सेल संस्कृती राखण्यासाठी पद्धती. सेल संस्कृती
तयारी तंत्रावर अवलंबून, सेल संस्कृतींचे वर्गीकरण केले जाते:
- एकल-स्तर- पेशी रासायनिक तटस्थ काचेच्या किंवा प्लास्टिकच्या पृष्ठभागावर जोडण्यास आणि गुणाकार करण्यास सक्षम आहेत.
- निलंबन- जेव्हा ते मिसळले जाते तेव्हा पेशी पोषक माध्यमाच्या संपूर्ण व्हॉल्यूममध्ये गुणाकार करतात.
- अवयव- अवयव आणि ऊतींचे संपूर्ण तुकडे जे त्यांची मूळ रचना शरीराबाहेर ठेवतात (मर्यादित वापर).
सर्वात व्यापक आहेत मोनोलेयर सेल संस्कृती, जे व्यवहार्य पिढ्यांच्या संख्येवर अवलंबून विभागले जाऊ शकते
1) प्राथमिक (प्रामुख्याने ट्रिप्सिनाइज्ड),
२) अर्ध लिनेन (डिप्लोइड)
3) प्रत्यारोपण करण्यायोग्य.
उत्पत्तीनेत्यांचे वर्गीकरण भ्रूण, ट्यूमर आणि प्रौढ जीवांमध्ये केले जाते.
मॉर्फोजेनेसिसद्वारे- फायब्रोब्लास्टिक, एपिथेलियल इ.
प्राथमिकसेल कल्चर्स हे कोणत्याही मानवी किंवा प्राण्यांच्या ऊतींचे पेशी असतात ज्यांना विशेष पोषक माध्यमाने लेपित प्लास्टिक किंवा काचेच्या पृष्ठभागावर मोनोलेयरच्या स्वरूपात वाढण्याची क्षमता असते. अशा पिकांचे आयुर्मान मर्यादित असते. प्रत्येक विशिष्ट प्रकरणात, ते मेकॅनिकल ग्राइंडिंग, प्रोटीओलाइटिक एन्झाईम्ससह उपचार आणि पेशींच्या संख्येचे मानकीकरण केल्यानंतर ऊतकांमधून मिळवले जातात. माकडांच्या किडनी, मानवी भ्रूण मूत्रपिंड, मानवी अम्निअन आणि चिकन भ्रूण यापासून मिळणाऱ्या प्राथमिक संस्कृतींचा मोठ्या प्रमाणावर विषाणू अलग ठेवण्यासाठी आणि जमा करण्यासाठी तसेच विषाणूजन्य लसींच्या निर्मितीसाठी केला जातो.
अर्ध-लेदर(किंवा द्विगुणित ) सेल कल्चर्स - समान प्रकारच्या पेशी, गुणसूत्रांचा मूळ डिप्लोइड संच राखून, विट्रोमध्ये 50-100 पॅसेजेसपर्यंत टिकून राहण्यास सक्षम. मानवी भ्रूण फायब्रोब्लास्ट्सच्या डिप्लोइड स्ट्रेनचा वापर व्हायरल इन्फेक्शन्सच्या निदानासाठी आणि विषाणूजन्य लसींच्या निर्मितीसाठी केला जातो. बर्याचदा, मानवी भ्रूण (WI-38, MRC-5, IMR-9), गायी, डुक्कर, मेंढ्या इत्यादींपासून फायब्रोब्लास्ट्सची संस्कृती वापरली जाते.
सततसेल लाईन्स संभाव्य अमरत्व आणि हेटरोप्लॉइड कॅरिओटाइप द्वारे दर्शविले जातात. सतत रेषांचा स्त्रोत प्राथमिक सेल संस्कृती असू शकतो(उदाहरणार्थ, एसओसी - सायनामोबस माकडाचे हृदय, पीईएस - डुक्कर भ्रूणाचे मूत्रपिंड, बीएनके -21 - एक दिवसाच्या सीरियन हॅमस्टरच्या मूत्रपिंडातून; पीएमएस - गिनी पिगच्या मूत्रपिंडातून, वेरो - हिरव्या माकडाचे मूत्रपिंड, इ.) वैयक्तिक पेशी ज्यामध्ये विट्रोमध्ये अंतहीन पुनरुत्पादनाची प्रवृत्ती दिसून येते. पेशींमधून अशी वैशिष्ट्ये दिसू लागणाऱ्या बदलांच्या संचाला ट्रान्सफॉर्मेशन म्हणतात आणि सतत टिश्यू कल्चरच्या पेशींना ट्रान्सफॉर्म्ड म्हणतात. सतत सेल लाईन्सचा आणखी एक स्रोत आहे घातक निओप्लाझम. या प्रकरणात, सेल ट्रान्सफॉर्मेशन व्हिवोमध्ये होते. प्रत्यारोपित पेशींच्या खालील ओळी बहुतेक वेळा व्हायरोलॉजिकल प्रॅक्टिसमध्ये वापरल्या जातात: HeLa - गर्भाशयाच्या ग्रीवेच्या कार्सिनोमापासून प्राप्त; Ner-2 - स्वरयंत्रातील कार्सिनोमा पासून; डेट्रॉईट -6 - फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या मेटास्टॅसिसपासून अस्थिमज्जापर्यंत; आरएच - मानवी मूत्रपिंडातून, केबी - ओरल कॅव्हिटी कार्सिनोमा, आरडी - मानवी रॅबडोमायोसारकोमा.
अवयव संस्कृती- निर्जंतुकीकरण परिस्थितीत तयार केलेले प्राण्यांच्या अवयवांचे विभाग आहेत, जे विशिष्ट कालावधीसाठी (दिवस, आठवडे) विशेष लागवडीच्या परिस्थितीत त्यांची महत्त्वपूर्ण कार्ये टिकवून ठेवतात.
पेशी संस्कृती -सतत पर्यावरणीय परिस्थितीत वाढणाऱ्या पेशींची ही जनुकीयदृष्ट्या एकसंध लोकसंख्या आहे. हे सामान्य मानव, प्राणी, वनस्पती किंवा घातक ट्यूमर पेशींचे ताण असू शकतात.
लागवडीची परिस्थिती
पेशी सामान्यत: काचेच्या भांड्यांमध्ये ठेवल्या जातात, म्हणून हे नाव इन विट्रो स्टडीज (लॅटिनमधून इन - इन, विट्रो - ग्लास) असे आहे, जरी आता संस्कृती अधिक वेळा प्लास्टिकच्या भांड्यांमध्ये वाढली आहे. ऊतींपासून वेगळे केलेल्या पेशी 38 ° C + 39 ° C (प्राणी आणि मानवी जीवांच्या पेशींसाठी) तापमानात आणि 22 ° C + 28 ° C (वनस्पती पेशींसाठी) योग्य रचनेच्या पोषक माध्यमात उष्मायन केल्या जातात. पेशी नंतर निलंबन किंवा मोनोलेयर म्हणून वाढतात. सस्पेंशन कल्चर म्हणजे वैयक्तिक पेशी किंवा त्यांच्या लहान गटांची निलंबनात द्रव पोषक माध्यमात त्यांची वायुवीजन आणि मिश्रण सुनिश्चित करणारी उपकरणे वापरून लागवड करणे. निलंबन संस्कृतींचे वैशिष्ट्यपूर्ण वैशिष्ट्य म्हणजे त्यांची मॉर्फोलॉजिकल आणि बायोकेमिकल विषमता. सेल लोकसंख्येमध्ये पेशी असतात ज्या आकार आणि आकारात भिन्न असतात.
अर्ज
सायटोलॉजी मध्ये अर्ज
सायटोलॉजीमध्ये, ही पद्धत सोयीस्कर आहे कारण संस्कृतीतील पेशी विविध जैवरासायनिक हाताळणीसाठी सहज उपलब्ध आहेत. त्यांच्याबरोबर काम करताना, आवश्यक वेळेसाठी आवश्यक एकाग्रतेमध्ये किरणोत्सर्गी पदार्थ, विष, हार्मोन्स इत्यादींचा परिचय करून दिला जाऊ शकतो. या पदार्थांचे प्रमाण प्राण्यांवरील प्रयोगांपेक्षा कमी प्रमाणात असू शकते. पदार्थ यकृताद्वारे चयापचय केला जाईल, मूत्रपिंडांद्वारे उत्सर्जित होईल किंवा स्नायूंमध्ये जमा होईल असा कोणताही धोका नाही. हे सेलवरील पदार्थाच्या क्रियेच्या दरासाठी किंवा सेलद्वारे त्याचे शोषण करण्यासाठी वास्तविक मूल्ये प्रदान करते.
जिवंत वनस्पती पेशींचा अभ्यास करण्यासाठी, वेगळ्या प्रोटोप्लास्टची संस्कृती वापरली जाते. पृथक प्रोटोप्लास्ट्सची व्याख्या "नग्न" वनस्पती पेशी म्हणून केली जाऊ शकते कारण सेलची भिंत यांत्रिक किंवा एन्झाइमॅटिक पद्धतीने काढली जाते. पृथक प्रोटोप्लास्ट्सच्या प्रणालीमुळे सेल्युलर स्तरावर निवड करणे, मोठ्या संख्येने वैयक्तिक पेशींसह लहान प्रमाणात कार्य करणे, थेट जनुक हस्तांतरणाद्वारे वनस्पतींचे नवीन रूप प्राप्त करणे आणि प्रजातींमध्ये सोमाटिक संकर प्राप्त करणे शक्य होते. पद्धतशीरपणे दूर. पृथक् प्रोटोप्लास्टमध्ये सेल झिल्लीचे पुनरुत्पादन त्वरित सुरू होत असल्याने, सेल्युलोज मायक्रोफायब्रिल्सच्या निर्मितीचा अभ्यास करण्यासाठी ते एक सोयीस्कर वस्तू आहेत.
व्हायरोलॉजी मध्ये अर्ज
व्हायरोलॉजीमध्ये, सेल कल्चर्सचा वापर मोठ्या प्रमाणावर केला जातो कारण ते प्रयोगशाळेत काम करणे तुलनेने सोपे आहे, इतर पद्धतींप्रमाणे - चिकन भ्रूण किंवा जिवंत प्राण्यांमध्ये वाढणारे विषाणू. याव्यतिरिक्त, सेल कल्चरच्या मोनोलेयरवर, व्हायरसच्या सायटोपॅथिक प्रभावाचा अभ्यास इंट्रासेल्युलर समावेश, प्लेक्स, हेमाडसोर्प्शन आणि हेमॅग्लुटिनेशन प्रतिक्रियांमध्ये आणि रंगाच्या विघटनाद्वारे केला जाऊ शकतो. सेल संस्कृतींसह कार्य करताना, थोड्या संख्येने संस्कृतींसह कार्य करून महत्त्वपूर्ण परिणाम मिळू शकतात. विशिष्ट वस्तुस्थितीची पुष्टी करण्यासाठी शेकडो किंवा हजारो प्रयोगशाळेतील प्राण्यांची आवश्यकता असते असे प्रयोग समान संख्येच्या पेशी संस्कृतींवर समान सांख्यिकीय विश्वासार्हतेसह केले जाऊ शकतात. अशा प्रकारे, प्रयोगशाळेत व्हिव्हरियम ठेवण्याची गरज नाही आणि आजारी प्राण्यांना हाताळण्यासाठी कोणतेही नैतिक पैलू नाहीत.
व्हायरसद्वारे पेशींच्या परिवर्तनाचा देखील अभ्यास केला जात आहे, ज्याची यंत्रणा घातक ट्यूमरच्या घटनेच्या यंत्रणेसारखीच आहे.
फार्माकोलॉजी मध्ये अर्ज
सेल कल्चर्सचा वापर मोठ्या प्रमाणावर पदार्थांच्या प्रभावाची चाचणी करण्यासाठी केला जातो ज्याचा वापर औषधे म्हणून केला जाऊ शकतो. सेल कल्चर्सवर मिळालेले परिणाम संपूर्ण शरीरात एक्स्ट्रापोलेट केले जाऊ शकत नाहीत हे तथ्य असूनही, जर एखाद्या विशिष्ट पदार्थाने अनेक भिन्न संस्कृतीच्या ओळींमधून पेशींच्या क्रियाकलापांमध्ये व्यत्यय आणला तर, जेव्हा हा पदार्थ सादर केला जातो तेव्हा नकारात्मक परिणामाची अपेक्षा केली पाहिजे. शरीरात.
जैवतंत्रज्ञान मध्ये अर्ज
विशिष्ट सेल संस्कृती हार्मोन्स आणि इतर जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थांचे मौल्यवान स्त्रोत आहेत. ते आधीच अँटीव्हायरल प्रोटीन इंटरफेरॉन तयार करण्यासाठी वापरले जात आहेत.
अनुवांशिकता मध्ये अर्ज
अनुवांशिकतेमध्ये, पेशींची संस्कृती वाढण्याची क्षमता खालील भागात वापरली जाते:
- क्लोनिंग
- सेल स्टोरेज
- उत्परिवर्ती पेशी मिळवणे आणि त्यांच्याबरोबर कार्य करणे
सेल कल्चरचे प्रकार
1. प्राथमिक ट्रिप्सिनायझेशन - ट्रिप्सिन किंवा इतर एन्झाईम्सच्या सहाय्याने चिरडलेल्या मानवी आणि प्राण्यांच्या ऊतींमधून प्राप्त केले जाते. ते फक्त 5-10 विभाग (पॅसेज) सहन करू शकतात.
2. प्रत्यारोपण करण्यायोग्य - पेशी ज्यांनी अमर्यादपणे पुनरुत्पादन करण्याची क्षमता प्राप्त केली आहे, कारण ते मानवी आणि प्राण्यांच्या ट्यूमरचे व्युत्पन्न आहेत.
3. नेपिव्रेस्प्ल्युवानी (डिप्लोइड) - क्रोमोसोम्सचा मूळ डिप्लोइड संच राखून, 100 पर्यंत परिच्छेद सहन करू शकतो.
सर्वात सामान्य सेल लाइन
| सेल लाइन | संक्षेप डीकोडिंग | जीव | कापड | मॉर्फोलॉजी | नोट्स आणि लिंक्स | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 293-टी | मानव | मूत्रपिंड (भ्रूण) | HEK-293 ECACC वरून व्युत्पन्न | |||
| 3T3 पेशी | "3-दिवसीय हस्तांतरण, इनोकुलम 3 x 105 पेशी" | उंदीर | भ्रूण फायब्रोब्लास्ट्स | NIH 3T3 ECACC म्हणूनही ओळखले जाते | ||
| 721 | मानव | मेलेनोमा | ||||
| 9L | उंदीर | ग्लिओब्लास्टोमा | ||||
| A2780 | मानव | अंडाशय | गर्भाशयाचा कर्करोग | ECACC | ||
| A2780ADR | मानव | अंडाशय | A2780 डेरिव्हेटिव्ह अॅड्रियामायसिन रेझिस्टन्ससह | ECACC | ||
| A2780cis | मानव | अंडाशय | A2780 व्युत्पन्न सिस्प्लेटिन प्रतिरोधासह | ECACC | ||
| A172 | मानव | ग्लिओब्लास्टोमा | घातक ग्लिओमा | ECACC | ||
| A431 | मानव | त्वचा उपकला | स्क्वॅमस सेल कार्सिनोमा | ECACCCell लाइन डेटा बेस | ||
| A-549 | मानव | फुफ्फुसाचा कार्सिनोमा | उपकला | DSMZECACC | ||
| B35 | उंदीर | न्यूरोब्लास्टोमा | ATCC | |||
| BCP-1 | मानव | परिधीय ल्यूकोसाइट्स | एचआयव्ही + लिम्फोमा | ATCC | ||
| BEAS-2B | ब्रोन्कियल एपिथेलियम + एडिनोव्हायरस 12-SV40 व्हायरस हायब्रिड (Ad12SV40) | मानव | फुफ्फुसे | उपकला | ATCC | |
| bEnd.3 | मेंदू एंडोथेलियल | उंदीर | कॉर्टेक्स | एंडोथेलियम | ATCC | |
| BHK-21 | "बेबी हॅम्स्टर किडनी" | हॅमस्टर | कळी | फायब्रोब्लास्ट | ECACCOlympus | |
| BR 293 | मानव | स्तन | कर्करोग | |||
| BxPC3 | पॅनक्रियाटिक कार्सिनोमा लाइन 3 चे बायोप्सी झेनोग्राफ | मानव | स्वादुपिंड एडेनोकार्सिनोमा | उपकला | ATCC | |
| C3H-10T1/2 | उंदीर | भ्रूण mesenchymal पेशी | ECACC | |||
| C6/36 | डास | लार्व्हा ऊतक | ECACC | |||
| सीएचओ | चीनी हॅमस्टर अंडाशय | क्रिसिटुलस ग्रिसियस | अंडाशय | उपकला | ECACCICLC | |
| COR-L23 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| COR-L23/CPR | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| COR-L23/5010 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| COR-L23/R23 | मानव | फुफ्फुसे | उपकला | ECACC | ||
| COS-7 | Cercopithecus aethiops, मूळ-दोषयुक्त SV-40 | माकड Cercopithecus aethiops | कळी | फायब्रोब्लास्ट | ECACCATCC | |
| CML T1 | क्रॉनिक मायलॉड ल्युकेमिया टी-लिम्फोसाइट 1 | मानव | क्रॉनिक मायलॉइड ल्युकेमिया | टी सेल ल्युकेमिया | रक्त | |
| CMT | कुत्र्याच्या स्तनाचा ट्यूमर | कुत्रा | स्तन | उपकला | ||
| D17 | कुत्रा | osteosarcoma | ECACC | |||
| DH82 | कुत्रा | हिस्टिओसाइटोसिस | मोनोसाइट्स/मॅक्रोफेज | ECACC | ||
| DU145 | मानव | कार्सिनोमा | प्रोस्टेट | |||
| DuCaP | प्रोस्टेटचा ड्युरा मॅटर कर्करोग | मानव | उपकला | 11317521 | ||
| EL4 | उंदीर | टी सेल ल्युकेमिया | ECACC | |||
| EMT6/AR1 | उंदीर | स्तन | उपकला | ECACC | ||
| EMT6/AR10.0 | उंदीर | स्तन | उपकला | ECACC | ||
| FM3 | मानव | लिम्फ नोडमध्ये मेटास्टेसेस | मेलेनोमा | |||
| H1299 | मानव | फुफ्फुसे | कर्करोग | |||
| H69 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| HB54 | हायब्रिडोमा | हायब्रिडोमा | L243 mAb (एंटी-एचएलए-डीआर) स्रावित करते | मानवी इम्युनोलॉजी | ||
| HB55 | हायब्रिडोमा | हायब्रिडोमा | MA2.1 mAb (HLA-A2 आणि HLA-B17 विरुद्ध) स्रावित करते | जर्नल ऑफ इम्युनोलॉजी | ||
| HCA2 | मानव | फायब्रोब्लास्ट | जनरल व्हायरोलॉजी जर्नल | |||
| HEK-293 | मानवी भ्रूण मूत्रपिंड | मानव | मूत्रपिंड (भ्रूण) | उपकला | ATCC | |
| हेला | Henrietta अभाव | मानव | गर्भाशयाच्या ग्रीवेचा कर्करोग | उपकला | DSMZECACC | |
| Hepa1c1c7 | क्लोन 1 हेपेटोमा लाइन 1 चा क्लोन 7 | उंदीर | हिपॅटोमा | उपकला | ECACC | |
| HL-60 | मानवी रक्ताचा कर्करोग | मानव | मायलोब्लास्ट | रक्त पेशी | ECACCDSMZ | |
| HMEC | मानवी स्तनधारी उपकला पेशी | मानव | उपकला | ECACC | ||
| HT-29 | मानव | कोलन एपिथेलियम | एडेनोकार्सिनोमा | ECACC सेल लाइन डेटा बेस |
||
| जुर्कट | मानव | टी सेल ल्युकेमिया | पांढऱ्या रक्त पेशी | ECACC | ||
| जे.वाय | मानव | लिम्फोब्लास्ट | B पेशी EBV द्वारे अमर आहेत | |||
| K562 | मानव | लिम्फोब्लास्ट | ECACC | |||
| Ku812 | मानव | लिम्फोब्लास्ट | erythroleukemia | ECACC | ||
| KCL22 | मानव | लिम्फोब्लास्ट | क्रॉनिक मायलॉइड ल्युकेमिया | |||
| KYO1 | क्योटो १ | मानव | लिम्फोब्लास्ट | क्रॉनिक मायलॉइड ल्युकेमिया | DSMZ | |
| LNCap | प्रोस्टेटचा लिम्फ नोड कर्करोग | मानव | प्रोस्टेट एडेनोकार्सिनोमा | उपकला | ECACCATCC | |
| मा-मेल १, २, ३….४८ | मानव | मेलेनोमा सेल लाइन्स | ||||
| MC-38 | उंदीर | एडेनोकार्सिनोमा | ||||
| MCF-7 | मिशिगन कॅन्सर फाउंडेशन-7 | मानव | स्तन | स्तनाचा आक्रमक डक्टल कार्सिनोमा | ER+, PR+ | |
| MCF-10A | मिशिगन कर्करोग फाउंडेशन | मानव | स्तन | उपकला | ATCC | |
| MDA-MB-231 | मानव | स्तन | कर्करोग | ECACC | ||
| MDA-MB-468 | एमडी अँडरसन - मेटास्टॅटिक स्तन | मानव | स्तन | कर्करोग | ECACC | |
| MDA-MB-435 | एमडी अँडरसन - मेटास्टॅटिक स्तन | मानव | स्तन | मेलेनोमा किंवा कार्सिनोमा (एकमत नाही) | केंब्रिज पॅथॉलॉजी ECACC | |
| MDCK II | मदन डार्बी कुत्र्याचे मूत्रपिंड | कुत्रा | कळी | उपकला | ECACC ATCC | |
| MOR/0.2R | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| NCI-H69/CPR | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| NCI-H69/LX10 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| NCI-H69/LX20 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| NCI-H69/LX4 | मानव | फुफ्फुसे | ECACC | |||
| NIH-3T3 | नॅशनल इन्स्टिट्यूट ऑफ हेल्थ, 3-दिवस हस्तांतरण, इनोकुलम 3 x 10 मे पेशी | उंदीर | गर्भ | फायब्रोब्लास्ट | ECACCATCC | |
| NALM-1 | परिधीय रक्त | क्रॉनिक मायलॉइड ल्युकेमिया | कर्करोग आनुवंशिकी आणि सायटोजेनेटिक्स | |||
| NW-145 | मेलेनोमा | ESTDAB | ||||
| OPCN/OPCT | Onyvax प्रोस्टेट कर्करोग…. | प्रोस्टेट कर्करोगाच्या पेशी रेषा | अॅस्टरँड | |||
| समवयस्क | मानव | टी सेल ल्युकेमिया | DSMZ | |||
| PNT-1A/PNT 2 | प्रोस्टेट कर्करोगाच्या पेशी रेषा | ECACC | ||||
| RenCa | रेनल कार्सिनोमा | उंदीर | किडनी कार्सिनोमा | |||
| RIN-5F | उंदीर | स्वादुपिंड | ||||
| RMA/RMAS | उंदीर | टी सेल कर्करोग | ||||
| साओस-2 | मानव | osteosarcoma | ECACC | |||
| Sf-9 | स्पोडोप्टेरा फ्रुगीपर्डा | फुलपाखरू स्पोडोप्टेरा फ्रुगीपर्डा | अंडाशय | DSMZECACC | ||
| SkBr3 | मानव | स्तनाचा कार्सिनोमा | ||||
| T2 | मानव | बी-सेल आणि टी-सेल ल्युकेमियाचा हायब्रिडोमा | DSMZ | |||
| T-47D | मानव | स्तन | डक्टल कार्सिनोमा | |||
| T84 | मानव | कोलन कार्सिनोमा/फुफ्फुसातील मेटास्टेसेस | उपकला | ECACCATCC | ||
| THP1 | मानव | मोनोसाइट्स | तीव्र मायलोइड ल्युकेमिया | ECACC | ||
| U373 | मानव | ग्लिओब्लास्टोमा-अस्ट्रोसाइटोमा | उपकला | |||
| U87 | मानव | ग्लिओब्लास्टोमा-अस्ट्रोसाइटोमा | उपकला | अबकॅम | ||
| U937 | मानव | ल्युकेमिक मोनोसाइटिक लिम्फोमा | ECACC | |||
| VCaP | वर्टेब्रल प्रोस्टेट कर्करोग | मानव | मेटास्टॅटिक प्रोस्टेट कर्करोग | उपकला | ECACC ATCC | |
| वेरो | "वेरा रेनो"/"वेरो" ("सत्य") | आफ्रिकन हिरवे माकड | मूत्रपिंड एपिथेलियम | ECACC | ||
| WM39 | मानव | चामडे | प्राथमिक मेलेनोमा | |||
| WT-49 | मानव | लिम्फोब्लास्ट | ||||
| X63 | उंदीर | मेलेनोमा | ||||
| YAC-1 | उंदीर | लिम्फोमा | सेल लाइन डेटा बेस ECACC | |||
| यार | मानव | बी लिम्फोसाइट्स | रूपांतरित EBV | मानवी इम्युनोलॉजी |
ज्ञान बेस मध्ये आपले चांगले काम पाठवा सोपे आहे. खालील फॉर्म वापरा
विद्यार्थी, पदवीधर विद्यार्थी, तरुण शास्त्रज्ञ जे ज्ञानाचा आधार त्यांच्या अभ्यासात आणि कार्यात वापरतात ते तुमचे खूप आभारी असतील.
वर पोस्ट केले http://www.allbest.ru/
सेल व्हायरस संस्कृती
परिचय
1. सेल संस्कृतींचे प्रकार
2. संस्कृती माध्यम
4.1 व्हायरस शोधणे
संदर्भग्रंथ
परिचय
व्हायरसच्या परिमाणात्मक संचयासाठी, सेल संस्कृती ही सर्वात सोयीस्कर प्रणाली आहे. शरीराच्या बाहेर प्राण्यांच्या पेशींची लागवड करण्याचे पहिले प्रयत्न गेल्या शतकाच्या शेवटी आहेत. या खंडित निरिक्षणांनी कृत्रिम परिस्थितीत ऊती आणि पेशींची व्यवहार्यता टिकवून ठेवण्याची शक्यता दर्शविली आणि ऊती संस्कृतींमध्ये सखोल वैज्ञानिक संशोधनाचा पाया घातला.
ऊती संवर्धन पद्धतींच्या विकासाचे बरेच श्रेय कॅरेलचे आहे. कृत्रिम परिस्थितीत प्राण्यांच्या पेशींचे पुनरुत्पादन करण्याची शक्यता सिद्ध करणारे ते पहिले होते आणि त्याद्वारे त्यांचे "अमरत्व" आणि एकल-पेशी मुक्त सजीवांच्या समानतेचे प्रदर्शन केले. अर्ले यांच्या नेतृत्वाखालील संशोधकांच्या गटाने या दिशेने महत्त्वपूर्ण यश मिळविले. काचेवर आणि ढवळलेल्या द्रव निलंबनात मोठ्या संख्येने पेशींची वाढ मिळवणारे ते पहिले होते. प्रतिजैविकांचे आगमन आणि कृत्रिम संवर्धन माध्यमांच्या निर्मितीमध्ये झालेल्या प्रगतीमुळे टिश्यू कल्चर तंत्राच्या विकासात नवीन युग सुरू झाले.
जीवशास्त्र आणि वैद्यकातील विविध समस्यांचे निराकरण करण्यासाठी टिश्यू कल्चरचा वापर फार पूर्वीपासून केला जात आहे. तथापि, केवळ टिश्यू कल्चरच्या मदतीने व्हायरोलॉजीच्या क्षेत्रातील प्रगती ही त्यांच्या आधुनिक स्तरावर विकासासाठी एक शक्तिशाली प्रेरणा होती.
व्हायरसची लागवड व्हायरस-सेल परस्परसंवादाच्या वैशिष्ट्यांचा अभ्यास करण्याशी संबंधित अनेक सैद्धांतिक समस्यांचे निराकरण करण्यात मदत करते. याव्यतिरिक्त, व्हायरल इन्फेक्शन्सच्या प्रतिबंधासाठी औषधांचे निदान आणि उत्पादनाशी संबंधित अनेक लागू समस्यांचे निराकरण करणे व्हायरस-युक्त कच्चा माल जमा केल्याशिवाय अशक्य आहे.
1. सेल संस्कृतींचे प्रकार
संपूर्ण जीवाच्या पेशींचे विट्रोमध्ये सजीवांच्या स्थितीत हस्तांतरण केल्याने त्यांचे अस्तित्व उती किंवा अवयवाच्या अनेक संरचनात्मक घटकांपैकी एक म्हणून संपते ज्याचा ते पूर्वी भाग होते. या प्रकरणात, पेशी न्यूरोह्युमोरल घटकांच्या नियंत्रणातून सुटतात आणि अनेक वैशिष्ट्ये प्राप्त करतात जी या ऊतकांमधून पेशींच्या नकाराच्या वस्तुस्थितीवर आणि विट्रोमध्ये त्यांच्या अस्तित्वाच्या विशिष्ट परिस्थितीवर अवलंबून असतात.
शरीराबाहेर राहणार्‍या पेशी किंवा ऊतींना चयापचय, आकारविज्ञान आणि अनुवांशिक वैशिष्ट्यांच्या संपूर्ण कॉम्प्लेक्सद्वारे वैशिष्ट्यीकृत केले जाते जे व्हिव्होमधील अवयव आणि ऊतकांच्या पेशींच्या गुणधर्मांपेक्षा अगदी भिन्न असतात.
प्राथमिक ऊतक स्पष्टीकरणाच्या पद्धती आणि त्याच्या लागवडीच्या तंत्रावर अवलंबून, अनेक प्रकारचे जिवंत आणि वाढणारे ऊतक आणि पेशी संस्कृती ओळखल्या जातात. वाढत्या पेशींचे सिंगल-लेयर आणि निलंबन संस्कृती सर्वात सामान्य आहेत. ते आधुनिक प्रयोगशाळा आणि औद्योगिक विषाणूजन्य सरावाचा आधार बनतात.
सिंगल-लेयर सेल कल्चरचे दोन मुख्य प्रकार आहेत: प्राथमिक आणि सतत.
"प्राथमिक" हा शब्द भ्रूण किंवा जन्मानंतरच्या काळात मानवी किंवा प्राण्यांच्या ऊतींमधून थेट प्राप्त झालेल्या पेशी संस्कृतीला सूचित करतो. अशा पिकांचे आयुर्मान मर्यादित असते. ठराविक काळानंतर, त्यांच्यामध्ये विशिष्ट अधःपतनाची घटना घडते, जी ग्रॅन्युलेशन आणि सायटोप्लाझमचे व्हॅक्यूलायझेशन, पेशींचे गोलाकार, पेशी आणि घन सब्सट्रेट ज्यावर ते वाढले होते यांच्यातील कनेक्शन कमी होणे यात व्यक्त केले जाते. माध्यमाचे नियतकालिक बदल, नंतरच्या रचनेतील बदल आणि इतर प्रक्रियेमुळे प्राथमिक सेल संस्कृतीचे आयुष्य केवळ किंचित वाढू शकते, परंतु त्याचा अंतिम नाश आणि मृत्यू टाळता येत नाही. सर्व शक्यतांमध्ये, ही प्रक्रिया संपूर्ण जीवामध्ये कार्यरत न्यूरोह्युमोरल घटकांच्या नियंत्रणातून काढून टाकलेल्या पेशींच्या चयापचय क्रियाकलापांच्या नैसर्गिक विलुप्ततेशी संबंधित आहे.
बहुतेक पेशींच्या थराच्या ऱ्हासाच्या पार्श्वभूमीवर लोकसंख्येतील केवळ वैयक्तिक पेशी किंवा पेशींचे गट वाढण्याची आणि पुनरुत्पादनाची क्षमता टिकवून ठेवू शकतात. या पेशींनी, विट्रोमध्ये अंतहीन पुनरुत्पादनाची क्षमता शोधून काढल्यानंतर, वारंवार कलम केल्याने सतत पेशी संस्कृतींना जन्म मिळतो.
प्रत्यारोपित पेशींच्या रेषा आणि ताण आहेत. पहिली संज्ञा संभाव्य अमरत्व आणि नियमानुसार, हेटरोप्लॉइड कॅरिओटाइपद्वारे वैशिष्ट्यीकृत प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशी दर्शवते; दुसरी संज्ञा गुणसूत्रांच्या द्विगुणित संचासह अर्ध-प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशी आणि विट्रोमध्ये मर्यादित आयुष्य दर्शवते. दोन्ही पेशींचे स्वरूप प्राथमिक संस्कृतींच्या सेल लोकसंख्येतील निवड प्रक्रियेशी संबंधित आहे, जे अशा प्रकारे प्रत्यारोपित पेशींच्या सर्व रेषा आणि ताणांचे स्त्रोत आहेत.
प्रत्यारोपित सेल लाईन्सचा मुख्य फायदा, कोणत्याही प्राथमिक संस्कृतीच्या तुलनेत, शरीराबाहेर अमर्यादित पुनरुत्पादनाची क्षमता आणि सापेक्ष स्वायत्तता आहे, जी त्यांना जीवाणू आणि एकल-पेशी प्रोटोझोआच्या जवळ आणते.
प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशींची विट्रोमध्ये अविरतपणे पुनरुत्पादन करण्याची क्षमता गुणात्मक झेप दर्शवते, परिणामी पेशी कृत्रिम पोषक माध्यमांवर वाढलेल्या सूक्ष्मजीवांप्रमाणे स्वायत्तपणे अस्तित्वात राहण्याची क्षमता प्राप्त करतात. पेशींमध्ये अशी वैशिष्ट्ये दिसण्यास कारणीभूत असलेल्या बदलांच्या संचाला परिवर्तन म्हणतात आणि सतत ऊतक संस्कृतींच्या पेशींना रूपांतरित म्हणतात.
सेल कल्चर तंत्रातील सुधारणांमुळे विविध प्रकारचे प्राणी आणि मानवी ऊतींमधून सतत सेल लाईन्स मिळण्याच्या शक्यतांमध्ये लक्षणीय वाढ झाली आहे. त्याच वेळी, विट्रोमध्ये अमर्यादित वाढीशी जुळवून घेण्याची क्षमता ज्या ऊतकांनी गमावली त्यापेक्षा जास्त वयाची मर्यादा सापडली नाही, म्हणजे. परिवर्तन करण्यासाठी.
प्रत्यारोपण करण्यायोग्य सेल लाईन्सचा आणखी एक स्रोत म्हणजे घातक निओप्लाझम. या प्रकरणात, पॅथॉलॉजिकल प्रक्रियेच्या विकासाच्या परिणामी विवोमध्ये सेल परिवर्तन होते, ज्याचे एटिओलॉजी मोठ्या प्रमाणात अस्पष्ट राहते.
सर्व घातक निओप्लाझम सतत सेल संस्कृतींना जन्म देण्यास सक्षम नाहीत. उदाहरणार्थ, मानवी पोट आणि स्तनाच्या कर्करोगाच्या ट्यूमरमधून प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशी मिळविण्याचा प्रयत्न अयशस्वी झाला. त्वचेच्या स्क्वॅमस सेल कार्सिनोमा पेशी आणि श्लेष्मल पडदा जीवनात विट्रोमध्ये जुळवून घेणे कठीण आहे. दुसरीकडे, रेषा तुलनेने सहजपणे सारकोमाच्या ऊतींमधून आणि मज्जासंस्थेच्या घातक ट्यूमरमधून मिळू शकतात.
2. संस्कृती माध्यम
कोणत्याही सेल कल्चरमध्ये सेल्युलर आणि लिक्विड टप्पे असतात. लिक्विड फेज कल्चर सेल्सची महत्त्वपूर्ण क्रिया सुनिश्चित करतो आणि विविध रचना आणि गुणधर्मांच्या पोषक माध्यमांचे प्रतिनिधित्व करतो.
सर्व माध्यमे त्यांच्या उद्देशाच्या आधारावर वाढ आणि समर्थनामध्ये विभागली जातात. काचेच्या पृष्ठभागावर मोनोलेयर तयार करण्यासाठी सक्रिय सेल प्रसार किंवा निलंबनामध्ये (सस्पेंशन कल्चर्स तयार करताना) सेल्युलर घटकांची पुरेशी उच्च एकाग्रता सुनिश्चित करण्यासाठी वाढीच्या माध्यमामध्ये अधिक पोषक असणे आवश्यक आहे. सहाय्यक माध्यमांनी प्रत्यक्षात केवळ पेशींमध्ये व्हायरल एजंट्सच्या गुणाकार दरम्यान पेशी आधीच तयार झालेल्या मोनोलेयरमध्ये टिकून राहतील याची खात्री केली पाहिजे.
वाढ आणि समर्थन माध्यम बहुघटक आहेत. त्यांच्या रचनेत नैसर्गिक उत्पादने (अम्नीओटिक द्रवपदार्थ, प्राणी सीरम) आणि नैसर्गिक उत्पादनांच्या आंशिक प्रक्रियेच्या परिणामी प्राप्त झालेले सब्सट्रेट्स (भ्रूण अर्क, लैक्टलब्युमिन हायड्रोलिसेट, हेमोहायड्रोलिसेट, एमिनोपेप्टाइड इ.), तसेच कृत्रिम रासायनिक शुद्ध पदार्थ (इ.) यांचा समावेश असू शकतो. amino ऍसिडस्, जीवनसत्त्वे, क्षार).
संपूर्णपणे नैसर्गिक घटकांचा समावेश असलेल्या पोषक माध्यमाचे उदाहरण म्हणून, माकडांच्या रेनल एपिथेलियममधून सेल कल्चर वाढवण्यासाठी प्रस्तावित असलेल्या बकलीच्या माध्यमाचे नाव घेता येईल. या माध्यमामध्ये बोवाइन ऍम्नीओटिक द्रव (85%), घोड्याचे सीरम (10%) आणि बोवाइन गर्भ अर्क (5%) समाविष्ट आहे.
सर्व नैसर्गिक उत्पादने कमी दर्जाची आहेत; त्यांचा वापर सेल संस्कृतींच्या सूक्ष्मजीव आणि विषाणूजन्य दूषित होण्याच्या मोठ्या धोक्याशी संबंधित आहे. या संदर्भात, ते हळूहळू कृत्रिम मानक मिश्रणांद्वारे बदलले जात आहेत. सिंथेटिक माध्यम 199 आणि ईगल माध्यम हे सर्वात जास्त वापरले जातात. क्षार, अमीनो ऍसिड आणि जीवनसत्त्वे यांचे काटेकोरपणे परिभाषित प्रमाण असलेले माध्यम मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते.
उद्देश काहीही असला तरी, सर्व टिश्यू कल्चर माध्यमे पुरेशा बफर क्षमतेसह काही प्रकारच्या संतुलित मीठ द्रावणातून तयार केली जातात. बहुतेकदा ते हँक्स आणि अर्ल सोल्यूशन असतात. हे द्रावण कोणत्याही पोषक माध्यमाचा एक आवश्यक घटक आहेत. बहुतेक वाढीच्या माध्यमांचा एक अविभाज्य घटक म्हणजे प्राणी सीरम (वासराचे मांस, बोवाइन, घोडा), ज्यापैकी 5-10% सेल पुनरुत्पादन आणि मोनोलेयर निर्मिती होत नाही.
एकाच वेळी सीरमचा समावेश केल्याने अचूक रासायनिक रचनेचे ग्रोथ मीडिया तयार होण्यास प्रतिबंध होतो, जो सेल्युलर फिजियोलॉजीमधील मूलभूत संशोधनाच्या विकासासाठी अत्यंत महत्त्वाचा आहे, कारण सीरम (किंवा त्याचे डेरिव्हेटिव्ह) सोबत अनियंत्रित घटकांचे संपूर्ण कॉम्प्लेक्स आहे. सादर केले, सीरमच्या मालिकेनुसार बदलते.
50 च्या दशकात, Ewans आणि Waymouth ने अचूक रासायनिक रचनेसह सीरम-मुक्त माध्यम सादर केले. तथापि, या माध्यमांनी पेशींच्या वाढीच्या क्रियाकलापांचे समान संकेतक प्रदान केले नाहीत जे जोडलेले सीरम असलेले माध्यम प्रदान करतात. या संदर्भात, बर्च आणि पिर्टचे कार्य स्वारस्यपूर्ण आहे, हे दर्शविते की सीरम-मुक्त माध्यमांमध्ये गहन सेल वाढ सुनिश्चित करण्यासाठी, Fe, Zn, Cu, तसेच MnC1 2 च्या सल्फेट लवणांचा समावेश निर्णायक आहे.
वाढीच्या माध्यमात तसेच ऊती धुण्यासाठी बफर सोल्यूशनमध्ये प्रतिजैविक जोडले जातात. ते वापरण्यापूर्वी ताबडतोब माध्यमात 1 मिली मुख्य प्रतिजैविक द्रावण प्रति 500 मिली माध्यमाच्या दराने सादर केले जातात.
खाली सामान्य संस्कृती माध्यमांपैकी एक तयार करण्याची रचना आणि पद्धत आहे.
बुधवारी सुई
l-आर्जिनिन - 17.4
l-सिस्टिन - 4.8
l-हिस्टिडाइन - 3.1
l-isoleucine - 26.2
l-leucia - 13.1
l-लाइसिन - 14.6
l-मेथिओनाइन - 7.5
l-फेनिलॅलानिन - 8.3
l-थ्रोनिन - 11.9
l-ट्रिप्टाफॅन - 2.0
l-टायरोसिन - 18.1
l-valine - 11.7
बायोटिन - 0.24
कोलीन - 0.12
कोलीन क्लोराईड - 0.14
व्हिटॅमिन बी 12 (टेरोयलग्लुटामिक ऍसिड) - 0.44
निकोटीनामाइड - 0.12
पॅन्टोथेनिक ऍसिड - 0.22
कॅल्शियम पॅन्टोथेनेट - 0.48
pyridoxal (pyridoxine hydrochloride) - 0.20
थायामिन हायड्रोक्लोराइड - 0.34
रायबोफ्लेविन - ०.०४
सोडियम क्लोराईड - 5850.0
पोटॅशियम क्लोराईड - 373.0
मोनोसब्स्टिट्यूट सोडियम फॉस्फेट (NaH 2 PO 4. H 2 O) - 138.0
कॅल्शियम क्लोराईड - 111.0
सोडियम बायकार्बोनेट (NaHCO 3) - 1680.0
मॅग्नेशियम क्लोराईड (MgCl 2. 6H 2 O) - 102.0
ग्लुकोज - 900.0
l-ग्लुटामाइन - 146.2--292.3
पेनिसिलिन - 50.0
स्ट्रेप्टोमायसिन - 50.0
फिनॉल लाल - 5.0
1000.0 पर्यंत पाणी
तयारी.
उपाय 1. 500 मिली पाण्यात अंदाजे 80° पर्यंत गरम करून, ढवळत, वरील प्रमाणात अमीनो ऍसिड विरघळवा, त्यानंतर एल-ग्लुटामाइन आणि फिनॉल रेड जोडले जातात.
उपाय 2. सोडियम बायकार्बोनेट (NaHCO 3) वगळता, अजैविक क्षार 100.0 मिली पाण्यात विरघळतात, अकार्बनिक क्षारांच्या मागील द्रावणात मिसळले जातात आणि बायोटिन आणि व्हिटॅमिन बी 12 जोडले जातात.
उपाय 3. बायोटिन आणि टेरोयलग्लुटामिक ऍसिड वगळता सर्व जीवनसत्त्वे आणि प्रतिजैविक - पेनिसिलिन आणि स्ट्रेप्टोमायसिन 200.0 मिली पाण्यात विरघळतात. सर्व द्रावण काचेच्या नटश फिल्टरद्वारे (सच्छिद्र काचेच्या प्लेट, छिद्र आकार 0.7-1.5) किंवा Seitz सेल्युलोज एस्बेस्टोस प्लेट्सद्वारे प्राथमिक पाण्याने धुतल्यानंतर आणि नंतर तयार केलेल्या द्रावणाद्वारे निर्जंतुकीकरण केले जातात.
500 मिली सोल्यूशन 1 + 200 मिली सोल्यूशन 2 + 200 मिली सोल्यूशन 3 मिसळले जाते आणि 1000.0 मिली निर्जंतुक पाण्यात पातळ केले जाते. आपण प्रति 1 लिटर 1 मिलीग्राम इनॉसिटॉल जोडू शकता.
3. सेल संस्कृती प्राप्त करणे
3.1 प्राथमिक सेल संस्कृतींची तयारी
प्राथमिक ही एक संस्कृती आहे जी ऊतींपासून मिळवली जाते आणि उपशेती सुरू होण्यापूर्वी, म्हणजेच पहिल्या पेरणीपूर्वी विट्रोमध्ये वाढते. प्राथमिक संस्कृती मूळ ऊतीमध्ये उपस्थित असलेल्या अनेक पेशींपासून वंचित आहे कारण सर्व पेशी सब्सट्रेटला चिकटून राहण्यास आणि विट्रोमध्ये टिकून राहू शकत नाहीत. पेशींच्या लागवडीदरम्यान, संस्कृती तुलनेने न-विभाजित किंवा हळूहळू विभाजित होणार्‍या पेशी कमी होते.
प्राथमिक संस्कृती प्राप्त करण्याच्या पहिल्या टप्प्यावर, ऊती किंवा प्राण्यांच्या अवयवांचा एक तुकडा निर्जंतुकपणे काढून टाकला जातो आणि त्याचे यांत्रिक किंवा एंजाइमॅटिक विघटन केले जाते. ऊतींचे तुकडे 1 - 3 मिमी पर्यंतचे तुकडे केले जातात, टिशूचे तुकडे लाल रक्तपेशींपासून अँटीबायोटिक्ससह हॅन्क्सच्या द्रावणाने धुतले जातात. ऊतींचे विघटन करण्यासाठी, ट्रिप्सिन (0.25% क्रूड किंवा 0.01 - 0.05% शुद्ध) किंवा कोलेजेनेस (200 - 2000 युनिट्स/मिली, क्रूड) आणि इतर प्रोटीओलाइटिक एन्झाईम वापरले जातात. संस्कृती मिळविण्याची ही पद्धत पेशींचे उच्च उत्पन्न प्रदान करते.
1 मिमीच्या ऊतींच्या तुकड्यांमधून प्राथमिक कल्चर देखील मिळू शकतात, जे त्यांच्या स्वत: च्या चिकटपणामुळे किंवा डिशवर खाचांच्या उपस्थितीमुळे किंवा प्लाझ्मा क्लॉट वापरून सब्सट्रेटच्या पृष्ठभागावर जोडलेले असतात. या प्रकरणांमध्ये, तुकड्यांमधून पेशींची वाढ होईल. एक्सप्लंट्समधून स्थलांतरित झालेल्या पेशींचा वापर पॅसेजिंगसाठी केला जाऊ शकतो. ऊतींचे तुकडे (एक्स्प्लांट्स) नवीन प्लेट्समध्ये हस्तांतरित केले जातात, स्थलांतरित पेशी उपसंस्कृतीद्वारे व्हर्सिन आणि ट्रिप्सिनच्या मिश्रणाने काढल्या जाऊ शकतात आणि उर्वरित एक्सप्लंट्स नवीन वाढ तयार करतील.
प्राथमिक संस्कृती जसे की चिक भ्रूण फायब्रोब्लास्ट कल्चर, वासराच्या किडनी सेल कल्चर आणि ल्युकोसाइट्स ज्ञात आहेत.
3.2 मोनोलेयर सतत सेल संस्कृती प्राप्त करणे
वर नमूद केल्याप्रमाणे, सतत सेल लाईन्स प्राप्त करण्याच्या पद्धतींपैकी एक म्हणजे प्राथमिक संस्कृतींच्या लोकसंख्येमधून वाढीव वाढ आणि पुनरुत्पादन क्रियाकलाप असलेल्या पेशींची निवड. प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड सेल कल्चरच्या मोनोलेयरच्या आसपासचे माध्यम नियमितपणे बदलून निवड केली जाऊ शकते. या उद्देशासाठी, सुव्यवस्थित सेल्युलर मोनोलेयर असलेले गद्दे निवडले जातात (मॅट्रेसेसचा स्वतःचा तळ सपाट असावा आणि भिंतींवर ओरखडे किंवा निस्तेज डाग नसावेत). पद्धतशीरपणे बदलण्यासाठी तयार केलेले वाढीचे माध्यम लहान भांड्यांमध्ये ओतले जाते (जीवाणूजन्य दूषितता वगळण्यासाठी) आणि t - 4° वर साठवले जाते.
आठवड्यातून किमान एकदा, माध्यम नियमितपणे बदलले जाते. पहिल्या 3 आठवड्यांमध्ये, वाढीच्या माध्यमाच्या 20-30% खंड बदलले जातात, पुढील 3-4 आठवड्यांत - 50-60%, नंतर माध्यमाचा संपूर्ण बदल केला जातो. ताजे माध्यम कामाच्या लगेच आधी t - 37° पर्यंत गरम केले जाते.
जसे वातावरण बदलते, पेशी त्यांचे आकारविज्ञान बदलतात. काही पेशी गोलाकार होऊन काचेवरून खाली पडतात. बहुतेक पेशी केंद्राकडे खेचल्या जातात आणि मोनोलेयर तारेच्या आकाराचे स्वरूप धारण करतात. पेशी स्वतःच काहीशा लांब होतात. वातावरणातील 7-10 बदलांनंतर, नवीन सेल्युलर घटक, नियमानुसार, गद्देमध्ये दिसू लागतात आणि वेगवेगळ्या संस्कृतींमध्ये त्यांच्याकडे भिन्न आकार असतात.
चिक भ्रूण किडनी पेशींच्या संस्कृतीत, गोलाकार सेल्युलर घटक मोनोलेयरच्या मध्यभागी किंवा त्याच्या संकुचित विभागांमध्ये दिसतात, ज्यामधून लहान वसाहतींच्या स्वरूपात क्लस्टर्स हळूहळू तयार होतात. माकडांच्या मूत्रपिंडाच्या पेशींच्या संस्कृतीत, धान्यासारखी एकल रचना दिसून येते. पेशी एकमेकांना घट्ट चिकटतात, लहान पारदर्शक वसाहती तयार करतात. अशा पेशींची संख्या हळूहळू वाढते आणि वसाहतींचा आकारही क्वचितच वाढतो. वसाहती केवळ गद्दाच्या तळाशीच नाहीत तर बाजूच्या पृष्ठभागावर देखील पोषक माध्यमाच्या सीमेवर दिसतात. म्हणून, पोषक माध्यम बदलताना एक पूर्व शर्त म्हणजे त्याचे स्थिर प्रमाण राखणे. मानवी भ्रूण मूत्रपिंडाच्या पेशींच्या संस्कृतीत, लांब प्रक्रिया असलेल्या मोठ्या बहुभुज पेशी दोरांमध्ये एकत्र खेचलेल्या मोनोलेयरच्या मोठ्या प्रमाणात झीज होण्याच्या पार्श्वभूमीवर प्रकट होतात.
निवड प्रक्रियेदरम्यान उद्भवणारे अॅटिपिकल सेल्युलर घटक उर्वरित मोनोलेयरपासून वेगळे केले जाणे आवश्यक आहे आणि वेगळ्या ट्यूब किंवा गाद्यामध्ये हस्तांतरित करणे आवश्यक आहे. यासाठी, बॅक्टेरियोलॉजिकल लूप किंवा स्पॅटुला वापरून अॅटिपिकल पेशींची व्हर्सनाइझेशन पद्धत किंवा यांत्रिक अलिप्तता वापरली जाऊ शकते. नंतरची पद्धत विशेषतः माकड किडनी सेल कल्चरसह कार्य करताना आवश्यक आहे, जेथे ऍटिपिकल पेशींच्या वसाहती काचेला घट्ट जोडल्या जातात आणि त्यापासून विभक्त होत नाहीत.
ऍटिपिकल पेशी दिसल्यास पोषक माध्यम बदलताना, बहुतेक वाढीचे माध्यम काळजीपूर्वक काढून टाकण्याची शिफारस केली जाते आणि मोनोलेयरला लहान भागाने जोमाने स्वच्छ धुवा आणि हे माध्यम चाचणी ट्यूबमध्ये ओतणे. या प्रकरणात, माध्यमामध्ये अॅटिपिकल पेशी असू शकतात ज्यात पुढील पुनरुत्पादनासाठी योग्य वसाहती तयार करण्याची क्षमता असते.
अॅटिपिकल पेशींची संस्कृती नवीन डिशमध्ये हस्तांतरित केल्यानंतर, मुख्य संस्कृतीचे निरीक्षण करणे सुरू ठेवण्याचा सल्ला दिला जातो, कारण नवीन सेल लाइन प्रजनन करण्याची प्रक्रिया खूप गुंतागुंतीची असते आणि निवडलेले अॅटिपिकल घटक नेहमीच व्यवहार्य ओळीला जन्म देत नाहीत. प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशी. नवीन सेल लाइन्स मिळविण्याचे सर्व कार्य, जे अनेक महिने चालू राहते, समान संस्कृती माध्यम, प्राणी सेरा आणि प्रतिजैविकांच्या मालिकेद्वारे केले जाणे आवश्यक आहे.
गोल्डन हॅमस्टर किडनी (BHK) सेल कल्चर, सायबेरियन माउंटन आयबेक्स किडनी (PSGK) सेल कल्चर आणि ग्रीन माकड किडनी (CV) सेल कल्चर यासारख्या प्राथमिक संस्कृती ओळखल्या जातात.
3.3 रोलर सेल कल्चर
अलीकडे पर्यंत, टिश्यू कल्चरचा वापर व्हायरोलॉजीमध्ये प्रामुख्याने सिंगल-लेयर स्थिर संस्कृतींच्या स्वरूपात केला जात असे. बर्याच प्रकरणांमध्ये, पेशी वाढविण्याची ही पद्धत अपरिहार्य आहे. बर्याच वर्षांचा अनुभव दर्शवितो की सिंगल-लेयर स्थिर संस्कृती वापरताना, कामाचा वेळ आणि सामग्रीच्या प्रचंड खर्चाशी संबंधित अनेक अडचणी येतात. या दृष्टिकोनातून, रोलर कल्चर अधिक फायदेशीर आहेत, जे किफायतशीर आहेत, उपयुक्त लागवडीच्या क्षेत्राच्या पोषक माध्यमाच्या प्रमाणाच्या इष्टतम गुणोत्तराने वैशिष्ट्यीकृत आहेत आणि सेल द्रव्यमान जमा करण्यासाठी अनुकूल संधी देतात.
"रोलर कल्चर" हा शब्द संस्कृती पद्धतीचा संदर्भ देतो ज्यामध्ये सेल मोनोलेयर आडव्या फिरणाऱ्या वाहिन्यांच्या संपूर्ण दंडगोलाकार पृष्ठभागावर पसरलेला असतो आणि वेळोवेळी पोषक माध्यमाने धुतला जातो. काही कारणास्तव, काही प्रकरणांमध्ये विशिष्ट संख्येच्या पेशी संस्कृती माध्यमात निलंबित केल्या जाऊ शकतात. या अवतारात, सेल कल्चरला रोलर-सस्पेंशन म्हणतात. सेल कल्चरचे "उत्पन्न" जास्त असेल, ज्या क्षेत्रातून पेशी गोळा केल्या जातात तितके मोठे. संशोधकांनी पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ वाढवण्यासाठी विविध मार्गांचा वापर केला आहे ज्यावर पेशी जोडतात आणि गुणाकार करतात. या उद्देशासाठी, मोठ्या विशिष्ट पृष्ठभागाच्या क्षेत्रासह विविध प्रकारचे तळ वापरले गेले: कठोर, स्पंज, लोकर, कोलेजन, काचेच्या सर्पिलवर, इत्यादी. या पद्धती मोठ्या प्रमाणावर वापरल्या जात नाहीत, कारण त्यांनी पेशींच्या हाताळणीमध्ये लक्षणीय गुंतागुंत निर्माण केली होती, परंतु हे लक्षात घेतले पाहिजे की एल.एस. रॅटनर आणि व्ही.ए. क्रिकुन यांनी वर्णन केले आहे, बहुस्तरीय लागवडीचे तंत्र. 1.5, 10 आणि 15 लिटरच्या बाटल्यांमध्ये पेशी संवर्धित केल्या गेल्या होत्या, ज्यात वाहिन्यांच्या रेखांशाच्या अक्षाच्या समांतर स्थित अंडाकृती काचेच्या नळ्या पूर्णपणे भरलेल्या होत्या. समान व्हॉल्यूमच्या वाहिन्यांमधील स्थिर सिंगल-लेयर कल्चरच्या तुलनेत उपयुक्त क्षेत्र 20 पट वाढले. लागवड 2 टप्प्यात झाली. पहिल्या टप्प्यावर, पेशी समान रीतीने वितरीत करण्यासाठी बाटल्या आडव्या अक्षाभोवती फिरवल्या गेल्या. त्यानंतर, जेव्हा पेशी काचेला जोडल्या गेल्या तेव्हा लागवड स्थिर स्थितीत चालू राहिली. पाऊल आणि तोंडाच्या रोगाच्या विषाणूच्या लागवडीसाठी वर्णन केलेली संस्कृती प्रणाली यशस्वीरित्या वापरली गेली.
ज्या वाहिन्यांमध्ये सेल गुणाकार झाला त्या वाहिन्यांचे फिरवणे अधिक प्रभावी होते. सुरुवातीला, पेशी चाचणी ट्यूबमध्ये वाढल्या होत्या, परंतु तांत्रिक उपकरणांच्या विकासासह, कल्चर वाहिन्यांचे प्रमाण वाढले आणि फिरत्या चाचणी ट्यूबमध्ये वाढणाऱ्या पेशींपासून, संशोधक फिरत्या बाटल्यांकडे गेले. रोलर कल्चरचा वापर सेल संचय आणि विषाणूच्या प्रसारासाठी केला जाऊ लागला.
रोलर लागवडीसाठी, बाटल्या किंवा ड्रम फिरवण्याकरिता विशेष रॅक-टियर उपकरणे वापरली जातात. बर्याचदा, 0.5-3 लिटरच्या बाटल्या लागवडीसाठी वापरल्या जातात. उत्पादनाच्या परिस्थितीत, त्यांची मात्रा 20 लिटर किंवा त्याहून अधिक पोहोचू शकते. रोलर लागवडीसाठी उपकरणे साधे, विश्वासार्ह आणि देखभाल करणे सोपे आहे. बाटल्या फिरवण्याच्या गतीला खूप महत्त्व आहे. ते खूप जास्त नसावे जेणेकरुन सेल जोडण्यामध्ये व्यत्यय आणू नये, परंतु खूप कमी नसावे, कारण गॅस टप्प्यात पेशींच्या दीर्घकालीन उपस्थितीमुळे त्यांची पोषण स्थिती बिघडते. वेगवेगळ्या लेखकांच्या कार्यात, बाटली फिरवण्याची गती 8-12 आरपीएम ते 1 आरपीएम पर्यंत बदलते. विविध सेल संस्कृतींसाठी सर्वात योग्य म्हणजे 0.5-1 आरपीएमच्या श्रेणीतील बाटल्यांच्या फिरण्याची गती. पहिल्या 30 मिनिटांत शिफारस केली. पेशींची बीजन केल्यानंतर, सामग्रीचे समान वितरण करण्यासाठी कुपींचा उच्च रोटेशन वेग (0.5--1.0 rpm) सुनिश्चित करा, नंतर त्यांना कमी रोटेशन गती (20--30 rpm) वर स्थानांतरित करा.
SPEV, BNK-21, HeLa, L पेशींसाठी 1 मिली माध्यमात बीजन एकाग्रता 60-80 हजार, द्विगुणित पेशींसाठी 100-200 हजार, प्राथमिक संस्कृतींसाठी 200-300 हजार. वाढीच्या माध्यमाची मात्रा 1/ असावी. 10, रोलर बाटलीच्या व्हॉल्यूमचा 1/20 भाग. रोलर कल्चर पद्धत आपल्याला मोठ्या संख्येने पेशी प्राप्त करण्यास अनुमती देते. अशाप्रकारे, 3 लिटर क्षमतेच्या बाटलीतून तुम्ही 8 पट जास्त, BHK-21 - 9 पट, AO - 1 लिटर बाटलीच्या मोनोलेयर स्थिर संस्कृतीपेक्षा 11 पट जास्त HeLa पेशींचे उत्पादन मिळवू शकता. 3-लिटर बाटल्या वापरताना मीडिया बचतीची बाहुल्यता HeLa पेशींसाठी 2.8 आहे; VNK-21 - 5.0, JSC - 4.0. उपसंस्कृती, सतत संस्कृती आणि, कमी सामान्यतः, प्राथमिक, तसेच डिप्लोइड सेल स्ट्रेनमध्ये रोलर परिस्थितीत वाढण्याची आणि पुनरुत्पादन करण्याची क्षमता असते. रोलर उपकरणांमध्ये पेशींच्या चांगल्या प्रसारासाठी, त्यांना नवीन लागवडीच्या परिस्थितीशी जुळवून घेणे आवश्यक आहे. रोलर कल्चर पद्धतीमुळे मोठ्या प्रमाणात पेशी मिळवणे शक्य होते. पारंपारिक स्थिर संस्कृतींच्या तुलनेत रोलर कल्चरचा फायदा, विशेषतः, पोषक माध्यमांचा अधिक किफायतशीर वापर आणि विषाणूजन्य प्रतिजन (1-2 lg ने) जास्त उत्पन्न.
3.4 निलंबन सेल संस्कृती
1953 मध्ये, ओवेन्स आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी प्रथम मुक्तपणे निलंबित अवस्थेत द्रव माध्यमात पेशींची गुणाकार करण्याची क्षमता प्रदर्शित केली. तेव्हापासून, मोठ्या संख्येने पेशी जमा करण्याच्या उच्च कार्यक्षमतेमुळे निलंबन संस्कृती पद्धतीने संशोधकांचे लक्ष वेधून घेतले आहे. हे निष्पन्न झाले की सतत रेषेतील पेशी, इतर प्रकारच्या सेल संस्कृतींच्या विपरीत, दीर्घकाळ निलंबनात लागवड करता येतात. या परिस्थितीत, माध्यमाच्या सतत मिसळण्यामुळे, पेशी कल्चर पात्राच्या भिंतींना जोडल्याशिवाय गुणाकार करतात, निलंबन अवस्थेत असतात. इष्टतम वाढीच्या परिस्थितीत, निलंबनातील पेशी त्वरीत गुणाकारतात आणि स्थिर संस्कृतींपेक्षा जास्त "उत्पन्न" असतात. प्राथमिक आणि सतत सेल लाईन्समध्ये निलंबनात वाढण्याची समान क्षमता नसते. अशा प्रकारे, हेटरोप्लॉइड आणि एन्युप्लॉइड कायम रेषा, स्यूडोडिप्लॉइड रेषांच्या विरूद्ध, निलंबनाच्या वाढीसाठी अधिक द्रुतपणे जुळवून घेतात.
सस्पेंशन कल्चर मोनोलेअर कल्चरपासून तयार केले जातात. व्हर्सेन आणि ट्रिप्सिनचे द्रावण वापरून पेशी काचेच्या सोलून काढल्या जातात. सेंट्रीफ्यूगेशन (1000 rpm) नंतर सेल सेडिमेंट ताज्या पोषक माध्यमात पुन्हा सस्पेंड केले जाते. तयार केलेले निलंबन कल्चर वेसल्समध्ये (अणुभट्ट्या, किण्वन) ठेवले जाते आणि सतत ढवळत वाढवले जाते. वैज्ञानिक अभ्यासात, प्रारंभिक निलंबनामध्ये पेशींची एकाग्रता 1 मिली मध्ये 0.3 ते 10x10 पर्यंत असते. प्रारंभिक निलंबनामध्ये पेशींची इष्टतम एकाग्रता 1 मिली मध्ये 2-5x10 असावी. अर्ल आणि त्याच्या सहकाऱ्यांच्या मते, निलंबित संस्कृतीत पेशींची एकाग्रता अशी असावी की संस्कृती तयार झाल्यानंतर 16-24 तासांनंतर लॉगरिदमिक वाढीचा टप्पा उद्भवू नये. सस्पेंशन सेल कल्चर वैशिष्ट्यपूर्ण टप्प्यांमधून जातात: लॅग फेज, लॉगरिदमिक ग्रोथ टप्पा, स्थिर टप्पा आणि लॉगरिदमिक डेथ फेज. पहिल्या टप्प्यात, नियमानुसार, पेशींची संख्या कमी होते, दुसऱ्या टप्प्यात पेशींची संख्या वाढते (लोगॅरिथमिक वाढीचा टप्पा), तिसऱ्या टप्प्यात पेशींच्या संख्येत (स्थिर अवस्था) वाढ होत नाही. जर लागवड पुढे चालू ठेवली तर, सेल नंबर कमी होण्याचा कालावधी शोधला जाईल - लॉगरिदमिक मृत्यूचा टप्पा (नाश टप्पा). लॉगरिदमिक वाढीच्या टप्प्यात सेल पुनरुत्पादनाचा दर पिढीच्या वेळेनुसार व्यक्त केला जातो. जनरेशन वेळ संस्कृतीत सेल लोकसंख्या दुप्पट करण्यासाठी आवश्यक कालावधी संदर्भित. पेशींच्या निलंबनाच्या लागवडीसाठी, द्रव मिसळणे ही एक महत्त्वाची अट आहे, जी निलंबनामध्ये पेशी टिकवून ठेवण्यासाठी, त्यांना स्थिर होण्यापासून आणि पात्राच्या भिंतींना जोडण्यापासून रोखण्यासाठी आणि त्याच वेळी कारणीभूत नसावी यासाठी सतत आणि तीव्र असणे आवश्यक आहे. त्यांना यांत्रिक नुकसान.
पॅडल मॅग्नेटिक स्टिरर, तसेच गोलाकार रॉकर्स वापरून सस्पेंशन कल्चर्सचे मिश्रण केले जाते. सध्या, रेखांशाचा अक्ष (15-40 आरपीएम) भोवती बाटल्या आणि बाटल्यांचे फिरणे मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते. चुंबकीय स्टिररवर, रोटेशन गती 100-200 rpm आहे. मिश्रणाची गती संस्कृतीच्या व्हॉल्यूमवर अवलंबून असते; कल्चरच्या लहान व्हॉल्यूमसाठी कमी वेग आवश्यक आहे, तर मोठ्या व्हॉल्यूमसाठी तो वाढवणे आवश्यक आहे. पेशींना जहाजाच्या आतील पृष्ठभागावर स्थिर होण्यापासून रोखण्यासाठी, सिलिकॉनायझेशन केले जाते. सिलिकॉन कोटिंग, त्याच्या हायड्रोफोबिसिटीमुळे, पेशींना जहाजाच्या भिंतीशी जोडण्यापासून प्रतिबंधित करते.
कल्चर वाहिनीच्या आतील भिंती 5% किंवा 10% सिलिकॉन द्रावणाने ओल्या केल्या जातात आणि सॉल्व्हेंट (बेंझिन, एसीटोन) च्या बाष्पीभवनानंतर, कलम 85°C आणि 200°C (अनुक्रमे 30 आणि 60 मिनिटांसाठी) ठेवल्या जातात. ). थंड झाल्यावर, भांडे गरम बिडस्टिल्ड पाण्याने भरले जातात आणि 2 तास सोडले जातात, नंतर ते 3 वेळा बिडस्टिल्ड पाण्याने धुवून 100 डिग्री सेल्सिअसवर वाळवले जातात. 170 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर ओव्हनमध्ये 2 तासांसाठी भांडी निर्जंतुक केली जातात.
निलंबनामध्ये जास्तीत जास्त सेल वाढ pH 7.0-7.2 वर दिसून येते. सस्पेंशनमध्ये पेशी वाढवण्यासाठी वापरले जाणारे पोषक माध्यम हे मोनोलेयर कल्चरमध्ये सेल लाईन्स वाढवण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या माध्यमांपेक्षा वेगळे नाहीत. बर्याचदा, निलंबनामध्ये पेशींचे संवर्धन करताना, एमिनो ऍसिड आणि जीवनसत्त्वे दुहेरी एकाग्रतेसह ईगलचे माध्यम वापरले जाते.
सस्पेंशन कल्चर मोनोलेयर कल्चरपेक्षा 2-7 पट जास्त ग्लुकोज वापरतात. ग्लुकोज वापरण्याच्या प्रक्रियेत, पेशी लैक्टिक ऍसिड सोडतात, जे त्यांच्यासाठी विषारी आहे, वातावरणात. पेशींद्वारे ग्लुकोजचा वापर आणि लैक्टिक ऍसिडचे उत्पादन समांतर चालते आणि सेल लोकसंख्येच्या घनतेवर थेट अवलंबून असते. पोषक माध्यमात 40 ते 200 युनिट्स प्रति लिटर प्रमाणात इन्सुलिनची भर घातली तर ते उपयुक्त ठरले. पोषक माध्यमामध्ये इन्सुलिनची भर घातल्याने शोषलेल्या ग्लुकोजचे प्रमाण आणि सोडलेल्या लैक्टिक ऍसिडचे प्रमाण बदलते. एल लाइन सेलसाठी, हा गुणांक 74-81 वरून 37-38% पर्यंत कमी केला जाऊ शकतो.
वेगवेगळ्या दराने पेशी वाढवून पोषक माध्यमांमधून वेगवेगळी अमीनो ऍसिड वापरली जातात. आर्जिनिन (20-40 mg/l) नियमित जोडणे आणि ग्लूटामाइनचे प्रमाण 450 mg/l पर्यंत वाढणे निलंबित संस्कृतींच्या वाढीस अनुकूल असल्याचे लक्षात आले.
इनोसिटॉल (0.4 mg/l) ची भर घातल्याने मानवी अम्नीओटिक सेल कल्चरच्या वाढीला गती मिळू शकते. कॅटालेस (1 mg/l) आणि थायरॉक्सिन (12 mg/l) माध्यमात जोडणे इष्ट आहे.
ब्लड सीरम नसलेल्या सिंथेटिक माध्यमात निलंबित सेल कल्चर्सच्या निर्मितीसाठी समर्पित कार्ये खूप स्वारस्यपूर्ण आहेत. प्रथिनेमुक्त घटकांचा वापर करून संस्कृती माध्यमाची स्निग्धता वाढविण्याचा प्रयत्न केला जात आहे. या कारणासाठी, मिथाइल सेल्युलोज आणि हायलुरोनिक ऍसिडचा वापर केला जातो.
0.1-0.2% च्या एकाग्रतेमध्ये मिथाइलसेल्युलोजचा माध्यमात निलंबित पेशींवर जास्तीत जास्त संरक्षणात्मक प्रभाव असतो. मिथाइलसेल्युलोजचा संरक्षणात्मक प्रभाव असा आहे की रेणू सेलभोवती एक संरक्षणात्मक स्तर तयार करतात, जेव्हा माध्यम मिसळले जाते तेव्हा पेशींचे नुकसान टाळते. सस्पेंशन कल्चरच्या अवस्थेचा एक अतिशय महत्त्वाचा सूचक म्हणजे द्रव अवस्थेत ऑक्सिजनचा आंशिक दाब. गॅस टप्प्यात ऑक्सिजन एकाग्रता सेल लोकसंख्येच्या घनतेवर अवलंबून असते आणि बहुतेक वेळा वातावरणापेक्षा कमी असते. ऑक्सिजनच्या कमतरतेमुळे सायटोप्लाज्मिक ग्रॅन्युलेशन दिसून येते, पेशी त्यांचा नियमित गोल आकार गमावतात. ऑक्सिजनच्या थोड्या जास्त प्रमाणात, पेशींना एक सुस्पष्ट, नियमित, गोलाकार आकार असतो आणि जास्त ऑक्सिजनमुळे नुकसान झाल्यास ते खूप मोठे होतात. विविध सेल संस्कृतींसाठी इष्टतम ऑक्सिजन एकाग्रता 9 ते 17% किंवा 293 मिमी एचजी पर्यंत असते. स्तंभ 20% पेक्षा जास्त ऑक्सिजन एकाग्रतेवर, पेशींची वाढ रोखली जाते. अशा प्रकारे, 24% च्या ऑक्सिजन एकाग्रतेवर, सशाच्या भ्रूण मूत्रपिंडाच्या पेशींचे पुनरुत्पादन (ERK लाइन) निम्म्याने कमी झाले आणि 30% वर ते शून्य झाले. ऑक्सिजन एकाग्रता वाढल्याने सेल्युलर चयापचय वर विषारी प्रभाव पडतो.
अशा प्रकारे, निलंबनामधील पेशींचा प्रसार प्रारंभिक निलंबनामधील पेशींच्या एकाग्रतेवर, माध्यमाचे वायुवीजन आणि pH, पोषक माध्यमाची रचना, मिश्रणाची पद्धत, निलंबनाची मात्रा आणि इतर घटकांवर अवलंबून असते.
निलंबनाची एकसंधता, लॉगरिदमिक वाढीच्या टप्प्यात पेशींच्या दीर्घकालीन देखभालीची शक्यता, पर्यावरणीय घटकांच्या प्रभावावर अवलंबून पेशींच्या वाढीच्या प्रक्रियेच्या गणितीय मॉडेलिंगची शक्यता, सेलच्या शारीरिक स्थितीचा वारंवार अभ्यास करण्याची सोय. निलंबनातील संस्कृती, पद्धतीची उच्च कार्यक्षमता - ही निलंबन संस्कृतींच्या फायद्यांची संपूर्ण यादी नाही.
सस्पेंशन कल्चरचा वापर व्हायरोलॉजिकल संशोधनामध्ये आणि लस आणि निदान औषधांच्या निर्मितीमध्ये मोठ्या प्रमाणात विषाणू-युक्त सामग्री जमा करण्यासाठी केला जातो.
3.5 मायक्रोकॅरियर्सवर सेल कल्चर
1967 मध्ये, व्हॅन वेरेल यांनी मोनोलेयर आणि सस्पेंशन सेल कल्चरच्या घटकांना एकत्रित करणारी एक संस्कृती पद्धत प्रस्तावित केली, ज्याला त्यांनी "मायक्रोकॅरियर" पद्धत म्हटले. त्याचे सार या वस्तुस्थितीत आहे की पेशी पॉलिमर मण्यांच्या पृष्ठभागावर "मायक्रोकॅरियर्स" (MC) च्या कणांना जोडतात आणि गुणाकार करतात, जे स्टिरर सारख्या मिक्सिंग यंत्राचा वापर करून निलंबनात ठेवले जातात. 160-230 मिमी व्यासासह एक MN कण 350-630 (किंवा सरासरी 460) पेशी सामावून घेऊ शकतो. अनेक हजार मायक्रोकॅरियर कण एका मिलीलीटर माध्यमात निलंबित केले जाऊ शकतात, ज्याचे एकूण क्षेत्रफळ अनेक ते 50 सेमी 2 / एमएल पर्यंत आहे.
कल्टिव्हेटरमध्ये टोचलेल्या पेशी MN कणांच्या पृष्ठभागावर जोडतात आणि गुणाकार करून प्रत्येक स्वतंत्र कणावर एक सतत मोनोलेयर तयार करतात.
या पद्धतीचे मुख्य फायदे आहेत:
1) जहाजाच्या संपूर्ण व्हॉल्यूममध्ये एकसमान परिस्थिती निर्माण करणे, ज्यामुळे आवश्यक पॅरामीटर्स (पीएच, पी0 2, इ.) प्रभावीपणे नियंत्रित करणे शक्य होते; 2) प्रति 1 मिली 5-6 दशलक्ष पेशींची उच्च सेल लोकसंख्या घनता प्राप्त करणे; 3) अनेक शंभर अब्ज पेशींची एकाचवेळी लागवड; 4) पेशींच्या वाढीच्या गतिशीलतेवर सतत नियंत्रणाचा परिचय; 5) कल्चर वाहिनीच्या उदासीनतेशी संबंधित ऑपरेशन्समध्ये घट झाल्यामुळे दूषिततेच्या वाढीमध्ये घट; 6) पोषक माध्यमांमध्ये लक्षणीय बचत; 7) वाढलेल्या पेशी थेट कणांवर कमी तापमानात जतन करण्याची क्षमता; 8) कृत्रिमरित्या MN चे विविध सांद्रता तयार करण्याची क्षमता त्यांच्यावर वाढलेली पेशी; 9) मायक्रोकॅरियरचे ताजे भाग जोडून ट्रिप्सिनचा वापर न करता कल्चर पास होण्याची शक्यता.
मायक्रोकॅरिअर्समध्ये असणे आवश्यक आहे:
1.5-1.8 MEKV/g च्या श्रेणीमध्ये थोडा सकारात्मक चार्ज. बहुतेक प्राण्यांच्या पेशींमध्ये किंचित नकारात्मक शुल्क असते या वस्तुस्थितीमुळे, ते अशा एमएनशी अधिक सहजपणे संलग्न होतील:
घनता 1.05--1.15 ग्रॅम/सेमी; सस्पेंशनमध्ये MN राखण्यासाठी निर्दिष्ट घनता इष्टतम आहे;
कण व्यास 100 ते 250 मायक्रॉन पर्यंत आहे, जे अनेक शंभर पेशींच्या वाढीसाठी क्षेत्र प्रदान करते;
गुळगुळीत पृष्ठभाग;
पारदर्शकता;
पेशींमध्ये घटकांच्या विषारीपणाची कमतरता;
पर्यावरणीय घटकांचे थोडेसे शोषण;
बहुमुखीपणा, प्राथमिक, डिप्लोइड आणि हेटरोप्लॉइड पेशींसाठी त्यांचा वापर करण्याची शक्यता सुनिश्चित करणे. MN च्या गुणधर्मांना फारसे महत्त्व नाही, जे त्यांना वारंवार वापरण्याची परवानगी देतात.
क्रॉस-लिंक्ड (पीएस) डेक्सट्रान, पीएस-अॅगरोज, पीएस-पॉलीविनाइलपायरोलिडोन, पॉलीएक्रायलोनिट्राईट, सच्छिद्र सिलिका जेल, पॉलिस्टीरिन, नायलॉन, नायलॉन, अॅल्युमिनोसिलिकेट यासह विविध रासायनिक स्वरूपाच्या अनेक दाणेदार तयारींवर एक अभ्यास केला गेला आहे. त्यांना मायक्रोकॅरियर म्हणून वापरणे.
त्यापैकी फक्त काही योग्य आहेत, प्रामुख्याने PS-dextran वर आधारित.
अनेक परदेशी कंपन्यांनी व्यावसायिक वापरासाठी तयार मायक्रोकॅरियर तयारी विकसित केली आहे: सायटोडेक्स-1, 2, 3 (फ्रान्स, स्वीडन), सुपरबिट (यूएसए, इंग्लंड), बायोसिलोन (डेनमार्क). सूचीबद्ध औषधांची किंमत खूप जास्त आहे, म्हणून देशांतर्गत MN च्या विकास आणि उत्पादनावर संशोधन करणे आवश्यक आहे.
मायक्रोकॅरियर्सवरील पेशींची लागवड सस्पेंशन लागवडीसाठी पारंपारिक किण्वनांमध्ये केली जाते. स्थिर झोनमध्ये मायक्रोकॅरियर्स जमा होण्यापासून रोखण्यासाठी किण्वन यंत्रामध्ये कोणतेही प्रोट्र्यूशन किंवा पॉकेट नसावेत. म्हणून, गोलाकार तळाशी आणि गुळगुळीत भिंती असलेले किण्वन वापरणे शहाणपणाचे आहे. फरमेंटरच्या काचेला किंवा स्टेनलेस स्टीलला मायक्रोकॅरियर्स चिकटू नयेत म्हणून आंबटाची आतील पृष्ठभाग सिलिकॉनाइज्ड असावी.
pH आणि O2 सारख्या पर्यावरणीय परिस्थितींचे परीक्षण करण्यासाठी मानक उपकरणे वापरली जाऊ शकतात. वाहकासह निलंबन मिसळण्याची गती 40-60 आरपीएम असावी. MN वर लागवडीसाठी विविध प्रकारच्या पेशी वापरल्या जातात.
सायटोडेक्सची एकाग्रता 0.5 ते 5 mg/ml पर्यंत बदलू शकते. तथापि, रोगप्रतिबंधक लसींच्या निर्मितीमध्ये, सायटोडेक्सची अंतिम एकाग्रता सहसा वापरली जाते, 1 mg/ml पेक्षा जास्त नसते. एकाग्रता 3 mg/ml आणि त्याहून अधिक वाढल्याने पोषक माध्यमाला परफ्यूज करणे आणि अंशतः बदलणे आवश्यकतेशी संबंधित अतिरिक्त अडचणी निर्माण होतात, ज्यामुळे तांत्रिक प्रक्रिया गुंतागुंतीची होते.
पेशींची बीजारोपण एकाग्रता, तसेच पहिल्या तासात MN वर संस्कृतीची परिस्थिती, मोठ्या प्रमाणावर पेशींच्या प्रसारासाठी आणि जास्तीत जास्त संचयनासाठी इष्टतम मापदंड निर्धारित करतात. माकड किडनी (व्हेरो) आणि मानवी भ्रूण फायब्रोब्लास्ट्स (MRC-5) च्या डिप्लोइड पेशींच्या सतत ओळीच्या 10 पेशी/मिली पौष्टिक मध्यम आकारमानात 1/3 पर्यंत कमी केल्याचे आणि वेळोवेळी स्टिरर चालू केल्याचे दर्शविले गेले (30 rpm) 4 तासांसाठी प्रत्येक तासानंतर एक मिनिटासाठी, त्यानंतर पोषक माध्यमाची अंतिम मात्रा जोडल्यास, नियंत्रणाच्या तुलनेत पेशींच्या प्रसारात आणि त्यांची संख्या वाढवते (पेशी लागवडीच्या वेळी पोषक माध्यमाची पूर्ण मात्रा. आणि लागवडीच्या सुरुवातीपासून स्टिररचे सतत ऑपरेशन).
MN वरील पेशींच्या संवर्धनासाठी पोषक माध्यम महत्त्वाचे आहे. पोषक माध्यमाची योग्य निवड देखील पेशींच्या प्रसाराची प्रक्रिया आणि त्यांची गुणवत्ता अनुकूल करण्यास मदत करेल. विविध प्रकारच्या MN वर पेशींच्या संवर्धनासाठी पोषक माध्यमांची निवड करणे आवश्यक आहे. असे दिसून आले आहे की सायटोडेक्सवरील माकड किडनी पेशींची (व्हेरो) सतत ओळ ईगल डीएमई माध्यम वापरताना (10 5 मिली रोपण सेल एकाग्रता) वापरताना सर्वाधिक उत्पन्न देते परंतु बीएमई आणि 199 माध्यमाच्या तुलनेत. जर पेशींची संख्या लागवडीदरम्यान 10 4 पर्यंत कमी केले जाते, त्यानंतर मध्यम 199 पासून सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त होतात. सर्व चाचणी केलेल्या माध्यमांमध्ये 10% गर्भाची सीरम असते.
3.6 सेल संस्कृतींमध्ये वाढणारे व्हायरस
सध्या, प्राइमरी कल्चर्स, सेल स्ट्रेन आणि स्थापित सेल लाइन्सचा वापर प्राण्यांच्या विषाणूंना वेगळे करण्यासाठी आणि प्रसार करण्यासाठी केला जातो. सर्वसाधारणपणे, सर्व व्हायरससाठी प्रक्रिया समान आहे.
सेल मोनोलेयरमधून माध्यम काढून टाकले जाते आणि मध्यममध्ये उपस्थित असणारे अवरोधक (अँटीबॉडीज) काढून टाकण्यासाठी मोनोलेयर संतुलित बफर सॉल्ट सोल्यूशन (BSA) किंवा फॉस्फेट बफर सलाईन (PBS) ने धुतात. व्हायरल कण थोड्या प्रमाणात PBS किंवा PBS मध्ये निलंबित केले जातात आणि 30-60 मिनिटांच्या आत पेशींद्वारे शोषले जातात. यानंतर, खारट द्रावण ताजे माध्यमाने बदलले जातात.
विषाणूंसह संवर्धित पेशींच्या संसर्गामुळे पेशींमध्ये वैशिष्ट्यपूर्ण मॉर्फोलॉजिकल बदल होतात. अंतिम डीजनरेटिव्ह सेल्युलर प्रक्रिया (सायटोपॅथोजेनिक इफेक्ट, सीपीई) व्हायरसच्या उपस्थितीत अनेक आठवड्यांच्या वाढीनंतरच आढळतात, परंतु काही प्रकरणांमध्ये, सीपीई 12 तासांनंतर आढळतात. मॉर्फोलॉजिकल बदलांचे तपशील वेगवेगळ्या बाबतीत भिन्न असतात. व्हायरस
जर, उत्पादक संसर्गाऐवजी, विषाणू सेल्युलर परिवर्तनास कारणीभूत ठरते, तर हे मॉर्फोलॉजी आणि पेशींच्या वाढीच्या वैशिष्ट्यांमधील वैशिष्ट्यपूर्ण बदलांसह देखील आहे.
4. व्हायरस-संक्रमित पेशींसोबत काम करताना खबरदारी
विषाणूंचा सायटोपॅथोजेनिक प्रभाव असतो आणि ते मानव आणि प्राण्यांच्या अनेक रोगांमध्ये एटिओलॉजिकल एजंट म्हणून काम करतात. याशिवाय, अनेक विषाणू (उदा., ऑनकॉर्नाव्हायरस, हर्पेस विषाणू प्रकार II, एडिनोव्हायरस, पॉलीओमा विषाणू आणि SV40) प्राण्यांमध्ये ट्यूमर-प्रेरित करणारे घटक आहेत. जिवाणू फिल्टरमधून जाण्याच्या विषाणूंच्या क्षमतेमुळे, विषाणूजन्य निलंबनाच्या उपस्थितीत, संसर्ग नसलेल्या पेशींच्या संस्कृतींमधून विषाणू वगळणे कठीण होऊ शकते जेथे कल्चर रूमच्या हवेद्वारे व्हायरसचा प्रसार शक्य आहे.
खालील सावधगिरी सामान्य स्वरूपाची आहे आणि जेव्हा विषाणूंमुळे कोणताही विशिष्ट धोका उद्भवत नाही तेव्हाच लागू होतो. विशेषत: धोकादायक विषाणू वापरताना जे प्रयोगशाळेतील कामगार किंवा आसपासच्या जगामध्ये लोक आणि प्राण्यांच्या आरोग्यास धोका निर्माण करतात, अतिरिक्त सावधगिरी बाळगली पाहिजे. विशेष चिंतेच्या विषाणूंमध्ये न्यूकॅसल रोगाचे विषाणू, पाय-आणि-तोंड रोगाचे विषाणू, वेसिक्युलर स्टोमाटायटीस विषाणू, चेचक विषाणू, रेबीज विषाणू, नागीण बी विषाणू इत्यादींचा समावेश होतो. शिवाय, SV40 सारखे व्हायरस देखील मानवांना धोका देत नाहीत याची खात्री असू शकत नाही.
पेशींना संक्रमित करण्यासाठी आणि विषाणू-संक्रमित पेशी वाढवण्यासाठी एक विशेष खोली किंवा खोल्यांच्या गटाचा वापर करणे आवश्यक आहे.
या भागांमधून कोणतेही जिवंत विषाणू घट्ट सीलबंद कंटेनरमध्ये ठेवल्याशिवाय काढले जाऊ नयेत. या कंटेनरच्या बाहेरील पृष्ठभाग विषाणूजन्य कणांनी दूषित होणार नाहीत याची खबरदारी घेतली पाहिजे.
व्हायरससह काम करताना, विशेष संरक्षणात्मक कपडे (लॅब कोट) वापरणे आवश्यक आहे. काम केल्यानंतर, हे कपडे विशेष ऑटोक्लेव्हिंग टाकीमध्ये ठेवले पाहिजेत.
व्हायरसच्या संपर्कात आलेले सर्व माध्यम आणि काचेच्या वस्तूंवर क्लोरोसचा उपचार केला पाहिजे; यानंतरच त्यांना व्हायरससह काम करण्याच्या हेतूने खोलीतून काढले जाऊ शकते.
सर्व प्लास्टिकची भांडी विशेष ऑटोक्लेव्हिंग टाकीमध्ये ठेवली पाहिजेत.
विषाणूजन्य सामग्री साठवण्यासाठी आणि त्यावर प्रक्रिया करण्यासाठी उपकरणे व्हायरस हाताळणी कक्षामध्ये स्थित असणे आवश्यक आहे.
प्रयोगशाळेतील कामगारांना हानिकारक पदार्थांपासून संरक्षण मिळावे यासाठी प्रयोगशाळा दोन-सायकल ऑटोक्लेव्हसह सुसज्ज असावी.
4.1 व्हायरस शोधणे
तुम्ही व्हायरसची उपस्थिती शोधू शकता आणि अनेक वेगवेगळ्या चाचण्या वापरून त्यांचे प्रमाण निश्चित करू शकता, उदाहरणार्थ:
1) विषाणूजन्य क्रियाकलाप होस्टमध्ये विशिष्ट प्रतिसाद देण्यासाठी आवश्यक व्हायरस-युक्त सामग्रीचे प्रमाण निर्धारित करून मोजले जाते. व्हायरस-प्रेरित प्रतिसाद सर्व-किंवा-काहीही असू शकतो (म्हणजे संसर्गाची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती) किंवा परिमाणवाचकपणे व्यक्त केली जाऊ शकते, जसे की संसर्ग होण्यासाठी लागणारा कालावधी किंवा संवेदनशील पेशीच्या थरातील जखमांची संख्या. विषाणूजन्य क्रियाकलापांच्या परिमाणात्मक निर्धाराला टायट्रेशन म्हणतात.
संबंधित प्रतिक्रिया घडवून आणण्यास सक्षम असलेल्या विषाणूच्या सर्वात लहान प्रमाणास संसर्गजन्य एकक म्हणतात आणि प्रारंभिक व्हायरल सस्पेंशनचे टायटर प्रति युनिट व्हॉल्यूम संक्रामक युनिट्सची संख्या म्हणून व्यक्त केले जाते. उदाहरणार्थ, 1:10 6 च्या डायल्युशनमध्ये संक्रमित फुफ्फुसाच्या ऊतींचे निलंबन इंट्रानासली प्रशासित केल्यावर इन्फ्लूएंझा विषाणूच्या निलंबनाचे किमान प्रमाण 0.1 मिली असते, तर याचा अर्थ असा होतो की इन्फ्लूएंझाचा टायटर मूळ फुफ्फुसाच्या टिश्यू सस्पेंशनमधील विषाणू 10 7 संसर्गजन्य युनिट्स प्रति 1 ml--1/(10~1-10-6) = 10 7 इतके आहे.
नियमानुसार, व्हायरस टायट्रेशन पद्धतीचा एक अनिवार्य घटक ही एक चाचणी आहे जी लसीकरण परिणाम सकारात्मक किंवा नकारात्मक म्हणून मूल्यांकन करण्यास अनुमती देते. उदाहरणार्थ, प्राण्यांच्या विषाणूंना टायट्रेटिंग करताना, अशी चाचणी सेल कल्चरमध्ये दृश्यमान जखमांची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती असू शकते, त्वचेवर किंवा कॉर्नियामध्ये विषाणू टोचण्याच्या ठिकाणी दाहक प्रतिक्रिया, प्राण्यांमध्ये पक्षाघात होतो. मेंदूमध्ये विषाणूच्या प्रवेशाचा परिणाम, इ. काहीवेळा यजमान जीवाकडून दृश्यमान प्रतिक्रिया नसतानाही विषाणूचा गुणाकार आढळून येतो: उदाहरणार्थ, मायक्सोव्हायरससह चिकन भ्रूणांचा संसर्ग हेमॅग्ग्लुटिनिनच्या देखाव्याद्वारे शोधला जाऊ शकतो. allantoic द्रवपदार्थ.
सर्वोत्कृष्ट परिणाम टायट्रेशन पद्धतींद्वारे प्राप्त केले जातात, जे विषाणू-युक्त सामग्रीच्या ज्ञात प्रमाणाने संक्रमित पेशींच्या थराच्या विशिष्ट क्षेत्रामध्ये वेगळ्या जखमांची संख्या मोजण्यावर आधारित असतात. अशा प्रकरणांमध्ये जेव्हा विषाणूसाठी संवेदनशील पेशींची संख्या आणि त्यात प्रवेश करण्यायोग्य असतात, व्यावहारिकदृष्ट्या अमर्यादपणे मोठ्या मानल्या जाऊ शकतात, उदाहरणार्थ, जेव्हा पोषक आगरवरील बॅक्टेरियाच्या मोनोलेयर कल्चरला फेजचा संसर्ग होतो किंवा जेव्हा प्राण्यांच्या पेशींची सतत मोनोलेयर संस्कृती असते. विषाणूचा संसर्ग झाला आहे, विषाणूमुळे होणारे घाव किंवा प्लेक्स तयार झालेले फेज, या अर्थाने, घन पोषक माध्यमावरील जीवाणूंच्या वसाहतीसारखेच असतात. ज्याप्रमाणे या वसाहतींची संख्या टायट्रेटेड तयारीमध्ये समाविष्ट असलेल्या जिवाणू पेशींच्या संख्येच्या प्रमाणात असते, त्याचप्रमाणे प्लेक्सची संख्या ही मोनोलेयर संस्कृतीमध्ये जोडलेल्या विषाणूच्या प्रमाणाशी थेट प्रमाणात असते; संक्रमित पेशींद्वारे विषाणूजन्य कणांची निर्मिती, जे उदाहरणार्थ, न्यूक्लिक अॅसिडचे स्वरूप आणि कणांच्या सममितीने ओळखले जाऊ शकते.
2) संक्रमित पेशींद्वारे न्यूक्लिक अॅसिडची निर्मिती, ज्याची घनता ग्रेडियंटमध्ये सेंट्रीफ्यूगेशन दरम्यान वैशिष्ट्यपूर्ण घनता असू शकते किंवा अॅग्रोज जेलमध्ये इलेक्ट्रोफोरेसीस दरम्यान वैशिष्ट्यपूर्ण आकार असू शकतो किंवा सुक्रोज एकाग्रता ग्रेडियंटमध्ये सेंट्रीफ्यूगेशन.
3) संक्रमित पेशी किंवा रूपांतरित पेशींद्वारे वैशिष्ट्यपूर्ण प्रतिजनांचे उत्पादन, ज्याला फ्लोरोसेंट विशिष्ट प्रतिपिंडांनी डाग पडून किंवा पेशीच्या पडद्यामध्ये बदल घडवून आणून हेम शोषण होऊ शकते. थेट पध्दतीमध्ये, विषाणूजन्य प्रतिजनांविरूद्ध तयार होणारे प्रतिपिंड फ्लोरोक्रोमसह एकत्रित केले जातात आणि संक्रमित पेशींना डाग देण्यासाठी वापरले जातात. सकारात्मक प्रतिक्रिया (फ्लोरोसंट मायक्रोस्कोपमध्ये पिवळा-हिरवा रंग) पेशींमध्ये विषाणूजन्य प्रतिजनांची उपस्थिती दर्शवते. म्हणून ही पद्धत सेल्युलर ट्रान्सफॉर्मेशन शोधण्यासाठी वापरली जाऊ शकते जेव्हा ऍन्टीबॉडीज लवकर SV40 व्हायरस ऍन्टीजनच्या विरूद्ध तयार होतात, उदाहरणार्थ, किंवा जेव्हा ऍन्टीबॉडीज कॅप्सिड प्रोटीनच्या विरूद्ध तयार होतात तेव्हा प्रौढ व्हायरसची निर्मिती शोधण्यासाठी. अप्रत्यक्ष पद्धतीने, अँटीबॉडीज फ्लोरोक्रोमसह एकत्र केले जात नाहीत. त्याऐवजी, निश्चित पेशींच्या तयारीमध्ये प्रतिपिंडांसह प्रतिपिंडांची प्रतिक्रिया झाल्यानंतर, फ्लोरोक्रोमशी संयुग्मित अँटीगामा ग्लोब्युलिन प्रतिपिंडे त्यांच्यामध्ये जोडली जातात. ही पद्धत अधिक संवेदनशील आहे आणि फ्लोरोसेंट डाईसह प्रत्येक वैयक्तिक अँटीबॉडीचे संयोग टाळते. अशाप्रकारे, त्याच फ्लोरोसेंट अँटी-रेबिट ऍन्टीबॉडीज (मेंढ्यांपासून ससा गॅमा ग्लोब्युलिनच्या विरूद्ध मिळविलेले) सशांमध्ये उत्पादित केलेल्या कोणत्याही प्रतिपिंडांना डाग देण्यासाठी वापरल्या जाऊ शकतात जे उत्पादकपणे संक्रमित किंवा बदललेल्या पेशींमध्ये व्हायरल प्रतिजनांशी संवाद साधतात. एक आणखी अप्रत्यक्ष, परंतु अधिक संवेदनशील पद्धत ज्याला फ्लोरोसेंट मायक्रोस्कोप वापरण्याची आवश्यकता नाही ती म्हणजे पेरोक्सिडेज-अँटीपेरोक्सिडेस पद्धत. या पद्धतीनुसार, ससा प्रतिपिंडे निश्चित सेल प्रतिजनांसह प्रतिक्रिया देतात आणि नंतर शेळीच्या अँटी-रेबिट इम्युनोग्लोबुलिन प्रतिपिंडांनी तिखट मूळ असलेले एक रोपटे पेरोक्सिडेस आणि ससा अँटीपेरोक्सिडेस कॉम्प्लेक्समध्ये एकत्रित केले जातात. यानंतर, तयारीवर डायमिनोबेन्झिडाइन आणि हायड्रोजन पेरोक्साइडचा उपचार केला जातो; तपकिरी रंग प्रतिजनांची उपस्थिती दर्शवतो.
4) विषाणूजन्य कणांवर प्रतिजनांच्या उपस्थितीमुळे हेमॅग्लुटिनेशन प्रतिक्रिया होऊ शकते, ज्यामुळे परिमाणवाचक मूल्यांकन होऊ शकते. अनेक विषाणूंमध्ये प्रतिजन असतात जे लाल रक्तपेशींमध्ये शोषून घेतात आणि त्यांना एकत्र चिकटवतात. जेव्हा मोठ्या संख्येने व्हायरल कण आणि एरिथ्रोसाइट्स संवाद साधतात तेव्हा पेशींचे नेटवर्क तयार होते आणि निलंबन एकत्रित होते, म्हणजे. लाल रक्तपेशींचा अवक्षेप होतो. यात काही विशिष्टता आहे की काही विषाणूंमुळे काही प्राण्यांच्या लाल रक्तपेशींचे एकत्रीकरण होते, परंतु सक्रिय संयोजन आढळल्यास, विषाणूचे टायटर निश्चित करण्यासाठी हेमॅग्लुटिनेशन एक जलद चाचणी बनते. हेपरिनाइज्ड सिरिंजमध्ये रक्त गोळा केले जाते आणि लाल रक्तपेशी 0.85% NaCl मध्ये 200 ग्रॅम 10 मिनिटांसाठी तीन वेळा धुतल्या जातात. अंतिम एरिथ्रोसाइट गोळी 0.85% NaCl द्रावणाच्या 200 पटीने निलंबित केली जाते. मायक्रोटायटर प्लेट्समध्ये हेमॅग्लुटिनेशन चाचणी करणे सर्वात सोयीचे आहे. 0.85% NaCl किंवा PBS चे 25 μl मायक्रोटायटर प्लेटच्या विहिरींच्या मालिकेत जोडले जातात; पहिल्या विहिरीत 25 μl व्हायरस निलंबन जोडले जाते आणि मिश्रण ढवळले जाते (1:2 पातळ करणे). 25 µl नंतर पहिल्या विहिरीतून दुसऱ्या (1:4 डायल्युशन) मध्ये हस्तांतरित केले जाते आणि असेच, अंतिम सौम्यता 1:2048 होईपर्यंत. यानंतर, प्रत्येक विहिरीमध्ये 25 μl एरिथ्रोसाइट सस्पेंशन जोडले जाते, मिश्रण ढवळले जाते आणि 4°C, खोलीचे तापमान किंवा 37°C वर हेमॅग्लुटिनेशन होईपर्यंत (1-2 तास) सोडले जाते. ज्या विहिरींमध्ये एकत्रीकरण झाले, तेथे एरिथ्रोसाइट गाळाचा आकार अनियमित असतो आणि ज्या विहिरींमध्ये हेमॅग्ग्लुटिनेशन झाले नाही तेथे सेल गाळ विहिरीच्या तळाशी एक संक्षिप्त बिंदू बनवते. ज्या विहिरीमध्ये हेमॅग्ग्लूटिनेशन झाले होते त्या शेवटच्या विहिरीतील विघटन हे टायटर मानले जाते आणि 1 हेमॅग्ग्लूटिनिंग युनिट (एचएयू) चे मूल्य या विघटनासाठी नियुक्त केले जाते. मागील सौम्यता मध्ये अनुक्रमे 2 GAE आणि असेच समाविष्ट आहे.
5) वैशिष्ट्यपूर्ण एंझाइमच्या संक्रमित पेशींद्वारे निर्मिती, किंवा यजमान पेशींच्या संबंधित एन्झाईम्सपासून त्यांच्या गुणधर्मांद्वारे सहजपणे ओळखल्या जाणार्‍या एन्झाईम्स.
4.2 हेला सेल कल्चरमध्ये पोलिओव्हायरस प्रकार 3 मिळविण्याचे उदाहरण वापरून पिकोर्नाव्हायरसची लागवड
विषाणूंची लागवड करण्यासाठी विशिष्ट तंत्र म्हणून, प्रत्यारोपण करण्यायोग्य पेशींमध्ये पोलिओव्हायरस वाढण्याची पद्धत उद्धृत करू शकते.
सर्व प्रक्रिया निर्जंतुकीकरण परिस्थितीत केल्या जातात.
काही HeLa सेल सबलाइन्स (उदा. HeLa S3) कमी कॅल्शियम आयन सांद्रता असलेल्या माध्यमांमध्ये वाढू शकतात (उदा. CaS2MEM). प्रभावी संसर्गासाठी पेशींची एकसंध निलंबनात चांगली वाढ होणे आवश्यक आहे. पेशी कमी-स्पीड सेंट्रीफ्यूगेशन (900 ग्रॅमवर 15 मिनिटे) द्वारे पेलेटेड असतात आणि CaS2MEM माध्यमात ~2 च्या एकाग्रतेपर्यंत पुन्हा निलंबित केले जातात. 10 7 पेशी/ml (मूळ खंडाच्या ~1/20).
व्हायरस प्रति सेल 10-50 PFU च्या एकाग्रतेने सेल सस्पेंशनमध्ये जोडला जातो; चुंबकीय ढवळत 35 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर 1 तास उबवा.
निलंबन समान माध्यमाने 2 च्या एकाग्रतेने पातळ केले जाते. 10 6 पेशी/मिली आणि 100 µCi [3 H]-युरिडीन घाला.
सेल सस्पेंशन 8 तासांसाठी उष्मायन केले जाते, त्यानंतर पेशी कमी-स्पीड सेंट्रीफ्यूगेशन (15 मिनिटे 900 ग्रॅम) द्वारे पेलेटेड असतात आणि मॅग्नेशियम आणि कॅल्शियम आयनपासून मुक्त फॉस्फेट बफर सोल्यूशन (PBS) सह एकदा धुतात.
पेशी PBS (5-10 7 पेशी/मिली) मध्ये पुन्हा निलंबित केल्या जातात आणि तीन फ्रीझ-थॉ सायकलमधून जातात.
सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे सेल डेब्रिज काढला जातो.
पुढील शुध्दीकरणासाठी सुपरनॅटंट जतन केले जाते.
संदर्भग्रंथ
1. अॅडम्स आर. बायोकेमिस्टसाठी सेल कल्चर पद्धती. - एम.: मीर, 1983, 263 पी.
2. विषाणूशास्त्र. पद्धती. / एड. B. मेखी. - एम.: मीर, 1988, 344 पी.
3. गोलुबेव डी.बी., सोमिनिना ए.ए., मेदवेदेव एम.एन. व्हायरोलॉजीमध्ये सेल संस्कृतींच्या वापरासाठी मार्गदर्शक. - एल.: मेडिसिन, 1976, 224 पी.
4. डायकोनोव्ह एल.पी., ग्लुखोव व्ही.एफ., पोझ्डन्याकोव्ह ए.ए., डेनिसेन्को जी.एफ., काल्मीकोवा टी.पी. प्राण्यांच्या पेशी आणि ऊतींची लागवड. - Stavropol: Stavrop. प्रवदा, १९८८, भाग २, ९१ पी.
5. अंतर्गत संस्कृतीत प्राणी सेल. एड एल.पी. डायकोनोव्हा, व्ही.आय. सिटकोवा. - एम.: 2000.
6. प्राणी पेशी संस्कृती. पद्धती. / एड. आर. फ्रेशनी. - एम.: मीर, 1989, 333 पी.
7. पशुवैद्यकीय विषाणूशास्त्रासाठी मार्गदर्शक. / एड. व्ही.एन. सायरीना. - एम.: कोलोस, 1965, 687 पी.
8. सर्गेव व्ही.ए. प्राण्यांच्या विषाणूंचे पुनरुत्पादन आणि लागवड. - एम.: कोलोस, 1976, 303 पी.
9. फेनर एफ., मॅकऑस्लेन बी., मिम्स एस., सॅमब्रुक जे., व्हाइट डी. प्राणी विषाणूंचे जीवशास्त्र. - एम.: मीर, 1977, खंड 1, 447 पी.
Allbest.ru वर पोस्ट केले
...तत्सम कागदपत्रे
व्हायरसने चिकन भ्रूण संक्रमित करण्याचे मुख्य मार्ग. उपसंस्कृती मिळविण्याचे टप्पे: सेल लेयर काढून टाकणे, पेशी वेगळे करणे आणि बीजन करणे, सेल कल्चरला व्हायरसने संक्रमित करण्याची पद्धत, परिणाम रेकॉर्ड करणे. मानवी आणि प्राणी पेशींच्या अर्ध-अखंड संस्कृती.
सादरीकरण, 01/29/2015 जोडले
सूक्ष्मजीवशास्त्रातील पोषक माध्यम, त्यांचे वर्गीकरण आणि वाण, क्षेत्रे आणि वापराची वैशिष्ट्ये. एरोबिक आणि अॅनारोबिक सूक्ष्मजीवांची लागवड. सूक्ष्मजीवांच्या परिमाणवाचक लेखांकनाच्या पद्धती, त्यांची संस्कृती साठवण्यासाठी मूलभूत नियम आणि अटी.
अमूर्त, 03/25/2013 जोडले
उच्च वनस्पतींमध्ये फ्लेवेन्स: रचना, मुख्य प्रतिनिधी, स्थानिकीकरण, कार्यात्मक भूमिका. चहाच्या वनस्पतींच्या सेल आणि कॉलस कल्चरची मॉर्फोफिजियोलॉजिकल आणि बायोकेमिकल वैशिष्ट्ये. फ्लॅव्हन्स आणि प्रोअँथोसायनिडिनच्या सामग्रीचे निर्धारण.
प्रबंध, 02/02/2018 जोडले
पेशी आणि एंजाइमच्या स्थिरीकरणासाठी वाहकांचे प्रकार. स्थिर पिके आणि विविध उद्योगांमध्ये त्यांचा वापर होण्याची शक्यता. अचल संस्कृती वापरून अणुभट्ट्यांचे प्रकार. स्थिर संस्कृती वापरण्याचे फायदे आणि तोटे.
अभ्यासक्रम कार्य, 01/15/2012 जोडले
कृत्रिम सेल्युलर असोसिएशन तयार करण्याच्या प्रक्रियेचा अभ्यास करणे ज्याच्या मदतीने नायट्रोजन-फिक्सिंग जीवांची महत्त्वपूर्ण क्रिया लागवड केलेल्या वनस्पतींच्या पेशी आणि ऊतींमध्ये केली जाऊ शकते. एंडो- आणि एक्सोसिम्बायोटिक प्रकारच्या संघटना. लोकसंख्या निर्माण करण्याचे उद्दिष्ट.
सादरीकरण, 03/18/2015 जोडले
बल्क मीडियावर एंजाइम वाढवताना पर्यावरणीय आर्द्रतेचे महत्त्व. सूक्ष्म बुरशीजन्य संस्कृतींच्या वायुवीजनाच्या डिग्रीचा प्रभाव. लिपेज बायोसिंथेसिसवर मध्यम रचना आणि लागवडीच्या कालावधीचा प्रभाव. प्रक्रिया आणि पिकांची वाढ करण्याच्या पद्धती.
सादरीकरण, 03/19/2015 जोडले
सादरीकरण, 02/23/2014 जोडले
सूक्ष्म शैवालांच्या शुद्ध संस्कृतींना वेगळे करण्याच्या पद्धती आणि त्यांची ओळख पटवण्याच्या पद्धती. युग्लेना ग्लॅसिलिसच्या शुद्ध संस्कृतीचे पृथक्करण; सेल व्यवहार्यता निश्चित करण्याच्या पद्धतींचा विचार. श्वासोच्छवासाच्या अनकपलरच्या प्रभावाचा अभ्यास करणे आणि पेशींच्या गतिशीलतेवर एटीपी संश्लेषण करणे.
प्रबंध, 05/24/2012 जोडले
अँटीव्हायरल प्रतिकारशक्तीचे विशिष्ट घटक आणि विशिष्ट प्रतिजनासाठी प्रतिपिंडांचे संश्लेषण. मेमरी पेशी आणि प्रतिपिंड जैवसंश्लेषणाच्या स्वरूपात रोगप्रतिकारक प्रतिसादाचे उत्पादन. पक्षी आणि पॅंगोलिनमध्ये संसर्गजन्य ब्राँकायटिसचा प्रसार. पेशींमध्ये विषाणूंची लागवड.
चाचणी, 11/17/2010 जोडले
वनस्पती प्रजननामध्ये सेल तंत्रज्ञानाचा वापर. रिमोट हायब्रिडायझेशनमध्ये इन विट्रो पद्धतींचा वापर. नवीन प्रजनन सामग्री मिळविण्यासाठी कॉलस लागवडीवर कार्य करा. सोमाटिक पेशींचे संकरीकरण आणि त्याचे मुख्य परिणाम.
1966).
1940 आणि 1950 च्या दशकात विषाणूशास्त्राच्या क्षेत्रातील संशोधनाच्या संदर्भात सेल कल्चर तंत्रे लक्षणीयरीत्या विकसित झाली. सेल संस्कृतींमध्ये वाढणाऱ्या विषाणूंमुळे लसींच्या निर्मितीसाठी शुद्ध विषाणूजन्य सामग्री मिळवणे शक्य झाले आहे. पोलिओ लस ही सेल कल्चर तंत्रज्ञानाचा वापर करून तयार करण्यात आलेल्या पहिल्या औषधांपैकी एक होती. 1954 मध्ये, एंडर्स, वेलर आणि रॉबिन्स यांना नोबेल पारितोषिक मिळाले "त्यांच्या पोलिओ विषाणूच्या ऊती संस्कृतींमध्ये वाढण्याची क्षमता शोधल्याबद्दल." 1952 मध्ये, सुप्रसिद्ध मानवी कर्करोग सेल लाइन हेला प्राप्त झाली.
लागवडीची मूलभूत तत्त्वे[ | ]
सेल अलगाव[ | ]
शरीराबाहेर लागवडीसाठी, जिवंत पेशी अनेक प्रकारे मिळवता येतात. पेशी रक्तापासून वेगळ्या केल्या जाऊ शकतात, परंतु केवळ ल्युकोसाइट्स संस्कृतीत वाढण्यास सक्षम आहेत. मोनोन्यूक्लियर पेशी कोलेजेनेस, ट्रिप्सिन, प्रोनेस सारख्या एन्झाईम्सचा वापर करून मऊ उतींपासून वेगळ्या केल्या जाऊ शकतात, जे बाह्य पेशी नष्ट करतात. याव्यतिरिक्त, ऊतींचे तुकडे आणि साहित्य पोषक माध्यमात ठेवता येते.
थेट वस्तू (ex vivo) पासून घेतलेल्या पेशींच्या संस्कृतींना प्राथमिक म्हणतात. ट्यूमर पेशींचा अपवाद वगळता बहुतेक प्राथमिक पेशींचे आयुष्य मर्यादित असते. विशिष्ट संख्येच्या विभाजनानंतर, या पेशी जुन्या होतात आणि विभाजन करणे थांबवतात, तरीही ते व्यवहार्य राहू शकतात.
तेथे अमर ("अमर") सेल लाइन्स आहेत ज्या अनिश्चित काळासाठी पुनरुत्पादित करू शकतात. बहुतेक ट्यूमर पेशींमध्ये, ही क्षमता यादृच्छिक उत्परिवर्तनाचा परिणाम आहे, परंतु काही प्रयोगशाळेतील सेल लाईन्समध्ये ते टेलोमेरेझ जनुक सक्रिय करून कृत्रिमरित्या प्राप्त केले जाते.
सेल संस्कृती[ | ]
पेशी स्थिर तापमानात विशेष पोषक माध्यमांमध्ये वाढतात. प्लांट सेल कल्चर्स नियंत्रित प्रकाश वापरतात आणि सस्तन प्राण्यांच्या पेशींना सामान्यतः सेल कल्चर इनक्यूबेटरमध्ये विशेष गॅस वातावरणाची आवश्यकता असते. नियमानुसार, हवेतील कार्बन डाय ऑक्साईड आणि पाण्याची वाफ यांचे प्रमाण नियंत्रित केले जाते, परंतु कधीकधी ऑक्सिजन देखील. वेगवेगळ्या पेशी संस्कृतींसाठी पोषक माध्यमांची रचना, ग्लुकोज एकाग्रता, वाढीच्या घटकांची रचना इत्यादींमध्ये भिन्नता असते. सस्तन प्राण्यांच्या सेल कल्चर मीडियामध्ये वापरल्या जाणार्‍या वाढीचे घटक बहुतेकदा रक्ताच्या सीरमसह जोडले जातात. या प्रकरणात जोखीम घटकांपैकी एक म्हणजे सेल कल्चरच्या प्राइन्स किंवा व्हायरससह संसर्ग होण्याची शक्यता. लागवडीमध्ये, दूषित घटकांचा वापर कमी करणे किंवा कमी करणे हे एक महत्त्वाचे उद्दिष्ट आहे. तथापि, सराव मध्ये हे नेहमीच साध्य होत नाही. सर्वोत्तम, परंतु सर्वात महाग मार्ग म्हणजे मट्ठाऐवजी शुद्ध वाढ घटक जोडणे.
सेल लाईन्सचे क्रॉस-दूषित होणे[ | ]
सेल संस्कृतींसह काम करताना, शास्त्रज्ञांना क्रॉस-दूषित समस्या येऊ शकतात.
वाढत्या पेशींची वैशिष्ट्ये[ | ]
पेशी वाढत असताना, सतत विभागणीमुळे, संस्कृतीत त्यांचे प्रमाण जास्त असू शकते आणि परिणामी, खालील समस्या उद्भवतात:
सेल संस्कृतींचे सामान्य कार्य राखण्यासाठी आणि नकारात्मक घटना टाळण्यासाठी, पोषक माध्यम वेळोवेळी बदलले जाते, सेल सिंचन आणि रक्तसंक्रमण केले जाते. बॅक्टेरिया, यीस्ट किंवा इतर सेल लाइन्ससह संस्कृतींचे दूषित टाळण्यासाठी, सर्व हाताळणी सामान्यतः निर्जंतुकीकरण बॉक्समध्ये केली जातात. मायक्रोफ्लोरा दाबण्यासाठी, प्रतिजैविक (पेनिसिलिन, स्ट्रेप्टोमायसिन) आणि अँटीफंगल औषधे (अॅम्फोटेरिसिन बी) पोषक माध्यमात जोडली जाऊ शकतात.
मानवी पेशींचे संवर्धन करणे हे बायोएथिक्सच्या नियमांच्या काहीसे विरुद्ध आहे, कारण एकाकी वाढलेल्या पेशी मूळ जीवापेक्षा जास्त जगू शकतात आणि नंतर प्रयोगासाठी किंवा नवीन उपचार विकसित करण्यासाठी आणि त्यातून नफा मिळवण्यासाठी वापरल्या जाऊ शकतात. या क्षेत्रातील पहिला निर्णय कॅलिफोर्नियाच्या सर्वोच्च न्यायालयाने जॉन मूर विरुद्ध कॅलिफोर्निया विद्यापीठात दिला होता, ज्याने असे मानले होते की रुग्णांना त्यांच्या संमतीने काढून टाकलेल्या अवयवांमधून मिळालेल्या सेल लाईन्समध्ये मालमत्ता अधिकार नाहीत.
हायब्रिडोमा [ | ]
सेल संस्कृतींचा वापर[ | ]
मास सेल कल्चर हा विषाणूजन्य लसी आणि विविध जैवतंत्रज्ञान उत्पादनांच्या औद्योगिक उत्पादनाचा आधार आहे.
जैवतंत्रज्ञान उत्पादने[ | ]
औद्योगिकदृष्ट्या, एन्झाईम्स, सिंथेटिक हार्मोन्स, मोनोक्लोनल अँटीबॉडीज, इंटरल्यूकिन्स, लिम्फोकाइन्स आणि अँटीट्यूमर औषधे यासारखी उत्पादने सेल संस्कृतींमधून मिळविली जातात. जरी अनेक साधी प्रथिने जिवाणू संस्कृतींचा वापर करून तुलनेने सहजतेने तयार केली जाऊ शकतात, परंतु अधिक जटिल प्रथिने जसे की ग्लायकोप्रोटीन्स सध्या केवळ प्राण्यांच्या पेशींमधून तयार केली जाऊ शकतात. या महत्त्वाच्या प्रथिनांपैकी एक हार्मोन एरिथ्रोपोएटिन आहे. वाढत्या सस्तन प्राण्यांच्या पेशींच्या संवर्धनाची किंमत खूप जास्त आहे, म्हणून सध्या कीटक किंवा उच्च वनस्पती सेल संस्कृतींमध्ये जटिल प्रथिने तयार करण्याच्या शक्यतेवर संशोधन केले जात आहे.
टिश्यू कल्चर[ | ]
सेल कल्चर हा टिश्यू कल्चर आणि टिश्यू इंजिनीअरिंग तंत्रज्ञानाचा अविभाज्य भाग आहे कारण ते पेशींच्या वाढीसाठी आणि त्यांना व्यवहार्य स्थितीत राखण्यासाठी आधार परिभाषित करते.
लसीकरण [ | ]
पोलिओ, गोवर, गालगुंड, रुबेला आणि चिकनपॉक्स विरूद्ध लस सध्या सेल कल्चर तंत्र वापरून तयार केल्या जात आहेत. H5N1 विषाणूच्या ताणामुळे इन्फ्लूएंझा महामारीच्या धोक्यामुळे, युनायटेड स्टेट्स सरकार सध्या सेल कल्चर वापरून एव्हीयन इन्फ्लूएंझा लस मिळविण्यासाठी संशोधनासाठी निधी देत आहे.
सस्तन नसलेल्या पेशी संस्कृती[ | ]
वनस्पती सेल संस्कृती[ | ]
वनस्पती पेशी संस्कृती सामान्यतः द्रव पोषक माध्यमामध्ये निलंबन म्हणून किंवा घन पोषक तत्वांच्या आधारावर कॉलस कल्चर म्हणून वाढतात. भिन्न नसलेल्या पेशी आणि कॉलसच्या लागवडीसाठी वनस्पतींच्या वाढीच्या संप्रेरकांचे, ऑक्सिन्स आणि साइटोकिनिनचे विशिष्ट संतुलन राखणे आवश्यक आहे.
जिवाणू, यीस्ट संस्कृती[ | ]
मुख्य लेख:
बॅक्टेरिया आणि यीस्ट पेशींच्या लहान संख्येची लागवड करण्यासाठी, पेशी जिलेटिन किंवा अगर-अगरवर आधारित घन पोषक माध्यमावर प्लेट केल्या जातात. मोठ्या प्रमाणात उत्पादनासाठी, द्रव पोषक माध्यमांमध्ये लागवड (ब्रॉथ) वापरली जाते.
व्हायरल संस्कृती[ | ]
I. पेशी संस्कृती
सर्वात सामान्य सिंगल-लेयर सेल कल्चर आहेत, ज्यांना 1) प्राथमिक (प्रामुख्याने ट्रिप्सिनाइज्ड), 2) अर्ध-अखंड (डिप्लोइड) आणि 3) सतत विभागले जाऊ शकते.
उत्पत्तीनेते भ्रूण, ट्यूमर आणि प्रौढ जीवांमध्ये वर्गीकृत आहेत; मॉर्फोजेनेसिस द्वारे- फायब्रोब्लास्टिक, एपिथेलियल इ.
प्राथमिकसेल कल्चर्स हे कोणत्याही मानवी किंवा प्राण्यांच्या ऊतींचे पेशी असतात ज्यांना विशेष पोषक माध्यमाने लेपित प्लास्टिक किंवा काचेच्या पृष्ठभागावर मोनोलेयरच्या स्वरूपात वाढण्याची क्षमता असते. अशा पिकांचे आयुर्मान मर्यादित असते. प्रत्येक विशिष्ट प्रकरणात, ते मेकॅनिकल ग्राइंडिंग, प्रोटीओलाइटिक एन्झाईम्ससह उपचार आणि पेशींच्या संख्येचे मानकीकरण केल्यानंतर ऊतकांमधून मिळवले जातात. माकडांच्या किडनी, मानवी भ्रूण मूत्रपिंड, मानवी अम्निअन आणि चिकन भ्रूण यापासून मिळणाऱ्या प्राथमिक संस्कृतींचा मोठ्या प्रमाणावर विषाणू अलग ठेवण्यासाठी आणि जमा करण्यासाठी तसेच विषाणूजन्य लसींच्या निर्मितीसाठी केला जातो.
अर्ध-लेदर(किंवा द्विगुणित ) सेल कल्चर्स - समान प्रकारच्या पेशी, गुणसूत्रांचा मूळ डिप्लोइड संच राखून, विट्रोमध्ये 50-100 पॅसेजेसपर्यंत टिकून राहण्यास सक्षम. मानवी भ्रूण फायब्रोब्लास्ट्सच्या डिप्लोइड स्ट्रेनचा वापर व्हायरल इन्फेक्शन्सच्या निदानासाठी आणि विषाणूजन्य लसींच्या निर्मितीसाठी केला जातो.
सततसेल लाईन्स संभाव्य अमरत्व आणि हेटरोप्लॉइड कॅरिओटाइप द्वारे दर्शविले जातात.
प्रत्यारोपित रेषांचे स्त्रोत प्राथमिक सेल संस्कृती आहेत (उदाहरणार्थ, एसओसी, पीईएस, व्हीएनके -21 - एक दिवसाच्या सीरियन हॅमस्टरच्या मूत्रपिंडातून; पीएमएस - गिनी पिगच्या मूत्रपिंडातून इ.) च्या वैयक्तिक पेशी जे विट्रोमध्ये अविरतपणे पुनरुत्पादन करतात. पेशींमधून अशी वैशिष्ट्ये दिसू लागणाऱ्या बदलांच्या संचाला ट्रान्सफॉर्मेशन म्हणतात आणि सतत टिश्यू कल्चरच्या पेशींना ट्रान्सफॉर्म्ड म्हणतात.
प्रत्यारोपण करण्यायोग्य सेल लाईन्सचा आणखी एक स्रोत म्हणजे घातक निओप्लाझम. या प्रकरणात, सेल ट्रान्सफॉर्मेशन व्हिवोमध्ये होते. प्रत्यारोपित पेशींच्या खालील ओळी बहुतेक वेळा व्हायरोलॉजिकल प्रॅक्टिसमध्ये वापरल्या जातात: HeLa - गर्भाशयाच्या ग्रीवेच्या कार्सिनोमापासून प्राप्त; Ner-2 - स्वरयंत्रातील कार्सिनोमा पासून; डेट्रॉईट -6 - फुफ्फुसाच्या कर्करोगाच्या मेटास्टॅसिसपासून अस्थिमज्जापर्यंत; आरएच - मानवी मूत्रपिंड पासून.
पेशींची लागवड करण्यासाठी, पोषक माध्यमांची आवश्यकता असते, जे त्यांच्या उद्देशानुसार, वाढ आणि समर्थन माध्यमांमध्ये विभागले जातात. मोनोलेयर तयार करण्यासाठी सक्रिय सेल प्रसार सुनिश्चित करण्यासाठी वाढ माध्यमामध्ये अधिक पोषक असणे आवश्यक आहे. सहाय्यक माध्यमांनी केवळ सेलमधील विषाणूंच्या गुणाकार दरम्यान पेशी आधीच तयार झालेल्या मोनोलेयरमध्ये टिकून राहतील याची खात्री केली पाहिजे.
प्रमाणित सिंथेटिक मीडिया, जसे की सिंथेटिक मीडिया 199 आणि ईगल मीडिया, मोठ्या प्रमाणावर वापरले जातात. उद्देश काहीही असो, सर्व सेल कल्चर मीडिया संतुलित मीठ द्रावण वापरून तयार केले जातात. बहुतेकदा हे हॅन्क्स सोल्यूशन असते. बहुतेक वाढीच्या माध्यमांचा एक अविभाज्य घटक प्राणी रक्त सीरम (वासराचे मांस, बोवाइन, घोडा) आहे, ज्याच्या उपस्थितीशिवाय 5-10% पेशी पुनरुत्पादन आणि मोनोलेयर निर्मिती होत नाही. देखभाल माध्यमांमध्ये सीरम समाविष्ट नाही.
I. सेल संस्कृती - संकल्पना आणि प्रकार. श्रेणी "I. सेल संस्कृती" 2017, 2018 चे वर्गीकरण आणि वैशिष्ट्ये.
II. वायरलेस कम्युनिकेशन्स I. वायर्ड कम्युनिकेशन्स Ø सिटी टेलिफोन कम्युनिकेशन Ø डायरेक्ट टेलिफोन कम्युनिकेशन (इंटरकॉम) Ø रेडिओटेलीफोन कम्युनिकेशन (अल्टाई) Ø प्रेरक कम्युनिकेशन (EKV कम्युनिकेशन “डिस्टन”, “नाल्मेस”) Ø... .
तक्ता 15 तक्ता 14 तक्ता 13 तक्ता 12 तक्ता 11 वेगवेगळ्या वर्षांच्या ऑपरेशनमध्ये चक्रवाढ व्याजाने रस्ते वाहतूक
धडा क्र. 5 ब्रेकिंग सिस्टम विषय क्रमांक 8 ऑटोमोटिव्ह उपकरणांच्या डिझाइनवर नियंत्रण यंत्रणा समूह पाठ योजना आयोजित करणे - रूपरेषा POPON सायकलचे शिक्षक, लेफ्टनंट कर्नल S.A. फेडोटोव्ह "____"...
अंजीर.5.9. चाकांचे दात ट्रिम करण्याबद्दल. रॅकचा कातरणे गुणांक x चाकावरील रॅकद्वारे कापता येणार्‍या दातांच्या संख्येशी कसा संबंधित आहे याचा विचार करूया. रेल्वे स्थान 1 मध्ये स्थापित करू द्या (चित्र 5.9.). या प्रकरणात, रॅक हेड्सची सरळ रेषा N-N प्रतिबद्धता रेषेला t. आणि.... मध्ये छेदेल.
Los verbos irregulares Go - ir Eat - comer Sleep - dormir Want - querer मला खाऊन झोपायचे आहे, तुला झोपायचे आहे, ती खाऊन झोपायची आहे, ती खाऊन झोपायची आहे, आम्हाला झोपायला जायची आहे, तुम्हाला झोपायचे आहे, तुम्हाला खावेसे वाटते आहे...