फॅगोसाइटोसिस पेशी केवळ आकुंचन करून स्यूडोपोडिया तयार करू शकत नाहीत, ते धूलिकण, सूक्ष्मजंतू, मृत पेशींचे अवशेष, क्षीण झालेल्या पेशी यांसारखे परदेशी कण निश्चित करण्यासाठी लिफाफा प्लेट्स स्राव करतात. वस्तुस्थिती अशी आहे की ल्यूकोसाइट्स आणि इतर मोबाइल

इम्युनिटी इम्युनिटी (अक्षांश. इम्युनिटास - "एखाद्यापासून मुक्ती") शरीराचे अनुवांशिकदृष्ट्या परकीय जीव आणि पदार्थांपासून संरक्षण आहे, ज्यामध्ये सूक्ष्मजीव, विषाणू, वर्म्स, विविध प्रथिने, पेशी, त्यांच्या स्वत: च्या बदललेल्या वस्तूंचा समावेश होतो. लक्ष प्रतिरक्षा धन्यवाद

साहित्यात फागोसाइटोसिसचे प्रमाण मोजण्यासाठी मोठ्या संख्येने पद्धती वर्णन केल्या आहेत. या पुस्तकाचे खंड आम्हाला त्या सर्वांचे तपशीलवार वर्णन करण्याची परवानगी देत ​​​​नाही, म्हणून आम्ही केवळ काही वर्णन करण्यापुरतेच मर्यादित राहू.

साहित्य आणि उपकरणे

कार्य करण्यासाठी, आपल्याकडे असणे आवश्यक आहे:

सायट्रेटेडएक्सट्रोज अँटीकोआगुलंट: 8 ग्रॅम साइट्रिक ऍसिड. 22 ग्रॅम ट्रायसब्स्टिट्यूट सोडियम सायट्रेट (दोन-पाणी), 24.5 ग्रॅम ग्लुकोज 1 लिटर पाण्यात विरघळतात;

डेक्स्ट्रोसोडेक्सट्रान द्रावण: 4.5 ग्रॅम NaCl, 25 ग्रॅम ग्लुकोज, 30 ग्रॅम डेक्सट्रान (rel. mol. wt. 500,000) 1 l मध्ये;

अमोनियम क्लोराईड द्रावण: 9 भाग 0.83% अमोनियम क्लोराईड, 1 भाग Tris-HCl बफर pH 7.2 (20.6 g/l);

फिकॉलचे मिश्रण - विझोट्रास्ट: फिकॉलचे 9 ग्रॅम, व्हिझोट्रास्टचे 20 मिली, बिडस्टिल्ड एच 2 0 100 मिली, घनता 1.077;

β-glucuronidase साठी सब्सट्रेट: 31.5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronide आणि 100 μm Triton X 100 100 ml 0.05 M सोडियम एसीटेट बफर pH 5 मध्ये विसर्जित केले जातात;

मायलोपेरॉक्सिडेस डेफिशियन्सी अभिकर्मक: फिक्सेटिव्ह (90 मिली अॅबसोल्युट इथेनॉलसह 10 मिली 37% फॉर्मल्डिहाइड), सब्सट्रेट सोल्यूशन (100 मिली 30% ईडीटीए, 0.3 ग्रॅम बेंझिडाइन क्लोराईड, 0.038 ग्रॅम ZnS0 4 x7H 2 0, 0.0 मिली लिटर पाणी 3 C00Nax3H 2 0, 0.7 मिली 3% H 2 0 2); 1.0 M NaOH चा pH 6.0 वर आणा.

व्यावसायिक अभिकर्मक:

एफएसबी, हँकचे सोल्यूशन आणि ईगल-एमईएम माध्यम (स्टेट इन्स्टिट्यूट फॉर इम्यून प्रिपरेशन्स अँड न्यूट्रिएंट मीडिया, बर्लिन-वेइसेंसी, जीडीआर);

हेपरिन (5000 IU/mg) (Gedeon Richter, Hungary);

गोवाइन भ्रूणांचे सीरम (फ्लो लॅबोरेटरीज, यूएसए, दुसरी कंपनी वापरली जाऊ शकते);

Visotrast (VEB Fahlberg सूची, Magdeburg, GDR);

इन्फुकोल (VEB Serumwerk Bernburg, GDR);

डेक्सट्रान, फिकॉल (फार्मेसिया, स्वीडन);

कोलोइडल कार्बन Сl1/143a (वॅगनर, पेलिकनवेर्के, जर्मनी);

Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson and Bell, USA);

ट्रायटन एक्स 100 (सर्वा, जर्मनी, दुसरी कंपनी शक्य आहे);

ऑइल रेड ओ (अलाईड केमिकल कॉर्प., मॉरिसटाउन, एनवाय, यूएसए);

Iaranitrophenyl-β-glucuronide (सिग्मा, यूएसए);

Safranin O (फिशर सायंटिफिक लॅब., शिकागो, यूएसए);

पॉलीस्टीरिन मणी, नळ्या (नंक, डेन्मार्क);

ग्रिड F 905 (VEB Orvo Wolfen, GDR).

फॅगोसाइट्स मिळवणे

मानवी ग्रॅन्युलोसाइट्सच्या अलगावबद्दल आवश्यक माहिती "प्रतिरक्षा प्रणालीच्या पेशींचे पृथक्करण" या अध्यायात मिळू शकते; पेरीटोनियल मॅक्रोफेज मिळविण्यासाठी, "मॅक्रोफेज आणि मोनोसाइट्सची लागवड" आणि "स्प्लीओसाइट्सच्या निलंबनापासून मॅक्रोफेजचे अलगाव" विभाग पहा. या समस्येचा अनेक कामांमध्ये तपशीलवार विचार केला जातो.

याव्यतिरिक्त, खालील पद्धती देखील नमूद केल्या पाहिजेत:

डेक्स्ट्राँग्लुकोजच्या द्रावणात 8 मिली रक्त मिसळले जाते. नंतर 0.15 M NaCl (5 ml) मध्ये dextran 75 चे 6% द्रावण घाला. एरिथ्रोसाइट्सच्या अवसादनासाठी हे मिश्रण खोलीच्या तपमानावर 45-50 मिनिटे सोडले जाते. एस्पिरेट प्लाझ्मा. अवशिष्ट एरिथ्रोसाइट्स 0.83% अमोनियम क्लोराईड (35 मिली ते 15 मिली प्लाझ्मा) जोडून नष्ट केले जातात. 80g वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा, 0.15 M NaCl 0°C पर्यंत थंड झालेल्या अवक्षेपाला निलंबित करा. 800 ग्रॅम वर 10 मिनिटे अनेक अवक्षेपण आणि सेंट्रीफ्यूज एकत्र करा. पेशी बर्फावर 0.15 M NaCl मध्ये उत्तम प्रकारे ठेवल्या जातात (हे माध्यम बफर केलेल्या माध्यमापेक्षा अधिक योग्य आहे द्विसंयोजक केशन्स ज्यामुळे पेशी एकत्र चिकटतात);

जर फागोसाइटोसिसची वस्तु यीस्ट असेल तर, अमोनियम क्लोराईड उपचाराची पायरी वगळली जाऊ शकते, कारण लाल रक्तपेशी प्रक्रियेत व्यत्यय आणत नाहीत. मोनोन्यूक्लियर पेशी खालीलप्रमाणे मिळू शकतात: हेपरिनाइज्ड रक्त 15% ग्लुकोज असलेल्या गरुड माध्यमाच्या 1/3 प्रमाणात मिसळले जाते, फिकॉल - व्हिसोट्रास्टच्या मिश्रणाच्या थरावर स्तरित केले जाते आणि 400 ग्रॅमवर ​​20 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केले जाते. मोनोन्यूक्लियर पेशींचा अंश पाश्चर विंदुकाने एस्पिरेट केला जातो, पीबीएसने दोनदा धुतला जातो आणि ईगलच्या माध्यमात (1x10 7 पेशी/मिली) निलंबन तयार केले जाते.

फागोसाइटोसिससाठी कण तयारी

Staphylococcus aureus (SG 511 किंवा 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli आणि इतर एन्टरोबॅक्टेरिया, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae चे लाइव्ह कल्चर्स जास्त वापरले जातात. घन आणि द्रव पोषक माध्यमांवर सूक्ष्मजीव 24 तास (आवश्यक असल्यास, 48 तास) वाढतात. गोळा केलेले बायोमास 0.15 M NaCl ने तीन वेळा धुतले जाते. खूप जाड निलंबन 640 एनएम वर मोजले जाते, एकाग्रता कॅलिब्रेशन वक्र वरून निर्धारित केली जाते.

सूक्ष्मजीवांची एकाग्रता दाट पोषक माध्यमांवर चाळण्याच्या पद्धतींद्वारे देखील निर्धारित केली जाते; काही प्रकरणांमध्ये, सूक्ष्मजीवांची गणना मोजणी कक्षांमध्ये केली जाऊ शकते.

जिवंत जिवाणू संस्कृतींसोबत काम करताना, एकाच टप्प्यावर संस्कृतींचा नेहमी वापर करण्याची काळजी घेतली पाहिजे. 0.01% बोवाइन सीरम अल्ब्युमिनची जोडणी सूक्ष्मजीवांच्या अस्तित्वाला प्रोत्साहन देते. तयार केलेले निलंबन 1-2 तास स्थिर राहते.

मारले गेलेले सूक्ष्मजीव संवर्धन सामान्यतः 80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे गरम करून किंवा वाहत्या वाफेवर उपचार करून मिळवले जातात. मारले गेलेले सूक्ष्मजंतू 0.15 M NaCl सह तीन वेळा धुतले जातात, पुन्हा निलंबित केले जातात आणि निलंबनाची एकाग्रता निश्चित केली जाते.

बेकरचे यीस्ट तयार करणे: 0.5 ग्रॅम बेकरचे यीस्ट 0.15 M NaCl मध्ये निलंबित केले जाते आणि 30 मिनिटे उकळत्या पाण्याच्या बाथमध्ये ठेवले जाते. कापूस-गॉझ फिल्टरद्वारे फिल्टर करा. लाइव्ह यीस्ट वापरताना, 1.0% ग्लुकोजच्या व्यतिरिक्त ताज्या पेशी (4-5 दिवसांचे कल्चर) ईगलच्या माध्यमात तीन वेळा धुतात. सामान्यतः 10 8 आणि 10 9 पेशी/ml चे सेल सस्पेंशन वापरले जाते. घटक C5 मधील दोष शोधण्यासाठी यीस्टचा वापर चाचणी कण म्हणून केला जातो.

पॉलिस्टीरिन कणांचे निलंबन वापरणे: 1.091 μm व्यासासह पॉलीस्टीरिन कणांचे 10% जलीय निलंबन तयार करा. ते 0.15 M NaCl मध्ये 0.2% BSA सोल्यूशनसह 1 + 1 च्या प्रमाणात पातळ केले जाते, सेंट्रीफ्यूज केले जाते. 253 nm च्या तरंगलांबीवर, पॉलिस्टीरिन 1 μg/ml चे निलंबन 1.17x10 -3 चे शोषण देते.

लिपोपोलिसॅकराइडचे निलंबन वापरणे - खनिज तेलामध्ये तेल लाल O: 2 ग्रॅम तेल लाल एका पोर्सिलेन मोर्टारमध्ये 50 मिली डायसोडेसिल फॅथलेट (किंवा व्हॅसलीन तेल) मध्ये ट्रायट्यूरेटेड केले जाते. 500 ग्रॅम वर 20 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज. डायऑक्सिनच्या 10 मिलीलीटरमध्ये 10 μg सुपरनाटंट अंश जोडा, 525 एनएमच्या तरंगलांबीवर ऑप्टिकल घनता मोजा. रूपांतरण घटक 0.92 आहे. दुस-या टप्प्यावर, 40 मिलीग्राम लिपोपॉलिसॅकेराइड (ई. कोलाई 0.26 बी6, इ.) 0.15 एम NaCl च्या 3 मिलीमध्ये विरघळले जाते. नंतर या मिश्रणात डायसोडेसिल सल्फेटमधील तेलकट लाल O चे 1 मिली द्रावण जोडले जाते आणि मिश्रण 90 सेकंदांसाठी निलंबित केले जाते. निलंबन ताबडतोब वापरले जाते आणि गोठवले जाऊ शकते.

फॅगोसाइटोसिस प्रतिक्रिया सेट करण्यासाठी, औपचारिक एरिथ्रोसाइट्सचा वापर चाचणी कण म्हणून केला जाऊ शकतो.

बॅक्टेरियाचे फागोसाइटोसिस, जीवाणूनाशक

लाइव्ह बॅक्टेरिया सस्पेंशन प्रयोग: 3-10 सूक्ष्मजंतू/फॅगोसाइटचे प्रमाण सहसा वापरले जाते. एकूण 2 मिली वॉल्यूममध्ये, 1x10 6 फॅगोसाइट्स 3x10 6 - 1x10 7 सूक्ष्मजंतूंसह मिसळले जातात. प्रॅक्टिसमध्ये, 1 मिलीलीटर फागोसाइट सस्पेंशनमध्ये 1 मिली बॅक्टेरियल सस्पेंशन जोडले जाते, ज्यामध्ये हेपरिनचे 8 आययू जोडले जातात. परस्परसंवादाची वेळ सहसा 30 मिनिटे असते, काही प्रकरणांमध्ये ती जास्त असते. उष्मायनानंतर, 0.5 मिली मिश्रण घेतले जाते, 0.1% जिलेटिनच्या द्रावणातील 1.5 मिली हँकच्या द्रावणात, 0 डिग्री सेल्सिअस पर्यंत थंड केले जाते, जोडले जाते आणि 300 ग्रॅमवर ​​3-4 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केले जाते. पेपेनहाइमनुसार डाग असलेल्या अवक्षेपणापासून स्मीअर तयार केले जातात. 200 सेल पहा (शक्य असल्यास तीन वेळा). फॅगोसाइटोसिसच्या टक्केवारीची गणना करा. पेशींमध्ये असलेल्या जीवाणूंच्या संख्येनुसार, फागोसाइटोसिस क्रियाकलापांच्या निर्देशांकाची गणना केली जाते: फागोसाइटाइज्ड बॅक्टेरियाची संख्या फॅगोसाइटिक पेशींच्या टक्केवारीने गुणाकार केली जाते; फॅगोसाइटोसिसची तीव्रता 1 ते 4 पर्यंतच्या संख्येद्वारे व्यक्त केली जाते.

ग्रेड 1: I-4 बॅक्टेरियासह फॅगोसाइटोज्ड
ग्रेड 2: फॅगोसाइटोज्ड 5-7 जीवाणू
ग्रेड 3: फॅगोसाइटोज्ड 8-10 जीवाणू
ग्रेड 4: 10 पेक्षा जास्त जीवाणू प्रति सेल फॅगोसाइटोज्ड

जिवंत सूक्ष्मजंतूंच्या फॅगोसाइटोसिसची पातळी निर्धारित करताना, सेल सेडमेंट आणि सुपरनेटंट अंश स्वतंत्रपणे तपासले जातात. अभ्यास केलेल्या अपूर्णांकांपैकी 0.1 मिली घन पोषक माध्यमांवर चाळणी करून जिवंत सूक्ष्मजंतूंची संख्या निश्चित केली जाते. 24 (48) तास उष्मायन केले जाते जिवाणूनाशक क्रियाकलापांची गणना करताना, असे गृहीत धरले जाते की एक बनलेली वसाहत एका जिवंत सूक्ष्मजंतूशी संबंधित आहे.

जीवाणूनाशक क्रियाकलापांच्या निर्देशित अभ्यासासाठी, रुग्ण आणि निरोगी रक्तदात्यांचे रक्त प्रतिजैविक द्रावण (पेनिसिलिन आणि स्ट्रेप्टोमायसिन / एमएलचे 5000 आययू) जोडून आणि त्याशिवाय तपासले जाते आणि बॅक्टेरियाचे नियंत्रण देखील केले जाते. नमुना रचना: 0.3 मिली हँकचे द्रावण + 0.1 मिली सामान्य सीरम 5 रक्तदात्यांकडून घेतलेले रक्त + 0.5 मिली ल्यूकोसाइट सस्पेंशन (10 7 पेशी / मिली) + 0.1 मिली मायक्रोबियल सस्पेंशन (10 6 सूक्ष्मजीव/मिली). प्रति नमुन्यात प्रतिजैविकांचे द्रावण 0.02 मिली मध्ये जोडले जाते. 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात नमुने उबवा आणि 20 मिनिटे, 1.5 तास आणि 3 तासांनंतर सूक्ष्मजंतूंची संख्या निश्चित करा. हे करण्यासाठी, प्रत्येक नमुन्यातून 0.1 मिली घ्या, निवडलेल्या एलिकोट्सला हँकच्या द्रावणाने 10, 100 आणि 1000 वेळा पातळ करा आणि गरम केलेल्या आगरला लावा. काहीवेळा, विशेषत: प्रतिजैविक जोडले गेले असल्यास, सूक्ष्मजंतू अचूकपणे मोजण्यासाठी इंटरमीडिएट डायल्युशन तयार केले जातात (उदाहरणार्थ, 0.2 मिली नमुना हँकच्या 5 मिली द्रावणात मिसळला जातो, 450 ग्रॅमवर ​​5 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज केला जातो, अवक्षेपण 1.9 मिली मध्ये विसर्जित केले जाते. PBS चे, आगर वर लागू). जर तुम्हाला बॅक्टेरियोलॉजिकल अभ्यासाचा कालावधी कमी करायचा असेल, तर तुम्ही ऍक्रिडाइन यलो स्टेनिंगचा वापर करून फ्लोरोसेन्सद्वारे सेलमधील सूक्ष्मजंतू निर्धारित करू शकता.

बेकरच्या यीस्टचे फॅगोसाइटोसिस: 0.15 M NaCl मध्ये 10 9 पेशी/मिली निलंबन तयार करा. रुग्णाच्या प्लाझ्माच्या 0.1 मिली निलंबनात 0.1 मिली मिसळा, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे उबवा, 0.2 मिली (10 6) पीएमएनएल घाला, 30 मिनिटे उष्मायन करा. अलिकोट्स 5 ते 30 मिनिटांच्या अंतराने घेतले जातात. 100 PMN मोजले जातात आणि प्रति सेल कॅप्चर केलेल्या यीस्ट कणांची संख्या निर्धारित केली जाते. खालील बदल ज्ञात आहेत: 50 µl चाचणी सीरम गिनी पिग सीरमच्या 50 µl मध्ये जोडले जाते (पूर्वी ते 1 + 1 च्या प्रमाणात ग्लुकोजसह ईगलच्या माध्यमाने पातळ केले जाते), 50-200 µl ल्युकोसाइट्सचे निलंबन ( 10 7 पेशी / एमएल) जोडले जाते, व्हॉल्यूम 450 μl पर्यंत समायोजित केले जाते आणि ग्लुकोजसह मध्यम सुईने 30 मिनिटे 37 डिग्री सेल्सियस तापमानात उबवले जाते. नंतर 50 μl यीस्ट सस्पेंशन (10 8 पेशी/मिली) घाला, मिक्स करा, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 40 मिनिटे उबवा. 50 μl L-75 Se-methionine (एकूण क्रियाकलाप 100 kBq) घाला, मिक्स करा आणि 37 °C वर 1 तास उबवा. 1000 ग्रॅम वर 5 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे पेशींचा अवक्षेप केला जातो, ते पीबीएसने दोनदा धुतले जातात, रेडिओएक्टिव्हिटी गामा काउंटरवर मोजली जाते. फॅगोसाइटोसेड यीस्टची टक्केवारी सूत्रानुसार मोजली जाते:

खनिज तेलामध्ये तेल लाल रंगाचे द्रावण वापरून फॅगोसाइटोसिस: ०.२ मिली कण सस्पेन्शन ०.८ मिली सेल सस्पेन्शन ३७ डिग्री सेल्सिअस पर्यंत गरम केले जाते. उष्मायनाच्या 5 मिनिटांनंतर, 0.15 M NaCl द्रावणाचे 6 मिली 0°C पर्यंत थंड केले जाते ज्यामध्ये 126 μg/l N-ethylmaleimide (कण पकडणे थांबवण्यासाठी) जोडले जाते. 250 ग्रॅम वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा. सुपरनेटंट अंश टाकून दिला जातो, NaCl आणि N-ethylmaleimide (वरील पहा) च्या द्रावणात अवक्षेपण पुन्हा केले जाते, पेशी दोनदा धुतल्या जातात. पेशी अल्ट्रासाऊंडसह लिस्ड केल्या जातात, तेल लाल सोडले जाते. डायऑक्सेन 1 मिली घाला. 500 ग्रॅम वर 15 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केले, शुद्ध डायऑक्सेनच्या विरूद्ध 525 एनएम तरंगलांबीवर ऑप्टिकल घनता मोजा. फॅगोसाइटोसिस (IF) ची डिग्री 10 7 पेशींद्वारे प्रति मिनिट शोषले जाणारे खनिज तेल (मिग्रॅ) म्हणून परिभाषित केले जाते. गणना करण्यासाठी आपण खालील सूत्र वापरू शकता:

मॅक्रोफेजच्या मोनोलेयरमध्ये फॅगोसाइटोसिसचा अभ्यास:

1. टप्पा: 2 मिली सेल सस्पेंशन (200,000 पेशी/मिली) निर्जंतुकीकरण पॉलीस्टीरिन ट्यूबमध्ये जोडले जातात. 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5 तास लसीकरण करा, नंतर ईगलच्या माध्यमाने धुवा. 10% निष्क्रिय (30 मिनिटे, 56 °C) गोवाइन भ्रूणांचे सीरम असलेले 2 मिली कल्चर माध्यम चाचणी ट्यूबमध्ये जोडले जाते, 37 °C तापमानावर उष्मायन केले जाते.

2. फेज A: सूक्ष्मजंतूंचे निलंबन (3-10/मॅक्रोफेज) सादर केले जाते, 37 °C तापमानात 30-60 मिनिटे उबवले जाते, नॉन-फॅगोसाइटोज्ड सूक्ष्मजंतू काढून टाकण्यासाठी माध्यमाच्या 3 मिली भागांसह नळ्या 6 वेळा धुवल्या जातात. 1 भाग ग्लेशियल ऍसिटिक ऍसिड आणि 3 भाग मिथेनॉलच्या मिश्रणाने त्वरित निराकरण करा. मे नुसार तयारी डाग - ग्रिनवाल्ड, पेशी मोजा.

फेज बी: इंट्रासेल्युलर जिवंत जीवाणूंचे निर्धारण. ऑपरेशन्सचा क्रम फिक्सेशन स्टेजच्या आधी फेज ए प्रमाणेच आहे. धुतल्यानंतर, माध्यमाचे सर्व ट्रेस काळजीपूर्वक काढून टाका. पेशी नष्ट केल्या जातात, ज्यासाठी बोवाइन सीरम अल्ब्युमिन (4°C) च्या 0.01% निर्जंतुकीकरण द्रावणात 2 मिली जोडले जाते, वारंवार हलवले जाते. 20 मिनिटांनंतर बहुतेक पेशी नष्ट होतात. सोडलेले जीवाणू दाट पोषक माध्यमांवर चाळणी करून निर्धारित केले जातात.

एरिथ्रोसाइट्सचे फॅगोसाइटोसिस: पीबीएसच्या 5 मिली मध्ये 4x10 7 फॅगोसाइट्स 5x10 7 चाचणी एरिथ्रोसाइट्ससह मिसळा. 0 डिग्री सेल्सिअस आणि सेंट्रीफ्यूजवर थंड झालेल्या 5 मिमी फॉस्फेट बफरमध्ये 2 मिली मिश्रण स्थानांतरित करा. 420 nm च्या तरंगलांबीवर सुपरनॅटंट अंशाची ऑप्टिकल घनता मोजा. कॅलिब्रेशन वक्र वापरून सेल-फ्री टप्प्यात हिमोग्लोबिन सामग्रीमध्ये घट झाल्यामुळे फॅगोसाइटोसिसची डिग्री निर्धारित केली जाते.

क्लिअरन्स निश्चित करण्यासाठी सरलीकृत पद्धत

उंदरांमध्ये क्लिअरन्स निश्चित करण्याचे उदाहरण: प्राण्यांना इंट्रापेरिटोनली इंट्रापेरिटोनली इंजेक्ट केले जाते 5x10 7 सूक्ष्मजंतू प्रति 100 ग्रॅम वजनाच्या (0.1 मिली//100 ग्रॅम). इष्टतम डोस प्रति 100 ग्रॅम वजनाच्या 10 6 ते 10 8 पर्यंत असू शकतो. 1-2 तासांच्या अंतराने, प्रायोगिक प्राण्यांच्या प्रत्येक गटातून 3 व्यक्तींची कत्तल केली जाते; प्रयोगाचा एकूण कालावधी 16 तास. निर्जंतुकपणे हृदयातून 0.5 मिली रक्त, पेरीटोनियल द्रवपदार्थ 1 मिली, फुफ्फुस, यकृत, प्लीहा आणि मूत्रपिंड स्राव करा. पाश्चर विंदुकाने अंगाच्या ऊतीमधून सिलेंडर कापले जातात. द्रव आणि घन पोषक माध्यमांवर संवर्धन करून सूक्ष्मजीवांची संख्या निश्चित करा.

उंदरांमध्ये क्लिअरन्स निश्चित करण्याचे उदाहरण: कोलाइडल चारकोल किंवा 51 [Cr] रॅम एरिथ्रोसाइट्ससह लेबल केलेले वापरले जातात. उंदरांना (प्रति अनुभव किमान 5 व्यक्ती) 0.01 मिली कोळशाच्या सस्पेंशनसह 16 मिलीग्राम प्रति 100 ग्रॅम वजनाने इंट्राव्हेनस इंजेक्शन दिले जातात. 2 मिनिटांच्या अंतराने 15 मिनिटांच्या आत, रेट्रोऑर्बिटल स्पेसमधून 0.025 मिली रक्त घेतले जाते. निवडलेले 0.025 मिली रक्त 0.1% Na 2 C0 3 च्या 2.0 मिली द्रावणात जोडले जाते. हेमोलिसिसनंतर, कॅलिब्रेशन वक्र वापरून कोळशाची एकाग्रता 675 एनएमच्या तरंगलांबीवर रंगीतपणे निर्धारित केली जाते.

t म्हणजे मिनिटातील वेळ, C हे नमुन्यातील कार्बनचे प्रमाण आहे.

फॅगोसाइटोसिसचे योग्य मूल्य:

फागोसाइट्सची कार्यात्मक तपासणी

डीग्रॅन्युलेशन निर्धारण (क्रियाकलाप मोजमाप (β-glucuropidase): 10 7 ल्यूकोसाइट्स प्लास्टिकच्या नळ्यांमध्ये 0.8 मिली पीबीएसमध्ये निलंबित केले जातात, 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5 मिनिटे हलवले जातात. 0.2 मिली सेन्सिटाइज्ड एलपीएस, फ्लोरोक्रोमिक कण (एफसी 800) जोडा. बर्फावर मिनिटे, 250 ग्रॅम वर 10 मिनिटे सेंट्रीफ्यूज करा सुपरनेटंट अंशातील एंझाइमची क्रिया तपासा 0.9 मिली सब्सट्रेट मिश्रणाचा 0.1 मिली तपासलेल्या अंशासह 18 तास उष्मायन करा 0.1 एम NaOH चे 2 मिली जोडा, ऑप्टिकल घनता मोजा तरंग 410 nm वर.

गणना:

(OD 410 x20)/(1.84x18) = 10 7 ल्युकोसाइट्सद्वारे 1 तासात सोडलेल्या पदार्थाच्या nmol ची संख्या, म्हणजेच degranulation ची डिग्री paranitrophenyl-β-glucuronide च्या nanomoles मध्ये व्यक्त केली जाते.

मायलोपेरॉक्सिडेसमधील दोषांचे निर्धारण करण्याची पद्धत: एच 2 0 2 च्या जैवरासायनिक निर्धाराने सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त होतात, जे फॅगोसाइटोसिस दरम्यान चयापचयातील बदल दर्शवितात. व्यावहारिक हेतूंसाठी, हेक्सोज-मोनोफॉस्फेट शंटचे सक्रियकरण, टेट्राझोलियम नायट्रोइन कमी करणे आणि पीएमएनएल प्रथिनांना एक्सोजेनस आयोडीनचे बंधन H 2 0 2 च्या निर्मितीशी संबंधित असणे खूप महत्वाचे आहे. अल्कोहोल आणि फॉर्मेलिनच्या मिश्रणासह 30 सेकंदांसाठी नियमित रक्त स्मीअर निश्चित केले जाते. डिस्टिल्ड पाण्याने धुऊन, पेरोक्सिडेजसाठी 30 सेकंदांसाठी डाग. पेरोक्सिडेस असलेल्या पेशींमध्ये, गडद निळ्या रंगात डागलेले समावेश शोधले जातात.

टेट्राझोलियम नायट्रो ब्लू (TNS) कमी करण्यासाठी चाचणी. THC सामान्य PMNL ने फॉर्मझानमध्ये कमी केले आहे. 0.1 मिली रक्त 0.1 मिली THC ​​चे 0.1% द्रावण 0.15 M NaCl मध्ये मिसळा, 37 ° C वर 20 मिनिटे उष्मायन करा, पुन्हा चांगले मिसळा. पेशींमध्ये फॉर्मॅझनचा समावेश मायक्रोस्कोपीद्वारे निर्धारित केला जातो. परिणाम फॉर्मॅझन-पॉझिटिव्ह पेशींची टक्केवारी म्हणून व्यक्त केला जातो.

खालील पद्धत थोडी अधिक क्लिष्ट आहे: रुग्णाच्या रक्ताचा 1 थेंब कव्हरस्लिपवर लावला जातो. आर्द्र चेंबरमध्ये 37°C तापमानावर 20 मिनिटे उष्मायन करा, नंतर काच काळजीपूर्वक 0.15 M NaCl ने धुवा. THC माध्यमाचा 1 थेंब असलेल्या स्लाइडवर कव्हर स्लिप ठेवा (0.5 मिली सीरम + 0.3 मिली निर्जंतुकीकरण 0.15 M NaCl + 0.6 मिली THC, वर पहा). आर्द्र चेंबरमध्ये 37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 30 मिनिटे उबवा, कव्हरस्लिप काढा आणि हवा कोरडी करा. 60 सेकंदांसाठी परिपूर्ण मिथेनॉलसह निराकरण करा आणि डिस्टिल्ड पाण्याने धुवा. safranin (1 ग्रॅम safranin + 100 ml डिस्टिल्ड वॉटर + 40 ml ग्लिसरीन) सह 5 मिनिटे डाग, धुवा. फॉर्मझान-पॉझिटिव्ह पेशी मोठ्या, स्फोटासारख्या असतात आणि त्यात निळे ग्रेन्युल असतात. सहसा, तयारीमध्ये सुमारे 30% फॉर्मॅझन-पॉझिटिव्ह पेशी आढळतात.

फागोसाइटोसिसचे मूल्यांकन करण्यासाठी वरील पद्धती खूप मोठ्या प्रमाणात प्रकाशनांचा सारांश आहेत. या मुद्द्यांवर अधिक तपशीलवार माहिती संबंधित कामांमध्ये आढळू शकते.

फागोसाइटोसिस (ग्रीक फागो - I devour and cytos - a cell मधून) सूक्ष्मजीवांसह प्रतिजैविक पदार्थांचे शोषण आणि पचन करण्याची प्रक्रिया आहे, ज्याला मेसोडर्मल उत्पत्तीच्या पेशी म्हणतात. फॅगोसाइट्स. I. I. मेकनिकोव्हने फागोसाइट्सचे विभाजन केले मॅक्रोफेजेस आणि मायक्रोफेजेस. सध्या, मॅक्रो- आणि मायक्रोफेजेस एकत्र आहेत मॅक्रोफेजची एकल प्रणाली (SMF). या प्रणालीमध्ये हे समाविष्ट आहे:

• टिश्यू मॅक्रोफेज - एपिथेलिओइड पेशी,
• स्टेलेट रेटिक्युलोएन्डोथेलियोसाइट्स (कुफ्फर पेशी),
• alveolar आणि peritoneal macrophages alveoli आणि peritoneal cavity मध्ये स्थित आहे,
• त्वचेची पांढरी प्रक्रिया एपिडर्मोसाइट्स (लॅन्गरहन्स पेशी), इ.

मायक्रोफेजमध्ये समाविष्ट आहे:

• न्यूट्रोफिल्स,
• इओसिनोफिल्स,
• बेसोफिल्स

मॅक्रोफेजची कार्येअत्यंत वैविध्यपूर्ण. परदेशी पदार्थावर प्रतिक्रिया देणारे ते पहिले आहेत, विशेष पेशी आहेत ज्या शरीरातील परदेशी पदार्थ शोषून घेतात आणि नष्ट करतात (मृत पेशी, कर्करोगाच्या पेशी, जीवाणू, विषाणू आणि इतर सूक्ष्मजीव, प्रतिजन, गैर-चयापचय अजैविक पदार्थ). याव्यतिरिक्त, मॅक्रोफेज अनेक जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थ तयार करतात - एन्झाईम्स (लायसोझाइम, पेरोक्सीडेस, एस्टेरेससह), पूरक प्रथिने, इंटरल्यूकिन्स सारख्या इम्युनोमोड्युलेटर. इम्युनोग्लोबुलिन (Am) आणि पूरक साठी रिसेप्टर्सच्या मॅक्रोफेजच्या पृष्ठभागावरील उपस्थिती, तसेच मध्यस्थांची एक प्रणाली, टी- आणि बी-लिम्फोसाइट्ससह त्यांचे परस्परसंवाद सुनिश्चित करते. त्याच वेळी, मॅक्रोफेज टी-लिम्फोसाइट्सचे संरक्षणात्मक कार्य सक्रिय करतात. पूरक आणि Am, तसेच हिस्टोकॉम्पॅटिबिलिटी सिस्टम एजी (एचएलए) साठी रिसेप्टर्सच्या उपस्थितीमुळे, मॅक्रोफेजेस प्रतिजनांच्या बंधनात आणि ओळखण्यात गुंतलेले असतात. अशा प्रकारे, फागोसाइट्सची तीन कार्ये आहेत:

• संरक्षक, संक्रामक एजंट, ऊतींचे क्षय उत्पादने इत्यादींच्या शरीराच्या शुद्धीकरणाशी संबंधित;
• फॅगोसाइट झिल्लीवरील लिम्फोसाइट्सला प्रतिजैनिक एपिटॉल्सच्या सादरीकरणामध्ये प्रतिनिधित्व करणारे;
• सेक्रेटरी, लाइसोसोमल एंजाइम आणि इतर जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थांच्या स्रावशी संबंधित - साइटोकिन्स, जी इम्युनोजेनेसिसमध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावतात.

खालील क्रमाने वाहते आहेत फागोसाइटोसिसचे टप्पे.

• केमोटॅक्सिस- वातावरणातील केमोएट्रॅक्टंट्सच्या रासायनिक ग्रेडियंटच्या दिशेने फागोसाइट्सची लक्ष्यित हालचाल. केमोटॅक्सिसची क्षमता केमोएट्रॅक्टंट्स (फॅगोसाइटोसिसच्या वस्तू) साठी विशिष्ट रिसेप्टर्सच्या पडद्यावरील उपस्थितीशी संबंधित आहे, जे जीवाणू, शरीराच्या ऊतींचे ऱ्हास उत्पादने इत्यादी असू शकतात.
• आसंजन(संलग्नक) देखील संबंधित रिसेप्टर्सद्वारे मध्यस्थी केली जाते, परंतु गैर-विशिष्ट भौतिक-रासायनिक परस्परसंवादाच्या नियमांनुसार पुढे जाऊ शकते. मॅक्रोफेजच्या पृष्ठभागावर कण शोषले जातात.
• एंडोसाइटोसिस(कॅप्चर) - सेल झिल्लीचे आक्रमण होते, परदेशी कण कॅप्चर होतो आणि प्रोटोप्लाझममध्ये त्याचे विसर्जन होते. एंडोसाइटोसिसच्या परिणामी, फागोसाइटिक व्हॅक्यूओल तयार होते - फागोसोम(म्हणजे, शोषलेल्या कणाभोवती प्रोटोप्लाझममधील बबल).
• इंट्रासेल्युलर पचन- फॅगोसाइटोज्ड वस्तूंच्या शोषणापासून सुरू होते. फागोसोम फॅगोसाइटच्या लाइसोसोममध्ये विलीन होतो, ज्यामध्ये डझनभर एंजाइम असतात आणि एन्झाईमद्वारे पकडलेल्या कणाचा फागोलिसोसोम (विनाश) तयार होतो. जेव्हा जीवाशी संबंधित कण स्वतःच शोषला जातो (उदाहरणार्थ, मृत पेशी किंवा त्याचे भाग, स्वतःचे प्रथिने), ते फॅगोलिसोसोम एन्झाईम्सद्वारे गैर-अँटीजेनिक पदार्थांमध्ये (अमीनो ऍसिड, फॅटी ऍसिडस्, न्यूक्लियोटाइड्स, मोनोसुगर) विभाजित केले जातात. जर एखादा परदेशी कण शोषला गेला असेल तर फॅगोलिसोसोमचे एन्झाईम पदार्थाचे विघटन करण्यास सक्षम नसतात ते नॉन-एंटीजेनिक घटकांमध्ये. अशा परिस्थितीत, अँटीजनच्या उर्वरित भागासह फॅगोलिसोसोम ज्याने त्याचे परकीयपणा टिकवून ठेवले आहे ते मॅक्रोफेजद्वारे टी- आणि बी-लिम्फोसाइट्समध्ये प्रसारित केले जाते, म्हणजेच, प्रतिकारशक्तीचा एक विशिष्ट दुवा चालू केला जातो.

गुप्त कार्यजैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थांच्या फागोसाइट्सद्वारे स्राव होतो - साइटोकाइन्स - हे इंटरल्यूकिन -1 आणि इंटरल्यूकिन -2 आहेत, जे सेल्युलर मध्यस्थ आहेत ज्यांचा फागोसाइट्स, लिम्फोसाइट्स, लिम्फोब्लास्ट्स आणि इतर पेशींच्या प्रसार, भिन्नता आणि कार्यावर नियामक प्रभाव पडतो. मॅक्रोफेजेस प्रोस्टॅग्लॅंडिन्स, ल्युकोट्रिएन्स, चक्रीय न्यूक्लियोटाइड्स सारख्या महत्त्वपूर्ण नियामक घटकांची निर्मिती आणि स्राव करतात ज्यात जैविक क्रियाकलापांच्या विस्तृत श्रेणी आहेत. याव्यतिरिक्त, मॅक्रोफेजेस बॅक्टेरियाच्या वाढीस प्रतिबंध करणारा पदार्थ, अँटीव्हायरल आणि सायटोटॉक्सिक क्रियाकलाप (ऑक्सिजन रॅडिकल्स O2-H2O2, लाइसोझाइम, इंटरफेरॉन इ.) सह अनेक उत्पादनांचे संश्लेषण आणि स्राव करतात.

फागोसाइटोसिस हे ऑप्सोनिन ऍन्टीबॉडीज द्वारे वर्धित केले जाते, कारण या ऍन्टीबॉडीजच्या रिसेप्टर्सच्या उपस्थितीमुळे फागोसाइटच्या पृष्ठभागावर बांधलेले किंवा प्रतिजन अधिक सहजपणे शोषले जाते. ऍन्टीबॉडीजद्वारे फॅगोसाइटोसिसच्या या वाढीस म्हणतात opsonization, म्हणजे फागोसाइट्सद्वारे कॅप्चर करण्यासाठी सूक्ष्मजीव तयार करणे. Opsonized antigens च्या Phagocytosis ला रोगप्रतिकारक म्हणतात.

phagocytosis च्या क्रियाकलाप वैशिष्ट्यीकृत करण्यासाठी ओळख फागोसाइटिक निर्देशांक.हे निर्धारित करण्यासाठी, एका फागोसाइटद्वारे शोषलेल्या जीवाणूंची संख्या सूक्ष्मदर्शकाखाली मोजली जाते. तसेच आनंद घ्या opsonophagocytic निर्देशांकरोगप्रतिकारक आणि नॉन-इम्यून सीरमसह प्राप्त झालेल्या फागोसाइटिक पॅरामीटर्सचे गुणोत्तर दर्शविते. रोग प्रतिकारशक्ती आणि रोगप्रतिकारक स्थितीचे मूल्यांकन करण्यासाठी क्लिनिकल इम्यूनोलॉजीमध्ये फॅगोसाइटिक इंडेक्स आणि ऑप्सोनोफॅगोसाइटिक इंडेक्स वापरले जातात.

फागोसाइटोसिस जीवाणूरोधी, अँटीफंगल आणि अँटीव्हायरल संरक्षणामध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते, शरीराचा परदेशी पदार्थांचा प्रतिकार राखतो. फागोसाइट्सचा लिम्फोसाइट्सवर सक्रिय आणि दडपशाही प्रभाव देखील असतो, रोगप्रतिकारक सहिष्णुतेच्या पुनरुत्थानात भाग घेतात, संसर्गविरोधी, प्रत्यारोपण आणि अँटीट्यूमर प्रतिकारशक्ती आणि काही प्रकारचे ऍलर्जी (एचआरटी).