціально закріпленими за дезінфекційно-мийним відділенням. Контроль за ефективністю чищення та знезараження інвентарю покладається на ветеринарного лікаря віварію.

6.21. Умови збирання, зберігання, вивезення (або утилізації) відходів (підстилка, гній, залишки корму тощо) мають бути визначені у кожному конкретному випадку за погодженням з місцевими органами та установами Росспоживнагляду. При роботі з інфікованим матеріалом необхідно проводити знешкодження відходів за допомогою автоклавування або обробки розчинами, що дезінфікують.

6.22. У секціях з піддослідними тваринами слід проводити постійний контроль за температурно-вологісним режимом. Для контролю якості повітряного середовища у приміщеннях, де утримуються тварини, рекомендується періодично (2 – 3 рази на місяць) визначати концентрацію шкідливих газів (діоксиду та аміаку).

6.23. Передача тварин на досліди провадиться за разовими вимогами відповідно до річної заявки від лабораторій, затвердженої керівником установи. Робота з тваринами дозволяється лише у години, передбачені розпорядком дня віварію.

6.24. При виявленні у секціях хворих тварин останні з відома експериментатора знищуються або перетворюються на ізолятор. Питання про подальше використання хворих тварин вирішується протягом не більше двох діб.

6.25. Трупи тварин до патологоанатомічного розтину зберігаються у спеціальному холодильнику не більше однієї доби, після чого підлягають утилізації. Зберігання трупів тварин у клітинах та на підлозі в експериментальних секціях категорично забороняється.

6.26. Патологоанатомічне розтин тварин проводиться експериментатором. У разі загибелі тварини незалежно від експерименту на розтині є ветеринарний лікар віварію.

6.27. Кожен випадок відмінка або вимушеного забою тварин повинен бути зафіксований у спеціальному журналі.

6.28. Заборонено відвідування віварію сторонніми особами без спеціального дозволу. Співробітники установи, які виконують роботи у віварії, зобов'язані:

дотримуватись встановлених правил розпорядку дня та режиму роботи віварію;

вести систематичні спостереження за своїми експериментальними тваринами;

вести первинну документацію, своєчасно заповнюючи етикетки на клітинах із експериментальними тваринами;

відвідувати лише ті приміщення віварію, в яких знаходяться тварини, закріплені за цим працівником;

після закінчення експериментів або будь-якої іншої поточної роботи з піддослідними тваринами залишати робоче місце у належному порядку;

стежити за своєчасним списанням вийшли з досвіду, полеглих або вимушено вбитих експериментальних тварин;

повідомляти спеціалістів віварію про всі помічені випадки захворювань експериментальних тварин, а також своєчасно повідомляти фахівців віварію про передбачувані патологічні стани тварин відповідно до умов експерименту.

6.29. Співробітникам установи, які виконують роботу у віварії з експериментальними тваринами, забороняється давати будь-які вказівки робітникам щодо зміни режиму утримання та годівлі тварин без погодження з фахівцями віварію.

6.30. При проведенні співробітниками цієї установи спільних досліджень на тваринах в інших установах забороняється на цей час робота цих співробітників у (клініці) віварії свого інституту (установи).

6.31. Всі дії, які можуть заподіяти лабораторним тваринам біль (операції, тотальне знекровлення, вживлення датчиків і т.д., а також вимушений забій тварин) повинні проводитися з використанням наркотизуючих засобів. Якщо за умовами експерименту протипоказано застосування анестезії, всі вищевказані дії необхідно проводити в максимально короткий термін.

6.32. У ході проведення експерименту співробітник, який проводить цей експеримент, повинен обов'язково дотримуватися наступних правил гуманного поводження з лабораторними (експериментальними) тваринами.

У випадках, коли передбачається хірургічне втручання або проведення експерименту з болючим роздратуванням, анестезія повинна проводитися до прив'язування тварини до верстата.

Розрахунок кількості анестезуючої речовини повинен проводитись на 1 кг або 1 г маси тварини. Назву речовини та її кількість необхідно фіксувати у протоколі досвіду, а й у спеціальній карті.

У ході експерименту, коли він виявляється тривалішим, ніж розраховувалося спочатку, обов'язково проводиться додаткове введення анестезуючих речовин.

Якщо гострий досвід повинен закінчитися загибеллю тварини, то експериментатор зобов'язаний умертвити тварину до закінчення дії речовини, що анестезує.

Після закінчення хірургічного втручання тварина має бути перенесена до післяопераційного приміщення на спеціальних ношах, що виключають можливість зміщення тканин, розходження швів тощо.

Експериментатор повинен передбачити можливість появи больових відчуттів у тварини у післяопераційному періоді та призначити знеболювальні препарати.

7. Штатна чисельність обслуговуючого персоналу віварію

7.1. Штатна чисельність обслуговуючого персоналу віварію визначається залежно від обсягу та характеру експериментальних досліджень, а також від кількості лабораторних тварин. При цьому необхідно виходити з наступних норм навантаження тварин одного виду на одного робітника з догляду (з урахуванням норм розміщення тварин у клітинах).

Вид тварин
	тварин
Морські свинки

При обслуговуванні однією людиною тварин кількох видів розрахунок проводиться, виходячи з наведених вище норм. У кожному конкретному випадку при встановленні норм навантаження по догляду за тваринами на одного робітника необхідно враховувати тип клітин, ступінь механізації виробничих процесів, тип годівлі (натуральні корми або гранульовані), періодичність, характер та особливості досліджень, що проводяться і т.д.

7.2. При роботі з радіоактивними речовинами або особливо небезпечними інфекціями, а також при утриманні видів тварин, які не вказані в табл. , норми обслуговування встановлюються керівником наукової установи на основі хронометражу окремих операцій та з урахуванням чинних нормативів з обслуговування сільськогосподарських тварин.

8. Правила особистої гігієни працівників віварію

8.1. Персонал віварію має бути забезпечений спецодягом, спецвзуттям, милом та рушниками відповідно до чинних нормативів.

8.2. У кімнатах з тваринами, годівниці, дезінфекційно-мийному відділенні необхідно мати дезінфікуючі розчини для знезараження рук.

8.3. Персонал віварію зобов'язаний:

перед початком роботи зняти верхній одяг, взуття, одягти спецодяг, спецвзуття;

після закінчення роботи (бажано і до початку роботи) пройти обробку в санітарному блоці (прийняти душ або ванну);

вішати домашній одяг та спецодяг лише у різних відділеннях індивідуальної шафи;

періодично (але не рідше одного разу на місяць) дезінфікувати свої індивідуальні шафи;

після закінчення кожного окремого етапу роботи відповідно до розпорядку дня, а також перед їдою обов'язково мити та дезінфікувати руки.

8.4. У виробничих приміщеннях віварію категорично забороняється приймати їжу та палити.

8.5. Знову прийняті на роботу з лабораторними тваринами особи повинні пройти медичне обстеження, що включає дослідження на наявність збудників туберкульозу і всієї групи кишкових інфекцій. Наступні обстеження проводяться не рідше одного разу на рік. Хворі на туберкульоз, венеричні, шкірні та інші заразні захворювання до роботи у віварії не допускаються.

8.6. При проведенні на тваринних експериментів з інфекційними збудниками, небезпечними для людей, обслуговуючий персонал віварію зазнає профілактичної імунізації.

Велика рогата худоба

Тварини приборкують шляхом здавлювання носової перегородки пальцями, щипцями Гармса, Миколаєва, носовими кільцями або обмежують рухи, утримуючи його за роги за допомогою мотузки, за шию, голову та другу петлю навколо носа. Задні кінцівки фіксують мотузковою петлею, яку накладають на обидві кінцівки трохи вище за скакальні суглоби. При розчищенні та обрізанні копит на тазові кінцівки тварин можна накласти закрутку на гомілку.

Биків фіксують за допомогою носових кілець та міцного ременя-нашийника з ланцюгом.

Биків-виробників незалежно від їх характеру доставляють на обстеження лише на недоуздке і обов'язково застосовують палицю-водило (карабін) завдовжки близько 2 м, яку причіплюють за носове кільце, що попереджає раптовий напад тварини на людину.

Телят утримують руками за шию, вуха або за допомогою шийної глухої петлі зі спеціальним вузлом і прив'язують мотузкою до стійки.

Тварин фіксують у стоячому положенні шляхом захоплення верхньої щелепи металевим тросом та ручкотримачем або у верстаті нескладної конструкції.

Відгодівельний молодняк та підсвинків зручно утримувати щипцями, запропонованими К.П. Соловйовим. При роботі з кнурами, старими килимками і свиноматками, що годують, особливо фіксованими в верстатах, потрібна обережність.

Кози та вівці

Тварин утримують за роги чи шию. У необхідних випадках фіксують у лежачому положенні на столі.

Коней фіксують так, щоб вони не могли вдарити передніми та задніми кінцівками, вкусити. До коней слід підходити трохи збоку, у напрямку плеча і лопатки, краще з лівого боку, оскільки кінь звикає до цього в процесі експлуатації. Підходять до голови, лівою рукою беруть за недоуздок, вуздечку чи гриву, а правою - погладжують і поплескують по шиї, холці, потім по лопатці та плечі. Якщо тварина міститься без прив'язі в деннику, то її слід гукнути, щоб привернути увагу до себе, покликати, вимовляючи лагідні слова. Необхідно, щоб кінь обов'язково став головою до людини.

До тварини, що знаходиться в верстаті або на конов'язі, слід підходити не ззаду, а трохи збоку з того боку, куди вона дивиться.

При термометрії, ректальному дослідженні, проведенні різних лікувальних маніпуляцій з метою забезпечення безпеки роботи ветеринарного спеціаліста необхідно підняти грудну кінцівку з того боку, з якої маніпулює фахівець, або накласти путки на одну або обидві задні кінцівки.

Грудну кінцівку фіксують, піднявши за щітку або путову частину і зігнувши у зап'ястковому суглобі. При цьому встають збоку від тварини спиною до її голови. Підняту кінцівку утримують двома руками, а при тривалих маніпуляціях – за допомогою путки чи мотузки, перекинутої через спину. Не можна класти підняту кінцівку тварини на своє коліно, тому що у тварини з'являється четверта точка опори, що є небезпечним для людини. Не слід прив'язувати мотузку до будь-якого предмета або обмотувати навколо тулуба тварини, оскільки при несподіваному падінні кінь не зможе швидко звільнити кінцівку. Під час обстеження задніх частин тіла фіксують тазову кінцівку. Вставши у крупа коня обличчям до хвоста, однією рукою спираються в маклок, а іншою легко поплескують по нозі зверху вниз, піднімають її, застібають путовий ремінь або надягають мотузкову петлю, яку потім пропускають між передніми кінцівками, обводять навколо шиї і зав'язують нестягається. При дослідженні норовливих і приборкання неспокійних коней застосовують закрутки і губні кліщі. Щоб накласти закрутку, треба ввести кисть руки в петлю закрутки. Захопити верхню губу, відтягнути вперед, лівою рукою перемістити петлю закрутки на губу і туго закрутити. Тварин можна надійно фіксувати у спеціальних верстатах. У верстаті кінь рекомендується прив'язувати на розтяжку, а непокірній тварині, щоб вона не завалилася, під живіт підвести ремені.

Верблюди

Верблюди доставляються для досліджень недоуздці. Підходити до верблюдів треба обережно, краще збоку (з боку грудних кінцівок). Способи приборкання цих тварин такі ж, як великої рогатої худоби та коней. Слід зважати на специфічні особливості поведінки цих тварин. Бажано, щоб для фіксації верблюдів залучався персонал, який постійно доглядає їх.

Птах фіксують, утримуючи в природному положенні за кінцівки та крила, не здавлюючи грудну клітину, щоб уникнути ядухи. При роботі з водоплавними (гуси, качки) потрібно утримувати голову, щоб уникнути удару в око, а маніпуляції проводити на відстані витягнутих рук.

Пухові звірі

Звірів утримують спеціальними щипцями або руками у брезентових (з ватною підкладкою) рукавицях. Кладають на стіл і тримають однією рукою за шию, іншою – за тулуб. Ротову порожнину можна розкрити за допомогою позівників конструкції В.Л. Берестова, рекомендується використовувати спеціальні намордники. Можна фіксувати тварин у сітчастих пастках, застосовувати аналгетичну або транквілізуючі засоби з місцево-анестезуючими речовинами, а також засіб для наркозу.

За допомогою господаря на тварин надягають намордник або зав'язують їм ротову порожнину міцною тасьмою. З цією метою на щелепи зверху накладають тасьму, зав'язують простим вузлом під нижньою щелепою, потім остаточно закріплюють на потилиці морським вузлом. При підозрі на сказ, а також злих і неспокійних собак краще помістити в спеціальну металеву клітину, одна сторона якої пересувається та затискає її. Для фіксації собак у лежачому положенні використовують операційний стіл для дрібних тварин, що дозволяє надати їм будь-яке зручне для роботи положення.

При хворобливих маніпуляціях тварин фіксують у спеціальному рукаві матерчатому або обгортають рушником, залишаючи вільною частину тіла, що підлягає дослідженню. Морду можна зав'язати, як собаці, а ноги зафіксувати руками, одягнувши шкіряні або гумові рукавички.

. СНиП 23.05-95. Природне та штучне освітлення.

. ОСН-АПК 2.10.24.001-04. Галузеві норми висвітлення сільськогосподарських підприємств, будівель та споруд.

. СНіП 2.04.01-85 *. Внутрішній водопровід та каналізація будівель.

. СаНПіН 2.1.4.1074-01. Питна вода. Гігієнічні вимоги щодо якості води централізованих систем питного водопостачання. Контроль якості.

2019-01-10T13:50:20+03:00

Кроликів, щурів, собак, кішок використовують в експериментах науково-дослідних інститутів та інших організацій протягом десятиліть. Вони живуть у віваріях – спеціальних приміщеннях для утримання лабораторних тварин. До цих приміщень та догляду за самими тваринами висувають особливі вимоги – адже для збереження ідеального здоров'я тварин найчастіше залежить чистота експерименту.

Правила утримання лабораторних тварин залежать від особливостей виду та підвиду тварини, у ряді випадків – її породи, розміру, фізіологічних особливостей (якщо йдеться про собак). Їх забезпечують усім необхідним: простором, сонячним світлом, свіжим повітрям, кормом та водою. Особливі (загальні всім тварин) вимоги пред'являють до приміщення, де вони будуть – віварію.

Віварій повинен бути у сухому місці, на височині. Низини, підвали та інші приміщення, що спочатку непристосовані до утримання тварин, використовувати не можна.

Поруч із віварієм має знаходитися земельна ділянка, захищена від вітру. Для цього по периметру будують глухий паркан. Біля входу в будівлю будують вольєри або ставлять клітки. За потреби над ними встановлюють навіс.

Сам віварій ділять на дві частини. У першій розміщують самих тварин. У другій мають у своєму розпорядженні підсобні приміщення.

Як розміщують тварин?

За межами будівлі можна тримати кроликів та собак. Перших поміщають у клітини, других – у вольєри на прибудинковій території.

Основну частину будівлі ділять на приміщення, у кожному з яких можуть містити лише один вид тварин. Наприклад, одну кімнату облаштують для собак, другу – для мавп, третю – для котів. Гризунів (великих білих щурів, хом'яків, морських свинок) різних видів можна тримати в одному приміщенні через їх розмір.

Навіщо потрібні підсобні приміщення?

• Кухня та комора. У коморі тримають корми, а в кухні, що знаходиться поряд, готують.
• Кімната для персоналу. Тут співробітники віварію перевдягаються, залишають повсякденні речі та зберігають спецодяг та спецвзуття. До кімнати має примикати душ.
• Карантин. Це перше приміщення, куди поміщають тварину, коли її лише привезли у віварій. Тут його перевіряють на інфекційні захворювання. Після карантину його відправляють у основну частину будівлі.
• Ізолятор. В ізолятор поміщають хворих з основної частини віварію.
• Клініка. Це кімната, куди відвозять тварин після хіругічних втручань та експериментів. Тут їх тримають доти, доки вони не прийдуть у норму.
• Секційна. Це приміщення для зберігання трупів, які сюди переносять померлих тварин. Тут же виробляють розтин.
• Приміщення для миття інвентарю, клітин та спецодягу. Тут має бути все для дезінфекції обладнання.
• КрематорійСпеціальне приміщення для утилізації трупів. Устаткується піччю та відповідним інвентарем.
• Приміщення для миття тварин. Зміст тварин у чистоті – одне з неодмінних умов роботи з лабораторними тваринами.

У всіх кімнатах, де тимчасово чи постійно перебувають піддослідні, мають бути вольєри чи клітини. Тут створюють умови для нормального утримання лабораторних тварин.

Технічні вимоги до віварію

Вміст лабораторних тварин у віваріях потенційно небезпечний для прилеглих територій та людей, які знаходяться на ній. Померлі чи хворі кролики, собаки, кішки можуть стати джерелом інфекції. А якщо в лабораторії випробовують вакцини або інші препарати проти інфекційних захворювань, то про безпеку слід подбати подвійно.

Зокрема, у віварії мають бути водонепроникні підлоги. При їх виготовленні роблять невеликий ухил - так, щоб вода стікала в каналізаційну систему. Підлоги можуть бути виготовлені із застосуванням бетону, асфальту, пластику, плитки. Стіни також обробляють матеріалом, стійким до вологи та інших рідин: масляною фарбою, пластиковими панелями, плиткою.

Інженерні системи:

• Система каналізації віварію має бути відокремлена від загальної. Стічні води перед тим, як потрапити до загальної системи, знезаражуються. У системі також мають бути передбачені широкі стоки.
• Вентиляція, згідно з правилами утримання лабораторних тварин, має бути представлена ​​двома системами – природною та припливно-витяжною.
• У будівлі влаштовують центральне опалення, яке забезпечує температуру від +12 до +18 градусів за Цельсієм.

Спеціальні приміщення для утримання лабораторних тварин

Крім перерахованих вище приміщень у віварії можуть бути додаткові кімнати, де утримують тварин з небезпечними інфекційними захворюваннями та радіоактивним зараженням. Вони мають бути ізольовані від інших приміщень та мати холодильник. Зазвичай до них примикають операційні.

Собаки, кішки, гризуни та їх зміст

Як ми вже уточнювали, різні види тварин потребують свого підходу до змісту та раціону. Розкажемо про основні вимоги до утримання кішок, собак та гризунів.

Собаки

Мінімальний розмір клітини – 1,5 на 1,2 метра, підлогу у ній утеплюють, роблять із невеликим ухилом. Її регулярно миють та дезінфікують, а самих тварин – купають.

У ряді випадків собак "обеззвучують": проводять операцію на голосових зв'язках під місцевою анестезією та морфіном. Це знижує рівень шуму у віварії з великою кількістю собак, але робить їх непридатними до складних експериментів: після операції у тварин може розвинутись дихальна недостатність.

Кішки

Кішки погано переносять вміст у клітинах, тому їх поміщають у цілі кімнати. По них тварини можуть вільно гуляти. У приміщенні має бути тепло та світло, не душно. На стінах встановлюють полиці, на яких кішки можуть сидіти. На підлозі ставлять ящик із наповнювачем – котячий туалет. Туалет очищають регулярно, видаляють запах за допомогою хімічних засобів.

Спільний вміст кішок та котів допустимо після кастрації. Перед тим, як ставити експерименти, тварин деякий час тримають у лабораторії – поки що не звикнуть.

Гризуни та кролики

Дрібних тварин – від кроликів та великого білого щура до мишей – можна тримати в одному приміщенні, навіть якщо вони належать до різних видів. Їх поміщають у клітини, клітини встановлюють на стелажі – 30-50 см від стін та 50-70 см від підлоги. Передбачають прохід між стелажами – завширшки від 1 метра.

Клітини підбирають за розмірами та кількістю тварин. Виготовляють їх із сталі, жерсті, пластику. Важливо, щоб матеріал був досить міцним. Тут ставлять напувалку та годівницю, на стінці встановлюють табличку з інформацією про тварин.

Кроликів та морських свинок можна тримати як у приміщенні, так і за його межами. На свіжому повітрі та сонці виростають міцніші та здоровіші тварини.