клетъчни култури

Животни

Индикация за вируси чрез следните явления

изоставане в развитието,

смърт, промяна

черупки на ембриона, RGA

CPP, образуване на плака, RIF, RGads, интерференция

болест, смърт,

хистологични промени

в тъкани, включвания

Титруване на изолиран вирус; избор на работна доза.

Титър на вируса- максималното разреждане на съдържащия вирус материал, при което все още се наблюдава очакваният ефект (CPE, RHA, смърт на животното).

Идентифициране на изолиран вирусв реакции на неутрализация, RTGads, RSK, потискане на образуването на плаки и др. с диагностични серуми. Вид (вид) на вирусасе определя от неутрализирането на специфичния ефект на вируса от съответния имунен серум.

Забележка: титруването и идентифицирането на вируса се извършват с помощта на един и същи феномен.

Култивиране на вируси

Вирусологични методи на изследване— методи за изследване на биологията на вирусите и тяхната идентификация. Във вирусологията се използват широко методи на молекулярна биология, с помощта на които е възможно да се установи молекулярната структура на вирусните частици, как те проникват в клетката и характеристиките на възпроизвеждането на вируси, първичната структура на вирусните нуклеинови киселини и протеини. Разработват се методи за определяне на последователността на съставните елементи на вирусните нуклеинови киселини и протеиновите аминокиселини. Става възможно да се свържат функциите на нуклеиновите киселини и кодираните от тях протеини с нуклеотидната последователност и да се установят причините за вътреклетъчните процеси, които играят важна роля в патогенезата на вирусна инфекция.

Методите за вирусологично изследване също се основават на имунологични процеси (взаимодействие на антиген с антитела), биологични свойства на вируса (способност за хемаглутинация, хемолиза, ензимна активност), характеристики на взаимодействието на вируса с клетката гостоприемник (естеството на цитопатичния ефект, образуване на вътреклетъчни включвания и др.) .

При диагностицирането на вирусни инфекции, при култивирането, изолирането и идентифицирането на вируси, както и при приготвянето на ваксинални препарати, широко се използва методът на тъканната и клетъчната култура. Използват се първични, вторични, стабилни непрекъснати и диплоидни клетъчни култури. Първичните култури се получават чрез диспергиране на тъкани с протеолитични ензими (трипсин, колагеназа). Източник на клетки могат да бъдат тъкани и органи (по-често бъбреци) на човешки и животински ембриони. Суспензия от клетки в хранителна среда се поставя в т. нар. матраци, бутилки или петриеви панички, където след закрепване към повърхността на съда клетките започват да се размножават. За вирусна инфекция обикновено се използва клетъчен монослой. Хранителната течност се отцежда, вирусната суспензия се въвежда в определени разреждания и след контакт с клетките се добавя свежа хранителна среда, обикновено без серум.

Клетките от повечето първични култури могат да бъдат субкултивирани и се наричат ​​вторични култури. При по-нататъшно преминаване на клетките се образува популация от фибробластоподобни клетки, способни на бързо възпроизвеждане, повечето от които запазват оригиналния набор от хромозоми. Това са така наречените диплоидни клетки. При серийно култивиране на клетки се получават стабилни непрекъснати клетъчни култури. По време на пасажи се появяват бързо делящи се хомогенни клетки с хетерплоиден набор от хромозоми. Стабилните клетъчни линии могат да бъдат монослойни и суспензионни. Еднослойните култури растат под формата на непрекъснат слой върху стъклената повърхност, суспензионните култури растат под формата на суспензии в различни съдове с помощта на бъркалки. Има над 400 клетъчни линии, получени от 40 различни животински вида (включително примати, птици, влечуги, земноводни, риби, насекоми) и хора.

Части от отделни органи и тъкани (органни култури) могат да се култивират в изкуствени хранителни среди. Тези видове култури запазват тъканната структура, което е особено важно за изолирането и преминаването на вируси, които не се възпроизвеждат в недиференцирани тъканни култури (например коронавируси).

В заразени клетъчни култури вирусите могат да бъдат открити чрез промяна в клетъчната морфология, цитопатично действие, което може да бъде специфично, поява на включвания, чрез определяне на вирусни антигени в клетката и в културалната течност; определяне на биологичните свойства на вирусно потомство в културална течност и титруване на вируси в тъканна култура, пилешки ембриони или чувствителни животни; чрез откриване на отделни вирусни нуклеинови киселини в клетки чрез молекулярна хибридизация или клъстери от нуклеинови киселини чрез цитохимичен метод с помощта на флуоресцентна микроскопия.

Изолирането на вируси е трудоемък и продължителен процес. Провежда се, за да се определи вида или варианта на вируса, циркулиращ сред населението (например за идентифициране на сероварианта на грипния вирус, дивия или ваксиналния щам на полиомиелитния вирус и др.); в случаите, когато е необходимо провеждането на спешни епидемиологични мерки; когато се появят нови видове или варианти на вируси; ако е необходимо, потвърдете предварителната диагноза; за индикация на вируси в обекти на околната среда. При изолиране на вируси се взема предвид възможността за тяхното персистиране в човешкия организъм, както и възникването на смесена инфекция, причинена от два или повече вируса. Генетично хомогенна популация на вирус, получена от един вирион, се нарича вирусен клонинг, а процесът на получаването му се нарича клониране.

За изолиране на вируси се използва инфекция на податливи лабораторни животни, пилешки ембриони, но най-често се използва тъканна култура. Наличието на вирус обикновено се определя от специфична клетъчна дегенерация (цитопатичен ефект), образуване на симпласти и синцитии, откриване на вътреклетъчни включвания, както и специфичен антиген, открит чрез имунофлуоресценция, хемадсорбция, хемаглутинация (при хемаглутиниращи вируси) и др. . Тези признаци могат да бъдат открити само след 2-3 пасажа на вируса.

За изолирането на редица вируси, като например грипните вируси, се използват пилешки ембриони, за изолирането на някои вируси Coxsackie и редица арбовируси се използват новородени мишки. Идентифицирането на изолирани вируси се извършва с помощта на серологични тестове и други методи.

При работа с вируси се определя техният титър. Титруването на вируси обикновено се извършва в тъканна култура, като се определя най-високото разреждане на течността, съдържаща вируса, при която настъпва тъканна дегенерация, образуват се включвания и вирус-специфични антигени. Методът на плаката може да се използва за титруване на редица вируси. Плаките или отрицателните колонии от вируси са огнища на унищожени от вируса клетки на еднослойна тъканна култура под агарово покритие. Преброяването на колониите позволява количествен анализ на инфекциозната активност на вирусите въз основа на това, че една инфекциозна вирусна частица образува една плака. Плаките се идентифицират чрез оцветяване на културата с витални багрила, обикновено неутрално червено; плаките не адсорбират боята и затова се виждат като светли петна на фона на оцветени живи клетки. Титърът на вируса се изразява като брой образуващи плака единици в 1 мл.

Пречистването и концентрирането на вирусите обикновено се извършва чрез диференциално ултрацентрофугиране, последвано от центрофугиране в градиенти на концентрация или плътност. За пречистване на вируси се използват имунологични методи, йонообменна хроматография, имуносорбенти и др.

Лабораторната диагностика на вирусни инфекции включва откриване на патогена или неговите компоненти в клиничен материал; изолиране на вируса от този материал; серодиагностика. Изборът на лабораторен диагностичен метод във всеки отделен случай зависи от естеството на заболяването, периода на заболяването и възможностите на лабораторията. Съвременната диагностика на вирусните инфекции се основава на експресни методи, които позволяват получаване на отговор няколко часа след вземане на клиничен материал в ранните стадии след заболяването.Те включват електронна и имунна електронна микроскопия, както и имунофлуоресценция, метод на молекулярна хибридизация, откриване на антитела от клас lgM и др.

Електронната микроскопия на отрицателно оцветени вируси позволява диференциране на вирусите и определяне на тяхната концентрация. Използването на електронна микроскопия при диагностицирането на вирусни инфекции е ограничено до случаите, когато концентрацията на вирусни частици в клиничния материал е достатъчно висока (10 5 в 1 мли по-високи). Недостатъкът на метода е невъзможността да се прави разлика между вируси, принадлежащи към една и съща таксономична група. Този недостатък се елиминира чрез използване на имунна електронна микроскопия. Методът се основава на образуването на имунни комплекси, когато специфичен серум се добавя към вирусни частици, докато се получава едновременна концентрация на вирусни частици, което прави възможно тяхното идентифициране. Методът се използва и за откриване на антитела. За целите на експресната диагностика се извършва електронно микроскопско изследване на тъканни екстракти, изпражнения, течност от везикули и секрети от назофаринкса. Електронната микроскопия се използва широко за изследване на морфогенезата на вируса, нейните възможности се разширяват с използването на белязани антитела.

Методът на молекулярната хибридизация, базиран на откриването на вирус-специфични нуклеинови киселини, дава възможност за откриване на единични копия на гени и няма равен по отношение на чувствителността. Реакцията се основава на хибридизацията на комплементарни вериги на ДНК или РНК (сонди) и образуването на двойноверижни структури. Най-евтината сонда е клонирана рекомбинантна ДНК. Сондата е белязана с радиоактивни прекурсори (обикновено радиоактивен фосфор). Използването на колориметрични реакции е обещаващо. Има няколко варианта на молекулярна хибридизация: точкова хибридизация, блот хибридизация, сандвич хибридизация, in situ хибридизация и др.

Антителата от клас lgM се появяват по-рано от антителата от клас G (на 3-5-ия ден от заболяването) и изчезват след няколко седмици, така че тяхното откриване показва скорошна инфекция. Антитела от клас IgM се откриват чрез имунофлуоресценция или ензимен имуноанализ, като се използват анти-m антисеруми (анти-IgM тежковерижни серуми).

Серологичните методи във вирусологията се основават на класически имунологични реакции (вж. Имунологични методи на изследване ): реакции на свързване на комплемента, инхибиране на хемаглутинацията, биологична неутрализация, имунодифузия, индиректна хемаглутинация, радиална хемолиза, имунофлуоресценция, ензимен имуноанализ, радиоимуноанализ. Разработени са микрометоди за много реакции и техните техники непрекъснато се подобряват. Тези методи се използват за идентифициране на вируси с помощта на набор от известни серуми и за серодиагностика, за да се определи увеличението на антителата във втория серум в сравнение с първия (първият серум се взема в първите дни след заболяването, вторият - след 2-3 седмици). Диагностичната стойност е не по-малко от четирикратно увеличение на антителата във втория серум. Ако откриването на антитела от клас lgM показва скорошна инфекция, тогава антителата от клас lgC персистират няколко години, а понякога и цял живот.

За идентифициране на отделни антигени на вируси и антитела към тях в сложни смеси без предварително пречистване на протеини се използва имуноблотинг. Методът съчетава протеиново фракциониране чрез електрофореза в полиакриламиден гел с последващ имуноанализ на протеини чрез ензимен имуноанализ. Разделянето на протеини намалява изискванията за химическа чистота на антигена и дава възможност за идентифициране на отделни двойки антиген-антитяло. Тази задача е от значение, например, при серодиагностиката на HIV инфекцията, където фалшиво положителни реакции на ензимен имуноанализ се дължат на наличието на антитела срещу клетъчни антигени, които присъстват в резултат на недостатъчно пречистване на вирусни протеини. Идентифицирането на антитела в серума на пациенти срещу вътрешни и външни вирусни антигени позволява да се определи стадият на заболяването, а при анализа на популациите - променливостта на вирусните протеини. Имуноблотингът при HIV инфекция се използва като потвърдителен тест за откриване на отделни вирусни антигени и антитела към тях. При анализиране на популациите методът се използва за определяне на вариабилността на вирусните протеини. Голямата стойност на метода е във възможността за анализиране на антигени, синтезирани чрез рекомбинантна ДНК технология, установяване на техния размер и наличие на антигенни детерминанти.

Етиологичната диагностика на вирусните заболявания се извършва чрез вирусологични, вирусологични, серологични и молекулярно-генетични методи. Последните три метода могат да се използват като експресни диагностични методи.

Вирусологичен диагностичен метод.

Крайната цел на метода е да идентифицира вирусите до вид или серологичен вариант.Вирусологичният метод включва няколко етапа:

1) подбор на материал за изследване;

2) обработка на вируссъдържащ материал;

3) замърсяване на чувствителни живи системи с материал;

4) индикация на вируси в живи системи;

5) титруване на изолирани вируси;

6) идентифициране на вируси в имунни реакции.

1. Избор на материал за изследване .

Извършва се в ранните стадии на заболяването, при спазване на правилата, които предотвратяват замърсяването на материала с чужда микрофлора и инфекцията на медицинския персонал. За да се предотврати инактивирането на вируса по време на транспортирането, материалът се поставя във вирусна транспортна среда (VTS), състояща се от балансиран солев разтвор, антибиотици и серумен албумин. Материалът се транспортира в специален контейнер с термоизолация и затворени найлонови торби, съдържащи лед. При необходимост материалът се съхранява при -20˚C. Всяка проба от материал за изследване трябва да бъде етикетирана и етикетирана с името на пациента, вида на материала, датата на вземане на пробата, подробна клинична диагноза и друга информация.

В зависимост от естеството на заболяването материалът за изследването може да бъде:

1) тампони от носната част на фаринкса и тампон от фаринкса;

2) цереброспинална течност;

3) изпражнения и ректални тампони;

6) течност от серозни кухини;

7) намазка от конюнктивата;

8) съдържание на везикули;

8) секционен материал.

За да се получи промиване от орофаринкса, се използват 15-20 ml VTS. Пациентът внимателно изплаква VTS гърлото за 1 минута и събира промиването в стерилен флакон.

Намазка от задната част на фаринкса се взема със стерилен памучен тампон, като се натиска върху корена на езика с шпатула. Тампонът се поставя в 2-3 ml VTS, изплаква се и се изстисква.

Цереброспиналната течност се получава чрез лумбална пункция. 1-2 ml цереброспинална течност се поставя в стерилен контейнер и се доставя в лабораторията.

Фекалните проби се вземат в рамките на 2-3 дни в стерилни флакони. От получения материал се приготвя 10% суспензия с разтвор на Hank. Суспензията се центрофугира при 3000 rpm, супернатантата се събира, към нея се добавят антибиотици и се поставя в стерилен съд.

Получената чрез венепункция кръв в обем 5-10 ml се дефибринира чрез добавяне на хепарин. Цялата кръв не се замразява и не се добавят антибиотици. За да се получи серум, кръвните проби се инкубират при 37°C за 60 минути.

Течност от серозните кухини се получава чрез пункция в количество от 1-2 ml. Течността се използва веднага или се съхранява замразена.

Натривка от конюнктивата се взема със стерилен тампон и се поставя във ВТС, след което материалът се центрофугира и замразява.

Съдържанието на везикулите се аспирира със спринцовка с тънка игла и се поставя във VTS. Материалът се изпраща в лабораторията под формата на изсушени петна върху предметни стъкла или в запечатани стерилни капиляри или ампули.

Секционният материал се взема възможно най-рано, като се спазват правилата на асептиката. За вземане на всяка проба се използват отделни комплекти стерилни инструменти. Количеството на избраните тъкани е 1-3 g, които се поставят в стерилни флакони. Първо се вземат проби от екстракавитарни органи (мозък, лимфни възли и др.). Тъканите от гръдната кухина се вземат преди отваряне на коремната кухина. Получените тъканни проби се смилат в хаван с добавяне на стерилен пясък и стерилен разтвор на натриев хлорид, след което материалът се центрофугира. Супернатантата се събира във флакони, добавят се антибиотици. Материалът за вирусологично изследване се използва веднага или се съхранява при -20°C.

2. Обработка на вируссъдържащ материал.

Провежда се с цел освобождаване на материала от съпътстващата бактериална микрофлора. За това се използват физични и химични методи.

Физически методи:

1) филтриране през различни бактериални филтри;

2) центрофугиране.

Химични методи:

1) третиране на материала с етер в случаи на изолиране на вируси, които нямат суперкапсид;

2) добавяне на смес от хептан и фреон към материала;

3) въвеждането на антибиотици (пеницилин - 200-300 U / ml; стрептомицин - 200-500 μg / ml; нистатин - 100-1000 U / ml).

3. Заразяване на чувствителни живи системи с материал.

1) лабораторни животни;

2) пилешки ембриони;

3) органни култури;

4) тъканна култура.

лабораторни животни. Използват се бели мишки, морски свинчета, хамстери, зайци и др.Белите мишки са най-чувствителни към голям брой видове вируси. Начинът на заразяване на животните се определя от тропизма на вируса към тъканите. Инфекцията в мозъка се използва при изолирането на невротропни вируси (вируси на бяс, полиовируси и др.). Интраназалната инфекция се извършва при изолиране на патогени на респираторни инфекции. Широко използвани интрамускулни, интравенозни, интраперитонеални, подкожни и други методи на инфекция. Болните животни се евтаназират с етер, отварят се и се взема материал от органи и тъкани.

пилешки ембриони. Широко достъпен и лесен за използване. Нанесете пилешки ембриони на възраст от 5 до 14 дни. Преди заразяване пилешките ембриони се овоскопират: определя се тяхната жизнеспособност, границата на въздушния сак и местоположението на ембриона („тъмното око“ на ембриона) се маркират върху черупката. Работата с пилешки ембриони се извършва в стерилна кутия със стерилни инструменти (пинсети, спринцовки, ножици, копия и др.). След завършване на фрагмент от работата, инструментите се потапят в 70% етилов алкохол и се изгарят преди следващата манипулация. Преди заразяване черупката на пилешкия ембрион се избърсва с тампон, напоен със спирт и алкохолен разтвор на йод. Обемът на тестовия материал, инжектиран в ембриона, е 0,1-0,2 ml. Най-малко 4 пилешки ембриона се използват за изолиране на вируси от един материал.

Вирусологичните изследвания са изследвания, предназначени за изолиране на вируси и изследване на техните свойства, както и за установяване на етиологичната връзка на вирусите с определени заболявания.

Материалът за изследването се взема в зависимост от местоположението на преобладаващите вируси в тялото на пациента и от начините, по които те се освобождават във външната среда. Материалът се събира в стерилна чиния, доставя се в лабораторията възможно най-бързо и се съхранява до замразяване на изследването или върху лед. Преди употреба материалът за изолиране на вируса се обработва (и) за потискане на чуждата микрофлора и се подлага на отстраняване на големи частици.

Изолирането на вируси се извършва чрез заразяване на лабораторни животни, пилешки ембриони, тъканна култура с вируссъдържащ материал. Изборът на метод за изолиране зависи от предполагаемия причинител на заболяването. Така че тъканните култури (вижте) се използват при работа с вируси, които не са патогенни за лабораторни животни, или когато се откриват в тъканна култура по-рано, отколкото когато животните са заразени. Пилешките ембриони се заразяват за изолиране на патогени, инфекциозен паротит (в амниотичната и алантоисната кухина), (в жълтъчната торбичка), едра шарка (върху хорионалантоичната мембрана).

От лабораторните животни най-често за изолиране на вируса се използват бели мишки, следвани от зайци, плъхове, морски свинчета и маймуни. За арбовирусите най-ефективното въвеждане на вируссъдържащ материал в главата или, за пневмотропните вируси - върху лигавицата на дихателните пътища, за вирусите на едра шарка - върху скарифицираната роговица.

Изолирането на вируси е най-ефективно в острия период на заболяването. Съществен момент при установяване на вирусната природа на заболяването са резултатите от серологични изследвания на серуми, взети многократно от един и същ пациент в началото на заболяването и по време на възстановяване. Откриването на антитела срещу изолирани вируси във втория серум в титър 4 или повече пъти по-висок от първия показва етиологичната връзка на вирусите с това заболяване.

Един ранен и бърз метод за откриване на вирусни антигени е методът на флуоресцентните антитела, който се основава на специфичното фиксиране на белязани с флуорохром антитела върху повърхността на антигена. Антигенът лесно се открива при луминесцентна микроскопия (виж) благодарение на ярката флуоресценция на антителата, адсорбирани върху антигена. Използвайки метода на флуоресцентните антитела, се изследват намазки, взети от пациенти, хистологични срезове от засегнати тъкани, препарати от тъканна култура. Също така се прилага за откриване на елементарни тела (вириони) (виж). От другите морфологични методи се използват тези, които откриват вътреклетъчни вирусни включвания в участъци от засегнатите органи и тъкани. Откриването на включвания показва инфекция и в някои случаи допринася за диагностицирането на вирусно заболяване. Използват се различни методи за откриване на вирусни антитела в кръвта на пациентите и за изследване на антигенната структура на вирусите. Реакцията на неутрализация се използва при почти всички вирусни инфекции. Основава се на способността на имунните антитела да неутрализират инфекциозните свойства на вирусите, когато сместа се въведе в тялото на възприемчиви животни или в тъканна култура. За да се определи индексът на неутрализация, постоянна доза серум се смесва с различни разреждания на вируси и за определяне на титъра на антителата, различни разреждания на серум с постоянна доза вируси. Контролът е заразяване на животни (или тъканни култури) със смес от вируси с нормален серум или физиологичен разтвор. Реакцията на неутрализация е настроена не само за откриване на антитела, но и за определяне на вида и вида на вирусите.

Реакцията на фиксиране на комплемента [например реакция на Borde - Zhangu (виж)] се използва за откриване както на вирусни антигени, така и на антитела. В първия случай известният имунен серум взаимодейства с материала, в който се предполага наличието на антигени: кръвен серум, назофарингеални тампони, тъканни екстракти от заразения организъм. Във втория случай, известен антиген (diagnosticum) и серум на пациента или реконвалесцента.

RSK се използва за диагностициране на заболявания, причинени от грип, едра шарка, аденовируси и арбовируси.

Вирусологичното изследване включва два основни етапа: изолиране на вируси и тяхното идентифициране. Материалът за вирусологично изследване може да бъде кръв, други биологични и патологични течности, биопсии на органи и тъкани.

Често се извършва вирусологично кръвно изследване за диагностициране на арбовирусни инфекции. В слюнката могат да бъдат открити вируси на бяс, паротит, херпес симплекс Назофарингеалните тампони служат за изолиране на грип и други патогени на ARVI, морбили. В промивките от конюнктивата се откриват аденовируси. От изпражненията се изолират различни ентеро-, адсно-, псо-, нора- и ротавируси.

За изолиране на вируси се използват клетъчни култури, пилешки ембриони и понякога лабораторни животни.

Повечето патогенни вируси са специфични за тъканите и типа, например полиовирусът се възпроизвежда само в клетки на примати, така че се използва подходяща тъканна култура за изолиране на специфичен вирус. За да се изолира неизвестен патоген, е препоръчително да се заразят едновременно 3-4 клетъчни култури, като се приеме, че една от тях може да е чувствителна. Наличието на вируса в заразените клетъчни култури се определя от развитието на специфична клетъчна дегенерация, т.е. цитопатогенен ефект, откриване на вътреклетъчни включвания, както и въз основа на откриване на специфичен антиген чрез имунофлуоресценция, положителни реакции на хемадсорбция и хемаглутинация.

Птичи ембриони с техните слабо диференцирани тъкани са подходящи за култивиране на много вируси. Чат просто използвайте пилешки ембриони. Когато се размножават в ембриони, вирусите могат да причинят тяхната смърт (арбовируси), появата на промени в хорион-алантоисната мембрана (покс вируси) или в тялото на ембриона, натрупването на mag glutinin в ембрионалните течности в ембрионалните течности (грипни вируси). , заушка) и комплемента на свързващия вирусен антиген .

Идентифицирането на вируси се извършва с помощта на имунологични методи: реакция на инхибиране на хемаглутинацията, фиксиране на комплемента, неутрализация, утаяване в гел, имунофлуоресценция.

Още по темата Вирусологичен метод:

1. Оценка на основните антропометрични данни по параметричен метод (сигма метод)
2. Лечение на условно изчезване и метод на принудително обучение
3. 2. Сравнителноправен метод - частнонаучен метод на правната наука
4. СЪВРЕМЕННИ МЕТОДИ ЗА ДИАГНОСТИКА И ИЗБОР НА МЕТОД ЗА ЛЕЧЕНИЕ НА СУБМУКОЗНА МИОМА НА МАТКАТА
5. 5.4. Концепцията и структурата на общия метод на изследване като метод на практическа дейност
6. Тема 8. МИКРОБИОЛОГИЧНИ МЕТОДИ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ НА ИЗМЕНЛИВОСТТА И МЕХАНИЗМИТЕ НА ТРАНСФЕР НА НАСЛЕДСТВЕНА ИНФОРМАЦИЯ. ПРИЛОЖЕНИЕ НА ГЕНЕТИЧНИ МЕТОДИ ЗА СЪЗДАВАНЕ НА НОВИ ЛЕКАРСТВА
7. Тема 15. ПАТОГЕННОСТ И ВИРУЛЕНТНОСТ НА МИКРООРГАНИЗМИТЕ. ВИРУЛЕНТНИ ФАКТОРИ. МЕТОДИ ЗА ИНФЕКЦИЯ НА ЛАБОРАТОРНИ ЖИВОТНИ. АНТИГЕНИ, МЕТОДИ ЗА ТЯХНОТО ПОЛУЧАВАНЕ. АНТИТЕЛА. ИМУННИ РЕАКЦИИ И ТЯХНОТО ПРАКТИЧЕСКО ИЗПОЛЗВАНЕ. ФАГОЦИТОЗА