Ang mga cell ng Phagocytosis ay hindi lamang nagagawang bumuo ng pseudopodia sa pamamagitan ng pag-urong, naglalabas sila ng mga nakabaluktot na plato upang ayusin ang mga dayuhang particle, tulad ng mga particle ng alikabok, microbes, mga labi ng patay, mga degenerated na selula. Ang katotohanan na ang mga leukocytes at iba pang mga mobile

Immunity Immunity (lat. immunitas - "pagpalaya mula sa isang bagay") ay ang proteksyon ng katawan mula sa mga genetically alien na organismo at mga sangkap, na kinabibilangan ng mga microorganism, virus, worm, iba't ibang mga protina, mga cell, kabilang ang kanilang sariling mga binago. PANSIN Salamat sa kaligtasan sa sakit

Ang isang malaking bilang ng mga pamamaraan para sa pagbibilang ng phagocytosis ay inilarawan sa panitikan. Ang dami ng aklat na ito ay hindi nagpapahintulot sa amin na ilarawan nang detalyado ang lahat ng mga ito, kaya lilimitahan namin ang aming sarili sa paglalarawan ng iilan lamang.

Mga materyales at kagamitan

Upang magtrabaho, kailangan mong magkaroon ng:

Citratedextrose anticoagulant: 8 g citric acid. 22 g ng trisubstituted sodium citrate (two-water), 24.5 g ng glucose ay natunaw sa 1 litro ng tubig;

Dextrosodextran solution: 4.5 g NaCl, 25 g glucose, 30 g dextran (rel. mol. wt. 500,000) sa 1 l;

Ammonium chloride solution: 9 na bahagi 0.83% ammonium chloride, 1 bahagi Tris-HCl buffer pH 7.2 (20.6 g/l);

Isang halo ng ficoll - vizotrast: 9 g ng ficoll, 20 ml ng vizotrast, 100 ml ng bidistilled H 2 0, density 1.077;

Substrate para sa β-glucuronidase: 31.5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronide at 100 μm Triton X 100 ay natunaw sa 100 ml 0.05 M sodium acetate buffer pH 5;

Myeloperoxidase deficiency reagents: fixative (10 ml 37% formaldehyde na may 90 ml absolute ethanol), substrate solution (100 ml 30% EDTA, 0.3 g benzidine chloride, 0.038 g ZnS0 4 x7H 2 0, 1 ml distilled water, CH 1 . 3 C00Nax3H 2 0, 0.7 ml 3% H 2 0 2); dalhin ang pH ng 1.0 M NaOH sa 6.0.

Mga komersyal na reagents:

FSB, Hank's solution at Eagle-MEM medium (State Institute for Immune Preparations and Nutrient Media, Berlin-Weissensee, GDR);

Heparin (5000 IU/mg) (Gedeon Richter, Hungary);

Serum ng bovine embryo (Flow Laboratories, USA, maaaring gamitin ang ibang kumpanya);

Visotrast (Listahan ng VEB Fahlberg, Magdeburg, GDR);

Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, GDR);

Dextran, ficoll (Pharmacia, Sweden);

Colloidal carbon Сl1/143a (Wagner, Pelikanwerke, Germany);

Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson at Bell, USA);

Triton X 100 (Serva, Germany, posible ang isa pang kumpanya);

Pulang langis O (Allied chemical corp., Morristown, NY, USA);

Iaranitrophenyl-β-glucuronide (Sigma, USA);

Safranin O (Fischer Scientific Lab., Chicago, USA);

Polystyrene beads, tubes (Nunc, Denmark);

Grid F 905 (VEB Orvo Wolfen, GDR).

Pagkuha ng mga phagocytes

Ang kinakailangang impormasyon tungkol sa paghihiwalay ng mga granulocytes ng tao ay maaaring makuha sa kabanata na "Paghihiwalay ng mga selula ng immune system"; para sa pagkuha ng peritoneal macrophage, tingnan ang mga seksyon na "Paglilinang ng mga macrophage at monocytes" at "Paghihiwalay ng mga macrophage mula sa isang suspensyon ng spleiocytes". Ang isyung ito ay isinasaalang-alang nang detalyado sa isang bilang ng mga gawa.

Bilang karagdagan, ang mga sumusunod na pamamaraan ay dapat ding banggitin:

8 ml ng dugo ay halo-halong may solusyon ng dextranglucose. Pagkatapos ay magdagdag ng 6% na solusyon ng dextran 75 sa 0.15 M NaCl (5 ml). Ang halo ay naiwan sa loob ng 45-50 min sa temperatura ng silid para sa sedimentation ng mga erythrocytes. Aspirate ng plasma. Ang mga natitirang erythrocyte ay lysed sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 0.83% ammonium chloride (35 ml hanggang 15 ml ng plasma). Centrifuge sa loob ng 10 minuto sa 80g, suspindihin ang precipitate sa 0.15 M NaCl na pinalamig hanggang 0°C. Pagsamahin ang ilang mga precipitates at centrifuge sa loob ng 10 minuto sa 800 g. Ang mga cell ay pinakamahusay na nakatago sa yelo sa 0.15 M NaCl (ang medium na ito ay mas angkop kaysa sa buffered media na may divalent cations na nagiging sanhi ng pagdikit ng mga cell);

Kung ang bagay ng phagocytosis ay lebadura, ang hakbang sa paggamot ng ammonium chloride ay maaaring tanggalin, dahil ang mga pulang selula ng dugo ay hindi nakakasagabal sa proseso. Ang mga mononuclear cell ay maaaring makuha tulad ng sumusunod: ang heparinized na dugo ay halo-halong may 1/3 ng dami ng daluyan ng Eagle na naglalaman ng 15% glucose, layered sa isang layer ng isang pinaghalong ficoll - visotrast at centrifuged para sa 20 minuto sa 400 g. Ang fraction ng mga mononuclear cell ay na-aspirate gamit ang isang Pasteur pipette, hugasan ng dalawang beses gamit ang PBS, at ang isang suspensyon ay inihanda sa Eagle's medium (1x10 7 cells/ml).

Paghahanda ng butil para sa phagocytosis

Ang mga live na kultura ng Staphylococcus aureus (SG 511 o 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli at iba pang enterobacteria, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae ay mas karaniwang ginagamit. Ang mga mikroorganismo ay lumaki sa loob ng 24 na oras (kung kinakailangan, 48 oras) sa solid at likidong nutrient media. Ang nakolektang biomass ay hinuhugasan ng tatlong beses gamit ang 0.15 M NaCl. Masyadong makapal ang isang suspensyon ay sinusukat sa 640 nm, ang konsentrasyon ay tinutukoy mula sa calibration curve.

Ang konsentrasyon ng mga mikroorganismo ay natutukoy din sa pamamagitan ng mga pamamaraan ng pagsala sa siksik na nutrient media; sa ilang mga kaso, ang enumeration ng mga microorganism ay maaaring isagawa sa pagbibilang ng mga silid.

Kapag nagtatrabaho sa mga live na bacterial culture, dapat mag-ingat na laging gumamit ng mga kultura sa parehong yugto. Ang pagdaragdag ng 0.01% bovine serum albumin ay nagtataguyod ng kaligtasan ng mga microorganism. Ang inihandang suspensyon ay nananatiling matatag sa loob ng 1-2 oras.

Ang mga pinatay na microorganism culture ay karaniwang nakukuha sa pamamagitan ng pag-init ng 30 minuto sa 80°C o sa pamamagitan ng paggamot na may dumadaloy na singaw. Ang mga napatay na mikrobyo ay hinuhugasan ng tatlong beses na may 0.15 M NaCl, muling sinuspinde, at ang konsentrasyon ng suspensyon ay tinutukoy.

Paghahanda ng lebadura ng panadero: 0.5 g ng lebadura ng panadero ay sinuspinde sa 0.15 M NaCl at inilagay sa isang paliguan ng tubig na kumukulo sa loob ng 30 minuto. Salain sa pamamagitan ng cotton-gauze filter. Kapag gumagamit ng live na lebadura, ang mga sariwang selula (4-5 araw na kultura) ay hinuhugasan ng tatlong beses sa medium ng Eagle na may pagdaragdag ng 1.0% na glucose. Karaniwan ang isang cell suspension na 10 8 at 10 9 na mga cell/ml ay ginagamit. Ang mga lebadura ay ginagamit bilang mga particle ng pagsubok sa pagtuklas ng mga depekto sa bahagi ng C5.

Paggamit ng isang suspensyon ng polystyrene particle: Maghanda ng 10% aqueous suspension ng polystyrene particle na may diameter na 1.091 μm. Ito ay diluted sa isang ratio ng 1 + 1 na may isang 0.2% BSA solusyon sa 0.15 M NaCl, centrifuged. Sa isang wavelength na 253 nm, ang isang suspensyon ng polystyrene 1 μg/ml ay nagbibigay ng pagsipsip ng 1.17x10 -3 .

Application ng isang suspensyon ng lipopolysaccharide - pula ng langis O sa mineral na langis: 2 g ng pula ng langis ay triturated sa 50 ml ng diisodecyl phthalate (o vaseline oil) sa isang porcelain mortar. Centrifuge para sa 20 min sa 500 g. Magdagdag ng 10 μg ng supernatant fraction sa 10 ml ng dioxin, sukatin ang optical density sa wavelength na 525 nm. Ang conversion factor ay 0.92. Sa ikalawang yugto, 40 mg ng lipopolysaccharide (E. coli 0.26 B6, atbp.) ay natunaw sa 3 ml ng 0.15 M NaCl. Pagkatapos ay 1 ml ng isang solusyon ng madulas na pula O sa diisodecyl sulfate ay idinagdag sa halo na ito, at ang halo ay sinuspinde ng 90 segundo. Ang suspensyon ay ginagamit kaagad at maaaring i-freeze.

Upang i-set up ang reaksyon ng phagocytosis, ang mga pormal na erythrocytes ay maaaring gamitin bilang mga particle ng pagsubok.

Phagocytosis ng bakterya, bactericidal

Eksperimento sa pagsususpinde ng live na bacteria: Karaniwang ginagamit ang ratio na 3-10 microbes/phagocyte. Sa kabuuang dami ng 2 ml, 1x10 6 phagocytes ay halo-halong may 3x10 6 - 1x10 7 microbes. Sa pagsasagawa, ang 1 ml ng bacterial suspension ay idinagdag sa 1 ml ng phagocyte suspension, kung saan idinagdag ang 8 IU ng heparin. Ang oras ng pakikipag-ugnayan ay karaniwang 30 minuto, sa ilang mga kaso ito ay mas mahaba. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, 0.5 ml ng pinaghalong kinuha, 1.5 ml ng isang 0.1% gelatin solution sa Hank's solution, pinalamig sa 0 ° C, ay idinagdag, at centrifuge para sa 3-4 minuto sa 300 g. Ang mga pahid ay inihanda mula sa namuo, na kung saan ay nabahiran ayon sa Pappenheim. Tingnan ang 200 mga cell (kung maaari tatlong beses). Kalkulahin ang porsyento ng phagocytosis. Ayon sa bilang ng mga bakterya na nakapaloob sa mga selula, ang index ng aktibidad ng phagocytosis ay kinakalkula: ang bilang ng mga phagocytized na bakterya ay pinarami ng porsyento ng mga phagocytic na selula; ang intensity ng phagocytosis ay ipinahayag ng mga numero mula 1 hanggang 4.

Grade 1: Phagocytosed na may I-4 bacteria
Grade 2: phagocytosed 5-7 bacteria
Grade 3: phagocytosed 8-10 bacteria
Grade 4: Mahigit sa 10 bacteria bawat cell na na-phagocytos

Kapag tinutukoy ang antas ng phagocytosis ng mga buhay na microbes, ang cell sediment at ang supernatant fraction ay hiwalay na sinusuri. Ang bilang ng mga live microbes ay natutukoy sa pamamagitan ng pagsala sa solid nutrient media na 0.1 ml ng mga pinag-aralan na fraction. Incubated para sa 24 (48) oras Kapag kinakalkula ang aktibidad ng bactericidal, ipinapalagay na ang isang nabuong kolonya ay tumutugma sa isang buhay na mikrobyo.

Para sa isang direktang pag-aaral ng aktibidad ng bactericidal, ang dugo ng mga pasyente at malusog na donor ay sinusuri kasama ang pagdaragdag ng isang antibiotic solution (5000 IU ng penicillin at streptomycin / ml) at kung wala ito, at isinasagawa din ang pagkontrol sa bakterya. Sample na komposisyon: 0.3 ml ng Hank's solution + 0.1 ml ng normal na serum na nakuha mula sa dugo na kinuha mula sa 5 donor + 0.5 ml ng leukocyte suspension (10 7 cells / ml) + 0.1 ml ng microbial suspension (10 6 microbes/ml). Ang isang solusyon ng antibiotics ay idinagdag sa 0.02 ml bawat sample. I-incubate ang mga sample sa 37°C at tukuyin ang bilang ng mga mikrobyo pagkatapos ng 20 minuto, 1.5 oras at 3 oras. Upang gawin ito, kumuha ng 0.1 ml mula sa bawat sample, palabnawin ang mga napiling aliquot na may solusyon ng Hank 10, 100 at 1000 beses at ilapat sa pinainit na agar. Minsan, lalo na kung ang mga antibiotics ay idinagdag, ang mga intermediate dilution ay inihanda upang tumpak na mabilang ang mga mikrobyo (halimbawa, 0.2 ml ng sample ay halo-halong may 5 ml ng Hank's solution, centrifuge para sa 5 minuto sa 450 g, ang precipitate ay natunaw sa 1.9 ml. ng PBS, inilapat sa agar) . Kung nais mong paikliin ang tagal ng pag-aaral ng bacteriological, maaari mong matukoy ang mga microbes sa loob ng cell sa pamamagitan ng fluorescence gamit ang acridine yellow staining.

Phagocytosis ng lebadura ng panadero: maghanda ng suspensyon na 10 9 cells/ml sa 0.15 M NaCl. Paghaluin ang 0.1 ml ng suspensyon sa 0.1 ml ng plasma ng pasyente, i-incubate sa loob ng 30 minuto sa 37 ° C, magdagdag ng 0.2 ml (10 6) PMNL, i-incubate ng 30 minuto. Ang mga aliquot ay kinukuha sa pagitan ng 5 hanggang 30 minuto. Binibilang ang 100 PMN at tinutukoy ang bilang ng mga nakuhang yeast particle bawat cell. Ang sumusunod na pagbabago ay kilala: 50 µl ng test serum ay idinagdag sa 50 µl ng guinea pig serum (dati ito ay diluted sa ratio na 1 + 1 sa Eagle's medium na may glucose), 50-200 µl ng isang suspensyon ng leukocytes ( 10 7 cell / ml) ay idinagdag, ang volume ay nababagay sa 450 µl na may medium Needle na may glucose at incubate ng 30 min sa 37 °C. Pagkatapos ay magdagdag ng 50 μl ng yeast suspension (10 8 cells/ml), ihalo, i-incubate ng 40 minuto sa 37 °C. Magdagdag ng 50 μl ng L-75 Se-methionine (kabuuang aktibidad 100 kBq), ihalo at i-incubate ng 1 oras sa 37 °C. Ang mga cell ay na-precipitate sa pamamagitan ng centrifugation sa loob ng 5 minuto sa 1000 g, sila ay hugasan ng dalawang beses sa PBS, ang radyaktibidad ay sinusukat sa isang gamma counter. Ang porsyento ng phagocytosed yeast ay kinakalkula ng formula:

Phagocytosis gamit ang isang solusyon ng pula ng langis sa mineral na langis: 0.2 ml ng particle suspension ay halo-halong may 0.8 ml ng cell suspension na pinainit sa 37°C. Pagkatapos ng 5 minuto ng pagpapapisa ng itlog, 6 ml ng isang 0.15 M NaCl solution na pinalamig hanggang 0°C na naglalaman ng 126 μg/l ng N-ethylmaleimide (upang ihinto ang pagkuha ng mga particle) ay idinagdag. Centrifuge para sa 10 minuto sa 250 g. Ang supernatant fraction ay itinapon, ang precipitate ay muling sinuspinde sa isang solusyon ng NaCl at N-ethylmaleimide (tingnan sa itaas), ang mga cell ay hugasan ng dalawang beses. Ang mga cell ay lysed sa ultrasound, ang pula ng langis ay inilabas. Magdagdag ng 1 ml ng dioxane. Centrifuged para sa 15 minuto sa 500 g, sukatin ang optical density sa isang wavelength na 525 nm laban sa purong dioxane. Ang antas ng phagocytosis (IF) ay tinukoy bilang ang halaga ng mineral na langis (mg) na hinihigop bawat minuto ng 10 7 mga cell. Maaari mong gamitin ang sumusunod na formula upang makalkula:

Ang pag-aaral ng phagocytosis sa monolayer ng macrophage:

1. Phase: 2 ml ng cell suspension (200,000 cells/ml) ay idinagdag sa sterile polystyrene tubes. Mag-inoculate ng 5 oras sa 37°C, pagkatapos ay hugasan gamit ang medium ng Eagle. 2 ml ng culture medium na may 10% inactivated (30 min, 56 °C) serum ng bovine embryo ay idinagdag sa mga test tube, na incubated sa 37 °C.

2. Phase A: isang suspensyon ng microbes (3-10/macrophage) ay ipinakilala, incubated para sa 30-60 min sa 37 °C, ang mga tubes ay anglaw 6 beses na may 3 ml na bahagi ng medium upang alisin ang non-phagocytosed microbes. Ayusin kaagad gamit ang pinaghalong 1 bahagi ng glacial acetic acid at 3 bahagi ng methanol. Mantsa ang paghahanda ayon sa Mayo - Griinwald, bilangin ang mga selula.

Phase B: pagtukoy ng intracellular na buhay na bakterya. Ang pagkakasunud-sunod ng mga operasyon ay pareho sa phase A bago ang yugto ng pag-aayos. Pagkatapos ng paghuhugas, maingat na alisin ang lahat ng mga bakas ng daluyan. Ang mga cell ay lysed, kung saan ang 2 ml ng isang 0.01% sterile solution ng bovine serum albumin (4°C) ay idinagdag, paulit-ulit na inalog. Karamihan sa mga cell ay lysed pagkatapos ng 20 minuto. Ang inilabas na bakterya ay tinutukoy sa pamamagitan ng pagsala sa siksik na nutrient media.

Phagocytosis ng erythrocytes: paghaluin ang 4x10 7 phagocytes sa 5x10 7 test erythrocytes sa 5 ml ng PBS. Ilipat ang 2 ml ng pinaghalong sa 5 mM phosphate buffer na pinalamig sa 0°C at centrifuge. Sukatin ang optical density ng supernatant fraction sa wavelength na 420 nm. Ang antas ng phagocytosis ay natutukoy sa pamamagitan ng pagbaba sa nilalaman ng hemoglobin sa cell-free phase gamit ang mga curve ng pagkakalibrate.

Pinasimpleng paraan para sa pagtukoy ng clearance

Isang halimbawa ng pagtukoy ng clearance sa mga daga: ang mga hayop ay tinuturok nang intraperitoneally sa 5x10 7 microbes bawat 100 g ng timbang (0.1 ml/ /100 g). Ang pinakamainam na dosis ay maaaring mula 10 6 hanggang 10 8 bawat 100 g ng timbang. Sa pagitan ng 1-2 oras, 3 indibidwal ang kinakatay mula sa bawat pangkat ng mga eksperimentong hayop; kabuuang tagal ng eksperimento 16 na oras. Sterilly kumuha ng 0.5 ml ng dugo mula sa puso, 1 ml ng peritoneal fluid, ilihim ang mga baga, atay, pali at bato. Ang mga silindro ay pinutol mula sa organ tissue na may Pasteur pipette. Tukuyin ang bilang ng mga microorganism sa pamamagitan ng pag-culture sa likido at solid nutrient media.

Halimbawa ng pagtukoy ng clearance sa mga daga: colloidal charcoal o may label na 51 [Cr] ram erythrocytes ay ginagamit. Ang mga daga (hindi bababa sa 5 indibidwal bawat karanasan) ay tinuturok sa ugat ng 0.01 ml ng isang suspensyon ng karbon sa rate na 16 mg bawat 100 g ng timbang. Sa loob ng 15 minuto na may pagitan ng 2 minuto, 0.025 ml ng dugo ang kinuha mula sa retroorbital space. Ang napiling 0.025 ml ng dugo ay idinagdag sa 2.0 ml ng 0.1% Na 2 C0 3 na solusyon. Pagkatapos ng hemolysis, ang konsentrasyon ng karbon ay tinutukoy ng colorimetrically sa wavelength na 675 nm gamit ang mga calibration curves.

t ay ang oras sa minuto, C ay ang carbon concentration sa sample.

Nawastong halaga ng phagocytosis:

Functional screening ng phagocytes

Degranulation determination (activity measurement (β-glucuropidase): 10 7 leukocytes ay sinuspinde sa 0.8 ml ng PBS sa plastic tubes, inalog ng 5 minuto sa 37 ° C. Magdagdag ng 0.2 ml ng sensitized LPS, fluorochromic particle (FC 80), cool 30 minuto sa yelo, centrifuge sa loob ng 10 minuto sa 250 g Suriin ang aktibidad ng enzyme sa supernatant fraction I-incubate ang 0.9 ml ng substrate mixture sa loob ng 18 oras na may 0.1 ml ng investigated fraction Magdagdag ng 2 ml ng 0.1 M NaOH, sukatin ang optical density sa alon 410 nm.

Pagkalkula:

(OD 410 x20)/(1.84x18) = bilang ng nmol ng substance na inilabas sa loob ng 1 oras ng 10 7 leukocytes, ibig sabihin, ang antas ng degranulation ay ipinahayag sa mga nanomol ng paranitrophenyl-β-glucuronide.

Paraan para sa pagtukoy ng mga depekto sa myeloperoxidase: ang pinakamahusay na mga resulta ay nakuha sa pamamagitan ng biochemical na pagpapasiya ng H 2 0 2, na nagpapahiwatig ng mga pagbabago sa metabolismo sa panahon ng phagocytosis. Para sa mga praktikal na layunin, napakahalaga na ang pag-activate ng hexose-monophosphate shunt, ang pagbawas ng tetrazolium nitroene, at ang pagbubuklod ng exogenous iodine sa mga protina ng PMNL ay nauugnay sa pagbuo ng H 2 0 2 . Ang isang regular na blood smear ay naayos sa loob ng 30 segundo na may pinaghalong alkohol at formalin. Hinugasan ng distilled water, at stain para sa peroxidase sa loob ng 30 segundo. Sa mga cell na naglalaman ng peroxidase, ang mga inklusyon na nabahiran ng madilim na asul ay nakita.

Pagsubok para sa pagbabawas ng tetrazolium nitro blue (TNS). Ang THC ay binabawasan ng normal na PMNL sa formazan. Ihalo sa 0.1 ml ng dugo ang 0.1 ml ng 0.1% na solusyon ng THC sa 0.15 M NaCl, i-incubate sa loob ng 20 minuto sa 37 ° C, ihalo muli nang lubusan. Ang pagsasama ng Formazan sa mga cell ay tinutukoy ng mikroskopya. Ang resulta ay ipinahayag bilang isang porsyento ng mga cell na positibo sa formazan.

Ang sumusunod na paraan ay medyo mas kumplikado: 1 patak ng dugo ng pasyente ay inilapat sa isang coverslip. I-incubate sa loob ng 20 minuto sa 37°C sa isang basang silid, pagkatapos ay maingat na hugasan ang baso gamit ang sterile na 0.15 M NaCl. Maglagay ng cover slip sa isang slide na naglalaman ng 1 drop ng THC medium (0.5 ml ng serum + 0.3 ml ng sterile 0.15 M NaCl + 0.6 ml ng THC, tingnan sa itaas). Incubate para sa 30 minuto sa isang mahalumigmig na silid sa 37°C, alisin ang coverslip at tuyo sa hangin. Ayusin gamit ang absolute methanol sa loob ng 60 segundo at hugasan ng distilled water. Mantsang para sa 5 min na may safranin (1 g safranin + 100 ml distilled water + 40 ml gliserin), hugasan. Ang mga cell na positibo sa Formazan ay malaki, parang sabog, at naglalaman ng mga asul na butil. Karaniwan, halos 30% ng mga cell na positibo sa formazan ay nakita sa paghahanda.

Ang mga pamamaraan sa itaas para sa pagtatasa ng phagocytosis ay isang buod ng napakalaking bilang ng mga publikasyon. Ang mas detalyadong impormasyon sa mga isyung ito ay matatagpuan sa mga nauugnay na gawa.

Phagocytosis (mula sa Greek phago - I devour at cytos - isang cell) ay isang proseso ng pagsipsip at pagtunaw ng mga antigenic substance, kabilang ang mga microorganism, ng mga cell ng mesodermal na pinagmulan, na tinatawag na mga phagocytes. I. I. Mechnikov hinati phagocytes sa macrophage at microphage. Sa kasalukuyan, nagkakaisa ang mga macro- at microphage isang solong sistema ng macrophage (SMF). Kasama sa sistemang ito ang:

• tissue macrophage - epithelioid cells,
• stellate reticuloendotheliocytes (Kupffer cells),
• alveolar at peritoneal macrophage na matatagpuan sa alveoli at peritoneal cavity,
• white process epidermocytes ng balat (Langerhans cells), atbp.

Kasama sa mga microphage ang:

• neutrophils,
• eosinophils,
• mga basophil.

Mga pag-andar ng macrophage lubhang iba-iba. Sila ang unang tumutugon sa isang dayuhang substansiya, bilang mga dalubhasang selula na sumisipsip at sumisira ng mga dayuhang sangkap sa katawan (namamatay na mga selula, mga selula ng kanser, bakterya, mga virus at iba pang mga mikroorganismo, antigens, hindi nababagong mga inorganic na sangkap). Bilang karagdagan, ang mga macrophage ay gumagawa ng maraming biologically active substances - enzymes (kabilang ang lysozyme, peroxidase, esterase), complement proteins, immunomodulators tulad ng interleukins. Ang presensya sa ibabaw ng mga macrophage ng mga receptor para sa mga immunoglobulin (Am) at pandagdag, pati na rin ang isang sistema ng mga tagapamagitan, ay tinitiyak ang kanilang pakikipag-ugnayan sa T- at B-lymphocytes. Kasabay nito, isinaaktibo ng mga macrophage ang mga proteksiyon na function ng T-lymphocytes. Dahil sa pagkakaroon ng mga receptor para sa pandagdag at Am, pati na rin ang histocompatibility system Ag (HLA), ang mga macrophage ay kasangkot sa pagbubuklod at pagkilala ng mga antigens. Kaya, ang mga phagocytes ay may tatlong pag-andar:

• proteksiyon, nauugnay sa paglilinis ng katawan ng mga nakakahawang ahente, mga produkto ng pagkabulok ng tissue, atbp.;
• kumakatawan, na binubuo sa pagtatanghal ng mga antigenic epitols sa mga lymphocytes sa phagocyte membrane;
• secretory, na nauugnay sa pagtatago ng lysosomal enzymes at iba pang biologically active substances - cytokines, na may mahalagang papel sa immunogenesis.

May mga sumusunod na sunod-sunod na dumadaloy mga yugto ng phagocytosis.

• Chemotaxis– naka-target na paggalaw ng mga phagocytes sa direksyon ng chemical gradient ng chemoattractants sa kapaligiran. Ang kakayahang chemotaxis ay nauugnay sa pagkakaroon sa lamad ng mga tiyak na receptor para sa chemoattractants (mga bagay ng phagocytosis), na maaaring bakterya, mga produkto ng pagkasira ng mga tisyu ng katawan, atbp.
• Pagdirikit(attachment) ay pinapamagitan din ng kaukulang mga receptor, ngunit maaaring magpatuloy alinsunod sa mga batas ng di-tiyak na pakikipag-ugnayang physico-kemikal. Ang mga particle ay na-adsorbed sa ibabaw ng macrophage.
• Endositosis(capture) - nangyayari ang invagination ng cell membrane, ang pagkuha ng isang dayuhang particle at ang paglulubog nito sa protoplasm. Bilang resulta ng endocytosis, nabuo ang isang phagocytic vacuole - phagosome(i.e., isang bubble sa protoplasm sa paligid ng hinihigop na particle).
• intracellular digestion- nagsisimula sa pagsipsip ng mga phagocytosed na bagay. Ang phagosome ay sumasama sa lysosome ng phagocyte, na naglalaman ng dose-dosenang mga enzyme, at ang pagbuo ng phagolysosome (pagkasira) ng nakuha na particle ng mga enzyme ay nangyayari. Kapag ang isang particle na kabilang sa mismong organismo ay nasisipsip (halimbawa, isang patay na selula o mga bahagi nito, ang sarili nitong mga protina), ito ay nahati ng phagolysosome enzymes sa mga non-antigenic substance (amino acids, fatty acids, nucleotides, monosugars). Kung ang isang dayuhang butil ay nasisipsip, kung gayon ang mga enzyme ng phagolysosome ay hindi magagawang masira ang sangkap sa mga di-antigenic na sangkap. Sa ganitong mga kaso, ang phagolysosome na may natitirang bahagi ng antigen na napanatili ang pagiging dayuhan nito ay ipinadala ng macrophage sa T- at B-lymphocytes, ibig sabihin, ang isang tiyak na link ng kaligtasan sa sakit ay nakabukas.

pagpapaandar ng pagtatago ay ang pagtatago ng mga phagocytes ng biologically active substances - cytokines - ito ay interleukin-1 at interleukin-2, na mga cellular mediator na may regulatory effect sa paglaganap, pagkita ng kaibhan at paggana ng phagocytes, lymphocytes, lymphoblasts at iba pang mga cell. Ang mga macrophage ay gumagawa at naglalabas ng mga mahahalagang salik sa regulasyon gaya ng mga prostaglandin, leukotrienes, cyclic nucleotides na may malawak na hanay ng biological activity. Bilang karagdagan, ang mga macrophage ay nag-synthesize at nagtatago ng isang bilang ng mga produkto na may aktibidad na antibacterial, antiviral at cytotoxic (oxygen radicals O2-H2O2, lysozyme, interferon, atbp.).

Ang phagocytosis ay pinahusay ng mga opsonin antibodies, dahil ang nakagapos o antigen ay mas madaling na-adsorbed sa ibabaw ng phagocyte, dahil sa pagkakaroon ng mga receptor para sa mga antibodies na ito sa huli. Ang pagpapahusay na ito ng phagocytosis ng mga antibodies ay tinatawag opsonisasyon, ibig sabihin. paghahanda ng mga microorganism para makuha ng mga phagocytes. Ang phagocytosis ng mga opsonized antigens ay tinatawag na immune.

Upang makilala ang aktibidad ng phagocytosis na ipinakilala phagocytic index. Upang matukoy ito, ang bilang ng mga bakterya na hinihigop ng isang phagocyte ay binibilang sa ilalim ng mikroskopyo. Enjoy din opsonophagocytic index na kumakatawan sa ratio ng mga phagocytic parameter na nakuha sa immune at non-immune serum. Ang phagocytic index at ang opsonophagocytic index ay ginagamit sa clinical immunology upang masuri ang estado ng immunity at immune status.

Ang phagocytosis ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa antibacterial, antifungal at antiviral na proteksyon, na pinapanatili ang paglaban ng katawan sa mga dayuhang sangkap. Ang mga phagocytes ay mayroon ding isang pag-activate at suppressive na epekto sa mga lymphocytes, nakikibahagi sa resuscitation ng immunological tolerance, anti-infective, transplantation at antitumor immunity, at ilang uri ng allergy (HRT).

Ang proseso ng phagocytosis (pagsipsip ng solid phase object) ay binubuo ng limang yugto.

• 1. Pag-activate (nadagdagang metabolismo ng enerhiya). Ang activation at chemotaxis factor ay bacterial products (LPS, peptides), complement components (C3 at C5), cytokines at antibodies.
• 2. Chemotaxis.
• 3. Pagdirikit.
• 4. Pagsipsip.
• 5. Kinalabasan ng phagocytosis.

Ang pagdirikit ay nauugnay sa pagkakaroon ng isang bilang ng mga receptor sa ibabaw ng mga phagocytes (sa mga fragment ng Fc ng mga antibodies, mga bahagi ng pandagdag, fibronectin), na tinitiyak ang lakas ng mga interaksyon ng receptor-mediated ng mga opsonins na bumabalot sa mga microorganism at nililimitahan ang kanilang kadaliang kumilos (antibodies, C3b, fibronectin).

Ang mga phagocyte ay nagtataglay ng mala-amoeba na pseudopodia. Sa pagsipsip, ang isang phagosome ay nabuo kasama ang hinihigop na bagay (bacterium), isang lysosome na naglalaman ng mga lytic enzymes ay sumali at sumasama dito, at isang phagolysosome ay nabuo.

May tatlong posibleng resulta ng phagocytosis:

• - kumpletong phagocytosis;
• - hindi kumpletong phagocytosis;
• - pagproseso ng mga antigens.

Ang kumpletong phagocytosis ay ang kumpletong pagtunaw ng mga microorganism sa isang phagocytic cell.

Sa proseso ng phagocytosis, ang isang "oxidative explosion" ay nangyayari sa pagbuo ng reactive oxygen species, na nagbibigay ng bactericidal effect.

Ang isa sa mga pinakamahalagang pag-andar ng macrophage (kasama ang chemotaxis, phagocytosis, pagtatago ng mga biologically active substance) ay ang pagproseso (pagproseso) ng antigen at ang pagtatanghal nito sa mga immunocompetent na mga cell na may partisipasyon ng mga protina ng pangunahing histocompatibility system (MHC) na klase. 2.

Ang phagocytosis ay hindi lamang ang pagkasira ng dayuhan, kundi pati na rin ang pagtatanghal ng isang antigen upang ma-trigger ang mga reaksyon ng immune at ang pagtatago ng mga tagapamagitan ng mga immune at nagpapasiklab na reaksyon. Ang macrophage system ay ang gitnang link hindi lamang sa natural na paglaban (species immunity), ngunit gumaganap din ng isang mahalagang papel sa nakuha na kaligtasan sa sakit, pakikipagtulungan ng cell sa immune response.

Ang pamamaga bilang isang proteksiyon na reaksyon ng katawan sa iba't ibang pinsala sa tisyu ay lumitaw sa isang mas mataas na yugto ng ebolusyon kaysa sa phagocytosis at katangian ng lubos na organisadong mga organismo na may mga sistema ng sirkulasyon at nerbiyos.

Ang nakakahawang pamamaga ay sinamahan ng iba't ibang mga reaksyon ng vascular at cellular (kabilang ang phagocytosis), pati na rin ang paglulunsad ng isang bilang ng mga tagapamagitan ng mga nagpapasiklab na reaksyon (histamine, serotonin, kinins, protina ng talamak na yugto ng pamamaga, leukotrienes at prostaglandin, cytokines, pandagdag. sistema).

Maraming mga produktong bacterial ang nagpapagana sa mga selula ng macrophage-monocyte system at mga lymphocytes, na tumutugon sa kanila sa pamamagitan ng pagpapalabas ng mga biologically active na produkto - mga cytokine, sa partikular na mga interleukin. Maaari silang makilala bilang mga tagapamagitan ng mga tugon sa immune ng cellular. Ang Interleukin-1 (IL-1), na nagpapasigla sa lagnat, nagpapataas ng vascular permeability at malagkit na katangian ng endothelium, at nagpapagana ng mga phagocytes, ay gumaganap ng pangunahing papel sa mga nagpapasiklab na reaksyon.

Lagnat. Ang pagtaas sa temperatura ng katawan ay isang proteksiyon na reaksyon ng katawan na nagpapalala sa mga kondisyon para sa pagpaparami ng maraming microorganism, pinapagana ang mga macrophage, pinabilis ang daloy ng dugo at pinahuhusay ang mga proseso ng metabolic sa katawan.

Barrier function ng mga lymph node. Ayon kay P.F. Zdrodovsky (1969), ang mga lymph node ay isang uri ng biological filter para sa mga pathogens na dala ng lymph. Dito, ang mga mikroorganismo na tumagos sa balat o mucous membrane at dinadala ng lymph current ay pinanatili at nakalantad sa pagkilos ng macrophage at activated lymphocytes.

Ang sistema ng pandagdag ay isang kumplikadong mga protina at glycoproteins sa serum ng dugo ng mga tao at vertebrates (mayroong higit sa 20 sa kanila). Ang mga indibidwal na sangkap ay namamagitan sa mga proseso ng pamamaga, opsonization ng mga dayuhang fragment para sa kasunod na phagocytosis, lumahok, kasama ang mga macrophage, sa direktang pagkasira ng mga microorganism at iba pang mga dayuhang selula (lysis ng bakterya at mga virus). Sa ilalim ng mga kondisyong pisyolohikal, ang mga bahagi ng sistemang pandagdag ay nasa isang hindi aktibong anyo. Mayroong tatlong paraan ng pag-activate ng complement system - klasikal, alternatibo at paggamit ng C1 shunt.

Ang klasikal na landas - isang kaskad ng mga reaksyon ng protease mula sa sangkap na C1q hanggang C9 - ay natanto sa pagkakaroon ng mga antibodies sa kaukulang antigen. Ang C1q component ay nakikipag-ugnayan sa "antigen-antibody" complex, pagkatapos ay C4, na sinusundan ng C2. Ang isang "antigen-antibody-C1C4C2" complex ay nabuo, ang C3 (ang sentral na bahagi ng system) ay konektado dito, at isang activation chain na may effector function (opsonization at lysis ng bakterya, activation ng macrophage system, pamamaga) ay inilunsad. .

Ang isang alternatibong landas ay natanto sa panahon ng unang pakikipag-ugnay sa pathogen (kapag wala pang mga antibodies). Ito ay sapilitan ng LPS at iba pang microbial antigens. Ang C1, C4, C2 ay hindi kasangkot, ang alternatibo at klasikal na mga landas ay pinagsama sa antas ng C3.

sistema ng interferon.

Ang mga interferon ay mga glycoprotein na na-synthesize ng iba't ibang mga selula ng katawan na may malawak na hanay ng biological na aktibidad (pangunahin ang antiviral), isang mabilis na tugon ng katawan sa mga selula na tumatanggap ng isang hindi tiyak na signal ng dayuhan. Mayroong isang buong sistema ng mga interferon, na nahahati sa alpha, beta at gamma subtypes na may binibigkas na heterogeneity ng mga katangian. Ang antiviral effect ay ipinahayag sa kakayahang sugpuin ang intracellular reproduction ng DNA at RNA virus (pangunahin bilang resulta ng pagharang sa synthesis ng viral macromolecules). Ang induction ng interferon synthesis ay sanhi ng mga virus, bacteria, rickettsiae, protozoa, synthetic compounds.

mga killer cells.

Sa pagtiyak ng kaligtasan sa mga species, isang mahalagang papel ang nabibilang sa T-cytotoxic lymphocytes (T-killers), pati na rin ang pangunahing histocompatibility system (higit pang mga detalye sa mga sumusunod na lektura).

Ang mga T-killer, sa pamamagitan ng pagpapakita ng mga antigen ng pangunahing histocompatibility class 1 system, kinikilala ang anumang mga dayuhang antigen (kabilang ang mga mutant, halimbawa, mga selula ng kanser), inaatake at sirain ang mga ito.

Ang mga cell ng NK (natural killer) ay mahalaga sa pagpapanatili ng genetic homeostasis at proteksyon ng antitumor, ang kanilang mga function ng pagkilala ay hindi nakasalalay sa pagtatanghal ng class 1 MHC (major histocompatibility complex) antigens.

Ang mga sistema ng nonspecific resistance at species immunity ay nag-aambag sa pagpapanatili ng structural at functional na integridad ng katawan at ang batayan para sa pagbuo ng nakuha (specific) immunity. Docking sa mas mataas na antas na ito, ang mga sistema ng tiyak at nakuha na kaligtasan sa sakit ay bumubuo ng isang solong at pinaka-epektibong sistema ng pagtatanggol sa sarili ng katawan mula sa lahat ng dayuhan.

Ang immune system.

Ang immune system ay isang hanay ng mga organ, tissue at cell na nagsisiguro sa cellular at genetic constancy ng katawan. Ang mga prinsipyo ng antigenic (genetic) na kadalisayan ay nakabatay sa pagkilala sa "sariling dayuhan" at higit na tinutukoy ng sistema ng mga gene at glycoproteins (mga produkto ng ekspresyon ng mga ito) - ang pangunahing histocompatibility complex (MHC), na kadalasang tinatawag na HLA (tao). leucocyte antigens) system sa mga tao. Ang mga protina ng MHC ay malinaw na ipinahayag sa mga leukocytes ng tao, ang mga antigen ng MHC ay nai-type gamit ang pag-aaral ng mga leukocytes.

mga organo ng immune system.

Mayroong gitnang (bone marrow - isang hematopoietic organ, thymus o thymus, lymphoid tissue ng bituka) at peripheral (spleen, lymph nodes, mga akumulasyon ng lymphoid tissue sa sarili nitong layer ng mauhog lamad ng uri ng bituka) na mga organo ng kaligtasan sa sakit.

Ang mga progenitor cells ng immunocompetent cells ay ginawa ng bone marrow. Ang ilang inapo ng mga stem cell ay nagiging mga lymphocyte. Ang mga lymphocytes ay nahahati sa dalawang klase - T at B. Ang mga precursor ng T-lymphocytes ay lumilipat sa thymus, kung saan sila ay nagiging mga selula na maaaring lumahok sa immune response. Sa mga tao, ang B-lymphocytes ay mature sa bone marrow. Sa mga ibon, lumilipat ang mga immature na B cells sa bursa ng Fabricius kung saan umabot sila sa maturity. Ang mga mature na B at T lymphocyte ay nagko-colonize sa mga peripheral lymph node. Kaya, ang mga sentral na organo ng immune system ay nagsasagawa ng pagbuo at pagkahinog ng mga immunocompetent na mga cell, ang mga peripheral na organo ay nagbibigay ng sapat na immune response sa antigenic stimulation - antigen "processing", ang pagkilala nito at clonal proliferation ng lymphocytes - antigen-dependent differentiation.