hodowle komórkowe

Zwierząt

Wskazanie wirusów za pomocą następujących zjawisk

opóźnienie rozwoju,

śmierć, zmiana

muszle zarodka, RGA

CPP, tworzenie blaszek, RIF, RGads, interferencja

choroba, śmierć,

zmiany histologiczne

w tkankach, inkluzje

Miareczkowanie wyizolowanego wirusa; wybór dawki roboczej.

miano wirusa- maksymalne rozcieńczenie materiału zawierającego wirus, w którym oczekiwany efekt jest nadal obserwowany (CPE, RHA, śmierć zwierzęcia).

Identyfikacja izolowanego wirusa w reakcjach neutralizacji, RTGads, RSK, supresji tworzenia blaszek itp. z surowicami diagnostycznymi. Rodzaj (typ) wirusa określane przez neutralizację specyficznego działania wirusa przez odpowiednią surowicę immunologiczną.

Uwaga: miareczkowanie i identyfikacja wirusa odbywa się przy użyciu tego samego zjawiska.

Hodowla wirusów

Wirusologiczne metody badawcze— metody badania biologii wirusów i ich identyfikacji. W wirusologii szeroko stosowane są metody biologii molekularnej, za pomocą których można było ustalić strukturę molekularną cząstek wirusowych, sposób ich przenikania do komórki i cechy reprodukcji wirusów, pierwotną strukturę wirusowych kwasów nukleinowych i białka. Opracowywane są metody określania sekwencji elementów składowych wirusowych kwasów nukleinowych i aminokwasów białkowych. Możliwe staje się powiązanie funkcji kwasów nukleinowych i kodowanych przez nie białek z sekwencją nukleotydów oraz ustalenie przyczyn procesów wewnątrzkomórkowych, które odgrywają ważną rolę w patogenezie infekcji wirusowej.

Wirusologiczne metody badawcze opierają się również na procesach immunologicznych (oddziaływanie antygenu z przeciwciałami), właściwościach biologicznych wirusa (zdolność do hemaglutynacji, hemolizy, aktywność enzymatyczna), cechach interakcji wirusa z komórką gospodarza (charakter cytopatycznego efekt, tworzenie wtrąceń wewnątrzkomórkowych itp.) .

W diagnostyce infekcji wirusowych, w hodowli, izolacji i identyfikacji wirusów, a także w przygotowaniu preparatów szczepionek szeroko stosowana jest metoda hodowli tkankowej i komórkowej. Stosowane są pierwotne, wtórne, stabilne ciągłe i diploidalne hodowle komórkowe. Hodowle pierwotne uzyskuje się poprzez dyspergowanie tkanki enzymami proteolitycznymi (trypsyna, kolagenaza). Źródłem komórek mogą być tkanki i narządy (częściej nerki) zarodków ludzkich i zwierzęcych. Zawiesinę komórek w pożywce umieszcza się w tzw. materacach, butelkach lub szalkach Petriego, gdzie komórki po przywarciu do powierzchni naczynia zaczynają się namnażać. W przypadku infekcji wirusowej zwykle stosuje się monowarstwę komórek. Pożywkę w płynie odsącza się, zawiesinę wirusa wprowadza się w określonych rozcieńczeniach, a po kontakcie z komórkami dodaje się świeżą pożywkę, zwykle bez surowicy.

Komórki z większości pierwotnych kultur mogą być przeszczepiane i są określane jako kultury wtórne. Wraz z dalszym pasażem komórek powstaje populacja komórek podobnych do fibroblastów, zdolnych do szybkiej reprodukcji, z których większość zachowuje oryginalny zestaw chromosomów. Są to tak zwane komórki diploidalne. W seryjnej hodowli komórek uzyskuje się stabilne, ciągłe hodowle komórkowe. Podczas pasaży pojawiają się szybko dzielące się jednorodne komórki z heteroploidalnym zestawem chromosomów. Stabilne linie komórkowe mogą być jednowarstwowe i zawieszone. Hodowle jednowarstwowe rosną w postaci ciągłej warstwy na powierzchni szkła, kultury zawiesinowe w postaci zawiesin w różnych naczyniach za pomocą mieszadeł. Istnieje ponad 400 linii komórkowych pochodzących od 40 różnych gatunków zwierząt (w tym naczelnych, ptaków, gadów, płazów, ryb, owadów) i ludzi.

Fragmenty poszczególnych narządów i tkanek (kultury narządowe) można hodować w sztucznych pożywkach. Tego typu kultury zachowują strukturę tkankową, co jest szczególnie ważne przy izolacji i pasażowaniu wirusów, które nie rozmnażają się w niezróżnicowanych kulturach tkankowych (np. koronawirusy).

W zakażonych hodowlach komórkowych wirusy można wykryć poprzez zmianę morfologii komórki, działanie cytopatyczne, które może być specyficzne, pojawienie się wtrąceń, przez określenie antygenów wirusowych w komórce iw płynie hodowlanym; określenie właściwości biologicznych potomstwa wirusa w płynie hodowlanym i miareczkowanie wirusów w kulturach tkankowych, zarodkach kurzych lub wrażliwych zwierzętach; przez wykrywanie pojedynczych wirusowych kwasów nukleinowych w komórkach przez hybrydyzację molekularną lub klastry kwasów nukleinowych metodą cytochemiczną przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej.

Izolacja wirusów to pracochłonny i długotrwały proces. Przeprowadza się ją w celu określenia typu lub wariantu wirusa krążącego w populacji (na przykład w celu zidentyfikowania wariantu serologicznego wirusa grypy, dzikiego lub szczepionkowego szczepu wirusa polio itp.); w przypadkach, gdy konieczne jest podjęcie pilnych działań epidemiologicznych; kiedy pojawiają się nowe typy lub warianty wirusów; w razie potrzeby potwierdź wstępną diagnozę; do wskazywania wirusów w obiektach środowiskowych. Podczas izolowania wirusów bierze się pod uwagę możliwość ich utrzymywania się w organizmie człowieka, a także wystąpienie zakażenia mieszanego wywołanego przez dwa lub więcej wirusów. Jednorodna genetycznie populacja wirusa uzyskana z pojedynczego wirionu nazywana jest klonem wirusowym, a proces jej uzyskiwania nazywa się klonowaniem.

Do izolacji wirusów stosuje się infekcję podatnych zwierząt laboratoryjnych, zarodki kurze, ale najczęściej stosuje się hodowlę tkankową. Obecność wirusa jest zwykle określana przez specyficzne zwyrodnienie komórek (efekt cytopatyczny), tworzenie się symplastów i syncytiów, wykrycie wtrąceń wewnątrzkomórkowych, a także specyficzny antygen wykrywany za pomocą immunofluorescencji, hemadsorpcji, hemaglutynacji (w wirusach hemaglutynujących) itp. . Znaki te można wykryć dopiero po 2-3 pasażach wirusa.

Do izolacji wielu wirusów, takich jak wirusy grypy, stosuje się zarodki kurze, do izolacji niektórych wirusów Coxsackie i wielu arbowirusów stosuje się nowonarodzone myszy. Identyfikację izolowanych wirusów przeprowadza się za pomocą testów serologicznych i innych metod.

Podczas pracy z wirusami określa się ich miano. Miareczkowanie wirusów zwykle przeprowadza się w hodowli tkankowej, określając najwyższe rozcieńczenie płynu zawierającego wirusa, przy którym następuje zwyrodnienie tkanki, tworzą się wtrącenia i antygeny specyficzne dla wirusa. Metodę łysinkową można wykorzystać do miareczkowania wielu wirusów. Łysinki lub ujemne kolonie wirusów są ogniskami komórek zniszczonych przez wirusa w jednowarstwowej hodowli tkankowej pod powłoką agarową. Liczenie kolonii umożliwia ilościową analizę aktywności zakaźnej wirusów na podstawie tego, że jedna zakaźna cząsteczka wirusa tworzy jedną łysinkę. Łysinki identyfikuje się przez barwienie hodowli barwnikami żywotnymi, zwykle obojętną czerwienią; łysinki nie adsorbują barwnika i dlatego są widoczne jako jasne plamki na tle barwionych żywych komórek. Miano wirusa jest wyrażone jako liczba jednostek tworzących łysinki w 1 ml.

Oczyszczanie i zatężanie wirusów zwykle przeprowadza się przez ultrawirowanie różnicowe, po którym następuje wirowanie w gradientach stężenia lub gęstości. Do oczyszczania wirusów stosuje się metody immunologiczne, chromatografię jonowymienną, immunosorbenty itp.

Diagnostyka laboratoryjna infekcji wirusowych obejmuje wykrycie patogenu lub jego składników w materiale klinicznym; izolacja wirusa z tego materiału; serodiagnoza. Wybór laboratoryjnej metody diagnostycznej w każdym indywidualnym przypadku zależy od charakteru choroby, okresu choroby i możliwości laboratorium. Współczesna diagnostyka zakażeń wirusowych opiera się na metodach ekspresowych, które pozwalają na uzyskanie odpowiedzi już w kilka godzin po pobraniu materiału klinicznego we wczesnych stadiach choroby, są to mikroskopia elektronowa i immunologiczna elektronów, a także immunofluorescencja, metoda hybrydyzacji molekularnej, wykrywanie przeciwciał klasy IgM itp.

Mikroskopia elektronowa ujemnie wybarwionych wirusów pozwala na różnicowanie wirusów i określenie ich stężenia. Zastosowanie mikroskopii elektronowej w diagnostyce infekcji wirusowych ogranicza się do tych przypadków, w których stężenie cząstek wirusowych w materiale klinicznym jest wystarczająco wysokie (10 5 w 1 ml i wyżej). Wadą metody jest brak możliwości rozróżnienia wirusów należących do tej samej grupy taksonomicznej. Ta wada jest eliminowana przez zastosowanie immunologicznej mikroskopii elektronowej. Metoda opiera się na tworzeniu kompleksów immunologicznych, gdy do cząstek wirusa dodaje się specyficzną surowicę, przy jednoczesnym zatężaniu cząstek wirusa, co umożliwia ich identyfikację. Metodę stosuje się również do wykrywania przeciwciał. W celu ekspresowej diagnostyki przeprowadza się badanie pod mikroskopem elektronowym ekstraktów tkankowych, kału, płynu z pęcherzyków i wydzielin z nosogardzieli. Mikroskopia elektronowa jest szeroko stosowana do badania morfogenezy wirusa, jej możliwości są poszerzane przy użyciu znakowanych przeciwciał.

Metoda hybrydyzacji molekularnej, oparta na wykrywaniu specyficznych dla wirusa kwasów nukleinowych, umożliwia wykrycie pojedynczych kopii genów i nie ma sobie równych pod względem czułości. Reakcja opiera się na hybrydyzacji komplementarnych nici DNA lub RNA (sond) i tworzeniu struktur dwuniciowych. Najtańszą sondą jest sklonowany zrekombinowany DNA. Sonda jest znakowana prekursorami radioaktywnymi (zazwyczaj radioaktywnym fosforem). Obiecujące jest zastosowanie reakcji kolorymetrycznych. Istnieje kilka wariantów hybrydyzacji molekularnej: hybrydyzacja punktowa, hybrydyzacja typu blot, hybrydyzacja kanapkowa, hybrydyzacja in situ itp.

Przeciwciała klasy lgM pojawiają się wcześniej niż przeciwciała klasy G (w 3-5 dniu choroby) i znikają po kilku tygodniach, więc ich wykrycie wskazuje na niedawną infekcję. Przeciwciała klasy IgM są wykrywane za pomocą immunofluorescencji lub testu immunoenzymatycznego przy użyciu antysurowic anty-m (surowice anty-IgM z łańcuchem ciężkim).

Metody serologiczne w wirusologii oparte są na klasycznych reakcjach immunologicznych (patrz. Metody badań immunologicznych ): reakcje wiązania dopełniacza, hamowanie hemaglutynacji, neutralizacja biologiczna, immunodyfuzja, hemaglutynacja pośrednia, hemoliza promieniowa, immunofluorescencja, test immunoenzymatyczny, test radioimmunologiczny. Opracowano mikrometody dla wielu reakcji, a ich techniki są stale udoskonalane. Metody te służą do identyfikacji wirusów przy użyciu zestawu znanych surowic oraz do serodiagnostyki w celu określenia wzrostu przeciwciał w drugiej surowicy w porównaniu z pierwszą (pierwsza surowica jest pobierana w pierwszych dniach po chorobie, druga - po 2-3 tygodnie). Wartość diagnostyczna to nie mniej niż czterokrotny wzrost przeciwciał w drugiej surowicy. Jeżeli wykrycie przeciwciał klasy lgM wskazuje na niedawną infekcję, to przeciwciała klasy lgC utrzymują się przez kilka lat, a czasami przez całe życie.

Aby zidentyfikować poszczególne antygeny wirusów i przeciwciała przeciwko nim w złożonych mieszaninach bez wcześniejszego oczyszczania białka, stosuje się immunoblotting. Metoda łączy frakcjonowanie białek przy użyciu elektroforezy w żelu poliakrylamidowym z następującym po nim testem immunologicznym białek za pomocą testu immunoenzymatycznego. Oddzielenie białek zmniejsza wymagania dotyczące czystości chemicznej antygenu i umożliwia identyfikację poszczególnych par antygen-przeciwciało. To zadanie jest istotne na przykład w serodiagnostyce zakażenia HIV, gdzie fałszywie dodatnie reakcje immunoenzymatyczne są spowodowane obecnością przeciwciał przeciwko antygenom komórkowym, które są obecne w wyniku niedostatecznego oczyszczenia białek wirusowych. Identyfikacja przeciwciał w surowicach pacjentów na wewnętrzne i zewnętrzne antygeny wirusowe umożliwia określenie stadium choroby, a w analizie populacji zmienności białek wirusowych. Immunoblotting w zakażeniu HIV jest stosowany jako test potwierdzający do wykrywania poszczególnych antygenów wirusowych i przeciwciał przeciwko nim. Podczas analizy populacji metoda służy do określenia zmienności białek wirusowych. Ogromną wartością metody jest możliwość analizy antygenów syntetyzowanych technologią rekombinacji DNA, ustalenia ich wielkości oraz obecności determinant antygenowych.

Diagnostyka etiologiczna chorób wirusowych prowadzona jest metodami wirusologicznymi, wirusologicznymi, serologicznymi i molekularnymi metodami genetycznymi. Trzy ostatnie metody mogą być stosowane jako ekspresowe metody diagnostyczne.

Wirusologiczna metoda diagnostyczna.

Ostatecznym celem metody jest identyfikacja wirusów do gatunku lub wariantu serologicznego. Metoda wirusologiczna obejmuje kilka etapów:

1) wybór materiału do badań;

2) przetwarzanie materiału zawierającego wirusy;

3) zanieczyszczenie wrażliwych systemów żywych materiałem;

4) wskazanie wirusów w żywych systemach;

5) miareczkowanie izolowanych wirusów;

6) identyfikacja wirusów w reakcjach immunologicznych.

1. Dobór materiału do badań .

Przeprowadza się go we wczesnych stadiach choroby, z zastrzeżeniem zasad, które zapobiegają zanieczyszczeniu materiału obcą mikroflorą i zakażeniu personelu medycznego. Aby zapobiec inaktywacji wirusa podczas transportu, materiał umieszcza się w pożywce do transportu wirusów (VTS) składającej się ze zbilansowanego roztworu soli, antybiotyków i albuminy surowicy. Materiał transportowany jest w specjalnym pojemniku z izolacją termiczną i zamkniętymi workami foliowymi zawierającymi lód. W razie potrzeby materiał przechowuje się w temperaturze -20˚C. Każda próbka materiału do badań powinna być oznakowana imieniem i nazwiskiem pacjenta, rodzajem materiału, datą pobrania, szczegółową diagnozą kliniczną i innymi informacjami.

W zależności od charakteru choroby materiałem do badania może być:

1) wymazy z nosowej części gardła i wymaz z gardła;

2) płyn mózgowo-rdzeniowy;

3) kał i wymazy z odbytu;

6) płyn z jam surowiczych;

7) wymaz ze spojówki;

8) zawartość pęcherzyków;

8) materiał przekrojowy.

Aby uzyskać płukanie z jamy ustnej i gardła, stosuje się 15-20 ml VTS. Pacjent dokładnie przepłukuje gardło VTS przez 1 minutę i zbiera popłuczyny do sterylnej fiolki.

Wymaz z tylnej części gardła pobiera się sterylnym wacikiem, naciskając szpatułką u nasady języka. Wacik umieszcza się w 2-3 ml VTS, płucze i wyciska.

Płyn mózgowo-rdzeniowy uzyskuje się przez nakłucie lędźwiowe. 1-2 ml płynu mózgowo-rdzeniowego umieszcza się w sterylnym pojemniku i dostarcza do laboratorium.

Próbki kału są pobierane w ciągu 2-3 dni w sterylnych fiolkach. Z otrzymanego materiału przygotowuje się 10% zawiesinę przy użyciu roztworu Hanka. Zawiesinę odwirowuje się przy 3000 obr/min, zbiera się supernatant, dodaje się do niego antybiotyki i umieszcza w sterylnym pojemniku.

Krew pobraną przez nakłucie żyły w objętości 5-10 ml odwłóknia się przez dodanie heparyny. Krew pełna nie jest zamrażana i nie dodaje się antybiotyków. Aby uzyskać surowicę, próbki krwi inkubuje się w temperaturze 37°C przez 60 minut.

Płyn z jam surowiczych uzyskuje się przez nakłucie w ilości 1-2 ml. Płyn jest używany natychmiast lub przechowywany w stanie zamrożonym.

Wymaz ze spojówki pobierany jest sterylnym wacikiem i umieszczany w VTS, po czym materiał jest odwirowywany i zamrażany.

Zawartość pęcherzyków odsysa się strzykawką z cienką igłą i umieszcza w VTS. Materiał wysyłany jest do laboratorium w postaci wysuszonych rozmazów na szkiełkach lub w zamkniętych sterylnych kapilarach lub ampułkach.

Materiał przekrojowy pobierany jest jak najwcześniej, z zachowaniem zasad aseptyki. Do pobrania każdej próbki używa się oddzielnych zestawów sterylnych instrumentów. Ilość wybranych tkanek to 1-3 g, które umieszcza się w sterylnych fiolkach. Najpierw pobierane są próbki narządów pozajamowych (mózg, węzły chłonne itp.). Tkanki jamy klatki piersiowej są pobierane przed otwarciem jamy brzusznej. Otrzymane próbki tkanek są mielone w moździerzu z dodatkiem sterylnego piasku i sterylnego roztworu chlorku sodu, po czym materiał jest odwirowywany. Supernatant zbiera się do fiolek, dodaje się antybiotyki. Materiał do badań wirusologicznych jest natychmiast używany lub przechowywany w temperaturze -20°C.

2. Przetwarzanie materiału zawierającego wirusy.

Przeprowadza się go w celu uwolnienia materiału od towarzyszącej mu mikroflory bakteryjnej. W tym celu stosuje się metody fizyczne i chemiczne.

Metody fizyczne:

1) filtracja przez różne filtry bakteryjne;

2) wirowanie.

Metody chemiczne:

1) obróbka materiału eterem w przypadku izolacji wirusów, które nie mają superkapsydu;

2) dodanie do materiału mieszaniny heptanu i freonu;

3) wprowadzenie antybiotyków (penicylina - 200-300 U / ml; streptomycyna - 200-500 μg / ml; nystatyna - 100-1000 U / ml).

3. Zakażenie wrażliwych systemów żywych materiałem.

1) zwierzęta laboratoryjne;

2) zarodki kurze;

3) kultury narządów;

4) kultura tkankowa.

zwierzęta laboratoryjne. Wykorzystywane są białe myszy, świnki morskie, chomiki, króliki itp. Białe myszy są najbardziej wrażliwe na dużą liczbę rodzajów wirusów. Tryb infekcji zwierząt jest determinowany przez tropizm wirusa do tkanek. Infekcja w mózgu służy do izolacji wirusów neurotropowych (wirusy wścieklizny, poliowirusy itp.). Infekcję donosową przeprowadza się, gdy izolowane są patogeny infekcji dróg oddechowych. Szeroko stosowane domięśniowe, dożylne, dootrzewnowe, podskórne i inne metody infekcji. Chore zwierzęta są usypiane eterem, otwierane i pobierany materiał z narządów i tkanek.

zarodki kurze. Powszechnie dostępny i łatwy w użyciu. Zastosuj zarodki kurze w wieku od 5 do 14 dni. Przed infekcją zarodki kurze poddaje się owoskopii: określa się ich żywotność, zaznacza się granicę worka powietrznego i położenie zarodka („ciemne oko” zarodka) na muszli. Praca z zarodkami kurzymi odbywa się w sterylnym pudełku za pomocą sterylnych narzędzi (pęsety, strzykawki, nożyczki, włócznie itp.). Po wykonaniu fragmentu pracy instrumenty zanurza się w 70% alkoholu etylowym i wypala przed kolejną manipulacją. Przed infekcją skorupę zarodka kurzego wyciera się palącym się wacikiem nasączonym alkoholem i alkoholowym roztworem jodu. Objętość materiału testowego wstrzykniętego do zarodka wynosi 0,1-0,2 ml. Co najmniej 4 zarodki kurczęce są wykorzystywane do izolacji wirusów z jednego materiału.

Badania wirusologiczne to badania mające na celu wyizolowanie wirusów i zbadanie ich właściwości, a także ustalenie związku etiologicznego wirusów z niektórymi chorobami.

Materiał do badań pobierany jest w zależności od umiejscowienia dominujących wirusów w organizmie pacjenta oraz sposobów ich uwalniania do środowiska zewnętrznego. Materiał jest zbierany w sterylnym naczyniu, dostarczany do laboratorium tak szybko, jak to możliwe i przechowywany do momentu zamrożenia badania lub na lodzie. Przed użyciem materiał do izolacji wirusa jest przetwarzany (i) w celu stłumienia obcej mikroflory i poddawany usuwaniu dużych cząstek.

Izolację wirusów przeprowadza się przez infekowanie zwierząt laboratoryjnych, zarodków kurzych, hodowli tkankowej materiałem zawierającym wirusa. Wybór metody izolacji zależy od domniemanego czynnika sprawczego choroby. Tak więc kultury tkankowe (patrz) są używane podczas pracy z wirusami, które nie są patogenne dla zwierząt laboratoryjnych lub gdy zostaną wykryte w kulturze tkankowej wcześniej niż w przypadku zakażenia zwierząt. Zarodki kurcząt są infekowane w celu wyizolowania patogenów, zakaźnego zapalenia ślinianek przyusznych (do jamy owodniowej i omoczniowej), (do woreczka żółtkowego), ospy (na błonie kosmówkowo-omoczniowej).

Spośród zwierząt laboratoryjnych do izolacji wirusa najczęściej wykorzystuje się białe myszy, a następnie króliki, szczury, świnki morskie i małpy. W przypadku arbowirusów najskuteczniejsze wprowadzenie materiału zawierającego wirusa do głowy lub, w przypadku wirusów pneumotropowych - na błonę śluzową dróg oddechowych, w przypadku wirusów ospy - na skaryfikowaną rogówkę.

Izolacja wirusów jest najskuteczniejsza w ostrym okresie choroby. Istotnym punktem w ustaleniu wirusowego charakteru choroby są wyniki badań serologicznych surowic pobieranych wielokrotnie od tego samego pacjenta na początku choroby i podczas rekonwalescencji. Wykrycie przeciwciał przeciwko izolowanym wirusom w drugiej surowicy w mianie 4 lub więcej razy większym niż w pierwszej wskazuje na związek etiologiczny wirusów z tą chorobą.

Wczesną i szybką metodą wykrywania antygenów wirusowych jest metoda przeciwciał fluorescencyjnych, polegająca na specyficznym wiązaniu przeciwciał znakowanych fluorochromem na powierzchni antygenu. Antygen jest łatwo wykrywalny pod mikroskopem luminescencyjnym (patrz) dzięki jasnej fluorescencji przeciwciał zaadsorbowanych na antygenie. Metodą przeciwciał fluorescencyjnych bada się rozmazy pobrane od pacjentów, skrawki histologiczne zaatakowanych tkanek, preparaty z hodowli tkankowej. Stosuje się również do wykrywania ciał elementarnych (wirionów) (patrz). Spośród innych metod morfologicznych stosuje się te, które wykrywają wewnątrzkomórkowe wtrącenia wirusowe w skrawkach dotkniętych narządów i tkanek. Wykrywanie wtrąceń wskazuje na infekcję, aw niektórych przypadkach przyczynia się do rozpoznania choroby wirusowej. Do wykrywania przeciwciał wirusowych we krwi pacjentów i badania struktury antygenowej wirusów stosuje się różne metody. Reakcja neutralizacji jest stosowana w prawie wszystkich infekcjach wirusowych. Opiera się na zdolności przeciwciał immunologicznych do neutralizowania infekcyjnych właściwości wirusów, gdy mieszanina jest wprowadzana do organizmu podatnych zwierząt lub do hodowli tkankowej. Aby określić wskaźnik neutralizacji, stałą dawkę surowicy miesza się z różnymi rozcieńczeniami wirusów, a w celu określenia miana przeciwciał różne rozcieńczenia surowicy ze stałą dawką wirusów. Kontrolą jest infekcja zwierząt (lub kultur tkankowych) mieszaniną wirusów z normalną surowicą lub solą fizjologiczną. Reakcja neutralizacji ma na celu nie tylko wykrycie przeciwciał, ale także określenie rodzaju i rodzaju wirusów.

Reakcja wiązania dopełniacza [na przykład reakcja Borde-Zhangu (patrz)] służy do wykrywania zarówno antygenów wirusowych, jak i przeciwciał. W pierwszym przypadku znana surowica immunologiczna oddziałuje z materiałem, w którym zakłada się obecność antygenów: surowicą krwi, wymazami z nosogardzieli, ekstraktami tkankowym zakażonego organizmu. W drugim przypadku znany antygen (diagnosticum) oraz surowica pacjenta lub rekonwalescenta.

RSK służy do diagnozowania chorób wywołanych przez grypę, ospę, adenowirusy i arbowirusy.

Badania wirusologiczne obejmują dwa główne etapy: izolację wirusów i ich identyfikację. Materiałem do badań wirusologicznych może być krew, inne płyny biologiczne i patologiczne, biopsje narządów i tkanek.

Wirusologiczne badania krwi są często wykonywane w celu zdiagnozowania infekcji arbowirusem. W ślinie można wykryć wirusy wścieklizny, świnki, opryszczki pospolitej.Wymazy z nosogardzieli służą do izolacji grypy i innych patogenów ARVI, odry. W popłuczynach ze spojówki znajdują się adenowirusy. Z kału izoluje się różne entero-, adsno-, pso-, nora- i rotawirusy.

Do izolacji wirusów wykorzystuje się hodowle komórkowe, zarodki kurze, a czasem zwierzęta laboratoryjne.

Większość wirusów chorobotwórczych jest swoista dla tkanek i typu, na przykład wirus polio rozmnaża się tylko w komórkach naczelnych, więc do wyizolowania konkretnego wirusa stosuje się odpowiednią hodowlę tkankową. W celu wyizolowania nieznanego patogenu wskazane jest jednoczesne zainfekowanie 3-4 hodowli komórkowych, zakładając, że jedna z nich może być wrażliwa. O obecności wirusa w zakażonych hodowlach komórkowych decyduje rozwój specyficznej degeneracji komórek, tj. działanie cytopatogenne, wykrywanie wtrąceń wewnątrzkomórkowych, a także na podstawie wykrywania specyficznego antygenu metodą immunofluorescencji, dodatniej hemadsorpcji i hemaglutynacji.

Zarodki ptaków o słabo zróżnicowanych tkankach nadają się do hodowli wielu wirusów. Porozmawiaj po prostu użyj embrionów kurzych. Podczas namnażania się w zarodkach wirusy mogą powodować ich śmierć (arbowirusy), pojawienie się zmian w błonie kosmówkowo-omoczniowej (wirusy ospy) lub w ciele zarodka, nagromadzenie w płynach embrionalnych glutyniny (grypa, wirusy świnki) ) i komplement wiążący antygen wirusowy .

Identyfikację wirusów przeprowadza się metodami immunologicznymi: reakcja hamowania hemaglutynacji, wiązanie dopełniacza, neutralizacja, precypitacja żelowa, immunofluorescencja.

Więcej na ten temat Metoda wirusologiczna:

1. Ocena głównych danych antropometrycznych metodą parametryczną (metoda sigma)
2. Leczenie Warunkowego Wymierania i Metoda Treningu Przymusowego
3. 2. Porównawcza metoda prawna – prywatna naukowa metoda nauk prawnych
4. NOWOCZESNE METODY DIAGNOSTYKI I WYBÓR METODY LECZENIA MIĘSANIAKA PODŚLUZKOWEGO
5. 5.4. Pojęcie i struktura ogólnej metody badawczej jako metody działania praktycznego
6. Temat 8. MIKROBIOLOGICZNE METODY BADANIA ZMIENNOŚCI I MECHANIZMÓW PRZEKAZYWANIA INFORMACJI DZIEDZICZNYCH. ZASTOSOWANIE METOD GENETYCZNYCH DO TWORZENIA NOWYCH LEKÓW
7. Temat 15. PATOGENICZNOŚĆ I Zjadliwość MIKROORGANIZMÓW. CZYNNIKI Zjadliwości. METODY ZAKAŻENIA ZWIERZĄT LABORATORYJNYCH. ANTYGENY, SPOSOBY ICH OTRZYMANIA. PRZECIWCIAŁA. REAKCJE ODPORNOŚCIOWE I ICH PRAKTYCZNE WYKORZYSTANIE. FAGOCYTOZA