Bản chất của thực bào có thể được mô tả chỉ trong một vài từ. Trong quá trình này, các tế bào thực bào đặc biệt "tính toán", nuốt chửng và tiêu hóa các hạt có hại đã xâm nhập vào cơ thể, chủ yếu là nhiễm trùng. Mục đích của hiện tượng này là để bảo vệ chúng ta khỏi các mầm bệnh, độc tố tiềm ẩn, v.v. Và chính xác cơ chế thực bào được thực hiện như thế nào? Nó trải qua một số giai đoạn, sẽ được thảo luận chi tiết hơn dưới đây.

Các giai đoạn thực bào:

hóa hướng động

Một đối tượng độc hại xâm nhập vào cơ thể và không được chú ý ở đó trong một thời gian ngắn. Vật thể này, có thể là vi khuẩn, vật thể lạ hoặc thứ gì khác, giải phóng các chất đặc biệt (chất hóa học) và tiếp xúc trực tiếp với máu hoặc mô. Tất cả điều này làm cho cơ thể nhận thức được sự hiện diện của một kẻ xâm lược bên trong nó.

Một loạt các phản ứng sinh hóa xảy ra. Trong giai đoạn đầu tiên của quá trình thực bào, tế bào mast giải phóng các hợp chất đặc biệt vào máu gây ra phản ứng viêm. Sự khởi đầu của quá trình viêm “đánh thức” các đại thực bào và các tế bào thực bào khác khỏi trạng thái nghỉ ngơi. Bạch cầu trung tính, bắt gặp sự hiện diện của các chất hóa học, nhanh chóng thoát khỏi máu vào các mô và vội vã di chuyển đến tiêu điểm viêm.

Thật khó để mô tả nó, và thậm chí còn khó tưởng tượng hơn, nhưng sự xâm nhập của mầm bệnh vào cơ thể dẫn đến sự ra mắt của hiệu ứng domino thực sự, bao gồm hàng trăm (!) Hiện tượng sinh lý khác nhau xảy ra ở tế bào và dưới tế bào. cấp độ. Trạng thái của hệ thống miễn dịch ở giai đoạn thực bào này có thể được so sánh với trạng thái của một tổ ong bị xáo trộn, khi nhiều cư dân của nó đang chuẩn bị tấn công kẻ phạm tội.

bạch cầu trung tính - di chuyển thực bào

Trình tự thực bào tiếp tục với giai đoạn thứ hai, phản ứng kết dính. Các thực bào tiếp cận đúng nơi sẽ mở rộng quy trình của chúng đến mầm bệnh, tiếp xúc với nó và nhận ra nó. Họ không vội tấn công ngay lập tức và muốn đảm bảo rằng trước tiên họ không nhầm về "người lạ". Việc nhận biết một tác nhân gây hại xảy ra với sự trợ giúp của các thụ thể đặc biệt trên bề mặt màng thực bào.

kích hoạt màng

Trong giai đoạn thứ ba của quá trình thực bào, các phản ứng vô hình xảy ra trong các tế bào bảo vệ để chuẩn bị cho chúng bắt giữ và tiêu diệt mầm bệnh.

ngâm

Màng thực bào là một chất dẻo, lỏng, có thể thay đổi hình dạng. Nó sẽ làm gì khi tế bào gặp một đối tượng độc hại. Bức ảnh cho thấy thực bào mở rộng "xúc tu" của nó tới hạt lạ. Sau đó, anh dần dần lan ra xung quanh cô, trườn lên người cô và hoàn toàn chiếm lấy cô.

Thực bào mở rộng các quá trình đến mầm bệnh

sự hình thành thể thực bào

Khi một thực bào bao phủ một hạt từ mọi phía, màng của nó sẽ đóng lại từ bên ngoài và một bong bóng kín vẫn còn bên trong tế bào với vật thể bị tấn công bên trong. Do đó, tế bào dường như nuốt chửng hạt. Túi này được gọi là phagosome.

Sự hình thành của phagolysosome (hợp nhất)

Trong khi các giai đoạn khác của quá trình thực bào đang diễn ra, thì bên trong thực bào, vũ khí của nó đang được chuẩn bị để sử dụng - các bào quan lysosome chứa các enzym "tiêu hóa" của tế bào. Ngay khi một vi khuẩn hoặc vật thể có hại khác bị tế bào bảo vệ bắt giữ, lysosome sẽ tiếp cận nó. Màng của chúng hợp nhất với lớp vỏ bao bọc hạt và nội dung của chúng được đổ vào "túi" này.

Đây là thời điểm kịch tính nhất trong toàn bộ cơ chế thực bào. Vật bắt giữ được thực bào tiêu hóa và chia nhỏ.

Loại bỏ các sản phẩm tách

Bất cứ thứ gì còn sót lại của vi khuẩn bị giết hoặc phần tử đã tiêu hóa khác sẽ được loại bỏ khỏi tế bào. Phagolysosome trước đây, là một túi chứa các sản phẩm thoái hóa, tiếp cận màng ngoài của thực bào và hợp nhất với nó. Vì vậy, tàn dư của đối tượng hấp thụ được loại bỏ khỏi tế bào. Trình tự thực bào hoàn thành

thực bào (từ tiếng Hy Lạp phago - tôi nuốt chửng và tế bào - tế bào) là một quá trình hấp thụ và tiêu hóa các chất kháng nguyên, bao gồm cả vi sinh vật, bởi các tế bào có nguồn gốc trung bì, được gọi là thực bào. I. I. Mechnikov chia thực bào thành đại thực bào và vi thể. Hiện nay, macro- và microphage được thống nhất trong một hệ thống duy nhất của đại thực bào (SMF). Hệ thống này bao gồm:

• đại thực bào mô - tế bào biểu mô,
• tế bào lưới nội mô hình sao (tế bào Kupffer),
• đại thực bào phế nang và phúc mạc nằm trong phế nang và khoang phúc mạc,
• quá trình làm trắng tế bào biểu bì của da (tế bào Langerhans), v.v.

Các vi thể bao gồm:

• bạch cầu trung tính,
• bạch cầu ái toan,
• bạch cầu ái kiềm.

Chức năng của đại thực bào vô cùng đa dạng. Chúng là những tế bào đầu tiên phản ứng với một chất lạ, là những tế bào chuyên biệt hấp thụ và tiêu diệt các chất lạ trong cơ thể (tế bào chết, tế bào ung thư, vi khuẩn, vi rút và các vi sinh vật khác, kháng nguyên, chất vô cơ không chuyển hóa được). Ngoài ra, đại thực bào tạo ra nhiều hoạt chất sinh học - enzyme (bao gồm lysozyme, peroxidase, esterase), protein bổ sung, chất điều hòa miễn dịch như interleukin. Sự hiện diện trên bề mặt đại thực bào của các thụ thể đối với globulin miễn dịch (Am) và bổ thể, cũng như hệ thống các chất trung gian, đảm bảo sự tương tác của chúng với các tế bào lympho T và B. Đồng thời, đại thực bào kích hoạt các chức năng bảo vệ của tế bào lympho T. Do sự hiện diện của các thụ thể dành cho bổ thể và Am, cũng như hệ thống tương hợp mô Ag (HLA), các đại thực bào tham gia vào việc liên kết và nhận biết các kháng nguyên. Do đó, thực bào có ba chức năng:

• bảo vệ, liên quan đến việc làm sạch cơ thể khỏi các tác nhân lây nhiễm, các sản phẩm phân rã mô, v.v.;
• đại diện, bao gồm việc trình bày các biểu mô kháng nguyên cho các tế bào lympho trên màng thực bào;
• bài tiết, liên quan đến việc tiết ra các enzyme lysosomal và các hoạt chất sinh học khác - các cytokine, đóng vai trò quan trọng trong quá trình tạo miễn dịch.

Có những dòng chảy tuần tự sau đây các giai đoạn thực bào.

• hóa hướng động– mục tiêu di chuyển của thực bào theo hướng gradient hóa học của chất hấp dẫn hóa học trong môi trường. Khả năng chemotaxis có liên quan đến sự hiện diện trên màng của các thụ thể đặc hiệu đối với các chất hóa học (đối tượng thực bào), có thể là vi khuẩn, các sản phẩm thoái hóa của các mô cơ thể, v.v.
• độ bám dính(phần đính kèm) cũng được trung gian bởi các thụ thể tương ứng, nhưng có thể diễn ra theo quy luật tương tác hóa lý không đặc hiệu. Các hạt được hấp phụ trên bề mặt của đại thực bào.
• nội tiết(bắt giữ) - xảy ra sự xâm lấn màng tế bào, bắt giữ một hạt lạ và ngâm nó trong nguyên sinh chất. Là kết quả của endocytosis, một không bào thực bào được hình thành - thể thực bào(nghĩa là bong bóng trong nguyên sinh chất xung quanh hạt bị hấp thụ).
• tiêu hóa nội bào- bắt đầu bằng sự hấp thụ các vật bị thực bào. Phagosome hợp nhất với lysosome của thực bào, chứa hàng chục enzyme và xảy ra sự hình thành phagolysosome (phá hủy) hạt bị bắt bởi các enzyme. Khi một hạt thuộc về sinh vật được hấp thụ (ví dụ: tế bào chết hoặc các bộ phận của nó, protein của chính nó), nó sẽ bị các enzyme phagolysosome phân tách thành các chất không có tính kháng nguyên (axit amin, axit béo, nucleotide, đường đơn). Nếu một hạt lạ được hấp thụ, thì các enzyme của phagolysosome không thể phân hủy chất đó thành các thành phần không có tính kháng nguyên. Trong những trường hợp như vậy, phagolysosome với phần còn lại của kháng nguyên vẫn giữ được tính ngoại lai của nó được đại thực bào truyền đến các tế bào lympho T và B, tức là, một liên kết miễn dịch cụ thể được bật.

chức năng bài tiết là sự bài tiết của thực bào các hoạt chất sinh học - cytokine - đó là interleukin-1 và interleukin-2, là chất trung gian tế bào có tác dụng điều hòa sự tăng sinh, biệt hóa và chức năng của thực bào, tế bào lympho, nguyên bào lympho và các tế bào khác. Các đại thực bào sản xuất và tiết ra các yếu tố điều hòa quan trọng như prostaglandin, leukotrienes, nucleotide vòng với nhiều hoạt động sinh học. Ngoài ra, đại thực bào tổng hợp và tiết ra một số sản phẩm có hoạt tính kháng khuẩn, kháng virus và gây độc tế bào (gốc oxy O2-H2O2, lysozyme, interferon, v.v.).

Quá trình thực bào được tăng cường bởi các kháng thể opsonin, vì kháng nguyên hoặc liên kết dễ dàng được hấp phụ hơn trên bề mặt của thực bào, do sự hiện diện của các thụ thể đối với các kháng thể này ở tế bào sau. Sự tăng cường khả năng thực bào của kháng thể này được gọi là opsonin hóa, I E. chuẩn bị các vi sinh vật để bắt giữ bởi thực bào. Quá trình thực bào của các kháng nguyên bị opsonin hóa được gọi là quá trình miễn dịch.

Để đặc trưng cho hoạt động của thực bào giới thiệu chỉ số thực bào.Để xác định nó, số lượng vi khuẩn được hấp thụ bởi một thực bào được đếm dưới kính hiển vi. Cũng thích chỉ số opsonophagocyticđại diện cho tỷ lệ các thông số thực bào thu được với huyết thanh miễn dịch và không miễn dịch. Chỉ số thực bào và chỉ số opsonophagocytic được sử dụng trong miễn dịch học lâm sàng để đánh giá tình trạng miễn dịch và tình trạng miễn dịch.

Thực bào đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ kháng khuẩn, kháng nấm và kháng virus, duy trì khả năng chống lại các chất lạ của cơ thể. Thực bào cũng có tác dụng kích hoạt và ức chế tế bào lympho, tham gia vào quá trình phục hồi dung nạp miễn dịch, chống nhiễm trùng, cấy ghép và miễn dịch chống ung thư, và một số dạng dị ứng (HRT).

Quá trình thực bào (hấp thụ một đối tượng pha rắn) bao gồm năm giai đoạn.

• 1. Hoạt huyết (tăng chuyển hóa năng lượng). Các yếu tố kích hoạt và hóa hướng động là các sản phẩm của vi khuẩn (LPS, peptide), các thành phần bổ thể (C3 và C5), các cytokine và kháng thể.
• 2. Hóa trị.
• 3. Độ bám dính.
• 4. Hấp thụ.
• 5. Kết quả thực bào.

Sự kết dính có liên quan đến sự hiện diện của một số thụ thể trên bề mặt của thực bào (với các mảnh Fc của kháng thể, các thành phần bổ sung, fibronectin), đảm bảo sức mạnh của các tương tác opsonin qua trung gian thụ thể bao bọc vi sinh vật và hạn chế khả năng di chuyển của chúng (kháng thể, C3b, fibronectin).

Thực bào sở hữu pseudopodia giống như amip. Sau khi hấp thụ, một phagosome được hình thành với đối tượng được hấp thụ (vi khuẩn), một lysosome chứa các enzyme ly giải tham gia và hợp nhất với nó, và một phagolysosome được hình thành.

Có ba kết quả có thể xảy ra của quá trình thực bào:

• - thực bào hoàn toàn;
• - thực bào không đầy đủ;
• - xử lý kháng nguyên.

Thực bào hoàn thành là quá trình tiêu hóa hoàn toàn vi sinh vật trong một tế bào thực bào.

Trong quá trình thực bào, một "vụ nổ oxy hóa" xảy ra với sự hình thành các loại oxy phản ứng, mang lại tác dụng diệt khuẩn.

Một trong những chức năng quan trọng nhất của đại thực bào (cùng với hóa ứng động, thực bào, bài tiết các chất có hoạt tính sinh học) là xử lý (xử lý) kháng nguyên và trình diện nó cho các tế bào có khả năng miễn dịch với sự tham gia của các protein thuộc lớp hệ thống tương hợp mô học chính (MHC). 2.

Thực bào không chỉ là sự phá hủy ngoại lai mà còn là sự xuất hiện của một kháng nguyên để kích hoạt các phản ứng miễn dịch và bài tiết các chất trung gian của các phản ứng miễn dịch và phản ứng viêm. Hệ thống đại thực bào là mắt xích trung tâm không chỉ trong sức đề kháng tự nhiên (miễn dịch loài) mà còn có vai trò quan trọng trong miễn dịch thu được, sự hợp tác của tế bào trong đáp ứng miễn dịch.

Viêm như một phản ứng bảo vệ của cơ thể đối với các tổn thương mô khác nhau phát sinh ở giai đoạn tiến hóa cao hơn quá trình thực bào và là đặc điểm của các sinh vật có tổ chức cao với hệ thống tuần hoàn và thần kinh.

Viêm nhiễm trùng đi kèm với các phản ứng mạch máu và tế bào khác nhau (bao gồm cả thực bào), cũng như giải phóng một số chất trung gian của phản ứng viêm (histamine, serotonin, kinin, protein của giai đoạn viêm cấp tính, leukotrienes và prostaglandin, cytokine, bổ sung hệ thống).

Nhiều sản phẩm vi khuẩn kích hoạt các tế bào của hệ thống bạch cầu đơn nhân và đại thực bào, đáp ứng với chúng bằng cách giải phóng các sản phẩm hoạt tính sinh học - cytokine, đặc biệt là interleukin. Chúng có thể được coi là chất trung gian của phản ứng miễn dịch tế bào. Interleukin-1 (IL-1), kích thích gây sốt, tăng tính thấm thành mạch và tính kết dính của lớp nội mô, đồng thời kích hoạt thực bào, đóng vai trò chính trong các phản ứng viêm.

Sốt. Tăng nhiệt độ cơ thể là một phản ứng bảo vệ của cơ thể, làm xấu đi các điều kiện sinh sản của nhiều vi sinh vật, kích hoạt các đại thực bào, tăng tốc lưu lượng máu và tăng cường các quá trình trao đổi chất trong cơ thể.

Chức năng rào cản của các hạch bạch huyết. Theo P.F. Zdrodovsky (1969), các hạch bạch huyết là một loại bộ lọc sinh học đối với mầm bệnh mang theo bạch huyết. Tại đây, các vi sinh vật đã xâm nhập vào da hoặc màng nhầy và được dòng bạch huyết mang đi được giữ lại và tiếp xúc với hoạt động của đại thực bào và tế bào lympho hoạt hóa.

Hệ thống bổ sung là một phức hợp protein và glycoprotein trong huyết thanh của người và động vật có xương sống (có hơn 20 loài trong số chúng). Các thành phần riêng lẻ làm trung gian cho quá trình viêm, opsonin hóa các mảnh ngoại lai cho quá trình thực bào tiếp theo, tham gia cùng với các đại thực bào trong quá trình tiêu diệt trực tiếp vi sinh vật và các tế bào ngoại lai khác (ly giải vi khuẩn và vi rút). Trong điều kiện sinh lý, các thành phần của hệ thống bổ sung ở dạng không hoạt động. Có ba cách để kích hoạt hệ thống bổ sung - cổ điển, thay thế và sử dụng shunt C1.

Con đường cổ điển - một loạt các phản ứng protease từ thành phần C1q đến C9 - được thực hiện với sự có mặt của kháng thể đối với kháng nguyên tương ứng. Thành phần C1q tương tác với phức hợp “kháng nguyên-kháng thể”, sau đó là C4, tiếp theo là C2. Một phức hợp “kháng nguyên-kháng thể-C1C4C2” được hình thành, C3 (thành phần trung tâm của hệ thống) được kết nối với nó và một chuỗi kích hoạt với các chức năng tác động (opsonin hóa và ly giải vi khuẩn, kích hoạt hệ thống đại thực bào, viêm nhiễm) được khởi động .

Một con đường thay thế được thực hiện trong lần tiếp xúc ban đầu với mầm bệnh (khi chưa có kháng thể). Nó được gây ra bởi LPS và các kháng nguyên vi sinh vật khác. C1, C4, C2 không tham gia, các đường dẫn thay thế và cổ điển hợp nhất ở cấp độ C3.

hệ thống interferon.

Interferon là glycoprotein được tổng hợp bởi các tế bào khác nhau của cơ thể với nhiều hoạt tính sinh học (chủ yếu là kháng vi-rút), phản ứng nhanh của cơ thể đối với các tế bào nhận được tín hiệu ngoại lai không đặc hiệu. Có cả một hệ thống interferon, được chia thành các phân nhóm alpha, beta và gamma với tính chất không đồng nhất rõ rệt. Tác dụng chống vi-rút thể hiện ở khả năng ngăn chặn sự sinh sản nội bào của vi-rút DNA và RNA (chủ yếu là do ngăn chặn quá trình tổng hợp các đại phân tử vi-rút). Cảm ứng tổng hợp interferon do virus, vi khuẩn, rickettsiae, động vật nguyên sinh, các hợp chất tổng hợp.

tế bào sát thủ.

Trong việc đảm bảo khả năng miễn dịch của loài, vai trò thiết yếu thuộc về tế bào lympho T gây độc tế bào (T-killers), cũng như hệ thống tương hợp mô chính (chi tiết ở các bài giảng sau).

Thuốc diệt T, bằng cách trình bày các kháng nguyên của hệ thống tương hợp mô chính loại 1, nhận ra bất kỳ kháng nguyên lạ nào (bao gồm cả các kháng nguyên đột biến, ví dụ, tế bào ung thư), tấn công và tiêu diệt chúng.

Các tế bào NK (sát thủ tự nhiên) rất quan trọng trong việc duy trì cân bằng nội môi di truyền và bảo vệ chống khối u, chức năng nhận biết của chúng không phụ thuộc vào sự trình diện của các kháng nguyên MHC (phức hợp tương hợp mô chính) loại 1.

Hệ thống đề kháng không đặc hiệu và miễn dịch loài góp phần duy trì tính toàn vẹn về cấu trúc và chức năng của cơ thể và là cơ sở để hình thành miễn dịch thu được (đặc hiệu). Kết nối ở cấp độ cao hơn này, các hệ thống miễn dịch cụ thể và có được tạo thành một hệ thống tự bảo vệ duy nhất và hiệu quả nhất của cơ thể khỏi mọi thứ xa lạ.

Hệ thống miễn dịch.

Hệ thống miễn dịch là một tập hợp các cơ quan, mô và tế bào đảm bảo tính ổn định của tế bào và di truyền của cơ thể. Các nguyên tắc về độ tinh khiết của kháng nguyên (di truyền) dựa trên sự thừa nhận "người ngoài hành tinh của chính mình" và phần lớn được xác định bởi hệ thống gen và glycoprotein (sản phẩm biểu hiện của chúng) - phức hợp tương hợp mô chính (MHC), thường được gọi là HLA (người). kháng nguyên bạch cầu) ở người. Protein MHC được thể hiện rõ ràng trên bạch cầu của con người, các kháng nguyên MHC được phân loại bằng cách sử dụng nghiên cứu về bạch cầu.

các cơ quan của hệ thống miễn dịch.

Có các cơ quan miễn dịch trung tâm (tủy xương - cơ quan tạo máu, tuyến ức hoặc tuyến ức, mô bạch huyết của ruột) và ngoại vi (lách, hạch bạch huyết, sự tích tụ của mô bạch huyết trong lớp màng nhầy của ruột).

Các tế bào tiền thân của các tế bào có thẩm quyền miễn dịch được tạo ra bởi tủy xương. Một số hậu duệ của tế bào gốc trở thành tế bào lympho. Tế bào lympho được chia thành hai lớp - T và B. Tiền thân của tế bào lympho T di chuyển đến tuyến ức, nơi chúng trưởng thành thành các tế bào có thể tham gia vào phản ứng miễn dịch. Ở người, tế bào lympho B trưởng thành trong tủy xương. Ở loài chim, các tế bào B chưa trưởng thành di chuyển đến túi Fabricius nơi chúng trưởng thành. Tế bào lympho B và T trưởng thành xâm chiếm các hạch bạch huyết ngoại vi. Do đó, các cơ quan trung tâm của hệ thống miễn dịch tiến hành hình thành và trưởng thành các tế bào có khả năng miễn dịch, các cơ quan ngoại vi cung cấp phản ứng miễn dịch đầy đủ đối với kích thích kháng nguyên - "xử lý" kháng nguyên, nhận biết và tăng sinh vô tính của tế bào lympho - biệt hóa phụ thuộc vào kháng nguyên.

Miễn dịch: cơ chế triển khai

Các tế bào và phân tử hoạt động đồng bộ, hỗ trợ lẫn nhau ở các giai đoạn phát triển khác nhau của phản ứng miễn dịch.

Cơ chế không đặc hiệu

Ở giai đoạn đầu tiên của sự va chạm với một kháng nguyên lạ, một quá trình bảo vệ bệnh lý không đặc hiệu được khởi động - quá trình viêm, kèm theo quá trình thực bào, giải phóng các chất trung gian gây viêm - histamine, serotonin, cytokine, v.v. các tế bào lympho trợ giúp, trình bày chúng trên các yếu tố quyết định kháng nguyên bề mặt. T-helpers kích hoạt sự sinh sản (tiết ra các chất protein cụ thể - interleukin) của các dòng vô tính của T-killers và B-lymphocytes đặc hiệu cho một kháng nguyên nhất định từ các tế bào gốc có sẵn đã được thử nghiệm khả năng chịu đựng trong thời kỳ phôi thai (lý thuyết chọn lọc dòng vô tính của Burnet).

viêm (lat. viêm) là một quá trình bệnh lý phức tạp, cục bộ và chung, xảy ra để đáp ứng với thiệt hại (thay đổi) hoặc tác động của một kích thích gây bệnh và biểu hiện trong các phản ứng (xuất tiết, v.v.) nhằm loại bỏ các sản phẩm gây hại, và nếu có thể , sau đó là các tác nhân (chất kích thích), cũng như dẫn đến sự phục hồi tối đa cho các tình trạng này (tăng sinh, v.v.) trong vùng tổn thương.

Sơ đồ phát triển viêm. Dưới ảnh hưởng của một yếu tố gây hại, các đại thực bào giải phóng các cytokine tiền viêm, thu hút các tế bào khác đến tâm điểm của tình trạng viêm, do đó sự tổng hợp hoặc giải phóng các hoạt chất của chúng, tính toàn vẹn của mô bị vi phạm .

thực bào (phago - nuốt chửng và tế bào - tế bào) - một quá trình trong đó các tế bào đặc biệt của máu và các mô của cơ thể (phagocytes) bắt giữ và tiêu hóa mầm bệnh của các bệnh truyền nhiễm và tế bào chết. Nó được thực hiện bởi hai loại tế bào: bạch cầu hạt (bạch cầu hạt) lưu thông trong máu và đại thực bào ở mô. Việc phát hiện ra quá trình thực bào thuộc về I. I. Mechnikov, người đã tiết lộ quá trình này bằng cách thực hiện các thí nghiệm với sao biển và daphnia, đưa các vật thể lạ vào cơ thể chúng. Ví dụ, khi Mechnikov đặt một bào tử nấm vào cơ thể của một loài daphnia, ông nhận thấy rằng nó đã bị tấn công bởi các tế bào di động đặc biệt. Khi anh ta giới thiệu quá nhiều bào tử, các tế bào không có thời gian để tiêu hóa hết và con vật đã chết. Mechnikov gọi các tế bào bảo vệ cơ thể khỏi vi khuẩn, vi rút, bào tử nấm, v.v. là thực bào.

Ở người, có hai loại thực bào chuyên nghiệp:bạch cầu trung tính và bạch cầu đơn nhân (trong mô - đại thực bào)

Các giai đoạn chính của phản ứng thực bào là giống nhau đối với cả hai loại tế bào. Phản ứng thực bào có thể được chia thành nhiều giai đoạn:

1. Hóa trị. Trong phản ứng thực bào vai trò quan trọng hơn thuộc về hóa ứng động tích cực. Là chất hóa học, có các sản phẩm được tiết ra bởi vi sinh vật và tế bào hoạt hóa trong tâm điểm của viêm (cytokine, leukotriene B4, histamine), cũng như các sản phẩm phân cắt của các thành phần bổ sung (C3a, C5a), các mảnh protein của các yếu tố đông máu và tiêu sợi huyết (thrombin). , fibrin), neuropeptide, các mảnh globulin miễn dịch, v.v. Tuy nhiên, các chemotaxin "chuyên nghiệp" là các cytokine thuộc nhóm chemokine.

Sớm hơn các tế bào khác, bạch cầu trung tính di chuyển đến ổ viêm và đại thực bào đến muộn hơn nhiều. Tốc độ di chuyển hóa học đối với bạch cầu trung tính và đại thực bào là tương đương nhau, sự khác biệt về thời gian đến có thể liên quan đến tốc độ kích hoạt khác nhau của chúng.

2. Sự kết dính của thực bào với đối tượng.Đó là do sự hiện diện trên bề mặt thực bào của các thụ thể đối với các phân tử được trình bày trên bề mặt của vật thể (riêng hoặc liên kết với nó). Trong quá trình thực bào của vi khuẩn hoặc tế bào cũ của sinh vật chủ, các nhóm saccharide cuối cùng được công nhận - glucose, galactose, fucose, mannose, v.v., được trình bày trên bề mặt của các tế bào bị thực bào. Sự nhận biết được thực hiện bởi các thụ thể giống như lectin có tính đặc hiệu thích hợp, chủ yếu bởi protein liên kết với mannose và các selectin hiện diện trên bề mặt của thực bào.

Trong những trường hợp khi đối tượng thực bào không phải là tế bào sống mà là các mảnh than, amiăng, thủy tinh, kim loại, v.v., trước tiên, thực bào làm cho đối tượng hấp thụ có thể chấp nhận được đối với phản ứng, bao bọc nó bằng các sản phẩm của chính chúng, bao gồm cả các thành phần của ma trận ngoại bào mà chúng tạo ra.

Mặc dù thực bào có khả năng hấp thụ các loại vật thể "không chuẩn bị" khác nhau, nhưng quá trình thực bào đạt cường độ lớn nhất trong quá trình opsonin hóa, tức là. sự cố định trên bề mặt của các vật thể opsonin mà thực bào có các thụ thể đặc hiệu - đối với đoạn Fc của kháng thể, các thành phần của hệ thống bổ thể, fibronectin, v.v.

3. Kích hoạt màng.Ở giai đoạn này, đối tượng đã được chuẩn bị để ngâm. Có sự kích hoạt protein kinase C, giải phóng các ion canxi từ các kho nội bào. Quá trình chuyển đổi sol-gel trong hệ thống chất keo tế bào và sắp xếp lại actin-myosin có tầm quan trọng lớn.

4. Lặn. Đối tượng đang bao bọc

5. Hình thành thể thực bào.Đóng màng, nhúng vật thể có một phần màng thực bào vào bên trong tế bào.

6. Hình thành thể thực bào.Sự hợp nhất của phagosome với lysosome, dẫn đến sự hình thành các điều kiện tối ưu cho quá trình phân giải vi khuẩn và phân tách tế bào chết. Cơ chế hội tụ của phagosome và lysosome không rõ ràng, có thể có sự di chuyển tích cực của lysosome sang phagosome.

7. Giết chóc và chia rẽ.Vai trò của thành tế bào của tế bào tiêu hóa là rất lớn. Các chất chính tham gia vào quá trình phân giải vi khuẩn: hydro peroxide, các sản phẩm chuyển hóa nitơ, lysozyme, v.v. Quá trình phá hủy tế bào vi khuẩn được hoàn thành do hoạt động của protease, nuclease, lipase và các enzyme khác, hoạt động của chúng là tối ưu ở mức thấp giá trị pH.

8. Giải phóng các sản phẩm thoái hóa.

Quá trình thực bào có thể là: hoàn thành (tiêu diệt và tiêu hóa thành công), không hoàn thành (đối với một số mầm bệnh, thực bào là một bước cần thiết trong vòng đời của chúng, ví dụ, đối với mycobacteria và gonococci).

hoạt hóa bổ thể.

Hệ thống bổ thể hoạt động như một chuỗi các phản ứng sinh hóa. Bổ sung được kích hoạt bởi ba con đường sinh hóa: con đường cổ điển, thay thế và lectin. Cả ba con đường kích hoạt đều tạo ra các biến thể khác nhau của C3 convertase (một loại protein phân cắt C3). Con đường cổ điển (là con đường đầu tiên được phát hiện, nhưng là con đường tiến hóa mới) yêu cầu các kháng thể phải được kích hoạt (phản ứng miễn dịch đặc hiệu, miễn dịch thích nghi), trong khi con đường thay thế và lectin có thể được kích hoạt bởi các kháng nguyên mà không cần sự hiện diện của kháng thể (miễn dịch không đặc hiệu). đáp ứng, miễn dịch bẩm sinh). Kết quả của hoạt hóa bổ thể trong cả ba trường hợp đều giống nhau: C3 convertase thủy phân C3, tạo ra C3a và C3b và gây ra một loạt các quá trình thủy phân tiếp theo của các yếu tố hệ thống bổ thể và các sự kiện hoạt hóa. Theo con đường cổ điển, việc kích hoạt C3 convertase yêu cầu hình thành phức hợp C4b2a. Phức hợp này được hình thành dựa trên sự phân cắt của C2 và C4 bởi phức hợp C1. Ngược lại, phức hợp C1 phải liên kết với các globulin miễn dịch loại M hoặc G để kích hoạt. C5a là một chất hóa học quan trọng giúp thu hút các tế bào miễn dịch mới đến vùng kích hoạt bổ thể. Cả C3a và C5a đều có hoạt tính gây độc phản vệ, trực tiếp gây thoái hóa tế bào mast (kết quả là giải phóng các chất trung gian gây viêm). C5b bắt đầu hình thành phức hợp tấn công màng (MAC) bao gồm C5b, C6, C7, C8 và C9 cao phân tử. MAC là sản phẩm cuối cùng của quá trình hoạt hóa bổ thể do hoạt hóa tế bào. MAC tạo thành một kênh xuyên màng gây ra sự ly giải thẩm thấu của tế bào đích. Đại thực bào nuốt mầm bệnh được đánh dấu bởi hệ thống bổ thể.

cách cổ điển

Con đường cổ điển được kích hoạt bằng cách kích hoạt phức hợp C1 (nó bao gồm một phân tử C1q và hai phân tử C1r và C1s mỗi loại). Phức hợp C1 liên kết thông qua C1q với các globulin miễn dịch loại M và G liên kết với các kháng nguyên. Hexameric C1q có hình dạng giống như một bó hoa tulip chưa nở, các "chồi" của chúng có thể liên kết với vùng Fc của kháng thể. Một phân tử IgM duy nhất là đủ để bắt đầu con đường này, việc kích hoạt bởi các phân tử IgG sẽ kém hiệu quả hơn và cần nhiều phân tử IgG hơn.

C1q liên kết trực tiếp với bề mặt của tác nhân gây bệnh, dẫn đến những thay đổi về hình dạng trong phân tử C1q và kích hoạt hai phân tử protease serine C1r. Chúng tách C1 (cũng là một serine protease). Phức hợp C1 sau đó liên kết với C4 và C2 rồi tách chúng ra để tạo thành C2a và C4b. C4b và C2a liên kết với nhau trên bề mặt mầm bệnh để tạo thành con đường cổ điển C3 convertase, C4b2a. Sự xuất hiện của C3 convertase dẫn đến sự phân tách C3 thành C3a và C3b. Các dạng C3b, cùng với C2a và C4b, C5 convertase của con đường cổ điển.

đường dẫn thay thế

Một con đường thay thế được kích hoạt bằng cách thủy phân C3 trực tiếp trên bề mặt mầm bệnh. Các yếu tố B và D tham gia vào con đường thay thế, với sự giúp đỡ của chúng, enzyme C3bBb được hình thành. Protein P ổn định nó và đảm bảo hoạt động lâu dài của nó.. Hơn nữa, PC3bBb kích hoạt C3, kết quả là C5-convertase được hình thành và kích hoạt sự hình thành phức hợp tấn công màng. Việc kích hoạt thêm các thành phần bổ thể cuối cùng xảy ra theo cách tương tự như trong con đường hoạt hóa bổ thể cổ điển.

Con đường thay thế khác với con đường cổ điển theo cách sau: kích hoạt hệ thống bổ sung không yêu cầu hình thành các phức hợp miễn dịch, nó xảy ra mà không có sự tham gia của các thành phần bổ sung đầu tiên - C1, C2, C4. Nó cũng khác ở chỗ nó hoạt động ngay sau khi xuất hiện các kháng nguyên - các chất kích hoạt của nó có thể là polysacarit và lipopolysacarit của vi khuẩn, các hạt vi rút, tế bào khối u.

Lectin (mannose) con đường hoạt hóa hệ thống bổ thể

Con đường lectin liên kết với mannan (mannan là một polyme của mannose) tương đồng với con đường hoạt hóa cổ điển của hệ thống bổ thể. Con đường này sử dụng lectin liên kết với mannan (MBL), một loại protein tương tự như con đường kích hoạt C1q cổ điển, liên kết với dư lượng mannose và các loại đường khác trên màng để cho phép nhận dạng nhiều loại mầm bệnh. MBL là một protein thuộc nhóm các protein thu thập do gan sản xuất và có thể kích hoạt chuỗi bổ sung bằng cách liên kết với bề mặt mầm bệnh. MBL là một phân tử có 2-6 đỉnh tạo thành phức hợp với MASP-I (Mannan-binding lectin Associated Serine Protease, MBL-associated serine protease) và MASP-II. MASP-I và MASP-II rất giống với C1r và C1 của con đường kích hoạt cổ điển và có thể có tổ tiên tiến hóa chung. Khi các đỉnh MBL xác định carbohydrate liên kết với các gốc mannose được định hướng cụ thể trên lớp kép phospholipid của mầm bệnh, MASP-I và MASP-II được kích hoạt và tách protein C4 thành C4a và C4b, và protein C2 thành C2a và C2b. C4b và C2a sau đó kết hợp tại tác nhân gây bệnh bề mặt bằng cách hình thành C3 convertase, trong khi C4a và C2b đóng vai trò là chất hóa học hấp dẫn.

Đáp ứng miễn dịch tế bào

Virus xâm nhập vào cơ thể được nội tiết bởi đại thực bào và sau đó bị phá hủy một phần trong mạng lưới nội chất (1). Kết quả là, các mảnh lạ được hình thành, chúng lộ ra trên bề mặt tế bào của đại thực bào (2). Những mảnh vỡ này được "trình bày" bởi một nhóm protein màng đặc biệt (protein MHC). Phức hợp của đoạn virus và protein phức hợp tương hợp mô chính [MHC (MHC)] được các tế bào T nhận biết và gắn kết bằng cách sử dụng các thụ thể (tế bào T) cụ thể. Trong số lượng lớn các tế bào T, chỉ một số ít có thụ thể thích hợp (3) Sự gắn kết dẫn đến việc kích hoạt các tế bào T này và sự xuất hiện của các bản sao chọn lọc của chúng (4, "lựa chọn vô tính"). Các protein tín hiệu giống như hormone khác nhau, interleukin [IL (IL), xem tr. 378]. Những protein này được tiết ra bởi các tế bào của hệ thống miễn dịch được kích hoạt khi liên kết với các tế bào T. Do đó, các đại thực bào được kích hoạt với một đoạn virus được trình bày sẽ tiết ra IL-1 (5) và các tế bào T tạo ra IL-2 (6), kích thích sao chép vô tính và sao chép các tế bào T-helper của chính chúng.

Các tế bào T được nhân bản và kích hoạt thực hiện các chức năng khác nhau tùy thuộc vào loại của chúng. Các tế bào T gây độc tế bào (trong sơ đồ màu xanh lá cây) có thể nhận biết và liên kết các tế bào của cơ thể bị nhiễm vi-rút và mang các mảnh vi-rút trên các thụ thể MHC của chúng (7). Tế bào T gây độc tế bào tiết ra perforin, một loại protein thấm qua màng của tế bào bị nhiễm liên kết, dẫn đến ly giải tế bào (8).

Ngược lại, T-helpers (trong sơ đồ màu xanh) liên kết với các tế bào B, tế bào này hiện diện trên bề mặt của chúng các mảnh virus liên kết với protein MHC (9). Điều này dẫn đến việc nhân bản có chọn lọc các tế bào B riêng lẻ và sự tăng sinh ồ ạt của chúng, Interleukin kích thích (10) sự trưởng thành của các tế bào B - biến đổi thành các tế bào plasma (11) có khả năng tổng hợp và tiết ra các kháng thể (12)

Một số lượng lớn các phương pháp để định lượng thực bào đã được mô tả trong tài liệu. Dung lượng của cuốn sách này không cho phép chúng tôi mô tả chi tiết tất cả chúng, vì vậy chúng tôi sẽ giới hạn chỉ mô tả một số ít.

Vật liệu và thiết bị

Để làm việc, bạn phải có:

Chất chống đông máu Citratedextrose: 8 g axit xitric. 22 g natri citrate thay thế ba lần (hai nước), 24,5 g glucose được hòa tan trong 1 lít nước;

Dung dịch Dextrosodextran: 4,5 g NaCl, 25 g glucose, 30 g dextran (rel. mol. wt. 500.000) trong 1 l;

Dung dịch amoni clorua: 9 phần amoni clorua 0,83%, 1 phần dung dịch đệm Tris-HCl pH 7,2 (20,6 g/l);

Hỗn hợp ficoll - vizotrast: 9 g ficoll, 20 ml vizotrast, 100 ml H 2 0 đã cất, tỷ trọng 1,077;

Cơ chất cho β-glucuronidase: 31,5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronide và 100 μm Triton X 100 được hòa tan trong 100 ml dung dịch đệm natri axetat 0,05 M pH 5;

Thuốc thử thiếu myeloperoxidase: chất định hình (10 ml 37% formaldehyde với 90 ml ethanol tuyệt đối), dung dịch cơ chất (100 ml 30% EDTA, 0,3 g benzidine clorua, 0,038 g ZnS0 4 x7H 2 0, 1 ml nước cất, 1 ,0 g CH 3 C00Nax3H 2 0, 0,7 ml 3% H 2 0 2); đưa pH của NaOH 1,0 M về 6,0.

Thuốc thử thương mại:

FSB, dung dịch Hank và môi trường Eagle-MEM (Viện điều chế miễn dịch và môi trường dinh dưỡng, Berlin-Weissensee, CHDC Đức);

Heparin (5000 IU/mg) (Gedeon Richter, Hungary);

Huyết thanh phôi bò (Flow Laboratories, Mỹ, có thể dùng hãng khác);

Visotrast (Danh sách VEB Fahlberg, Magdeburg, CHDC Đức);

Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, CHDC Đức);

Dextran, ficoll (Pharmacia, Thụy Điển);

Keo carbon Сl1/143a (Wagner, Pelikanwerke, Đức);

Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson và Bell, USA);

Triton X 100 (Serva, Đức, hãng khác cũng được);

Dầu đỏ O (Allied Chemical corp., Morristown, NY, USA);

Iaranitrophenyl-β-glucuronide (Sigma, Hoa Kỳ);

Safranin O (Phòng thí nghiệm khoa học Fischer, Chicago, Hoa Kỳ);

Hạt, ống polystyrene (Nunc, Đan Mạch);

Lưới F 905 (VEB Orvo Wolfen, CHDC Đức).

Lấy thực bào

Thông tin cần thiết về việc phân lập bạch cầu hạt của con người có thể được lấy trong chương "Tách các tế bào của hệ thống miễn dịch"; để thu được đại thực bào phúc mạc, hãy xem phần "Nuôi cấy đại thực bào và bạch cầu đơn nhân" và "Phân lập đại thực bào từ huyền phù tế bào lách". Vấn đề này được xem xét chi tiết trong một số tác phẩm.

Ngoài ra, các phương pháp sau đây cũng nên được đề cập:

8 ml máu được trộn với dung dịch dextranglucose. Sau đó thêm dung dịch dextran 75 6% trong NaCl 0,15 M (5 ml). Hỗn hợp này được để trong 45-50 phút ở nhiệt độ phòng để lắng hồng cầu. Hút huyết tương. Hồng cầu còn lại được ly giải bằng cách thêm 0,83% amoni clorua (35 ml đến 15 ml huyết tương). Ly tâm 80g trong 10 phút, hòa tan kết tủa trong NaCl 0,15 M được làm lạnh đến 0°C. Kết hợp một số kết tủa và ly tâm trong 10 phút ở 800 g. Các tế bào được giữ tốt nhất trên đá trong 0,15 M NaCl (môi trường này phù hợp hơn môi trường đệm với các cation hóa trị hai làm cho các tế bào dính lại với nhau);

Nếu đối tượng thực bào là nấm men thì có thể bỏ qua bước xử lý bằng amoni clorua, vì hồng cầu không can thiệp vào quá trình này. Tế bào đơn nhân có thể thu được như sau: máu heparin được trộn với 1/3 thể tích môi trường Eagle chứa 15% glucose, xếp trên một lớp hỗn hợp ficoll - visotrast và ly tâm trong 20 phút ở 400 g. Phần tế bào đơn nhân được hút bằng pipet Pasteur, rửa hai lần bằng PBS và chuẩn bị huyền phù trong môi trường Eagle (1x10 7 tế bào/ml).

Chuẩn bị hạt cho quá trình thực bào

Nuôi cấy sống Staphylococcus aureus (SG 511 hoặc 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli và các vi khuẩn đường ruột khác, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae thường được sử dụng nhiều hơn. Vi sinh vật được nuôi cấy trong 24 giờ (nếu cần thì 48 giờ) trên môi trường dinh dưỡng rắn và lỏng. Sinh khối thu được được rửa ba lần bằng NaCl 0,15 M. Huyền phù quá đặc được đo ở bước sóng 640 nm, nồng độ được xác định từ đường chuẩn.

Mật độ vi sinh vật cũng được xác định bằng các phương pháp sàng trên môi trường dinh dưỡng đậm đặc; trong một số trường hợp, có thể tiến hành định lượng vi sinh vật trong buồng đếm.

Khi làm việc với các chủng vi khuẩn sống, nên chú ý luôn sử dụng các chủng cấy ở cùng một giai đoạn. Việc bổ sung 0,01% albumin huyết thanh bò thúc đẩy sự sống sót của vi sinh vật. Hệ thống treo đã chuẩn bị vẫn ổn định trong 1-2 giờ.

Nuôi cấy vi sinh vật bị giết thường thu được bằng cách đun nóng trong 30 phút ở 80°C hoặc xử lý bằng hơi nước chảy. Các vi khuẩn bị giết được rửa ba lần bằng NaCl 0,15 M, tạo huyền phù và nồng độ của huyền phù được xác định.

Chuẩn bị men làm bánh: 0,5 g men làm bánh được hòa tan trong NaCl 0,15 M và đặt trong nồi cách thủy đang sôi trong 30 phút. Lọc qua bộ lọc bông gạc. Khi sử dụng men sống, các tế bào tươi (nuôi cấy 4-5 ngày) được rửa ba lần trong môi trường Eagle có bổ sung 1,0% glucose. Thường sử dụng huyền phù tế bào 10 8 và 10 9 tế bào/ml. Nấm men được sử dụng làm hạt thử nghiệm trong việc phát hiện các khuyết tật trong thành phần C5.

Sử dụng huyền phù các hạt polystyrene: Chuẩn bị huyền phù 10% hạt polystyrene có đường kính 1,091 μm. Nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với dung dịch BSA 0,2% trong NaCl 0,15 M, ly tâm. Ở bước sóng 253 nm, huyền phù polystyrene 1 μg/ml cho độ hấp thụ 1,17x10 -3 .

Ứng dụng hỗn dịch lipopolysacarit - dầu đỏ O trong dầu khoáng: 2 g dầu đỏ được nghiền nhỏ trong 50 ml diisodecyl phthalate (hoặc dầu vaseline) trong cối sứ. Ly tâm 20 phút ở 500 g. Cho 10 μg phần nổi phía trên vào 10 ml dioxin, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm. Hệ số chuyển đổi là 0,92. Ở giai đoạn thứ hai, 40 mg lipopolysacarit (E. coli 0,26 B6, v.v.) được hòa tan trong 3 ml NaCl 0,15 M. Sau đó, 1 ml dung dịch O đỏ nhờn trong diisodecyl sulfat được thêm vào hỗn hợp này và hỗn hợp này được treo trong 90 giây. Hệ thống treo được sử dụng ngay lập tức và có thể được đông lạnh.

Để thiết lập phản ứng thực bào, có thể sử dụng hồng cầu đã hình thành để làm hạt thử nghiệm.

Thực bào vi khuẩn, diệt khuẩn

Thí nghiệm huyền phù vi khuẩn sống: Thường sử dụng tỷ lệ 3-10 vi khuẩn/thực bào. Trong tổng thể tích 2 ml, 1x10 6 thực bào được trộn với 3x10 6 - 1x10 7 vi khuẩn. Trong thực tế, 1 ml huyền phù vi khuẩn được thêm vào 1 ml huyền phù thực bào, 8 IU heparin đã được thêm vào. Thời gian tương tác thường là 30 phút, có trường hợp lâu hơn. Sau khi ủ, lấy 0,5 ml hỗn hợp, 1,5 ml dung dịch gelatin 0,1% trong dung dịch Hank, được làm lạnh đến 0°C, được thêm vào và ly tâm trong 3-4 phút ở 300 g. Các phết được chuẩn bị từ kết tủa, được nhuộm theo Pappenheim. Xem 200 ô (nếu có thể ba lần). Tính tỷ lệ phần trăm thực bào. Theo số lượng vi khuẩn có trong tế bào, người ta tính được chỉ số hoạt động thực bào: số lượng vi khuẩn bị thực bào nhân với tỷ lệ tế bào bị thực bào; cường độ thực bào được biểu thị bằng các số từ 1 đến 4.

Lớp 1: Bị thực bào với vi khuẩn I-4
Độ 2: thực bào được 5-7 vi khuẩn
Độ 3: thực bào 8-10 vi khuẩn
Độ 4: Hơn 10 vi khuẩn trên mỗi tế bào bị thực bào

Khi xác định mức độ thực bào của vi khuẩn sống, cặn tế bào và phần nổi phía trên được kiểm tra riêng. Số lượng vi khuẩn sống được xác định bằng cách sàng 0,1 ml phân đoạn nghiên cứu trên môi trường dinh dưỡng rắn. Ủ trong 24 (48) giờ Khi tính toán hoạt tính diệt khuẩn, người ta cho rằng một khuẩn lạc hình thành tương ứng với một vi khuẩn sống.

Đối với một nghiên cứu trực tiếp về hoạt động diệt khuẩn, máu của bệnh nhân và người hiến tặng khỏe mạnh được kiểm tra bằng cách bổ sung dung dịch kháng sinh (5000 IU penicillin và streptomycin / ml) và không có dung dịch này, đồng thời tiến hành kiểm soát vi khuẩn. Thành phần mẫu: 0,3 ml dung dịch Hank + 0,1 ml huyết thanh bình thường thu được từ máu lấy của 5 người cho + 0,5 ml huyền dịch bạch cầu (10 7 tế bào/ml) + 0,1 ml huyền phù vi khuẩn (10 6 vi khuẩn/ml). Một giải pháp kháng sinh được thêm vào trong 0,02 ml mỗi mẫu. Ủ mẫu ở 37°C và xác định số lượng vi sinh vật sau 20 phút, 1,5 giờ và 3 giờ. Để làm điều này, lấy 0,1 ml từ mỗi mẫu, pha loãng các phần dịch chiết đã chọn với dung dịch Hank 10, 100 và 1000 lần và cho vào thạch đã đun nóng. Đôi khi, đặc biệt nếu đã thêm kháng sinh, các pha loãng trung gian được chuẩn bị để đếm chính xác vi khuẩn (ví dụ: 0,2 ml mẫu được trộn với 5 ml dung dịch Hank, ly tâm trong 5 phút ở 450 g, kết tủa được hòa tan trong 1,9 ml của PBS, áp dụng cho thạch). Nếu bạn muốn rút ngắn thời gian nghiên cứu vi khuẩn học, bạn có thể xác định vi khuẩn bên trong tế bào bằng huỳnh quang sử dụng nhuộm vàng acridine.

Thực bào men bánh mì: chuẩn bị huyền phù 10 9 tế bào/ml trong NaCl 0,15M. Trộn 0,1 ml hỗn dịch với 0,1 ml huyết tương bệnh nhân, ủ 30 phút ở 37°C, thêm 0,2 ml (10 6) PMNL, ủ 30 phút. Các phần dịch được thực hiện trong khoảng thời gian từ 5 đến 30 phút. 100 PMN được đếm và số lượng hạt nấm men thu được trên mỗi tế bào được xác định. Sự sửa đổi sau đây đã được biết: 50 µl huyết thanh thử nghiệm được thêm vào 50 µl huyết thanh chuột lang (trước đây nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với môi trường Eagle có glucose), 50-200 µl huyền phù bạch cầu ( 10 7 tế bào / ml) được thêm vào, thể tích được điều chỉnh thành 450 µl với môi trường Needle có glucose và ủ trong 30 phút ở 37°C. Sau đó thêm 50 μl huyền phù men (10 8 tế bào/ml), trộn đều, ủ 40 phút ở 37°C. Thêm 50 μl L-75 Se-methionine (tổng hoạt tính 100 kBq), trộn và ủ trong 1 giờ ở 37°C. Các tế bào được kết tủa bằng cách ly tâm trong 5 phút ở 1000 g, chúng được rửa hai lần bằng PBS, độ phóng xạ được đo trên máy đếm gamma. Tỷ lệ nấm men bị thực bào được tính theo công thức:

Thực bào sử dụng dung dịch dầu đỏ trong dầu khoáng: 0,2 ml huyền phù hạt được trộn với 0,8 ml huyền phù tế bào đã được làm nóng trước đến 37°C. Sau 5 phút ủ, thêm 6 ml dung dịch NaCl 0,15 M được làm lạnh đến 0°C chứa 126 μg/l N-ethylmaleimide (để ngăn chặn sự bắt giữ các hạt). Ly tâm 10 phút ở 250 g. Phần nổi phía trên được loại bỏ, kết tủa được tái huyền phù trong dung dịch NaCl và N-ethylmaleimide (xem ở trên), tế bào được rửa hai lần. Tế bào bị ly giải bằng sóng siêu âm, màu đỏ dầu được giải phóng. Thêm 1 ml dioxan. Ly tâm trong 15 phút ở 500 g, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm so với dioxane tinh khiết. Mức độ thực bào (IF) được định nghĩa là lượng dầu khoáng (mg) được hấp thụ mỗi phút bởi 10 7 tế bào. Bạn có thể sử dụng công thức sau để tính toán:

Nghiên cứu về quá trình thực bào trong đơn lớp đại thực bào:

1. Pha: 2 ml huyền phù tế bào (200.000 tế bào/ml) được thêm vào các ống polystyrene vô trùng. Cấy trong 5 giờ ở 37°C, sau đó rửa bằng môi trường Eagle. 2 ml môi trường nuôi cấy với 10% huyết thanh bất hoạt (30 phút, 56 °C) của phôi bò được thêm vào các ống nghiệm, ủ ở 37 °C.

2. Giai đoạn A: đưa huyền phù vi khuẩn (3-10/đại thực bào), ủ trong 30-60 phút ở 37°C, các ống được tráng 6 lần với mỗi phần 3 ml môi trường để loại bỏ các vi khuẩn không bị thực bào. Khắc phục ngay bằng hỗn hợp gồm 1 phần axit axetic băng và 3 phần metanol. Nhuộm chế phẩm theo May - Griinwald, đếm tế bào.

Giai đoạn B: xác định vi khuẩn sống nội bào. Trình tự các hoạt động giống như trong giai đoạn A trước giai đoạn cố định. Sau khi rửa, cẩn thận loại bỏ tất cả dấu vết của môi trường. Các tế bào được ly giải, trong đó 2 ml dung dịch vô trùng 0,01% albumin huyết thanh bò (4°C) được thêm vào, lắc nhiều lần. Hầu hết các tế bào bị ly giải sau 20 phút. Vi khuẩn giải phóng được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng dày đặc.

Thực bào hồng cầu: trộn 4x10 7 thực bào với 5x10 7 hồng cầu thử trong 5 ml PBS. Chuyển 2 ml hỗn hợp vào dung dịch đệm 5 mM phosphate được làm lạnh đến 0°C và ly tâm. Đo mật độ quang của phần nổi phía trên ở bước sóng 420 nm. Mức độ thực bào được xác định bởi sự giảm hàm lượng huyết sắc tố trong giai đoạn không có tế bào bằng cách sử dụng các đường chuẩn.

Phương pháp đơn giản để xác định giải phóng mặt bằng

Ví dụ xác định độ thanh thải ở chuột: động vật được tiêm trong màng bụng 5x10 7 vi khuẩn trên 100 g trọng lượng (0,1 ml/ /100 g). Liều tối ưu có thể dao động từ 10 6 đến 10 8 trên 100 g cân nặng. Trong khoảng thời gian 1-2 giờ, 3 cá thể bị giết từ mỗi nhóm động vật thí nghiệm; tổng thời gian thí nghiệm 16 giờ. Vô trùng lấy 0,5 ml máu từ tim, 1 ml dịch màng bụng, tiết ra phổi, gan, lách và thận. Các ống trụ được cắt ra khỏi mô cơ quan bằng pipet Pasteur. Xác định số lượng vi sinh vật bằng cách nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng lỏng và rắn.

Ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: sử dụng than keo hoặc được đánh dấu bằng hồng cầu 51 [Cr] ram. Chuột (ít nhất 5 cá thể mỗi lần thử nghiệm) được tiêm tĩnh mạch 0,01 ml huyền phù than với tỷ lệ 16 mg trên 100 g trọng lượng. Trong vòng 15 phút với khoảng thời gian 2 phút, 0,025 ml máu được lấy từ khoang sau ổ mắt. Cho 0,025 ml máu đã chọn vào 2,0 ml dung dịch Na 2 C0 3 0,1%. Sau khi tán huyết, nồng độ của than được xác định bằng phương pháp đo màu ở bước sóng 675 nm sử dụng các đường chuẩn.

t là thời gian tính bằng phút, C là nồng độ carbon trong mẫu.

Giá trị hiệu chỉnh của thực bào:

Sàng lọc chức năng của thực bào

Xác định quá trình thoái hóa hạt (đo hoạt tính (β-glucuropidase): 10 7 bạch cầu lơ lửng trong 0,8 ml PBS đựng trong ống nhựa, lắc trong 5 phút ở 37 ° C. Thêm 0,2 ml LPS nhạy cảm, các hạt phát quang (FC 80), để nguội 30 phút trên đá, ly tâm 10 phút ở 250 g Kiểm tra hoạt tính enzym ở phần nổi Ủ 0,9 ml hỗn hợp cơ chất trong 18 giờ với 0,1 ml phần khảo sát Thêm 2 ml NaOH 0,1 M, đo mật độ quang trên bước sóng 410 nm.

Phép tính:

(OD 410 x20)/(1,84x18) = số nmol chất được giải phóng trong 1 giờ bởi 10 7 bạch cầu, tức là mức độ thoái hóa được biểu thị bằng nanomol paranitrophenyl-β-glucuronide.

Phương pháp xác định khiếm khuyết trong myeloperoxidase: kết quả tốt nhất thu được bằng cách xác định sinh hóa H 2 0 2, cho thấy những thay đổi trong quá trình trao đổi chất trong quá trình thực bào. Đối với các mục đích thực tế, điều rất quan trọng là việc kích hoạt shunt hexose-monophosphate, khử tetrazolium nitroene và liên kết iốt ngoại sinh với protein PMNL tương quan với sự hình thành H 2 0 2 . Một phết máu thông thường được cố định trong 30 giây bằng hỗn hợp rượu và formalin. Rửa bằng nước cất và nhuộm peroxidase trong 30 giây. Trong các tế bào chứa peroxidase, các thể vùi màu xanh đậm được phát hiện.

Thử nghiệm khử tetrazolium nitro blue (TNS). THC được PMNL thông thường khử thành formazan. Trộn với 0,1 ml máu 0,1 ml dung dịch THC 0,1% trong NaCl 0,15 M, ủ 20 phút ở 37°C, trộn kỹ lại. Sự kết hợp formazan vào các tế bào được xác định bằng kính hiển vi. Kết quả được biểu thị bằng phần trăm tế bào dương tính với formazan.

Phương pháp sau đây có phần phức tạp hơn: nhỏ 1 giọt máu của bệnh nhân lên một lớp phủ. Ủ trong 20 phút ở 37°C trong buồng ẩm, sau đó rửa kính cẩn thận bằng NaCl 0,15 M vô trùng. Đặt một nắp đậy lên một phiến kính có chứa 1 giọt môi trường THC (0,5 ml huyết thanh + 0,3 ml NaCl 0,15 M vô trùng + 0,6 ml THC, xem ở trên). Ủ trong 30 phút trong buồng ẩm ở 37°C, tháo tấm kính phủ và để khô tự nhiên. Cố định bằng metanol tuyệt đối trong 60 giây và rửa bằng nước cất. Nhuộm safranin 5 phút (1 g safranin + 100 ml nước cất + 40 ml glycerin), rửa. Các tế bào dương tính với formazan lớn, giống như vụ nổ và chứa các hạt màu xanh lam. Thông thường, khoảng 30% tế bào dương tính với formazan được phát hiện trong chế phẩm.

Các phương pháp đánh giá thực bào ở trên là một bản tóm tắt của một số lượng rất lớn các ấn phẩm. Thông tin chi tiết hơn về những vấn đề này có thể được tìm thấy trong các tác phẩm có liên quan.