nuôi cấy tế bào

Loài vật

Chỉ ra virus bằng các hiện tượng sau

chậm phát triển,

chết, thay đổi

vỏ phôi, RGA

CPP, hình thành mảng bám, RIF, RGads, nhiễu

bệnh tật, cái chết,

thay đổi mô học

trong mô, thể vùi

Chuẩn độ virus phân lập được; lựa chọn liều lượng làm việc.

hiệu giá virus- độ pha loãng tối đa của vật liệu chứa vi-rút, trong đó tác động dự kiến ​​vẫn được quan sát thấy (CPE, RHA, cái chết của động vật).

Xác định virus phân lập trong các phản ứng trung hòa, RTGads, RSK, ngăn chặn sự hình thành mảng bám, v.v. với huyết thanh chẩn đoán. Loại (loại) vi-rútđược xác định bởi sự vô hiệu hóa tác dụng đặc hiệu của virus bằng huyết thanh miễn dịch tương ứng.

Lưu ý: chuẩn độ và xác định virus được thực hiện bằng cách sử dụng cùng một hiện tượng.

nuôi cấy virus

Phương pháp nghiên cứu virus học- các phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học của virus và nhận dạng chúng. Trong virus học, các phương pháp sinh học phân tử được sử dụng rộng rãi, nhờ đó có thể thiết lập cấu trúc phân tử của các hạt virus, cách chúng xâm nhập vào tế bào và các đặc điểm sinh sản của virus, cấu trúc chính của axit nucleic của virus. và protein. Các phương pháp xác định trình tự các yếu tố cấu thành axit nucleic của virus và axit amin của protein đang được phát triển. Có thể liên kết các chức năng của axit nucleic và protein do chúng mã hóa với trình tự nucleotide và xác định nguyên nhân của các quá trình nội bào đóng vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh của nhiễm virus.

Các phương pháp nghiên cứu virus học cũng dựa trên các quá trình miễn dịch (tương tác giữa kháng nguyên với kháng thể), đặc tính sinh học của virus (khả năng ngưng kết hồng cầu, tán huyết, hoạt tính enzym), đặc điểm tương tác của virus với tế bào chủ (bản chất của tế bào học). ảnh hưởng, sự hình thành các thể vùi nội bào, v.v.).

Trong chẩn đoán nhiễm virut, trong nuôi cấy, phân lập và xác định virut, cũng như trong điều chế các chế phẩm vắc xin, phương pháp nuôi cấy mô và tế bào được sử dụng rộng rãi. Nuôi cấy tế bào sơ cấp, thứ cấp, liên tục ổn định và lưỡng bội được sử dụng. Nuôi cấy sơ cấp thu được bằng cách phân tán mô bằng các enzym phân giải protein (trypsin, collagenase). Nguồn tế bào có thể là các mô và cơ quan (thường là thận) của phôi người và động vật. Một huyền phù tế bào trong môi trường dinh dưỡng được đặt trong cái gọi là nệm, chai hoặc đĩa Petri, sau khi gắn vào bề mặt của bình, các tế bào bắt đầu nhân lên. Đối với nhiễm vi-rút, lớp đơn lớp tế bào thường được sử dụng. Chất lỏng dinh dưỡng được rút cạn, huyền phù virus được đưa vào ở một số độ pha loãng nhất định và sau khi tiếp xúc với các tế bào, môi trường dinh dưỡng tươi được thêm vào, thường không có huyết thanh.

Các tế bào từ hầu hết các nền văn hóa sơ cấp có thể được cấy chuyền và được gọi là các nền văn hóa thứ cấp. Khi các tế bào tiếp tục di chuyển, một quần thể tế bào giống như nguyên bào sợi được hình thành, có khả năng sinh sản nhanh chóng, hầu hết chúng đều giữ nguyên bộ nhiễm sắc thể ban đầu. Đây là những cái gọi là tế bào lưỡng bội. Trong nuôi cấy tế bào nối tiếp, thu được nuôi cấy tế bào liên tục ổn định. Trong quá trình di truyền, các tế bào đồng nhất phân chia nhanh chóng với bộ nhiễm sắc thể dị bội xuất hiện. Các dòng tế bào ổn định có thể là lớp đơn và huyền phù. Nuôi cấy đơn lớp phát triển dưới dạng một lớp liên tục trên bề mặt kính, nuôi cấy huyền phù phát triển dưới dạng huyền phù trong các bình khác nhau bằng cách sử dụng máy khuấy. Có hơn 400 dòng tế bào có nguồn gốc từ 40 loài động vật khác nhau (bao gồm linh trưởng, chim, bò sát, lưỡng cư, cá, côn trùng) và con người.

Các mảnh của các cơ quan và mô riêng lẻ (nuôi cấy cơ quan) có thể được nuôi cấy trong môi trường dinh dưỡng nhân tạo. Các loại nuôi cấy này bảo tồn cấu trúc mô, điều này đặc biệt quan trọng đối với việc phân lập và lây truyền vi rút không sinh sản trong nuôi cấy mô không phân biệt (ví dụ: coronavirus).

Trong môi trường nuôi cấy tế bào bị nhiễm bệnh, virus có thể được phát hiện bằng sự thay đổi hình thái tế bào, hoạt động tế bào học, có thể là đặc hiệu, sự xuất hiện của các thể vùi, bằng cách xác định kháng nguyên virus trong tế bào và trong dịch nuôi cấy; xác định đặc tính sinh học của thế hệ con cháu virus trong dịch nuôi cấy và chuẩn độ virus trong nuôi cấy mô, phôi gà hoặc động vật nhạy cảm; bằng cách phát hiện các axit nucleic riêng lẻ của virus trong tế bào bằng lai phân tử hoặc các cụm axit nucleic bằng phương pháp hóa tế bào sử dụng kính hiển vi huỳnh quang.

Phân lập virus là một quá trình tốn nhiều công sức và lâu dài. Nó được thực hiện để xác định loại hoặc biến thể của vi-rút lưu hành trong quần thể (ví dụ: để xác định biến thể huyết thanh của vi-rút cúm, chủng vi-rút dại hoặc vắc-xin của vi-rút bại liệt, v.v.); trong trường hợp cần tiến hành các biện pháp dịch tễ khẩn cấp; khi các loại hoặc biến thể mới của vi rút xuất hiện; nếu cần, xác nhận chẩn đoán sơ bộ; để chỉ thị virus trong các đối tượng môi trường. Khi phân lập vi-rút, khả năng tồn tại của chúng trong cơ thể người, cũng như sự xuất hiện của nhiễm trùng hỗn hợp do hai hoặc nhiều vi-rút gây ra, sẽ được tính đến. Một quần thể vi-rút đồng nhất về mặt di truyền thu được từ một virion duy nhất được gọi là bản sao vi-rút và quá trình thu được nó được gọi là nhân bản.

Phôi gà được sử dụng để phân lập virus, lây nhiễm cho động vật thí nghiệm nhạy cảm, nhưng nuôi cấy mô thường được sử dụng nhất. Sự hiện diện của vi-rút thường được xác định bằng sự thoái hóa của tế bào cụ thể (hiệu ứng tế bào học), sự hình thành các hợp chất và hợp bào, phát hiện các thể vùi nội bào, cũng như một kháng nguyên cụ thể được phát hiện bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang, hấp phụ máu, ngưng kết hồng cầu (ở vi rút ngưng kết hồng cầu), v.v. . Những dấu hiệu này chỉ có thể được phát hiện sau 2-3 lần lây nhiễm vi rút.

Để phân lập một số loại vi-rút, chẳng hạn như vi-rút cúm, phôi gà được sử dụng, để phân lập một số vi-rút Coxsackie và một số arbovirus, chuột sơ sinh được sử dụng. Việc xác định các virus bị cô lập được thực hiện bằng các xét nghiệm huyết thanh học và các phương pháp khác.

Khi làm việc với virus, hiệu giá của chúng được xác định. Chuẩn độ virus thường được thực hiện trong nuôi cấy mô, xác định độ pha loãng cao nhất của chất lỏng chứa virus, tại đó quá trình thoái hóa mô diễn ra, thể vùi và kháng nguyên đặc hiệu của virus được hình thành. Phương pháp mảng bám có thể được sử dụng để chuẩn độ một số loại virus. Mảng, hoặc khuẩn lạc âm tính của vi rút, là ổ chứa các tế bào bị vi rút phá hủy của môi trường nuôi cấy mô một lớp dưới lớp phủ thạch. Đếm khuẩn lạc cho phép phân tích định lượng hoạt động truyền nhiễm của vi-rút trên cơ sở một hạt vi-rút truyền nhiễm tạo thành một mảng bám. Các mảng được xác định bằng cách nhuộm nuôi cấy bằng thuốc nhuộm quan trọng, thường là màu đỏ trung tính; các mảng không hấp thụ thuốc nhuộm và do đó có thể nhìn thấy dưới dạng các đốm sáng trên nền của các tế bào sống được nhuộm màu. Hiệu giá của virus được biểu thị bằng số lượng đơn vị hình thành mảng bám trong 1 ml.

Quá trình tinh chế và cô đặc virus thường được thực hiện bằng siêu ly tâm vi sai, sau đó là ly tâm ở gradient nồng độ hoặc mật độ. Để làm sạch virus, người ta sử dụng các phương pháp miễn dịch, sắc ký trao đổi ion, chất hấp thụ miễn dịch, v.v.

Chẩn đoán nhiễm vi-rút trong phòng thí nghiệm bao gồm việc phát hiện mầm bệnh hoặc các thành phần của mầm bệnh trong vật liệu lâm sàng; phân lập virus từ vật liệu này; chẩn đoán huyết thanh học. Việc lựa chọn phương pháp chẩn đoán trong phòng thí nghiệm trong từng trường hợp cụ thể phụ thuộc vào bản chất của bệnh, thời kỳ của bệnh và khả năng của phòng thí nghiệm. Chẩn đoán hiện đại về nhiễm vi-rút dựa trên các phương pháp rõ ràng cho phép thu được phản ứng vài giờ sau khi lấy vật liệu lâm sàng ở giai đoạn đầu sau khi mắc bệnh.Chúng bao gồm kính hiển vi điện tử và điện tử miễn dịch, cũng như miễn dịch huỳnh quang, phương pháp lai phân tử, phương pháp phát hiện các kháng thể của lớp lgM, v.v.

Kính hiển vi điện tử của vi rút nhuộm màu âm tính cho phép phân biệt vi rút và xác định nồng độ của chúng. Việc sử dụng kính hiển vi điện tử trong chẩn đoán nhiễm vi-rút chỉ giới hạn ở những trường hợp nồng độ các hạt vi-rút trong vật liệu lâm sàng đủ cao (10 5 trong 1 ml và cao hơn). Nhược điểm của phương pháp này là không có khả năng phân biệt giữa các loại virus thuộc cùng một nhóm phân loại. Nhược điểm này được loại bỏ bằng cách sử dụng kính hiển vi điện tử miễn dịch. Phương pháp này dựa trên sự hình thành các phức hợp miễn dịch khi huyết thanh cụ thể được thêm vào các hạt vi-rút, trong khi nồng độ đồng thời của các hạt vi-rút xảy ra, giúp xác định chúng. Phương pháp này cũng được sử dụng để phát hiện kháng thể. Với mục đích chẩn đoán rõ ràng, một cuộc kiểm tra bằng kính hiển vi điện tử về chiết xuất mô, phân, chất lỏng từ túi và dịch tiết từ vòm họng được thực hiện. Kính hiển vi điện tử được sử dụng rộng rãi để nghiên cứu sự phát sinh hình thái của virus; khả năng của nó được mở rộng với việc sử dụng các kháng thể được đánh dấu.

Phương pháp lai phân tử, dựa trên việc phát hiện các axit nucleic đặc hiệu của virus, cho phép phát hiện các bản sao đơn lẻ của gen và không có độ nhạy bằng. Phản ứng dựa trên sự lai tạo của các chuỗi bổ sung của DNA hoặc RNA (mẫu dò) và sự hình thành các cấu trúc chuỗi kép. Mẫu dò rẻ nhất là DNA tái tổ hợp nhân bản. Đầu dò được dán nhãn tiền chất phóng xạ (thường là phốt pho phóng xạ). Việc sử dụng các phản ứng so màu là đầy hứa hẹn. Có một số biến thể của phép lai phân tử: phép lai điểm, phép lai blot, phép lai sandwich, phép lai tại chỗ, v.v.

Kháng thể lớp lgM xuất hiện sớm hơn kháng thể lớp G (vào ngày thứ 3-5 của bệnh) và biến mất sau vài tuần, vì vậy việc phát hiện chúng cho thấy một bệnh nhiễm trùng gần đây. Các kháng thể của lớp IgM được phát hiện bằng xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang hoặc miễn dịch enzyme sử dụng kháng huyết thanh kháng m (huyết thanh chuỗi nặng kháng IgM).

Các phương pháp huyết thanh học trong virus học dựa trên các phản ứng miễn dịch cổ điển (xem. Phương pháp nghiên cứu miễn dịch ): phản ứng cố định bổ thể, ức chế ngưng kết hồng cầu, trung hòa sinh học, khuếch tán miễn dịch, ngưng kết hồng cầu gián tiếp, tán huyết xuyên tâm, miễn dịch huỳnh quang, xét nghiệm miễn dịch enzym, xét nghiệm miễn dịch phóng xạ. Các phương pháp vi mô cho nhiều phản ứng đã được phát triển và các kỹ thuật của chúng đang được cải tiến liên tục. Các phương pháp này được sử dụng để xác định vi-rút bằng cách sử dụng một bộ huyết thanh đã biết và để chẩn đoán huyết thanh nhằm xác định sự gia tăng kháng thể trong huyết thanh thứ hai so với huyết thanh thứ nhất (huyết thanh thứ nhất được lấy trong những ngày đầu tiên sau khi mắc bệnh, huyết thanh thứ hai - sau 2 đến 3 tuần). Giá trị chẩn đoán không dưới mức tăng gấp bốn lần kháng thể trong huyết thanh thứ hai. Nếu việc phát hiện các kháng thể của lớp lgM cho thấy một lần nhiễm trùng gần đây, thì các kháng thể của lớp lgC sẽ tồn tại trong vài năm và đôi khi là suốt đời.

Để xác định các kháng nguyên riêng lẻ của vi-rút và kháng thể đối với chúng trong các hỗn hợp phức tạp mà không cần tinh chế protein trước, phương pháp tạo miễn dịch được sử dụng. Phương pháp này kết hợp quá trình phân đoạn protein bằng cách sử dụng điện di trên gel polyacrylamide với xét nghiệm miễn dịch protein sau đó bằng xét nghiệm miễn dịch enzyme. Việc tách protein làm giảm các yêu cầu về độ tinh khiết hóa học của kháng nguyên và giúp xác định các cặp kháng nguyên-kháng thể riêng lẻ. Nhiệm vụ này có liên quan, ví dụ, trong chẩn đoán huyết thanh nhiễm HIV, trong đó các phản ứng xét nghiệm miễn dịch enzyme dương tính giả là do sự hiện diện của kháng thể đối với các kháng nguyên tế bào, xuất hiện do không đủ độ tinh khiết của protein virus. Việc xác định các kháng thể trong huyết thanh của bệnh nhân đối với các kháng nguyên virut bên trong và bên ngoài giúp xác định giai đoạn của bệnh và trong phân tích quần thể, sự biến đổi của protein virut trong phân tích quần thể. Phương pháp tạo miễn dịch trong nhiễm HIV được sử dụng như một xét nghiệm xác nhận để phát hiện các kháng nguyên và kháng thể của từng virus đối với chúng. Khi phân tích quần thể, phương pháp này được sử dụng để xác định tính biến đổi của protein virus. Giá trị tuyệt vời của phương pháp nằm ở khả năng phân tích các kháng nguyên được tổng hợp bằng công nghệ DNA tái tổ hợp, xác định kích thước của chúng và sự hiện diện của các yếu tố quyết định kháng nguyên.

Chẩn đoán căn nguyên của các bệnh do virus được thực hiện bằng các phương pháp di truyền virus học, virus học, huyết thanh học và phân tử. Ba phương pháp cuối cùng có thể được sử dụng làm phương pháp chẩn đoán nhanh.

Phương pháp chẩn đoán virus học.

Mục tiêu cuối cùng của phương pháp là xác định virus cho một loài hoặc biến thể huyết thanh học. Phương pháp virus học bao gồm một số giai đoạn:

1) lựa chọn tài liệu cho nghiên cứu;

2) xử lý vật liệu chứa vi-rút;

3) ô nhiễm các hệ thống sống nhạy cảm với vật chất;

4) dấu hiệu của virus trong hệ thống sống;

5) chuẩn độ virus được phân lập;

6) xác định virus trong các phản ứng miễn dịch.

1. Lựa chọn tài liệu nghiên cứu .

Nó được thực hiện trong giai đoạn đầu của bệnh, tuân theo các quy tắc ngăn ngừa ô nhiễm vật liệu với hệ vi sinh vật lạ và lây nhiễm cho nhân viên y tế. Để ngăn vi rút bất hoạt trong quá trình vận chuyển, vật liệu được đặt trong môi trường vận chuyển vi rút (VTS) bao gồm dung dịch muối cân bằng, kháng sinh và albumin huyết thanh. Vật liệu được vận chuyển trong một thùng chứa đặc biệt có cách nhiệt và đóng túi nhựa có chứa nước đá. Nếu cần, vật liệu được bảo quản ở -20˚C. Mỗi mẫu vật liệu cho nghiên cứu phải được dán nhãn và ghi rõ tên bệnh nhân, loại vật liệu, ngày lấy mẫu, chẩn đoán lâm sàng chi tiết và các thông tin khác.

Tùy thuộc vào bản chất của bệnh, tài liệu cho nghiên cứu có thể là:

1) tăm bông từ phần mũi của hầu họng và tăm bông từ hầu họng;

2) dịch não tủy;

3) phân và gạc trực tràng;

6) chất lỏng từ khoang huyết thanh;

7) phết từ kết mạc;

8) nội dung của túi;

8) vật liệu mặt cắt.

Để có được sự tuôn ra từ hầu họng, 15-20 ml VTS được sử dụng. Bệnh nhân súc rửa cẩn thận cổ họng VTS trong 1 phút và thu dịch rửa vào lọ vô trùng.

Một vết bẩn từ phía sau hầu họng được lấy bằng tăm bông vô trùng, dùng thìa ấn vào gốc lưỡi. Gạc được đặt trong 2-3 ml VTS, rửa sạch và vắt.

Dịch não tủy được lấy bằng cách chọc dò tủy sống. 1-2 ml dịch não tủy được đặt trong hộp vô trùng và chuyển đến phòng thí nghiệm.

Mẫu phân được lấy trong vòng 2-3 ngày trong lọ vô trùng. Một huyền phù 10% được điều chế từ vật liệu thu được bằng dung dịch của Hank. Huyền phù được ly tâm ở tốc độ 3000 vòng / phút, phần nổi phía trên được thu thập, thêm kháng sinh vào đó và đặt vào đĩa vô trùng.

Máu thu được bằng cách lấy máu tĩnh mạch với thể tích 5-10 ml được khử rung bằng cách thêm heparin. Máu toàn phần không đông lạnh và không thêm kháng sinh. Để thu được huyết thanh, các mẫu máu được ủ ở 37°C trong 60 phút.

Chất lỏng từ các khoang huyết thanh thu được bằng cách chọc thủng với lượng 1-2 ml. Chất lỏng được sử dụng ngay lập tức hoặc giữ đông lạnh.

Một vết bẩn từ kết mạc được lấy bằng tăm bông vô trùng và đặt vào VTS, sau đó vật liệu được ly tâm và đông lạnh.

Nội dung của các túi được hút bằng một ống tiêm có kim nhỏ và đặt vào VTS. Vật liệu được gửi đến phòng thí nghiệm ở dạng phết khô trên phiến kính hoặc trong ống mao dẫn hoặc ống vô trùng kín.

Vật liệu cắt được lấy càng sớm càng tốt, tuân thủ các quy tắc vô trùng. Các bộ dụng cụ vô trùng riêng biệt được sử dụng để lấy từng mẫu. Lượng mô được chọn là 1-3 g, được đặt trong lọ vô trùng. Đầu tiên, các mẫu của cơ quan ngoại bào (não, hạch bạch huyết, v.v.) được lấy. Các mô của khoang ngực được lấy trước khi mở khoang bụng. Các mẫu mô thu được được nghiền trong cối có thêm cát vô trùng và dung dịch natri clorua vô trùng, sau đó vật liệu được ly tâm. Chất nổi trên bề mặt được thu thập trong lọ, thuốc kháng sinh được thêm vào. Nguyên liệu nghiên cứu virus học được sử dụng ngay hoặc bảo quản ở -20°C.

2. Xử lý vật liệu chứa vi-rút.

Nó được thực hiện để giải phóng vật liệu khỏi hệ vi khuẩn đi kèm. Đối với điều này, các phương pháp vật lý và hóa học được sử dụng.

Phương pháp vật lý:

1) lọc qua các bộ lọc vi khuẩn khác nhau;

2) ly tâm.

Phương pháp hóa học:

1) xử lý vật liệu bằng ether trong trường hợp phân lập vi rút không có siêu capsid;

2) thêm hỗn hợp heptan và freon vào vật liệu;

3) sự ra đời của thuốc kháng sinh (penicillin - 200-300 U / ml; streptomycin - 200-500 g / ml; nystatin - 100-1000 U / ml).

3. Lây nhiễm các hệ thống sống nhạy cảm với vật chất.

1) động vật thí nghiệm;

2) phôi gà;

3) nuôi cấy nội tạng;

4) nuôi cấy mô.

động vật thí nghiệm. Sử dụng chuột bạch, chuột lang, chuột đồng, thỏ, v.v... Chuột bạch nhạy cảm nhất với một số lượng lớn các loại vi rút. Phương thức lây nhiễm của động vật được xác định bởi tính hướng của virus đối với các mô. Nhiễm trùng trong não được sử dụng trong phân lập virus hướng thần kinh (virus bệnh dại, virus bại liệt, v.v.). Nhiễm trùng mũi được thực hiện khi mầm bệnh nhiễm trùng đường hô hấp được phân lập. Sử dụng rộng rãi các phương pháp tiêm bắp, tiêm tĩnh mạch, trong màng bụng, dưới da và các phương pháp lây nhiễm khác. Động vật bị bệnh được tiêu hủy bằng ether, mở ra và vật chất được lấy từ các cơ quan và mô.

phôi gà. Có sẵn rộng rãi và dễ sử dụng. Bón phôi gà từ 5 đến 14 ngày tuổi. Trước khi lây nhiễm, phôi gà được nội soi: khả năng sống sót của chúng được xác định, đường viền của túi khí và vị trí của phôi ("mắt đen" của phôi) được đánh dấu trên vỏ. Công việc với phôi gà được thực hiện trong hộp vô trùng với các dụng cụ vô trùng (nhíp, ống tiêm, kéo, giáo, v.v.). Sau khi hoàn thành một phần của tác phẩm, các dụng cụ được ngâm trong cồn etylic 70% và đốt cháy trước khi thao tác tiếp theo. Trước khi lây nhiễm, vỏ phôi gà được lau bằng tăm bông đang cháy và dung dịch cồn iốt. Thể tích vật liệu thử được tiêm vào phôi là 0,1-0,2 ml. Ít nhất 4 phôi gà được sử dụng để phân lập virus từ một vật liệu.

Các nghiên cứu về virus học là các nghiên cứu được thiết kế để phân lập virus và nghiên cứu các đặc tính của chúng, cũng như thiết lập mối quan hệ căn nguyên của virus với một số bệnh.

Vật liệu cho nghiên cứu được lấy tùy thuộc vào vị trí của các loại virus chiếm ưu thế trong cơ thể bệnh nhân và cách chúng được giải phóng ra môi trường bên ngoài. Vật liệu được thu thập trong một đĩa vô trùng, được chuyển đến phòng thí nghiệm càng nhanh càng tốt và được bảo quản cho đến khi nghiên cứu được đông lạnh hoặc trên băng. Trước khi sử dụng, vật liệu phân lập vi rút được xử lý (và) để ngăn chặn hệ vi sinh vật lạ và được loại bỏ các hạt lớn.

Việc phân lập virus được thực hiện bằng cách gây nhiễm cho động vật thí nghiệm, phôi gà, nuôi cấy mô với vật liệu chứa virus. Việc lựa chọn phương pháp phân lập phụ thuộc vào tác nhân gây bệnh được cho là. Vì vậy, nuôi cấy mô (xem) được sử dụng khi làm việc với vi rút không gây bệnh cho động vật thí nghiệm hoặc khi chúng được phát hiện trong nuôi cấy mô sớm hơn so với khi động vật bị nhiễm bệnh. Phôi gà được gây nhiễm để phân lập mầm bệnh, viêm tuyến mang tai truyền nhiễm (vào khoang màng ối và allantoic), (vào túi noãn hoàng), đậu mùa (vào màng đệm).

Trong số động vật thí nghiệm, chuột bạch thường được dùng để phân lập vi rút nhất, sau đó là thỏ, chuột cống, chuột lang và khỉ. Đối với arbovirus, việc đưa vật liệu chứa vi rút vào đầu hiệu quả nhất hoặc đối với vi rút khí hư - trên màng nhầy của đường hô hấp, đối với vi rút đậu mùa - trên giác mạc bị sẹo.

Phân lập virus có hiệu quả nhất trong giai đoạn cấp tính của bệnh. Một điểm thiết yếu trong việc thiết lập bản chất virus của bệnh là kết quả của các nghiên cứu huyết thanh học về huyết thanh được lấy lặp đi lặp lại từ cùng một bệnh nhân khi bắt đầu bệnh và trong thời gian hồi phục. Việc phát hiện kháng thể đối với vi rút đã phân lập trong huyết thanh thứ hai với hiệu giá gấp 4 lần trở lên so với huyết thanh thứ nhất cho thấy mối quan hệ căn nguyên của vi rút với bệnh này.

Một phương pháp sớm và nhanh chóng để phát hiện các kháng nguyên vi-rút là phương pháp kháng thể huỳnh quang, dựa trên sự cố định cụ thể của các kháng thể đánh dấu bằng chất huỳnh quang trên bề mặt kháng nguyên. Kháng nguyên dễ dàng được tiết lộ dưới kính hiển vi phát quang (xem) nhờ sự phát huỳnh quang sáng của các kháng thể được hấp phụ trên kháng nguyên. Sử dụng phương pháp kháng thể huỳnh quang, các phết lấy từ bệnh nhân, các phần mô học của các mô bị ảnh hưởng, các chế phẩm từ nuôi cấy mô được kiểm tra. Cũng áp dụng để phát hiện các thể cơ bản (virion) (xem). Trong số các phương pháp hình thái học khác, những phương pháp phát hiện thể vùi virus nội bào trong các phần của cơ quan và mô bị ảnh hưởng được sử dụng. Việc phát hiện các thể vùi cho thấy sự nhiễm trùng và trong một số trường hợp góp phần chẩn đoán bệnh do virus. Có nhiều phương pháp được sử dụng để phát hiện kháng thể virus trong máu bệnh nhân và nghiên cứu cấu trúc kháng nguyên của virus. Phản ứng trung hòa được sử dụng trong hầu hết các trường hợp nhiễm virus. Nó dựa trên khả năng của các kháng thể miễn dịch vô hiệu hóa các đặc tính lây nhiễm của virus khi hỗn hợp này được đưa vào cơ thể của động vật mẫn cảm hoặc vào nuôi cấy mô. Để xác định chỉ số trung hòa, một liều huyết thanh không đổi được trộn với các độ pha loãng khác nhau của vi rút và để xác định hiệu giá kháng thể, các pha loãng huyết thanh khác nhau với một liều vi rút không đổi. Biện pháp kiểm soát là lây nhiễm cho động vật (hoặc nuôi cấy mô) bằng hỗn hợp vi-rút với huyết thanh hoặc nước muối thông thường. Phản ứng trung hòa được thiết lập không chỉ để phát hiện kháng thể mà còn để xác định loại và loại vi rút.

Phản ứng cố định bổ thể [ví dụ, phản ứng Borde - Zhangu (xem)] được sử dụng để phát hiện cả kháng nguyên và kháng thể của virus. Trong trường hợp đầu tiên, huyết thanh miễn dịch đã biết tương tác với vật liệu giả định có sự hiện diện của các kháng nguyên: huyết thanh máu, gạc mũi họng, chiết xuất mô của sinh vật bị nhiễm bệnh. Trong trường hợp thứ hai, một kháng nguyên đã biết (diagnosticum) và huyết thanh của bệnh nhân hoặc người hồi phục.

RSK được sử dụng để chẩn đoán các bệnh do cúm, đậu mùa, adenovirus và arbovirus gây ra.

Nghiên cứu virus học bao gồm hai giai đoạn chính: phân lập virus và xác định chúng. Vật liệu cho nghiên cứu virus học có thể là máu, các chất lỏng sinh học và bệnh lý khác, sinh thiết các cơ quan và mô.

Xét nghiệm máu về vi rút thường được thực hiện để chẩn đoán nhiễm arbovirus. Trong nước bọt có thể phát hiện virus bệnh dại, quai bị, herpes simplex... Gạc mũi họng dùng để phân lập bệnh cúm và các mầm bệnh ARVI khác, bệnh sởi. Trong nước rửa từ kết mạc, adenovirus được tìm thấy. Nhiều loại entero-, adsno-, pso-, nora- và rotavirus được phân lập từ phân.

Nuôi cấy tế bào, phôi gà, và đôi khi động vật thí nghiệm được sử dụng để phân lập virus.

Hầu hết các vi-rút gây bệnh đều là mô và loại cụ thể, ví dụ, vi-rút bại liệt chỉ sinh sản trong tế bào linh trưởng, do đó nuôi cấy mô thích hợp được sử dụng để phân lập một loại vi-rút cụ thể. Để phân lập một mầm bệnh chưa biết, nên lây nhiễm đồng thời 3-4 tế bào nuôi cấy, giả sử rằng một trong số chúng có thể nhạy cảm. Sự hiện diện của virus trong môi trường nuôi cấy tế bào bị nhiễm bệnh được xác định bởi sự phát triển của quá trình thoái hóa tế bào cụ thể, tức là. tác dụng gây bệnh tế bào, phát hiện các thể vùi nội bào, cũng như trên cơ sở phát hiện một kháng nguyên cụ thể bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang, hấp phụ máu dương tính và phản ứng ngưng kết hồng cầu.

Phôi gia cầm với các mô kém biệt hóa phù hợp để nuôi cấy nhiều loại virus. Chat chỉ sử dụng phôi gà. Khi nhân lên trong phôi, virus có thể gây ra cái chết của chúng (arboviruses), sự xuất hiện của những thay đổi trong màng đệm-allantoic (virus thủy đậu) hoặc trong cơ thể phôi, sự tích tụ mag glutinin trong dịch phôi trong dịch phôi (virus cúm , quai bị) và bổ thể của kháng nguyên virus liên kết .

Việc xác định virus được thực hiện bằng các phương pháp miễn dịch: phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu, cố định bổ thể, trung hòa, kết tủa gel, miễn dịch huỳnh quang.

Thông tin thêm về chủ đề Phương pháp virus học:

1. Đánh giá dữ liệu nhân trắc chính bằng phương pháp tham số (phương pháp sigma)
2. Phương pháp điều trị tuyệt chủng có điều kiện và phương pháp huấn luyện cưỡng bức
3. 2. Phương pháp so sánh pháp lý - phương pháp khoa học tư của khoa học pháp lý
4. CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN VÀ LỰA CHỌN PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU TRỊ BỆNH U CƠ DƯỚI TỬ CUNG HIỆN ĐẠI
5. 5.4. Khái niệm và cấu trúc của phương pháp điều tra chung với tư cách là phương pháp hoạt động thực tiễn
6. Chủ đề 8. PHƯƠNG PHÁP VI SINH VẬT ĐỂ NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN VÀ CƠ CHẾ CHUYỂN BIẾN THÔNG TIN DI TRUYỀN. ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP GEN TẠO THUỐC MỚI
7. Chủ đề 15. KHẢ NĂNG BỆNH VÀ ĐỘC HỌC CỦA VI SINH VẬT. CÁC YẾU TỐ ĐỘC LỰC. CÁC PHƯƠNG PHÁP LÂY NHIỄM ĐỘNG VẬT TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM. KHÁNG NGUYÊN, PHƯƠNG PHÁP THU HỒI CỦA CHÚNG. KHÁNG THỂ. PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH VÀ CÔNG DỤNG THỰC TẾ CỦA CHÚNG. THỰC TẾ