Техніка визначення групи крові. Методи визначення групи крові Системи визначення групи крові

Матеріали публікуються для ознайомлення та не є приписом до лікування! Рекомендуємо звернутися до лікаря-гематолога у вашому лікувальному закладі!

Група крові та резус-фактор – особливі білки, які визначають її індивідуальний характер, так само, як колір очей чи волосся у людини. Група та резус мають велике значення в медицині при лікуванні крововтрат, хвороб крові, а також впливають на формування організму, функціонування органів і навіть психологічні особливості людини.

Поняття про групу крові

Ще лікарі давнини намагалися поповнювати крововтрату шляхом переливання крові від людини людині і навіть від тварин. Як правило, всі ці спроби мали сумний результат. І лише на початку ХХ століття австрійським ученим Карлом Ландштейнером були виявлені відмінності в групах крові у людей, які являли собою особливі білки в еритроцитах — аглютиногени, тобто аглютинації, що викликають реакцію, — склеювання еритроцитів. Вона і була причиною загибелі хворих після переливання крові.

Встановлено 2 основні види аглютиногенів, які були умовно названі А і В. Склеювання еритроцитів, тобто несумісність крові, відбувається у випадку, якщо аглютиноген з'єднується з однойменним білком - аглютиніном, що міститься в плазмі, відповідно, а і b. Отже, у крові людини може бути однойменних білків, викликають склеювання еритроцитів, тобто якщо є аглютиноген А, то ній може бути аглютиніна а.

Виявлено також, що в крові можуть бути обидва аглютиногени - А і В, але тоді вона не містить жодного виду аглютинінів, і навпаки. Все це є ознаки, що визначають групу крові. Тому при поєднанні однойменних білків еритроцитів та плазми розвивається конфлікт за групою крові.

Види груп крові

На підставі цього відкриття у людей виділено 4 основні види групи крові:

1-а, що не містить аглютиногенів, але містить обидва аглютиніну а і b, це - найпоширеніша група крові, яку мають 45% населення планети;
2-а, що містить аглютиноген А та аглютинін b, визначається у 35% людей;
3-я, в якій є аглютиноген і аглютиніна, її мають 13% людей;
4-та, що містить обидва аглютиногени А і В, і не містить аглютинінів, така група крові найрідкісніша, вона визначається лише у 7% населення.

У Росії її прийнято позначення групової належності крові за системою АВ0, тобто за вмістом у ній аглютиногенів. Відповідно до цього таблиця груп крові виглядає наступним чином:

Групова належність крові передається у спадок. Чи може змінитися група крові — на це запитання однозначна відповідь: не може. Хоча історії медицини відомий єдиний випадок, пов'язаний із генними мутаціями. Ген, що визначає групу крові, знаходиться у 9-й парі хромосомного набору людини.

Важливо! Судження у тому, яка група крові підходить всім, сьогодні втратило актуальність, як і, як і поняття універсального донора, тобто володаря 1-ї (нульової) групи крові. Відкрито безліч підвидів груп крові і переливається тільки одногрупна кров.

Резус-фактор: негативний та позитивний

Незважаючи на відкриття Ландштейнером груп крові, все ж таки продовжували мати місце трансфузійні реакції під час переливання. Вчений продовжував свої дослідження, і разом із своїми колегами Вінером і Левайном йому вдалося виявити ще один специфічний білок-антиген еритроцитів - резус-фактор. Спочатку він був виявлений у людиноподібної мавпи макакі-резус, звідки й отримав свою назву. Виявилося, що резус присутній і в крові більшості людей: у 85% населення цей антиген є, а у 15% він відсутній, тобто у них негативний резус-фактор.

Особливість резус-антигена полягає в тому, що при попаданні в кров людей, які його не мають, він сприяє виробленню антирезус-антитіл. При повторному контакті з резус фактором ці антитіла дають важку гемолітичну реакцію, яка називається резус-конфліктом.

Важливо! Коли резус-фактор негативний, це означає не просто відсутність в еритроцитах резус-антигена. У крові можуть бути антирезусні антитіла, які могли утворитися під час контакту з резус-позитивною кров'ю. Тому обов'язковим є аналіз на наявність резус-антитіл.

Визначення групи крові та резус-фактора

Група крові та резус-фактор підлягають обов'язковому визначенню у таких випадках:

для проведення переливання крові;
для пересадки кісткового мозку;
перед будь-якою операцією;
при вагітності;
при захворюваннях крові;
у новонароджених при гемолітичній жовтяниці (резус-несумісності з матір'ю).

Однак в ідеалі відомості про групову та резус-приналежність мають бути у кожної людини — як у дорослої, так і у дитини. Ніколи не можна виключити випадки тяжкої травми чи гострого захворювання, коли може терміново знадобитися кров.

Визначення групи крові

Визначення групи крові проводиться спеціально одержаними моноклональними антитілами за системою АВ0, тобто аглютинінами сироватки, які дають склеювання еритроцитів при контакті з однойменними аглютиногенами.

Алгоритм визначення групи крові наступний:

Готують цоліклони (моноклональні антитіла) анти-А - ампули рожевого кольору, і анти-В - ампули синього кольору. Готують 2 чисті піпетки, скляні палички для змішування та предметні скла, одноразовий шприц на 5 мл для взяття крові, пробірку.
Виконують забір крові із вени.
На предметне скло або спеціальний маркований планшет наносять великою краплею цоліклонів (0,1 мл), до них підмішують окремими скляними паличками маленькі краплі досліджуваної крові (0,01 мл).
Спостерігають за результатом 3-5 хвилин. Крапля з примішаною кров'ю може бути гомогенною – реакція мінус (-), або випадають пластівці – реакція плюс або аглютинація (+). Оцінка результатів обов'язково проводиться лікарем. Варіанти дослідження визначення групи крові представлені у таблиці:

Визначення резус-фактора

Визначення резус-фактора виконується аналогічно до визначення групи крові, тобто за допомогою моноклонального антитіла сироватки до резус-антигена. На спеціальну чисту білу керамічну поверхню наносять велику краплю реагенту (цоліклону) і малу краплю щойно взятої крові, у таких самих пропорціях (10:1). Кров обережно змішують скляною паличкою з реагентом.

Визначення резус фактора цоліклонами займає менше часу, тому що реакція настає вже через 10-15 секунд. Однак необхідно витримати максимальний термін – 3 хвилини. Як і у разі визначення групи крові, пробірку з кров'ю направляють у лабораторію.

У медичній практиці сьогодні широко застосовують зручний та швидкий експрес-метод визначення групової приналежності та резус-фактору за допомогою сухих цоліклонів, які розводяться стерильною водою для ін'єкцій безпосередньо перед дослідженням. Метод називається «Ерітротест-группокарт», він дуже зручний як в умовах клінік, так і в екстремальних, і в польових умовах.

Характер та здоров'я людини за групою крові

Кров людини як його специфічна генетична ознака ще до кінця не вивчена. В останні роки вчені відкрили варіанти підгруп крові, розробляють нові технології визначення сумісності і так далі.

Крові також приписується властивість впливати на здоров'я та характер її власника. І хоча це питання залишається спірним, все ж таки багаторічними спостереженнями помічені цікаві факти. Наприклад, японські дослідники вважають, що можна визначити характер людини за групою крові:

власники 1-ї групи крові - люди вольові, сильні, товариські та емоційні;
володарі 2-ї групи відрізняються терплячістю, скрупульозністю, завзятістю, працьовитістю;
представники 3-ї групи є творчими особистостями, але водночас надто вразливі, владні та примхливі;
люди з 4-ю групою крові живуть більше почуттями, відрізняються нерішучістю, часом невиправдано різання.

Що стосується здоров'я залежно від групи крові, то вважається, що воно є найміцнішим у більшості населення, тобто при 1-й групі. Особи з 2-ою групою схильні до хвороб серця та онкологічних захворювань, для володарів 3-ї групи характерний слабкий імунітет, низька стійкість до інфекцій та стресів, а представники 4-ї групи схильні до серцево-судинної патології, захворювань суглобів, раку.

Залежно від різновидів антигенів, що входять до складу кров'яних тілець (еритроцитів), визначається конкретна група крові. У кожної людини вона постійна і не змінюється від народження до смерті.

Кількість еритроцитів визначає групу крові

Хто відкрив групу крові у людини

Ідентифікувати клас біологічного матеріалу людини вийшло у австрійського імунолога Карла Ландштейнера у 1900 році. У цей час було визначено лише 3 різновиди антиген у мембранах еритроцитів – А, В та С. У 1902 році вдалося виявити 4 клас еритроцитів.

Карл Ландштейнер першим відкрив групи крові

Карл Ландштейнер зміг зробити ще одне важливе досягнення у медицині. У 1930 році вчений у тандемі з Олександром Вінером відкрив резус-фактор крові (негативний та позитивний).

Класифікація та характеристика груп крові та резус-фактора

Групові антигени класифікуються за єдиною системою АВ0 (а, б, нуль). Встановлена концепція поділяє склад кров'яних тілець на 4 основні види. Їх відмінності в альфа та бета аглютинінах у плазмі, а також присутність специфічних антигенів на оболонці еритроцитів, які позначаються літерами А та В.

Таблиця "Характеристика класів крові"

На групову приналежність національність чи раса людей впливає.

Резус-фактор

Крім системи АВ0, біологічний матеріал класифікують за фенотипом крові – наявністю або відсутністю в ній специфічного антигену D, який називається резус-фактором (Rh). Крім білка D система Rh охоплює ще 5 основних антиген - C, c, d, E, e. Вони містяться у зовнішній оболонці еритроцитів.

Резус-фактор та клас кров'яних тілець закладаються у дитини ще в утробі матері, і передаються їй від батьків на все життя.

Методика визначення групи крові та резус-фактора

Методи виявлення групової власності

Для виявлення в еритроцитах специфічних антигенів використовують кілька методів:

проста реакція – береться стандартна сироватка 1, 2 та 3 класу, з якою порівнюється біологічний матеріал пацієнта;
подвійна реакція – особливістю методики є використання як стандартних сироваток (порівнюються з досліджуваними кров'яними тільцями), а й стандартних еритроцитів (порівняються з сироваткою пацієнта), які попередньо готуються у центрах переливання крові;
моноклінальні антитіла – використовуються циклони анти-А та анти-В (готуються за допомогою генної інженерії з крові стерильних мишей), з якими порівнюється біологічний матеріал, що досліджується.

Метод виявлення групи крові за моноклінальними антитілами

p align="justify"> Сама специфіка дослідження плазми на предмет її групової приналежності полягає в порівнянні зразка біологічного матеріалу пацієнта зі стандартною сироваткою або стандартними еритроцитами.

Послідовність такого процесу така:

забір венозної рідини натще у кількості 5 мл;
розподіл стандартних зразків на предметному склі чи спеціальній тарілці (кожен клас підписується);
паралельно зразкам розміщується кров пацієнта (кількість матеріалу повинна бути в кілька разів менша за обсяг крапель стандартної сироватки);
змішується кров'яна рідина із заготовленими зразками (проста або подвійна реакція) або з циклонами (моноклінальні антитіла);
через 2,5 хвилини в ті краплі, де відбулася аглютинація (утворилися білки групи А, В або АВ), додається спеціальний фізрозчин.

Наявність аглютинації (склеювання і випадання осад еритроцитів з відповідними антигенами) в біологічному матеріалі дає можливість віднести еритроцити до того чи іншого класу (2, 3, 4). А ось відсутність такого процесу свідчить про нульовий (1) вид.

Як визначити резус-фактор

Існує кілька методів виявлення Rh-приналежності – використання антирезусних сироваток та моноклінального реагенту (білків групи D).

У першому випадку порядок проведення наступний:

забір матеріалу походить з пальця (допускається використання консервованої крові або самих еритроцитів, що утворилися після відстоювання сироватки);
в пробірку міститься 1 крапелька антирезусного зразка;
у заготовлений матеріал наливається крапля досліджуваної плазми;
невелике збовтування дозволяє сироватки рівномірно розташуватися у скляній тарі;
через 3 хвилини в тару з сироваткою та досліджуваними кров'яними тільцями додається розчин натрію хлориду.

Після кількох перевертань пробірки фахівець проводить розшифровку. Якщо аглютиніни з'явилися на тлі освітленої рідини, йдеться про Rh+ - позитивний резус-фактор. Відсутність змін у кольорі та консистенції сироватки свідчить про негативне Rh.

Визначення групи крові за системою резус

Вивчення резуса за допомогою моноклінального реагенту передбачає використання цоліклону анти-D супер (спеціальний розчин). Порядок проведення аналізу включає кілька етапів.

Реагент (0,1 мл) наноситься на підготовлену поверхню (тарілку, скло).
Поруч із розчином міститься крапля крові пацієнта (не більше 0,01 мл).
Дві краплі матеріалу поєднуються.
Проведення розшифровки відбувається через 3 хвилини початку дослідження.

У більшості людей на планеті в еритроцитах є аглютиноген системи резус. Якщо розглядати у відсотках, то 85% реципієнтів мають білок D і вони є резус-позитивними, а у 15% він відсутній – це резус-негативний фактор.

Сумісність

Сумісність крові являє собою відповідність по групі та резус-фактору. Такий критерій дуже важливий при переливанні життєво важливої рідини, а також у період планування вагітності та виношуванні плода.

Яка група крові буде у дитини

Наука генетика передбачає успадкування дітьми групової належності та резусу від батьків. Гени передають інформацію про склад кров'яних тілець (аглютинін альфа та бета, антигенів А, В), а також про Rh.

Таблиця «Спадкування груп крові»

Батьки	Дитина

	1	2	3	4
1+1	100
1+2	50	50
1+3	50		50
1+4		50	50
2+2	25	75
2+3	25	25	25	25
2+4		50	25	25
3+3	25		75
3+4		25	50	25
4+4		25	25	50

Змішування груп еритроцитів з різними Rh веде до того, що у дитини резус-фактор може бути як плюс, так і мінус.

Якщо Rh однаковий у подружжя (є антитіла групи D) – діти в 75% успадкують домінуючий білок, а в 25% він буде відсутній.
У разі відсутності специфічного білка D в оболонках еритроцитів мами та тата дитина також буде резус-негативною.
У жінки Rh-, а у чоловіка Rh+ – поєднання передбачає наявність або відсутність резусу у дитини у співвідношенні 50 на 50, при цьому можливий конфлікт антиген мами та малюка.
Якщо у матері Rh+, а у батька анти-D відсутня – резус передасться малюкові з ймовірністю 50 на 50, але ризику конфлікту антитіл немає.

Важливо розуміти, що резус-фактор передається генетичному рівні. Тому якщо батьки резус-позитивні, а дитина народилася з Rh-, чоловікам не варто поспішати ставити під сумнів своє батьківство. У таких людей просто є людина без домінуючого білка D в еритроцитах, що й успадкував малюк.

Група крові для переливання

При здійсненні гемотрансфузії (переливанні крові) важливо дотримуватися сумісності груп антигенів та резусу. Фахівці керуються правилом Оттенберга, яке говорить – кров'яні тільця донора не повинні склеюватись із плазмою реципієнта. У малих дозах вони розчиняються у великому обсязі біологічного матеріалу пацієнта та не випадають в осад. Такий принцип діє у разі переливання життєво важливої рідини до 500 мл і не підходить, коли людина має сильну втрату крові.

Універсальними донорами вважаються люди з нульовою групою. Їхня кров підходить усім.

Представникам рідкісного 4 класу для гемотрансфузії підійде 1, 2 та 3 вид кров'яної рідини. Вони вважаються універсальними реципієнтами (люди, яким вливають кров).

Пацієнтам з 1 (0) позитивною для переливання підійде 1 клас (Rh+/-), тоді як людині з негативним резусом можна вливати тільки нульову з Rh-.

Людям, у яких 2 позитивна, підходить 1 (+/-) та 2 (+/-). Пацієнтам з Rh-можна застосовувати тільки 1 (-) і 2 (-). Аналогічна ситуація з 3 класом. Якщо Rh+ – можна вливати 1 та 3 як позитивну, так і негативну. У випадку Rh-, підійде лише 1 та 3 без анти-D.

Сумісність під час зачаття

При плануванні вагітності велике значення має поєднання резус-фактора чоловіка та жінки. Це робиться, щоб уникнути резус-конфлікту. Таке буває, коли у матері Rh-, а дитина успадкувала Rh+ від батька. При попаданні домінуючого білка в кров людини, де її немає, може виникнути імунологічна реакція та вироблення аглютинінів. Такий стан провокує зчеплення одержаних еритроцитів та подальше їх руйнування.

Таблиця сумісності крові для зачаття дитини

Несумісність резусів матері та дитини при першій вагітності не несе небезпеки, а ось перед другим зачаттям краще розірвати вироблення антирезусних тіл. Жінці вводять спеціальний глобулін, що руйнує імунологічні ланцюжки. Якщо цього не зробити, резус-конфлікт здатний спровокувати переривання вагітності.

Чи може змінюватись група крові?

У медичній практиці є випадки зміни групової належності при вагітності або внаслідок перенесених тяжких захворювань. Це тим, що з подібних станах можливе сильне збільшення вироблення червоних кров'яних тілець. При цьому сповільнюється склеювання та руйнування еритроцитів. У аналізі подібне явище відбивається як зміна маркерів у складі плазми. Згодом все стає на свої місця.

Клас крові, як і резус-фактор, у людини закладається генетично ще до народження і не може змінюватися протягом усього життя.

Дієта по групі крові

Головний принцип харчування за груповою приналежністю полягає у підборі продуктів, які близькі організму генетично і дозволяють налагодити роботу травної системи, а також схуднути.

Першим, хто запропонував враховувати групу крові під час вибору їжі, став американець Пітер Д'Адамо. Лікар натуропат видав кілька книг, де виклав свою ідею здорового харчування. Якщо правильно вибирати їжу, можна забути про погане засвоєння корисних речовин та проблеми зі шлунком, кишечником.

Таблиця «Дієта за групою крові»

Група крові

Дозволена їжа

Їжа, яку варто максимально обмежити

1 (0)

Морська риба

Будь-яке м'ясо (смажене, тушковане, варене, мариноване та приготоване на багатті)

Харчові добавки (імбир, гвоздика)

Усі види овочів (за винятком картоплі)

Фрукти (крім цитрусових, полуниці)

Сухофрукти, горіхи

Зелений чай

Молоко та його похідні

Борошняні продукти

Пшенична, кукурудзяна, вівсяна каша, пластівці, висівки

2 (А)

М'ясо індички, курки

Курячі яйця

Йогурт, кефір, ряжанка

Фрукти (крім бананів)

Овочі (особливо цінні кабачок, морква, броколі, шпинат)

Горіхи, насіння

Пшенична та кукурудзяна каша

Борошняні вироби

Баклажани, помідори, капуста, картопля

Молоко, сир

3 (В)

Риба жирних сортів

Молоко та кисломолочні продукти

Спеції (перечна м'ята, імбир петрушка)

Куряче м'ясо

Гречана каша

Сочевиця

4 (АВ)

Морська та річкова риба

Соєві продукти

Сир, йогурт, кефір

Брокколі, морква, шпинат

Квашені огірки, помідори

Морська капуста

Курятина, червоне м'ясо

Свіже молоко

Річна біла риба

Гречана, кукурудзяна каша

Дієта з групової приналежності передбачає обмеження алкоголю, тютюнопаління. Важливим є активний спосіб життя – біг, піша ходьба на свіжому повітрі, плавання.

Особливості характеру групи крові

Група крові впливає як на фізіологічні особливості організму, а й у характер людини.

Нульова група

У світі близько 37% носіїв нульової групи крові.

Головними особливостями їхнього характеру є:

стресостійкість;
лідерські задатки;
цілеспрямованість;
енергійність;
сміливість;
амбітність;
комунікабельність.

Власники нульової групи вважають за краще займатися небезпечними видами спорту, люблять подорожувати та не боятися невідомості (легко беруться за будь-яку роботу, швидко навчаються).

До недоліків можна віднести запальність та різкість. Такі люди часто безцеремонно висловлюють свою думку і бувають зарозумілими.

2 група

Найбільш поширеною групою вважається 2(А). Її носії – це стримані люди, які здатні знайти підхід до найскладніших особистостей. Вони намагаються уникати стресових ситуацій, завжди дружелюбні та працелюбні. Власники 2 групи дуже господарські, сумлінно виконують свої обов'язки та завжди готові допомогти.

Серед недоліків характеру виділяють упертість та невміння чергувати роботу з відпочинком. Таких людей важко розбурхати на якісь необдумані вчинки чи несподівані заходи.

3 група

Людина, у крові якої переважають антигени групи В, натура мінлива. Такі люди відрізняються підвищеною емоційністю, креативністю та незалежністю від думки оточуючих. Вони легко пускаються в подорожі, беруться за нові справи. У дружбі – віддані, у коханні – чуттєві.

Серед негативних якостей часто виявляються:

часта мінливість у настрої;
мінливість у вчинках;
високі вимоги до оточуючих.

Власники 3 групи крові часто намагаються сховатися від реалій світу у своїх фантазіях, що не є позитивною рисою характеру.

4 група

Носії 4 групи мають хороші лідерські якості, що проявляється в умінні вести переговори і бути зібраними у відповідальний момент. Такі люди комунікабельні, легко сходяться з оточуючими, в міру емоційні, багатогранні та розумні.

Незважаючи на безліч переваг у характері, представники 4 групи часто не можуть дійти єдиного рішення, страждають від подвійності почуттів (внутрішній конфлікт) та відрізняються тугодумством.

Специфічний склад крові та наявність у ній або відсутність домінуючого фактора (антигена D) передається людині з генами. Існує 4 групи крові та резус-фактор. Завдяки класифікації за системою АВ0 та Rh фахівці навчилися безпечно переливати донорську кров, визначати батьківство та уникати резус-конфлікту під час дитини. Перевірити свою групову приналежність кожна людина може у лабораторії, здавши біологічний матеріал із пальця чи вени.

Процедура визначення груп крові за системою АВО полягає у виявленні антигенів А та В в еритроцитах за допомогою стандартних антитіл та використанням аглютинінів у плазмі або сироватці аналізованої крові стандартними еритроцитами. Методика розроблена на початку XX століття і досі активно застосовується у медицині. Визначення антигенів А та В здійснюється завдяки цоліклонам анти-А та анти-В.

Основні поняття

У донорів завжди визначаються як антигени в еритроцитах, а й аглютинини в сироватці (плазмі) із застосуванням стандартних еритроцитів. Як біоматеріал використовується венозна кров. Перед дослідженням необхідно відмовитись від жирної їжі за добу до аналізу та не палити за півгодини до здачі тесту. Групи крові визначають двічі: спочатку у лікувальному відділенні, де заготовляється матеріал, а потім підтверджують дослідженням у лабораторії.

Визначення груп крові за системою АВО є основним тестом, що використовується у трансфузіології. Також подібна система груп крові є у деяких тварин, наприклад, у шимпанзе, горил і бонобо.

Історія відкриття

У науці існує загальноприйнята думка про те, що методику визначення груп крові за системою АВО було виявлено вперше Карлом Ландштейнером, австрійським ученим, у 1900 році. Тоді він описав у своїй праці три типи антигенів. За це через тридцять років йому було присуджено Нобелівську премію з медицини та фізіології. Через те, що між вченими раніше не було тісних зв'язків, пізніше встановили, що чеський лікар-серолог Ян Янський незалежно від досліджень К. Ландштейнера вперше описав чотири групи крові людини, але його дослідження були не відомі широкій аудиторії. Нині саме класифікація, розроблена Я. Янським, застосовується у Росії республіках колишнього СРСР. У У. Л. Мосс створив свою схожу роботу 1910 р.

Методика визначення груп крові за системою АВО за допомогою цоліклонів

Група крові повинна визначатися у приміщенні з хорошим освітленням з дотриманням діапазону температури від 15 до 25 градусів Цельсія, оскільки відхилення від цієї норми можуть вплинути на результати дослідження. На платівці чи тарілці пишуться ініціали та прізвище пацієнта. Зліва направо або по колу наносять стандартні позначення груп (О(I), A(II), В(III)). Під ними розміщують краплі відповідні сироватки окремими піпетками для кожного виду. Потім до них додається кров пацієнта. Матеріал для дослідження береться з мочки вуха чи пальця. Цього потребує техніка визначення групи крові за системою АВО.

Правомірно також використання еритроцитів, що у пробірці після того, як утворився потік. Потрібно, щоб кількість сироватки була більша за кількість доданої крові вдесятеро. Після цього краплі перемішуються скляними паличками (окремо кожної). Протягом п'яти хвилин, акуратно похитуючи платівку, стежать за появою реакції гемаглютинації. Вона виявляється в тому, що з'являються маленькі червоні грудочки, що зливаються потім у більші. Сироватка тим часом практично повністю втрачає колір.

Щоб усунути хибну гемаглютинацію простого склеювання еритроцитів, потрібно через три хвилини додати одну краплю фізіологічного розчину і перевірити, чи зберігається аглютинація. Якщо так, вона є істинною. Все визначення груп крові за системою АВО на цьому завершено.

Тлумачення результатів

В результаті можуть спостерігатися чотири реакції:

не відбувається аглютинація з жодної з сироваток - перша група О(I);
реакція проявилася із сироватками I(ab) та III(a) - друга група А(II);
аглютинація настає із сироватками I(ab) та II(b) - третя група В(III);
якщо реакція відбувається з трьома сироватками, слід провести додаткову процедуру з реактивами групи АВ(IV), які є стандартними; якщо аглютинація у такій краплі відсутня, можна вважати, що це 4 група крові АВ(IV).

Експрес-метод для резус-фактора

Методика визначення груп крові у системі АВО передбачає одночасне виявлення резус-фактора (Rh).

Поверхню платівки попередньо змочують і пишуть на ній «контрольна сироватка» та «сироватка антирезус». Потім під написами мають одну-дві краплі необхідних реактивів і додають до них аналізований матеріал. Для цього також можна використовувати кров з пальця (у такій кількості, як і обсяг сироватки) або еритроцити, що залишилися на дні пробірки після появи згустку (половина об'єму сироватки). Вибір матеріалу на кінцевий результат не впливає. Потім кров і сироватка перемішуються сухою скляною паличкою, після чого протягом п'яти хвилин очікують настання реакції. Щоб усунути хибні показання, через три-чотири хвилини додають ізотонічний розчин натрію хлориду (загалом кілька крапель). Визначення групи крові за системою АВО та Rh проводиться дуже часто.

Якщо аглютинація еритроцитів у краплі із сироваткою відбувається, це вказує на позитивний резус крові. За статистикою Rh+ зустрічається у 85% населення планети. Відсутність її дозволяє говорити про резус-негативну належність. Якщо аглютинація з'явилася в контрольній сироватці, значить вона стала непридатною. На жаль, алгоритм визначення групи крові у системі АВО який завжди спрацьовує ідеально.

Які помилки можуть бути допущені за даної методики?

Неточності щодо визначення належності крові тій чи іншій групі залежить від таких причин:

Технічні.
Біологічна специфіка досліджуваної крові.
Неповноцінного характеру стандартних сироваток та еритроцитів.

Технічні помилки

Можливі похибки щодо групи крові системи АВО перехресним способом:

Помилки біологічної специфіки

Похибки, пов'язані з біологічною специфікою аналізованої крові, поділяються на два типи.

Залежні від особливостей еритроцитів.
Помилки, зумовлені біологічними особливостями сироватки.

Розглянемо кожен вид докладніше.

Залежні від особливостей еритроцитів

Пізня аглютинація, що пояснюється «слабкими» формами еритроцитів та антигенів. Щоб уникнути помилок, визначати групу крові донорів і реципієнтів потрібно з використанням стандартних еритроцитів. Індентифікувати аглютиноген А2 слід повторним дослідженням з іншими видами реагентів та іншого посуду, збільшивши час реєстрації реакції.
«Панаглютинація» («аутоаглютинація») – вміння крові виявляти однакову реакцію неспецифічного характеру з усіма сироватками, у тому числі з власною. Через п'ять хвилин гострота такої аглютинації слабшає, хоча має посилюватися. Подібні випадки спостерігаються у онкохворих, обпалених та ін. Як контроль необхідно оцінити прояв аглютинації аналізованих еритроцитів у стандартній сироватці четвертої групи та фізрозчині. При панаглютинації групу крові визначають в результаті потрійного відмивання еритроцитів. Якщо воно не дає потрібного результату, варто провести повторний забір зразка крові в прогріту перед процедурою пробірку і поставити пробу в термоконтейнер, щоб сприяти підтримці температури 37 градусів Цельсія і вище. Потім слід доставити в лабораторію, де зберігається вказана вище температура і використовуються підігріті фізіологічний розчин, платівка та реактиви.

Іноді еритроцити аналізованої крові розташовуються як «монетні стовпчики», і їх можна вважати аглютинати. Якщо додати дві краплі ізотонічного розчину та м'яко похитати планшет, червоні кров'яні клітини займають правильну позицію.
Неповна або змішана аглютинація, що зустрічається у пацієнтів з другою, третьою та четвертою групами внаслідок трансплантації кісткового мозку або у перші три місяці після переливання крові 0(I).

Зумовлені біологічними особливостями сироватки

Помилки, пов'язані із застосуванням неповноцінних стандартних еритроцитів та сироваток

Слабкі сироватки з минулим терміном придатності або мають титр менше 1:32 здатні зароджувати слабку та пізню аглютинацію. Застосування таких реактивів є неприпустимим.

Використання непридатних стандартних еритроцитів або сироваток, приготованих у нестерильних умовах і недостатньо законсервованих, призводить до появи «бактеріальної» аглютинації, що має неспецифічну природу.

Існує безліч популярних припущень про групи крові системи АВО, які з'явилися безпосередньо після виявлення у різних світових культурах. Так, наприклад, у 30-ті роки минулого століття в Японії та деяких інших країнах набула популярності теорія, що пов'язує групу крові з тим чи іншим типом особистості. Подібні теорії популярні і сьогодні.

Є також думка, що людина, що має групу А, схильна до важкого похмілля, Про пов'язана з хорошими зубами, а група А2 - з найвищим рівнем IQ. Але науково такі твердження не доведено.

Ми розглянули визначення груп крові за системою АВО за допомогою стандартних сироваток.

Група крові – це оригінальні антигенні характеристики клітин крові (еритроцитів), які визначаються з використанням способів розпізнавання груп білків та вуглеводів, які містяться в оболонці еритроцитів. Визначити групу крові – обов'язок кожної людини, при цьому необхідно здати аналіз. На сьогоднішній день у будь-якій лікарні чи поліклініці можна здавати свою кров на дослідження, тому труднощів із проведенням даної процедури не виникає, і кожному важливо знати, як визначити групу крові та звідки беруть матеріал на дослідження.

Група крові протягом усього життя у кожної людини залишається незмінною. Люди з одним типом можуть відрізнятися від людей з іншим через те, що у кожної людини різна кількість аглютиногенів A та B у кров'яних клітинах, а також зовсім різна кількість аглютинінів α та β, які містяться вже в амбоцептері крові.

У природі існує кілька видів груп крові:

0(I) – ця містить тільки аглютинини α та β, аглютиногенів немає.
A(II) – міститься лише аглютинін β та аглютиноген A.
В(III) – аглютинін α та аглютиноген B.
AB(IV) група крові містить аглютиногени A і B, аглютинини відсутні.

Звідки виникла класифікація? Вперше відкрив усі існуючі типи крові у людей лікар із Австрії. Це відкриття дозволило вченому отримати премію А. Нобеля з медицини у 1930 році. Також відкриття груп допомогло зупинити смертельні наслідки в процесі переливання крові від однієї людини іншій. Людина, якій необхідно зробити переливання, називається реципієнтом. А людина, що здає свою кров, називається донором. Найбільш відповідним типом для реципієнта буде ідентична кров його типу.

Крім існуючих антиглютиногенів A та B у кров'яних клітинах можна спостерігати й інші антигени, наприклад, резус-фактори. У ситуації, якщо кров не сумісна з резус-фактором, проводити переливання категорично заборонено. Згодом можуть виникнути плачевні випадки, аж до смерті.

Проведення дослідження

Як дізнатися групу крові, звідки її беруть на дослідження? Ці питання цікавлять усіх зацікавлених людей. Для цього можна звернутися до лікувального закладу, де потрібно здати біологічну рідину з пальця. Аналіз на групу крові можна проводити трьома основними способами:

по ізогемагглютинових сироватках;
по ізогемагглютинових сироватках і стандартних клітин крові (перехресний спосіб);
метод із застосуванням МКА (цоліклони анти-A та анти-B).

Зазвичай у лабораторіях переливання крові проводять дослідження за першим способом, тобто. із застосуванням стандартних ізогемаглютинових сироваток. Процес полягає в тому, що тест проводиться на виявлення антиглютиногенів A та B у освітленій лабораторії з температурою повітря в межах 15-25 °C. Для цього беруть досліджуваний матеріал і на спеціально підготовлену тарілку або пластину наносять стандартні изогемагглютинирующие сироватки I, II, III груп обсягом 0,1 мл.

Щоб уникнути будь-яких неточностей, наносять дві серії сироваток кожного з типів. Повинно вийти 6 крапель. Ці 6 крапель зразка аналізованої биожидкости переносять на спеціальну пластину в інші 6 точок, при цьому кожну краплю розміщують поряд з крапельками сироватки (крові знадобиться в 10 разів менше, ніж кількість сироватки, що використовується), після цього їх акуратно змішують вже іншими паличками зі злегка . Під час змішування пластину акуратно похитують із боку на бік. Склеювання клітин відбувається протягом 30 секунд. У ті краплі біологічної рідини, де пройшло з'єднання, додається трохи ізотонного розчину хлориду натрію, і оцінюється результат тесту.

Другим тестом на групу є перехресний метод. Його частіше застосовують у серологічних лабораторіях. Перехресний метод полягає в тому, що здавати біологічний матеріал потрібно на визначення вмісту антиглютиногенів A та B із застосуванням стандартних ізогемагглютинових сироваток та антитіл α та β за допомогою еритроцитів. Для цього на спеціальну тарілку білого кольору наносять маркером 6 клітин, в які капають піпеткою по 1 краплі сироватки з аналізованої біорідності, а поряд розташовують по маленькій краплі еритроцитів певних груп 0(I), A(II), B(III) – по два рази.

Відмінною та головною особливістю цього є те, що еритроцити групи 0(I) головні, т.к. вони містять антигенів. Ця особливість унеможливлює з'єднання еритроцитів з будь-якою із сироваток.

У третьому тесті виявлення застосовують МКА. Використовується гібридомна біотехнологія. Гібридому являє собою гібрид клітин, отриманих з мієломи та імунного лімфоциту, що виробляє МКА. До моноклональних антитіл (МКА) відносять: цоліклони анти-A і цоліклони анти-B. Їх наносять на приготовлену пластину білого кольору по великій краплі під спеціальними написами анти-A і анти-B. Після, поряд з краплями антитіл розміщують по маленькій краплі аналізованої биожидкости. Аглютинація відбувається в наступні 2-3 хвилини.

Похибки під час проведення дослідження

Визначення групи крові описаними тестами може ускладнитися виникненням деяких характерних помилок. Усі можливі помилки можна класифікувати на три групи: технічні, біологічні та сироваткові.

До технічних помилок відносяться поспішна оцінка результатів, недотримання режиму потрібної температури, відсутність маркування платин, неправильне співвідношення кількості крові та сироватки. Біологічні помилки з'являються у тих випадках, коли червоні кров'яні тільця з'єдналися з усіма сироватками, на дослідження беруть інфіковану біорідкість, відбувається повна панаглютинація, неактивні антигени A і B. Сироваткові помилки можуть бути, якщо беруть інфіковану, прострочену або сироватку2.

Щоб уникнути зазначених похибок, потрібно дотримуватися суворих правил при проведенні тестів на встановлення своєї групи. Слід використовувати різні тарілки (чисті та сухі), категорично не можна змішувати компоненти однією і тією ж паличкою, стежити за термінами та температурою, ну і звичайно, процедура визначення групи крові не повинна проходити в домашніх умовах, а лише у медичному закладі фахівцями.

Таким чином, лише дослідження в лабораторних умовах допоможуть відповісти на головне питання, як дізнатися про групу крові. І жодна інша інформація чи поради інших людей не дозволять дізнатися про свою групу, особливо в домашніх умовах. Тому для тих, хто ставить питання, яка у мене група крові, для проведення правильного дослідження з точними результатами необхідне спеціальне обладнане приміщення, де будуть дотримуватися всі вимоги, а не домашні умови з використанням підручних предметів.

У сучасній медицині група крові характеризує набір розташованих на поверхні еритроцитів антигенів, які визначають їхню специфічність. Існує безліч таких антигенів (зазвичай застосовується таблиця груп крові з різноманітними антигенами), але повсюдно проводиться визначення групи крові з використанням класифікації за резус-фактором і системою АВ0.

Визначення групи є обов'язковою процедурою для підготовки до будь-якої операції. Такий аналіз також необхідний при вступі на службу до деяких контингентів, серед яких військові, працівники внутрішніх органів та силових структур. Цей захід проводиться через підвищений ризик виникнення стану, що загрожує життю людини, з метою скорочення часу, необхідного для надання допомоги у вигляді переливання крові.

Склад крові різних груп крові

Суть системи АВ0 полягає у наявності структур антигенів на еритроцитах. У плазмі немає відповідних їм типових антитіл (гамма-глобулінів).Тому для дослідження крові можна використовувати реакцію "антиген + антитіло".

Еритроцити склеюються в момент зустрічі антигену та антитіла.Подібна реакція зветься гемаглютинації. Реакція відображається у вигляді невеликих пластівців під час проведення аналізу. Дослідження засноване на отриманні зображення аглютинації із сироватками.

Зв'язуються антигени еритроцитів "А" з антитілами "ά", а також "В" з "β" відповідно.

Виділяються такі групи крові за складом:

I (0) – ά, β – поверхня еритроцитів зовсім не містить антигенів;
II (А) - β - на поверхні є антиген А і антитіло β;
III (В) - ά - поверхня містить В з антитілом типу ά;
IV (АВ) - 00 - поверхня містить обидва антигени, проте не має антитіл.

Антигени є у зародка вже в стані ембріона, а аглютиніни (антитіла) з'являються на першому місяці життя.

Методи визначення

Стандартний метод

Існує безліч технік, однак у лабораторії зазвичай використовують визначення за допомогою стандартних сироваток.

Метод стандартних сироваток використовується для визначення типів антигенів АВ0. Склад стандартної ізогемагглютинуючої сироватки містить набір антитіл до молекул еритроцитів.У разі наявності антигену, який піддається дії антитіл, формується комплекс антиген-антитіло, що запускає каскад реакцій імунітету.

Результатом цієї реакції є аглютинація еритроцитів, на підставі характеру аглютинації, що відбувається, можна визначити приналежність зразка до будь-якої групи.

Для приготування стандартної сироватки використовується донорська кров та певна система - за допомогою виділення плазми, що включає антитіла, та подальшого її розведення. Розведення виконується з використанням ізотонічного розчину хлориду натрій.

Розведення проводиться так:

Безпосередньо дослідження проводиться таким чином:

На спеціальний планшет поміщають по краплі кожної сироватки (загальним обсягом приблизно 0.1 мл) на ділянку, де є відповідна позначка (застосовуються 2 зразки, з них один – контрольний, другий призначений для дослідження).
Потім поряд з кожною краплею сироватки розміщують досліджуваний зразок обсягом 0.01 мл, після чого його окремо змішують з кожним діагностикумом.

Правила розшифрування результатів

Через п'ять хвилин можна оцінювати результати дослідження. У великих краплях сироватки відбувається просвітлення, в одних спостерігається реакція аглютинації (утворюються дрібні пластівці), в інших – ні.

Відео: Визначення групи крові та резус-фактора

Тут можливі варіанти:

Якщо реакції аглютинації немає в обох пробах із сироватками II та III (+ контрольні 1 та IV) – визначення першої групи;
Якщо згортання спостерігається у всіх пробах, крім ІІ – визначення другої;
За відсутності реакції аглютинації лише у пробі з III групи - визначення III;
Якщо згортання спостерігається у всіх пробах, у тому числі в IV-контрольній - визначення IV.

Коли сироватки розташовуються в правильному порядку і на тарілці стоять підписи, легко орієнтуватися: група відповідає місцям з відсутньою аглютинацією.

У деяких випадках склеювання неясно помітне.Тоді аналіз необхідно переробити, дрібну аглютинацію спостерігають під мікроскопом.

Метод перехресної реакції

Суть цієї техніки полягає у визначенні аглютиногенів за допомогою стандартних сироваток або цоліклонів з паралельним визначенням аглютинінів за допомогою еталонних еритроцитів.

Техніка аналізу перехресним методом практично немає відмінностей від дослідження з допомогою сироваток, але є деякі доповнення.

На планшетку під сироватками необхідно додати краплі стандартних еритроцитів.Потім із пробірки з кров'ю пацієнта, що пройшла через центрифугу, піпеткою витягують плазму, яку поміщають до стандартних еритроцитів, що знаходяться на дні – додають у стандартну сироватку.

Так само, як і згідно з технікою стандартної методики, результати дослідження оцінюють через кілька хвилин після початку реакції. У разі реакції аглютинації можна говорити про наявність аглютинінів АВ0, у разі реакції плазми можна будувати висновки про аглютиногенах.

Результати дослідження крові із застосуванням стандартних еритроцитів та сироваток:

Наявність аглютинації при реакції зі стандартними ізогемагглютинуючими сироватками				Наявність аглютинації при реакції зі стандартними еритроцитами			Групи крові
0(I)	A(II)	B(III)	AB(IV)	0(I)	A(II)	B(III)
–	–	–	-	–	+	+	0(I)
+	–	+	-	–	–	+	A(II)
+	+	–	-	–	+	–	B(III)
+	+	+	–	–	–	–	AB(IV)

Аглютинація;

- аглютинація відсутня;

- Реакцію не проводять.

Перехресний метод набув поширення за рахунок того, що він запобігає діагностичним помилкам, що виникають при застосуванні стандартних методик.

Визначення групи крові цоліклонами

Цоліклони - синтетичні замінники сироваток, які містять у своєму складі штучні замінники аглютинінів типів і β. Вони називаються еритротестами "Цоліклон анти-А" (мають рожевий колір), а також "анти-В" (мають синій колір). Очікувана аглютинація спостерігається між аглютинінами цоліклонів та еритроцитами крові.

Ця методика не вимагає двох серій, вона є більш надійною та точною. Проведення дослідження та оцінка його результатів відбуваються так само, як і в стандартному методі.

	Вид цоліклонів		Група крові
Результат аглютинації	Анти-А	Анти-В
	-	-	0(I)
	+	-	A(II)
	-	+	B(III)
	+	+	AB(IV)

IV група (АВ) обов'язково підтверджується аглютинацією з цоліклоном анти-АВ, а також відсутністю склеювання еритроцитів в ізотонічному розчині натрію хлориду.

Експрес-методика за допомогою набору «Ерітротест-группокарт»

Хоча загальноприйняті методи визначення належності крові до конкретної групи поширені повсюдно, у сучасній медицині відбувається використання експрес-методів, найпоширенішим у тому числі є “Эритротест”.

При визначенні групи із застосуванням методики “Ерітротест групокарт” необхідний комплект інструментів, що включає наступні прилади:

Планшетка, що має з п'ять лунок, для визначення групи за її резус-приналежності та системі АВ0;
Скарификатор, призначений для одержання зразка, необхідного для дослідження;
Скляні палички для перемішування зразків;
Чиста піпетка для набору розчинів.

Усі перелічені інструменти необхідні безпомилкового проведення діагностики.

Набір для аналізу крові “Ерітротест-группокарт” дозволяє проводити дослідження резус-фактора та визначення групи крові в будь-яких умовах, вона особливо ефективна за відсутності можливості використання загальноприйнятих методів.

У лунках на планшетці розташовані цоліклони до антигенів (це цоліклони анти-А, -В, -АВ) і до основного антигену, який зумовлює успадкування резус-фактора (це цоліклон анти-D). П'ята лунка містить контрольний реагент, який дозволяє запобігти можливим помилкам і грамотно визначити приналежність до групи крові.