Fagocytoza Komórki nie tylko są zdolne do tworzenia pseudopodiów poprzez kurczenie się, ale wydzielają otaczające je płytki, które wiążą obce cząstki, takie jak cząsteczki kurzu, drobnoustroje, pozostałości martwych, zdegenerowanych komórek. Fakt, że leukocyty i inne ruchome komórki

Odporność Odporność (łac. immunitas – „wyzwolenie od czegoś”) to ochrona organizmu przed genetycznie obcymi organizmami i substancjami, do których należą mikroorganizmy, wirusy, robaki, różne białka, komórki, w tym także te własne zmienione. UWAGA Dzięki odporności

W literaturze opisano wiele metod ilościowej oceny fagocytozy. Objętość tej książki nie pozwala na szczegółowe opisanie wszystkich, dlatego ograniczymy się do opisania tylko kilku.

Materiały i ekwipunek

Do pracy musisz mieć:

Antykoagulant cytrynianowo-dekstrozowy: 8 g kwasu cytrynowego. 22 g cytrynianu trisodu (dwuwodzian) i 24,5 g glukozy rozpuszcza się w 1 litrze wody;

Roztwór dekstrozodekstranu: 4,5 g NaCl, 25 g glukozy, 30 g dekstranu (względna masa cząsteczkowa 500 000) w 1 l;

Roztwór chlorku amonu: 9 części 0,83% chlorku amonu, 1 część buforu Tris-HCl o pH 7,2 (20,6 g/l);

Mieszanka Ficoll - Visotrust: 9 g Ficoll, 20 ml Visotrust, 100 ml bidestylowanej H 2 0, gęstość 1,077;

Substrat β-glukuronidazy: 31,5 mg paranitrofenylo-β-glukuronidu i 100 µM Triton X 100 rozpuszcza się w 100 ml 0,05 M buforu octanu sodu, pH 5;

Odczynniki do oznaczania niedoboru mieloperoksydazy: utrwalacz (10 ml 37% formaldehydu z 90 ml etanolu absolutnego), roztwór substratu (100 ml 30% EDTA, 0,3 g chlorku benzydyny, 0,038 g ZnS0 4x7H 2 0, 1 ml woda destylowana, 1,0 g CH3C00Nax3H20, 0,7 ml 3% H202); dostosować pH do 6,0 za pomocą 1,0 M NaOH.

Odczynniki komercyjne:

PBS, roztwór Hanksa i podłoże Eagle-MEM (Państwowy Instytut Preparatów Odpornościowych i Pożywek Kultury, Berlin-Weissensee, NRD);

Heparyna (5000 jednostek/mg) (Gedeon Richter, Węgry);

Płodowa surowica bydlęca (Flow Laboratories, USA lub innej firmy);

Visotrust (VEB Fahlberg List, Magdeburg, NRD);

Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, NRD);

Dextran, ficoll (Pharmacia, Szwecja);

Węgiel koloidalny Cl1/143a (Wagner, Pelikanwerke, Niemcy);

ftalan diizodecylu, paradioksan (Coleman, Matheson i Bell, USA);

Triton X 100 (Serva, Niemcy lub innej firmy);

Czerwień olejowa O (Allied Chemical Corp., Morristown, NY, USA);

Iaranitrofenylo-β-glukuronid (Sigma, USA);

Safranina O (Fischer Scientific Lab., Chicago, USA);

Kulki, rurki styropianowe (Nunc, Dania);

Siatka F 905 (VEB Orvo Wolfen, NRD).

Pozyskiwanie fagocytów

Niezbędne informacje na temat izolacji ludzkich granulocytów można uzyskać w rozdziale „Separacja komórek układu odpornościowego”; informacje na temat otrzymywania makrofagów otrzewnowych można znaleźć w rozdziałach „Hodowla makrofagów i monocytów” oraz „Izolacja makrofagów z zawiesiny spleiocytów”. Zagadnienie to zostało szczegółowo omówione w szeregu prac.

Ponadto należy wspomnieć o następujących metodach:

8 ml krwi miesza się z roztworem glukozy dekstranu. Następnie dodać 6% roztwór dekstranu 75 w 0,15 M NaCl (5 ml). Mieszaninę pozostawia się na 45-50 minut w temperaturze pokojowej w celu sedymentacji czerwonych krwinek. Plazma jest wysysana. Pozostałości czerwonych krwinek poddaje się lizie poprzez dodanie 0,83% chlorku amonu (35 ml do 15 ml osocza). Wirować przez 10 minut przy 80 g, zawiesić osad w 0,15 M NaCl schłodzonym do 0°C. Połączyć kilka osadów i wirować przez 10 minut przy 800 g. Komórki najlepiej przechowywać na lodzie w 0,15 M NaCl (to podłoże jest bardziej odpowiednie niż podłoże buforowane z kationami dwuwartościowymi, które powodują zlepianie się komórek);

Jeżeli celem fagocytozy są drożdże, można pominąć etap obróbki chlorkiem amonu, ponieważ czerwone krwinki nie zakłócają tego procesu. Komórki jednojądrzaste można otrzymać w następujący sposób: heparynizowaną krew miesza się z 1/3 objętości pożywki Eagle'a zawierającej 15% glukozy, nakłada na warstwę mieszaniny Ficoll-Visotrust i wiruje przez 20 minut przy 400 g. Frakcję komórek jednojądrzastych aspiruje się pipetą Pasteura, przemywa dwukrotnie PBS i przygotowuje zawiesinę w pożywce Eagle'a (1x107 komórek/ml).

Przygotowanie cząstek do fagocytozy

Najczęściej wykorzystuje się żywe kultury Staphylococcus aureus (SG 511 lub 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli i innych enterobakterii, listerii, maczugowców, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae. Mikroorganizmy hoduje się przez 24 godziny (w razie potrzeby 48 godzin) na stałych i płynnych pożywkach. Zebraną biomasę przemywa się trzykrotnie 0,15 M NaCl. Jeżeli zawiesina jest zbyt gęsta, dokonać pomiaru przy 640 nm i określić stężenie korzystając z krzywej kalibracyjnej.

Stężenie mikroorganizmów oznacza się także metodami przesiewowymi na pożywkach stałych; W niektórych przypadkach mikroorganizmy można policzyć w komorach liczących.

Podczas pracy z żywymi kulturami bakteryjnymi należy zachować ostrożność, aby zawsze wykorzystywać kultury na tym samym etapie. Dodatek 0,01% albuminy surowicy bydlęcej sprzyja przeżywalności mikroorganizmów. Przygotowana zawiesina pozostaje stabilna przez 1-2 godziny.

Zabite kultury mikroorganizmów uzyskuje się zwykle przez ogrzewanie przez 30 minut w temperaturze 80 °C lub działanie przepływającą parą. Zabite drobnoustroje przemywa się trzykrotnie 0,15 M NaCl, ponownie zawiesza i określa stężenie zawiesiny.

Przygotowanie drożdży piekarskich: 0,5 g drożdży piekarskich zawiesza się w 0,15 M NaCl i umieszcza we wrzącej łaźni wodnej na 30 minut. Przesączyć przez filtr z gazy bawełnianej. W przypadku stosowania żywych drożdży świeże komórki (hodowla 4-5-dniowa) przemywa się trzykrotnie pożywką Eagle'a z dodatkiem 1,0% glukozy. Zazwyczaj stosuje się zawiesinę komórek o stężeniu 108 i 109 komórek/ml. Drożdże stosuje się jako cząstkę testową do wykrywania defektów składnika C5.

Stosując zawiesinę cząstek styropianu: przygotować 10% wodną zawiesinę cząstek styropianu o średnicy 1,091 mikrona. Rozcieńczyć w stosunku 1 + 1 0,2% roztworem BSA w 0,15 M NaCl i odwirować. Przy długości fali 253 nm zawiesina polistyrenu o stężeniu 1 µg/ml daje absorbancję 1,17x10-3.

Nakładanie zawiesiny lipopolisacharydu - czerwieni oleistej O w oleju mineralnym: 2 g czerwieni oleistej O rozciera się w moździerzu porcelanowym w 50 ml ftalanu diizodecylu (lub wazeliny). Wirować przez 20 minut przy 500 g. Dodać 10 µg frakcji supernatantu do 10 ml dioksyn, zmierzyć gęstość optyczną przy długości fali 525 nm. Współczynnik konwersji wynosi 0,92. W drugim etapie 40 mg lipopolisacharydu (E. coli 0,26 B6 itp.) rozpuszcza się w 3 ml 0,15 M NaCl. Następnie do tej mieszaniny dodać 1 ml roztworu czerwieni oleistej O w siarczanie diizodecylu, zawiesić mieszaninę na 90 sekund. Zawiesinę należy zużyć natychmiast i można ją zamrozić.

Aby przeprowadzić reakcję fagocytozy, jako cząstki testowe można zastosować sformalizowane erytrocyty.

Fagocytoza bakterii, działanie bakteriobójcze

Eksperymentuj z zawiesiną żywych bakterii: zwykle stosuje się stosunek 3-10 drobnoustrojów/fagocyt. W całkowitej objętości 2 ml 1x10 6 fagocytów miesza się z 3x10 6 - 1x10 7 drobnoustrojów. W praktyce 1 ml zawiesiny bakteryjnej dodaje się do 1 ml zawiesiny fagocytów, do którego dodaje się 8 IU heparyny. Czas interakcji wynosi zazwyczaj 30 minut, w niektórych przypadkach jest dłuższy. Po inkubacji pobrać 0,5 ml mieszaniny, dodać 1,5 ml 0,1% roztworu żelatyny w roztworze Hanksa, ochłodzić do 0°C i wirować przez 3-4 minuty przy 300 g. Z osadu sporządza się rozmazy i barwi je metodą Pappenheima. Przejrzyj 200 komórek (jeśli to możliwe, trzy razy). Oblicza się procent fagocytozy. Na podstawie liczby bakterii zawartych w komórkach oblicza się wskaźnik aktywności fagocytozy: liczbę fagocytozowanych bakterii mnoży się przez procent komórek fagocytujących; intensywność fagocytozy wyraża się liczbami od 1 do 4.

Stopień 1: fagocytoza bakterii I-4
Stopień 2: 5-7 bakterii uległo fagocytozie
Stopień 3: 8-10 bakterii uległo fagocytozie
Stopień 4: Fagocytozie ulega więcej niż 10 bakterii na komórkę

Przy określaniu poziomu fagocytozy żywych drobnoustrojów sprawdza się oddzielnie osad komórkowy i frakcję supernatantu. Liczbę żywych drobnoustrojów określa się przesiewając 0,1 ml badanych frakcji na pożywkę stałą. Inkubować przez 24 (48) h. Przy obliczaniu aktywności bakteriobójczej przyjmuje się, że jedna utworzona kolonia odpowiada jednemu żywemu drobnoustrojowi.

W celu ukierunkowanego badania działania bakteriobójczego bada się krew pacjentów i zdrowych dawców z dodatkiem roztworu antybiotyku (5000 jednostek penicyliny i streptomycyny/ml) lub bez niego, a także przeprowadza się kontrolę bakteryjną. Skład próbki: 0,3 ml roztworu Hanksa + 0,1 ml prawidłowej surowicy uzyskanej z krwi pobranej od 5 dawców, +0,5 ml zawiesiny leukocytów (10 7 komórek/ml) +0,1 ml zawiesiny drobnoustrojów (10 6 drobnoustrojów/ml). Dodano roztwór antybiotyku w ilości 0,02 ml na próbkę. Próbki inkubuje się w temperaturze 37°C, a liczbę drobnoustrojów określa się po 20 minutach, 1,5 godzinie i 3 godzinach. W tym celu z każdej próbki należy pobrać 0,1 ml, rozcieńczyć wybrane porcje roztworem Hanksa 10, 100 i 1000 razy i nałożyć na ogrzany agar. Czasami, zwłaszcza jeśli dodano antybiotyki, przygotowuje się rozcieńczenia pośrednie w celu dokładnego zliczenia drobnoustrojów (np. 0,2 ml próbki miesza się z 5 ml roztworu Hanksa, odwirowuje przez 5 minut przy 450 g, osad rozpuszcza się w 1,9 ml roztworu Hanksa). PBS, nałożony na agar). Jeżeli chcesz skrócić czas trwania badań bakteriologicznych, możesz określić obecność drobnoustrojów wewnątrz komórki metodą fluorescencji, stosując barwienie żółcią akrydynową.

Fagocytoza drożdży piekarskich: przygotować zawiesinę 109 komórek/ml w 0,15 M NaCl. Zmieszać 0,1 ml zawiesiny z 0,1 ml osocza pacjenta, inkubować przez 30 minut w temperaturze 37°C, dodać 0,2 ml (10 6) PMN, inkubować przez 30 minut. Porcje usuwa się w odstępach od 5 do 30 minut. Zlicza się 100 PMN i określa liczbę wychwyconych cząstek drożdży na komórkę. Znana jest modyfikacja: do 50 µl surowicy świnki morskiej dodać 50 µl surowicy testowej (wcześniej rozcieńczonej w stosunku 1 + 1 pożywką Eagle'a z glukozą), dodać 50-200 µl zawiesiny leukocytów (10 7 komórek /ml) i dostosuj objętość do 450 μl za pomocą pożywki Needle z glukozą i inkubuj przez 30 minut w temperaturze 37°C. Następnie dodać 50 µl zawiesiny drożdży (108 komórek/ml), wymieszać, inkubować przez 40 minut w temperaturze 37°C. Dodać 50 µl L-75 Se-metioniny (całkowita aktywność 100 kBq), wymieszać i inkubować przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. Komórki wytrąca się przez wirowanie przez 5 minut przy 1000 g, przemywa dwukrotnie PBS i mierzy radioaktywność licznikiem gamma. Procent fagocytowanych drożdży oblicza się ze wzoru:

Fagocytoza przy użyciu roztworu czerwieni oleistej w oleju mineralnym: 0,2 ml zawiesiny cząstek miesza się z 0,8 ml zawiesiny komórek podgrzanej do temperatury 37°C. Po 5 minutach inkubacji dodać 6 ml 0,15 M roztworu NaCl schłodzonego do 0°C zawierającego 126 µg/cl N-etylomaleimidu (w celu zatrzymania wychwytywania cząstek). Wirować przez 10 minut przy 250 g. Frakcję supernatantu odrzuca się, osad zawiesza się w roztworze NaCl i N-etylomaleimidu (patrz wyżej), a komórki przemywa się dwukrotnie. Komórki poddaje się lizie za pomocą ultradźwięków i uwalnia się czerwień oleista. Dodać 1 ml dioksanu. Wirować przez 15 minut przy 500 g, zmierzyć gęstość optyczną przy fali 525 nm w stosunku do czystego dioksanu. Stopień fagocytozy (IF) definiuje się jako ilość oleju mineralnego (mg) wchłoniętego w ciągu minuty przez 10 7 komórek. Aby obliczyć, możesz skorzystać z następującego wzoru:

Badanie fagocytozy w monowarstwie makrofagów:

1. Faza: dodać 2 ml zawiesiny komórek (200 000 komórek/ml) do sterylnych probówek polistyrenowych. Zaszczepiać przez 5 godzin w temperaturze 37°C, następnie przemyć pożywką Eagle. Dodać do probówek 2 ml pożywki hodowlanej zawierającej 10% inaktywowanej (30 min, 56°C) płodowej surowicy bydlęcej do probówek i inkubować w temperaturze 37°C.

2. Faza A: dodać zawiesinę drobnoustrojów (3-10/makrofag), inkubować 30-60 minut w temperaturze 37°C, przepłukać probówki 6 razy porcjami po 3 ml podłoża w celu usunięcia drobnoustrojów niefagocytozowanych. Natychmiast utrwalić preparat mieszaniną 1 części lodowatego kwasu octowego i 3 części metanolu. Preparat barwi się metodą May-Griinwalda i liczy komórki.

Faza B: oznaczenie żywych bakterii wewnątrzkomórkowych. Kolejność operacji jest taka sama jak w fazie A przed etapem utrwalenia. Po umyciu należy dokładnie usunąć wszelkie ślady pożywki. Komórki poddaje się lizie poprzez dodanie 2 ml 0,01% sterylnego roztworu albuminy surowicy bydlęcej (4°C) i wielokrotne wytrząsanie. Większość komórek ulega lizie po 20 minutach. Uwolnione bakterie określa się poprzez przesiewanie na stałych pożywkach.

Fagocytoza erytrocytów: zmieszać 4x10 7 fagocytów z 5x10 7 erytrocytów testowych w 5 ml PBS. Przenieść 2 ml mieszaniny do 5 mM buforu fosforanowego ochłodzonego do 0°C i odwirować. Gęstość optyczną frakcji supernatantu mierzy się przy długości fali 420 nm. Stopień fagocytozy określa się poprzez zmniejszenie zawartości hemoglobiny w fazie wolnej od komórek za pomocą krzywych kalibracyjnych.

Uproszczona metoda określania luzu

Przykład określenia klirensu u szczurów: zwierzętom wstrzykuje się dootrzewnowo 5x107 drobnoustrojów na 100 g masy ciała (0,1 ml//100 g). Optymalna dawka może wynosić od 10 6 do 10 8 na 100 g masy ciała. W odstępie 1-2 godzin ubija się po 3 osobniki z każdej grupy zwierząt doświadczalnych; Całkowity czas trwania eksperymentu wynosi 16 godzin. Pobrać sterylnie 0,5 ml krwi z serca, 1 ml płynu otrzewnowego i wyizolować płuca, wątrobę, śledzionę i nerki. Cylindry wycina się z tkanki narządów za pomocą pipety Pasteura. Liczbę mikroorganizmów określa się poprzez hodowlę na pożywkach płynnych i stałych.

Przykład oznaczania klirensu u myszy: stosuje się węgiel koloidalny lub erytrocyty owcze znakowane 51 [Cr]. Myszom (co najmniej 5 zwierząt na doświadczenie) wstrzykuje się dożylnie 0,01 ml zawiesiny węgla drzewnego w ilości 16 mg na 100 g masy ciała. W ciągu 15 minut, w odstępie 2 minut, z przestrzeni zaoczodołowej pobiera się 0,025 ml krwi. Wybrane 0,025 ml krwi dodaje się do 2,0 ml 0,1% roztworu Na2CO3. Po hemolizie stężenie węgla określa się kolorymetrycznie przy długości fali 675 nm, stosując krzywe kalibracyjne.

t – czas w minutach, C – stężenie węgla w próbce.

Skorygowana wartość fagocytozy:

Funkcjonalne badanie przesiewowe fagocytów

Oznaczanie degranulacji (pomiar aktywności (β-glukuropidaza): 107 leukocytów zawiesza się w 0,8 ml PBS w plastikowych probówkach, wytrząsa przez 5 minut w temperaturze 37°C. Dodaj 0,2 ml uczulonego LPS, cząstek fluorochromu (FC 80), ostudzić 30 min na lodzie, wirować 10 minut przy 250 g. We frakcji supernatantu sprawdzić aktywność enzymu. Inkubować 0,9 ml mieszaniny substratów przez 18 godzin z 0,1 ml frakcji testowej. Dodać 2 ml 0,1 M NaOH. , zmierzyć gęstość optyczną przy długości fali 410 nm.

Obliczenie:

(OD 410 x 20)/(1,84 x 18) = liczba nmoli substancji uwolnionej w ciągu 1 godziny przez 10 7 leukocytów, tj. stopień degranulacji wyraża się w nanomolach paranitrofenylo-β-glukuronidu.

Metoda oznaczania defektów mieloperoksydazy: najlepsze wyniki daje biochemiczne oznaczanie H 2 0 2, wskazujące na zmiany metabolizmu w procesie fagocytozy. Ze względów praktycznych bardzo ważne jest, aby aktywacja bocznika heksozowo-monofosforanowego, redukcja nitroenu tetrazoliowego i wiązanie egzogennego jodu z białkami PMN korelowały z tworzeniem się H 2 0 2. Regularny rozmaz krwi utrwala się na 30 sekund mieszaniną alkoholu i formaliny. Przemyć wodą destylowaną i barwić na obecność peroksydazy przez 30 sekund. W komórkach zawierających peroksydazę wykrywa się wtręty w kolorze ciemnoniebieskim.

Test redukcji nitrobluku tetrazoliowego (TNB). THC jest redukowane przez normalne PMN do formazanu. Zmieszać 0,1 ml 0,1% roztworu THC w 0,15 M NaCl z 0,1 ml krwi, inkubować przez 20 minut w temperaturze 37°C i ponownie dokładnie wymieszać. Włączenie formazanu do komórek określa się metodą mikroskopową. Wynik wyraża się jako procent komórek pozytywnych pod względem formazanu.

Następująca metoda jest nieco bardziej skomplikowana: 1 kroplę krwi pacjenta nanosi się na szkiełko nakrywkowe. Inkubować przez 20 minut w temperaturze 37°C w wilgotnej komorze, następnie ostrożnie umyć szkło sterylnym 0,15 M NaCl. Na szkiełku nakrywkowym umieścić 1 kroplę podłoża THC (0,5 ml surowicy + 0,3 ml sterylnego 0,15 M NaCl + 0,6 ml THC, patrz wcześniej). Inkubować przez 30 minut w wilgotnej komorze w temperaturze 37°C, zdjąć szkiełko nakrywkowe i wysuszyć na powietrzu. Utrwalić absolutnym metanolem przez 60 sekund i przemyć wodą destylowaną. Barwić przez 5 minut safraniną (1 g safraniny + 100 ml wody destylowanej + 40 ml gliceryny), przemyć. Komórki dodatnie pod względem formazanu są duże, przypominają komórki blastyczne i zawierają niebieskie granulki. Zwykle w preparacie wykrywa się około 30% komórek dodatnich pod względem formazanu.

Powyższe metody oceny fagocytozy stanowią podsumowanie bardzo dużej liczby publikacji. Bardziej szczegółowe informacje na ten temat można znaleźć w odpowiednich pracach.

Fagocytoza (od greckich phago – pożerać i cytos – komórka) to proces wchłaniania i trawienia substancji antygenowych, w tym mikroorganizmów, przez komórki pochodzenia mezodermalnego, tzw. fagocyty. I. I. Mechnikov podzielił fagocyty na makrofagi i mikrofagi. Obecnie makro- i mikrofagi są łączone w zunifikowany system makrofagów (SMF). System ten obejmuje:

• makrofagi tkankowe – komórki nabłonkowe,
• retikuloendoteliocyty gwiaździste (komórki Kupffera),
• makrofagi pęcherzykowe i otrzewnowe zlokalizowane w pęcherzykach i jamie otrzewnej,
• białe procesy epidermocytów skóry (komórki Langerhansa) itp.

Mikrofagi obejmują:

• neutrofile,
• eozynofile,
• bazofile.

Funkcje makrofagów niezwykle zróżnicowane. To one jako pierwsze reagują na obcą substancję, będąc wyspecjalizowanymi komórkami, które absorbują i niszczą obce substancje w organizmie (komórki umierające, komórki nowotworowe, bakterie, wirusy i inne mikroorganizmy, antygeny, niemetabolizowane substancje nieorganiczne). Ponadto makrofagi wytwarzają wiele substancji biologicznie czynnych – enzymy (m.in. lizozym, peroksydaza, esteraza), białka dopełniacza, immunomodulatory takie jak interleukiny. Obecność receptorów dla immunoglobulin (Am) i dopełniacza na powierzchni makrofagów, a także układu mediatorów, zapewnia ich interakcję z limfocytami T i B. W tym przypadku makrofagi aktywują funkcje ochronne limfocytów T. Dzięki obecności receptorów dopełniacza i Am oraz Ag układu zgodności tkankowej (HLA), makrofagi biorą udział w wiązaniu i rozpoznawaniu antygenów. Zatem fagocyty pełnią trzy funkcje:

• ochronny, związany z oczyszczaniem organizmu z czynników zakaźnych, produktów rozpadu tkanek itp.;
• prezentacja, polegająca na prezentacji antygenowych epitoli na błonie fagocytów limfocytom;
• wydzielniczy, związany z wydzielaniem enzymów lizosomalnych i innych substancji biologicznie czynnych - cytokin, które odgrywają ważną rolę w immunogenezie.

Wyróżnia się następujące procesy sekwencyjne: etap fagocytozy.

• Chemotaksja– ukierunkowany ruch fagocytów w kierunku gradientu chemicznego chemoatraktantów w środowisku. Zdolność do chemotaksji wiąże się z obecnością na błonie specyficznych receptorów dla chemoatraktantów (obiektów fagocytozy), którymi mogą być bakterie, produkty degradacji tkanek organizmu itp.
• Przyczepność(przyłączenie) również odbywa się za pośrednictwem odpowiednich receptorów, ale może przebiegać zgodnie z prawami niespecyficznego oddziaływania fizykochemicznego. Cząsteczki są adsorbowane na powierzchni makrofagów.
• Endocytoza(wychwytywanie) - następuje inwazja błony komórkowej, wychwytywanie obcej cząstki i jej zanurzenie w protoplazmie. W wyniku endocytozy powstaje wakuola fagocytarna - fagosom(tj. bąbel w protoplazmie wokół zaabsorbowanej cząstki).
• Trawienie wewnątrzkomórkowe– zaczyna się od wchłonięcia fagocytozowanych obiektów. Fagosom łączy się z lizosomem fagocytu, zawierającym dziesiątki enzymów i tworzy się fagolizosom (zniszczenie) wychwyconej cząsteczki przez enzymy. Po wchłonięciu cząstka należąca do samego organizmu (na przykład martwa komórka lub jej części, własne białka) zostaje rozłożona przez enzymy fagolizosomalne na substancje nieantygenowe (aminokwasy, kwasy tłuszczowe, nukleotydy, monosacharydy). Jeśli obca cząstka zostanie wchłonięta, wówczas enzymy fagolizosomu nie są w stanie rozbić substancji na składniki nieantygenowe. W takich przypadkach fagolizosom wraz z pozostałą częścią antygenu, który pozostaje obcy, zostaje przeniesiony przez makrofag do limfocytów T i B, co oznacza, że ​​zostaje włączone specyficzne połączenie odporności.

Funkcja wydzielnicza polega na wydzielaniu przez fagocyty substancji biologicznie czynnych – cytokin – są to interleukina-1 i interleukina-2, które są mediatorami komórkowymi, które mają regulacyjny wpływ na proliferację, różnicowanie i funkcje fagocytów, limfocytów, limfoblastów i innych komórek. Makrofagi wytwarzają i wydzielają tak ważne czynniki regulatorowe jak prostaglandyny, leukotrieny, cykliczne nukleotydy o szerokim spektrum aktywności biologicznej. Ponadto makrofagi syntetyzują i wydzielają szereg produktów o działaniu przeciwbakteryjnym, przeciwwirusowym i cytotoksycznym (rodniki tlenowe O2-H2O2, lizozym, interferon itp.).

Fagocytoza jest wzmacniana przez przeciwciała opsoniny, ponieważ związany antygen jest łatwiej adsorbowany na powierzchni fagocytu, ze względu na obecność w nim receptorów dla tych przeciwciał. To wzmocnienie fagocytozy przez przeciwciała nazywa się opsonizacja, tj. przygotowanie mikroorganizmów do wychwycenia przez fagocyty. Fagocytoza opsonizowanych antygenów nazywana jest immunologiczną.

Aby scharakteryzować aktywność fagocytozy, wskaźnik fagocytarny. Aby to określić, pod mikroskopem liczy się liczbę bakterii wchłoniętych przez jeden fagocyt. Także używany indeks opsonofagocytarny, reprezentujący stosunek wskaźników fagocytarnych uzyskanych dla surowicy odpornościowej i nieodpornej. Indeks fagocytarny i indeks opsonofagocytarny wykorzystywane są w immunologii klinicznej do oceny stanu odporności i statusu odpornościowego.

Fagocytoza odgrywa ważną rolę w ochronie antybakteryjnej, przeciwgrzybiczej i przeciwwirusowej, utrzymując odporność organizmu na obce substancje. Fagocyty działają także aktywująco i supresyjnie na limfocyty, biorą udział w odbudowie tolerancji immunologicznej, odporności przeciwinfekcyjnej, transplantacyjnej i przeciwnowotworowej oraz w niektórych postaciach alergii (HTZ).