उपकरणे आणि अभिकर्मक: क्रोमॅटोग्राफिक पेपर; क्रोमॅटोग्राफिक चेंबर; फोटोइलेक्ट्रिक रंगमापक; कात्री; काचेच्या प्लेट्स (3x32 सेमी) - 3 पीसी.; क्रोमॅटोग्रामसाठी धारक; कोरडे कॅबिनेट; मायक्रोपिपेट्स; ग्राउंड स्टॉपर्ससह चाचणी ट्यूब; बुरेट 25 मिली; अमीनो ऍसिडचे मानक मिश्रण; अमीनो ऍसिडचे चाचणी मिश्रण; ब्युटानॉल, ऍसिटिक ऍसिड, 15:3:7 च्या प्रमाणात पाणी; 95% एसीटोनमध्ये निनहायड्रिनचे 1% द्रावण; इथाइल अल्कोहोल (75%), तांबे सल्फेटसह संतृप्त.

काम पूर्ण करणे

18x28 सेमी मोजमापाचा क्रोमॅटोग्राफिक पेपर घ्या आणि त्याच्या लहान काठापासून 3 सेमी अंतरावर साध्या पेन्सिलने आडवी रेषा काढा. मग ते संलग्न योजनेनुसार असमान विभागांमध्ये विभागले गेले आहे आणि मानक आणि चाचणी मिश्रणाच्या वापराच्या सीमा बाणांनी चिन्हांकित केल्या आहेत आणि संबंधित शिलालेख एका साध्या पेन्सिलने बनवले आहेत.

कागद टेबलच्या पृष्ठभागाच्या वर आणि सुरुवातीच्या ओळीवर निश्चित केला आहे, बाणांनी मर्यादित आहे, मानक मिश्रण प्रथम विशिष्ट मायक्रोपिपेटसह पातळ रेषेत लागू केले जाते जोपर्यंत मायक्रोपिपेटचे संपूर्ण सोल्यूशन स्टार्ट लाइनवर हस्तांतरित केले जात नाही (मायक्रोपिपेट भरले जाते). 2-3 सेमी). लागू केलेल्या द्रावणाचे वस्तुमान मानक मिश्रणाने भरलेल्या पिपेटचे वजन करून (द्रावण लागू करण्यापूर्वी) आणि रिक्त (द्रावण लागू केल्यानंतर) मोजले जाते. 0.02-0.03 ग्रॅम मानक द्रावण सामान्यतः कागदावर लागू केले जाते. नंतर एक स्वच्छ विंदुक अमीनो ऍसिडच्या मिश्रणाने भरा (अभ्यासासाठी शिक्षकांनी दिलेले), त्याचे वजन करा आणि मिश्रण योग्य चिन्हासह सुरुवातीच्या ओळीवर लावा.

तयार केलेला क्रोमॅटोग्राम एका क्रोमॅटोग्राफिक चेंबरमध्ये ठेवला जातो ज्यामध्ये अमीनो ऍसिडचे मिश्रण वेगळे करण्यासाठी त्यामध्ये पूर्वी ओतलेल्या सॉल्व्हेंट्सची प्रणाली असते, उदाहरणार्थ, 15:3:7 च्या प्रमाणात बुटानॉल, ऍसिटिक ऍसिड आणि पाण्याचे मिश्रण. क्रोमॅटोग्राफिक पेपरच्या (फिनिश लाइन) वरच्या काठावर समोरची रेषा 2-3 सेमी पर्यंत पोहोचेपर्यंत चढत्या क्रोमॅटोग्राफीद्वारे वेगळे केले जाते. त्यानंतर, क्रोमॅटोग्राम चेंबरमधून काढून टाकला जातो आणि कागदाच्या वरच्या टोकाला ताबडतोब तीन काचेच्या रॉडने बनवलेल्या होल्डरमध्ये रबर रिंगने बांधले जाते आणि पेपरमधून सॉल्व्हेंट्स काढण्यासाठी 20 मिनिटांसाठी फ्युम हुडमध्ये ठेवले जाते.

तांदूळ. 8. क्रोमॅटोग्रामवर एमिनो ऍसिडच्या व्यवस्थेची योजना:

अ - अमीनो ऍसिडचे मिश्रण लागू करण्याचा बिंदू; मी - सिस्टिन आणि सिस्टीन;

2 - लाइसिन; 3 - हिस्टिडाइन; 4 - आर्जिनिन; 5 - एस्पार्टिक ऍसिड,

मालिका आणि ग्लाइसिन; 6 - ग्लूटामिक ऍसिड आणि थ्रोनिन; 7 - अॅलनाइन;

8 - प्रोलिन; 9 - टायरोसिन; 10 - व्हॅलिन आणि मेथिओनाइन; II - ट्रिप्टोफॅन;

12 - फेनिलॅलानिन; 13 - leucine आणि isoleucine

वाळलेल्या क्रोमॅटोग्रामला एसीटोनमध्ये निनहायड्रिनच्या 1% द्रावणात बुडवून त्यावर अमीनो ऍसिड स्पॉट्सचे स्थान शोधले जाते. त्यानंतर क्रोमॅटोग्राम एसीटोन काढून टाकण्यासाठी फ्युम हुडमध्ये 10 मिनिटांसाठी ठेवले जाते आणि ओव्हनमध्ये स्थानांतरित केले जाते, जिथे ते 70 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 15 मिनिटे सोडले जाते. मानक आणि चाचणी मिश्रणाचे अमीनो अॅसिड्स स्टार्ट लाइनपासून क्रोमॅटोग्रामच्या वरच्या काठापर्यंत सॉल्व्हेंट सिस्टमच्या दिशेने एका साखळीत निळ्या-व्हायलेट स्पॉट्स म्हणून शोधले जातात.

चाचणी मिश्रणामध्ये समाविष्ट असलेल्या अमीनो ऍसिडची ओळख मानक आणि चाचणी मिश्रण (चित्र 8) च्या अमीनो ऍसिडने व्यापलेल्या पोझिशन्सच्या क्रोमॅटोग्रामवर योगायोगाने केली जाते.

चाचणी मिश्रणातील अमीनो आम्लांची परिमाणात्मक सामग्री निश्चित करण्यासाठी, क्रोमॅटोग्राम एका साध्या पेन्सिलने काढला जातो जेणेकरून समान स्तरावर पडलेले रंगीत झोन, समान अमीनो आम्लाशी संबंधित, अंदाजे समान आयतामध्ये बंद केले जातील (चित्र 9) .

I II III IV

तांदूळ. 9. क्रोमॅटोग्रामवर अमीनो ऍसिडच्या व्यवस्थेची योजना:

मी - मिश्रण क्रमांक I; II - मिश्रण क्रमांक 2; 1U - मिश्रण क्रमांक 3; Ш - मानक

अमीनो आम्ल मिश्रण

कागदाचे बाह्यरेखा केलेले विभाग कापले जातात आणि चाचणी ट्यूबमध्ये ठेवले जातात, ज्याची संख्या क्रोमॅटोग्रामवरील स्पॉट्सच्या संख्येशी संबंधित असावी. मध सल्फेटसह संतृप्त इथाइल अल्कोहोलच्या 75% द्रावणाचे 10 मिली प्रत्येक चाचणी ट्यूबमध्ये ब्युरेटमधून ओतले जाते (500 मिली एथिल अल्कोहोलमध्ये कॉपर सल्फेटचे संतृप्त द्रावण 0.2 मिली जोडले जाते). चाचणी ट्यूब कॉर्कने बंद केली जाते आणि वेळोवेळी ढवळत असताना, विट-लाल रंगाचे संपूर्ण संक्रमण (रुमनच्या निळ्या-व्हायलेटचे तांबे मीठ) कागदापासून द्रावणात केले जाते. यास 15-20 मिनिटे लागतात. मानक आणि चाचणी सोल्यूशन्सचे शोषण (ऑप्टिकल घनता) हिरवा प्रकाश फिल्टर (540 nm) असलेल्या फोटोइलेक्ट्रोकॅलोरीमीटरवर मोजले जाते. कॉपर सल्फेटसह इथाइल अल्कोहोलचे 75% द्रावण असलेले क्युवेट संदर्भ प्रवाहात स्थापित केले आहे.

चाचणी सोल्युशनमधील अमीनो ऍसिडची परिमाणवाचक सामग्री चाचणी आणि मानक नमुन्यांच्या विलुप्ततेच्या गुणोत्तरावरून मोजली जाते.

गणना उदाहरण. असे गृहीत धरा की मानक मिश्रणामध्ये 1 मिली मध्ये 1.8 मिलीग्राम ग्लाइसिन असते, या मानक द्रावणाचा 0.02 ग्रॅम सुरुवातीच्या पट्टीवर लागू केला जातो. म्हणून, क्रोमॅटोग्रामला (1.8×0.02) = 0.036 mg glycine मिळाले. आपण पुढे मान्य करूया की रंगीत द्रावणांचे शोषण प्रमाणासाठी 0.288 आणि अज्ञात मिश्रणासाठी 0.336 होते. नंतर क्रोमॅटोग्रामवर लागू केलेल्या चाचणी मिश्रणातील ग्लाइसिनची सामग्री असेल (36´0.336): 0.288=42 µg. जर आपण पुढे असे गृहीत धरले की चाचणी मिश्रण क्रोमॅटोग्रामवर 0.0250 ग्रॅमच्या प्रमाणात लागू केले आहे, तर चाचणी द्रावणाच्या 1 मिली मध्ये ग्लाइसिनची सामग्री (42: 0.0250) = 1680 μg, किंवा 1.68 mg असेल. / मिली.

तुमच्या स्वतःच्या प्रयोगाचे परिणाम काढा, त्यातून निष्कर्ष काढा.

प्रयोगशाळा #15

आयन वेगळे करणेफे 3+ , सह 2+ , नि 2+

रंगाच्या प्रतिक्रियांचा वापर करून अमीनो ऍसिड शोधले जाऊ शकतात: ninhydrin, xantoprotein, Fol, Milon, biuret चाचण्या इ. या प्रतिक्रिया विशिष्ट नाहीत, कारण अमीनो ऍसिडच्या संरचनेतील वैयक्तिक तुकड्यांच्या शोधावर आधारित आहेत, जे इतर संयुगेमध्ये देखील येऊ शकतात.

Ninhydrin प्रतिक्रिया, अमीनो अॅसिड, इमिनो अॅसिड आणि अमाइन्सच्या गुणात्मक आणि परिमाणवाचक निर्धारासाठी वापरलेली रंग प्रतिक्रिया. प्राथमिक अमिनो गट (-NH 2) असलेल्या पदार्थांसह ninhydrin (triketohydrindenhydrate, C 9 H b O 4) च्या क्षारीय माध्यमात गरम केल्यावर, सुमारे 570 च्या जास्तीत जास्त शोषणासह एक स्थिर तीव्र निळा-व्हायलेट रंग असलेले उत्पादन तयार होते. nm. या तरंगलांबीवरील शोषण मुक्त अमीनो गटांच्या संख्येवर रेखीयपणे अवलंबून असल्याने, रंगमिति किंवा स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रीद्वारे त्यांच्या परिमाणवाचक निर्धारासाठी निनहायड्रिन प्रतिक्रिया आधार म्हणून काम करते. ही प्रतिक्रिया इमिनो ऍसिडस् - प्रोलाइन आणि हायड्रॉक्सीप्रोलीनमधील दुय्यम अमीनो गट (> एनएच) निर्धारित करण्यासाठी देखील वापरली जाते; या प्रकरणात, एक चमकदार पिवळा उत्पादन तयार होतो. संवेदनशीलता - 0.01% पर्यंत. अमीनो ऍसिडचे आयन-विनिमय पृथक्करण आणि निनहायड्रिन प्रतिक्रिया वापरून त्यांचे परिमाणात्मक निर्धारण एकत्रित करून आधुनिक स्वयंचलित अमीनो ऍसिड विश्लेषण केले जाते. पेपर क्रोमॅटोग्राफीद्वारे अमीनो ऍसिडचे मिश्रण वेगळे करताना, प्रत्येक अमीनो ऍसिड किमान 2-5 μg च्या प्रमाणात निर्धारित केले जाऊ शकते.

रंगाच्या तीव्रतेवरून अमीनो ऍसिडचे प्रमाण ठरवता येते.

ही प्रतिक्रिया केवळ मुक्त अमीनो ऍसिडसहच नाही तर पेप्टाइड्स, प्रथिने इत्यादींसह देखील सकारात्मक आहे.

झँटोप्रोटीन प्रतिक्रियासुगंधी न्यूक्लियस (नायट्रेशन) मध्ये इलेक्ट्रोफिलिक प्रतिस्थापनाच्या प्रतिक्रियेवर आधारित सुगंधी अमीनो ऍसिड (फेनिलॅलानिन, टायरोसिन, हिस्टिडाइन, ट्रिप्टोफॅन) शोधण्याची परवानगी देते.

एकाग्र नायट्रिक ऍसिडच्या कृती अंतर्गत, उदाहरणार्थ, टायरोसिनवर, एक पिवळा उत्पादन तयार होतो.

फोलची प्रतिक्रिया.ही सिस्टीन आणि सिस्टिनची प्रतिक्रिया आहे. अल्कधर्मी हायड्रोलिसिस दरम्यान, सिस्टीन आणि सिस्टिनमधील "कमकुवत बांधलेले सल्फर" ऐवजी सहजपणे विभाजित होते, परिणामी हायड्रोजन सल्फाइड तयार होते, जे अल्कलीशी प्रतिक्रिया देऊन सोडियम किंवा पोटॅशियम सल्फाइड देते. जेव्हा शिसे(II) एसीटेट जोडले जाते, तेव्हा शिसे(II) सल्फाइडचा राखाडी-काळा अवक्षेप तयार होतो.

अनुभवाचे वर्णन. चाचणी ट्यूबमध्ये 1 मिली सिस्टिन द्रावण घाला, 0.5 मिली 20% सोडियम हायड्रॉक्साइड द्रावण घाला. मिश्रण उकळण्यासाठी गरम केले जाते आणि नंतर 0.5 मिली लीड (II) एसीटेट द्रावण जोडले जाते. शिसे(II) सल्फाइडचा राखाडी-काळा अवक्षेप दिसून येतो:

झिमरमन प्रतिक्रिया.ही अमीनो ऍसिड ग्लाइसिनची प्रतिक्रिया आहे.

अनुभवाचे वर्णन. ग्लाइसिनच्या 0.1% द्रावणाच्या 2 मिली, pH = 8 मध्ये अल्कलीचे 10% द्रावण जोडून समायोजित करून, ओ-फॅथलिक डायल्डिहाइडच्या जलीय द्रावणाचे 0.5 मिली ओतणे. प्रतिक्रिया मिश्रण हळूहळू चमकदार हिरवे होऊ लागते. काही मिनिटांनंतर, एक हिरवा वर्षाव दिसून येतो.

ट्रिप्टोफॅनला प्रतिसाद.ट्रिप्टोफॅन, अॅल्डिहाइड्ससह अम्लीय वातावरणात प्रतिक्रिया देऊन, रंगीत संक्षेपण उत्पादने तयार करतात. उदाहरणार्थ, ग्लायऑक्सिलिक ऍसिडसह (जे एकाग्र केलेल्या ऍसिटिक ऍसिडची अशुद्धता आहे), प्रतिक्रिया समीकरणानुसार पुढे जाते:

फॉर्मल्डिहाइडसह ट्रिप्टोफॅनची प्रतिक्रिया समान योजनेनुसार पुढे जाते.

साकागुचीची प्रतिक्रिया.एमिनो ऍसिड आर्जिनिनची ही प्रतिक्रिया ऑक्सिडायझिंग एजंटच्या उपस्थितीत α-naphthol सह आर्जिनिनच्या परस्परसंवादावर आधारित आहे. त्याची यंत्रणा अद्याप पूर्णपणे स्पष्ट झालेली नाही. वरवर पाहता, प्रतिक्रिया खालील समीकरणानुसार चालते:

क्विनोनिमाइन्सचे डेरिव्हेटिव्ह्ज (या प्रकरणात, नॅफ्थोक्विनोन), ज्यामध्ये इमिनो ग्रुप –NH– च्या हायड्रोजनची जागा अल्काइल किंवा आर्यल रॅडिकलने घेतली आहे, ते नेहमी पिवळ्या-लाल टोनमध्ये रंगलेले असतात, नंतर, वरवर पाहता, नारंगी-लाल साकागुची प्रतिक्रियेदरम्यान द्रावणाचा रंग अचूकपणे नॅफ्थोक्विनोनिमाइन डेरिव्हेटिव्ह दिसण्यामुळे होतो. तथापि, आर्जिनिन अवशेषांच्या उर्वरित NH गट आणि α-naphthol च्या बेंझिन रिंगच्या पुढील ऑक्सिडेशनमुळे आणखी जटिल कंपाऊंड तयार होण्याची शक्यता वगळली जात नाही:

अनुभवाचे वर्णन. आर्जिनिनच्या 0.01% द्रावणाचे 2 मिली चाचणी ट्यूबमध्ये घाला, नंतर सोडियम हायड्रॉक्साइडच्या 10% द्रावणात 2 मिली आणि α-नॅफथॉलच्या 0.2% अल्कोहोल द्रावणाचे काही थेंब घाला. ट्यूबची सामग्री चांगली मिसळली जाते, 0.5 मिली हायपोब्रोमाइट द्रावण जोडले जाते आणि पुन्हा मिसळले जाते. वेगाने विकसित होणारा नारिंगी-लाल रंग स्थिर करण्यासाठी 40% युरिया द्रावणात 1 मिली ताबडतोब जोडले जाते.

बाय्युरेट प्रतिक्रिया- प्रथिनांसाठी रंग प्रतिक्रिया म्हणून वापरले जाते. तांबे (II) क्षारांच्या उपस्थितीत अल्कधर्मी वातावरणात, ते जांभळा रंग देतात. तांबे (II) कॉम्प्लेक्स कंपाऊंडच्या निर्मितीमुळे, पेप्टाइड गटामुळे रंग येतो -CO-NH-जे प्रथिनांचे वैशिष्ट्य आहे. या प्रतिक्रियेला युरियाच्या व्युत्पन्नापासून त्याचे नाव मिळाले - बियुरेट, जो अमोनियाच्या निर्मूलनासह युरिया गरम करून तयार होतो:

प्रथिने आणि बियुरेट व्यतिरिक्त, या गटातील इतर संयुगे देखील समान डाग देतात: एमाइड्स, कार्बोक्झिलिक ऍसिडचे इमिड्स, तसेच रेणूमध्ये -CS-NH- किंवा \u003d CH-NH- गट असलेले संयुगे. प्रथिने, काही अमीनो ऍसिडस्, पेप्टाइड्स, बाय्युरेट आणि मध्यम पेप्टोन देखील प्रतिक्रिया देतात.

वेगवेगळ्या पेप्टाइड्ससह बियुरेट प्रतिक्रियाद्वारे प्राप्त झालेल्या कॉम्प्लेक्सचा रंग काहीसा वेगळा असतो आणि पेप्टाइड साखळीच्या लांबीवर अवलंबून असतो. चार अमिनो आम्ल अवशेषांच्या साखळी लांबीच्या आणि त्यावरील पेप्टाइड्स लाल कॉम्प्लेक्स बनवतात, ट्रायपेप्टाइड्स - जांभळा आणि डायपेप्टाइड्स - निळा.

पॉलीपेप्टाइडचे केटोन फॉर्म

पॉलीपेप्टाइडचे एनॉल फॉर्म

जेव्हा पॉलीपेप्टाइड Cu (OH) 2 शी संवाद साधते तेव्हा एक कॉम्प्लेक्स तयार होते, ज्याची रचना खालीलप्रमाणे दर्शविली जाऊ शकते.

अमीनो ऍसिडचे निर्धारण करण्याच्या पद्धती

अमीनो ऍसिड हे जैविक दृष्ट्या सक्रिय पदार्थ आहेत, ते मानवी शरीराच्या जीवनात महत्वाची भूमिका बजावतात, ते औषधे म्हणून मोठ्या प्रमाणावर वापरले जातात. त्यापैकी काही अपरिहार्य आहेत आणि अन्नाने शरीरात प्रवेश करतात. सध्या, औषधी वनस्पती सामग्री, औषधे आणि जैविक द्रवपदार्थ आणि अन्न उत्पादनांमध्ये अमीनो ऍसिडचे परिमाणात्मक निर्धारण करण्यासाठी अनेक पद्धती आहेत.

विविध वस्तूंमधील अमीनो ऍसिडचे परिमाणवाचक निर्धारण करण्याच्या पद्धतींमधून, चार मुख्य गट ओळखले जाऊ शकतात: क्रोमॅटोग्राफिक, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक, टायट्रिमेट्रिक आणि इलेक्ट्रोकेमिकल विश्लेषण पद्धती.

क्रोमॅटोग्राफिक पद्धती

गेल्या दशकांमध्ये, अमीनो ऍसिडच्या गॅस-लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीच्या क्षेत्रात महत्त्वपूर्ण प्रगती केली गेली आहे. मायक्रोपॅक केलेले स्तंभ वापरण्याची एक पद्धत प्रस्तावित आहे, जी तुलनेने कमी वेळेत जवळजवळ पूर्णपणे 17 जैविकदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण α-amino ऍसिड वेगळे करणे शक्य करते.

सीरम, प्लाझ्मा, मूत्र आणि सेरेब्रोस्पाइनल फ्लुइडच्या नमुन्यांमध्ये गॅस-लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर करून अमीनो ऍसिडचे निर्धारण करण्यासाठी 2,3,4,5,6-पेंटाफ्लुरोबेन्झॉयल-आयसोब्युटाइल इथरच्या आधारावर एक पद्धत विकसित केली गेली आहे, त्यानंतर फ्लेम आयनीकरण डिटेक्टरसह 140°C ते 250°C पर्यंत तापमान प्रोग्रामिंग मोडमध्ये पॉलीडिमेथिलसिलॉक्सेनच्या स्तंभावर वेगळे करणे. क्रोमॅटोग्राफिक पृथक्करण वेळ 28 मिनिटे आहे. संशोधनाच्या परिणामी, 27 अमीनो ऍसिड वेगळे करणे शक्य झाले.

एमिनो ऍसिडच्या विश्लेषणामध्ये उच्च कार्यक्षमता द्रव क्रोमॅटोग्राफीच्या विविध पद्धती असूनही, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक डिटेक्शनसह उलट-फेज आवृत्ती सर्वात अर्थपूर्ण आणि प्रवेशयोग्य आहे. यशस्वी पृथक्करण आणि शोधासाठी, अमीनो ऍसिडचे हायड्रोफोबिक आणि प्रकाश-शोषक डेरिव्हेटिव्ह्जमध्ये रूपांतरित केले जाते, म्हणजेच प्री-कॉलम डेरिव्हेटायझेशन केले जाते. डेरिव्हेटायझेशनसाठी अभिकर्मक म्हणून, ऑर्थोफ्थालाल्डिहाइड, नॅप्थलीन-2,3-डायकार्बोक्झायलडीहाइड, 9-फ्लोरेनिल्मेथिलक्लोरोफॉर्मेट वापरले जातात.

एल्टासिन औषधामध्ये एल-सिस्टीन, एल-ग्लुटामिक ऍसिड आणि ग्लाइसिनचे परिमाणात्मक निर्धारण करण्यासाठी एक पद्धत विकसित केली गेली आहे, ज्यामध्ये अँटीएंजिनल प्रभावासह अँटिऑक्सिडेंट क्रिया आहे. ग्लूटामिक ऍसिड आणि ग्लायसिन हे ऑर्थोफ्थालाल्डिहाइड/एन-एसिटाइल-एल-सिस्टीन अभिकर्मकासह प्री-कॉलम डेरिव्हेटायझेशननंतर रिव्हर्स फेज हाय परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे निर्धारित केले गेले. लेखकांच्या मते, अमीनो ऍसिडच्या अस्थिरतेमुळे आणि परिणामी डेरिव्हेटिव्ह्जमुळे सिस्टीनचे व्युत्पन्न करणे कठीण आहे. म्हणून, सिस्टीनचे विश्लेषण ब्रोमॅटोमेट्रिक टायट्रेशनच्या पद्धतीद्वारे केले गेले. असे आढळून आले की नमुन्यामध्ये लक्षणीय प्रमाणात सिस्टीनची उपस्थिती ऑर्थोफ्थालाल्डिहाइड / एन-एसिटाइल-एल-सिस्टीन अभिकर्मकाने ग्लाइसिन आणि ग्लूटामिक ऍसिडच्या व्युत्पन्न उत्पादनांच्या निर्धारामध्ये व्यत्यय आणत नाही. पद्धत उच्च पुनरुत्पादकता आणि दृढनिश्चय अचूकता द्वारे दर्शविले जाते.

उच्च-कार्यक्षमता द्रव क्रोमॅटोग्राफीद्वारे अमीनो ऍसिडचे पृथक्करण आणि परिमाणात्मक विश्लेषणासाठी त्याच्या डेरिव्हेटिव्हजच्या पूर्व-स्तंभ निर्मितीसाठी फ्लोरोजेनिक अभिकर्मक-लेबल म्हणून 4,7-फेनॅन्थ्रोलिन-5,6-डायोन (फॅनक्विनोन) वापरण्याची शक्यता आहे. अभ्यास. स्वतःचा फ्लूरोसेन्स नसल्यामुळे, फॅन्क्विनोन अमीनो ऍसिडच्या अमीनो गटांवर प्रतिक्रिया देते (१६० मिनिटांसाठी ६८ डिग्री सेल्सिअस तापमानात), इमिनोक्विनॉल्स तयार करतात, ज्याचा फ्लूरोसेन्स 460 एनएमच्या तरंगलांबीवर मोजला जातो. टीएम, आयआर, मास आणि पीएमआर स्पेक्ट्राद्वारे पृथक डेरिव्हेटिव्ह्ज ओळखले गेले. फ्लोरोसेंट डिटेक्टरसह क्रोमॅटोग्राफवर उच्च-कार्यक्षमता लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी केली गेली आणि मिश्रणासह ग्रेडियंट इल्युशनसह स्तंभ: ट्रायथिलामाइन द्रावण - फॉस्फेट बफर (पीएच 3) - मिथेनॉल. क्विनिडाइनचा वापर अंतर्गत मानक म्हणून केला गेला. ही पद्धत मोठ्या प्रयोगशाळांच्या परिस्थितीत खूप आशादायक आहे आणि तयार डोस फॉर्ममध्ये अमीनो ऍसिडच्या विश्लेषणासाठी प्रस्तावित केली जाऊ शकते.

लाइसिनचे परिमाणात्मक निर्धारण करण्यासाठी पोटेंटिओमेट्रिक बायोसेन्सरसह उच्च-कार्यक्षमता द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे तंत्र विकसित केले गेले आहे. बायोसेन्सर आयन-निवडक NH4+ इलेक्ट्रोडला लाइसिन ऑक्सिडेस असलेल्या पडद्याला जोडून तयार केले जाते. लाइसिनच्या एन्झाइमॅटिक डिग्रेडेशन दरम्यान तयार होणारे अमोनियम आयन पोटेंशियोमेट्रिक पद्धतीने शोधले जातात. सांस्कृतिक द्रवांमध्ये ट्रिप्टोफॅनच्या विश्लेषणासाठी क्रोमॅटोडेन्सिटोमेट्रिक एक्सप्रेस पद्धत विकसित केली गेली आहे. सॉर्बफिल प्लेट्सवर पातळ थर क्रोमॅटोग्राफी केली गेली. क्रोमॅटोग्राफी सिस्टम प्रोपेनॉल -2 - 25% अमोनियम हायड्रॉक्साइड द्रावण (7:3) मध्ये 25 मिनिटांसाठी केली गेली. क्रोमॅटोग्राम खोलीच्या तपमानावर वाळवले गेले आणि 15 मिनिटांसाठी 120 डिग्री सेल्सियसवर ठेवले. क्रोमॅटोग्रामवरील स्पॉट्स शोधण्यासाठी, एक विशिष्ट अभिकर्मक वापरला गेला - 4-डायमेथिलामिनोबेन्झाल्डिहाइड, ट्रिप्टोफॅनच्या इंडोल रिंगसाठी निवडक, 0.5% इथेनॉल सोल्यूशनच्या स्वरूपात 5% एकाग्र सल्फ्यूरिक ऍसिडच्या व्यतिरिक्त. टेफ्लॉन क्युवेटमध्ये 4-डायमेथिलामिनोबेन्झाल्डिहाइडचे ताजे तयार द्रावण बुडवून क्रोमॅटोग्राम विकसित केल्यानंतर, ते 110 डिग्री सेल्सियस तापमानात 5-7 मिनिटे ठेवले गेले. ट्रिप्टोफॅन स्पॉट्स संगणक व्हिडिओ डेन्सिटोमीटर वापरून 625 एनएमच्या तरंगलांबीवर स्कॅन केले गेले. विकसित पद्धत, दृढनिश्चय आणि उत्पादकतेची उच्च अचूकता असूनही, ट्रिप्टोफॅनसाठी विशिष्ट आहे.

जैविक द्रव, औषधे आणि अन्न उत्पादनांमध्ये α-amino ऍसिडचे विश्लेषण करण्यासाठी, लागू केलेल्या विद्युत क्षेत्राच्या कृती अंतर्गत क्वार्ट्ज केशिकामधील जटिल मिश्रणाच्या घटकांच्या पृथक्करणावर आधारित केशिका इलेक्ट्रोफोरेसीस पद्धती मोठ्या प्रमाणावर वापरल्या जातात. अमिनो अॅसिड्स हे झ्विटेरिओनिक स्वरूपाचे असल्याने, त्यांना योग्य pH चे इलेक्ट्रोलाइट बफर वापरून वेगळे केले जाऊ शकते, सर्वात सामान्यतः तटस्थ आणि मूलभूत पृथक्करण बफर वापरले जातात.

वैयक्तिक α-amino ऍसिडच्या विश्लेषणासाठी केशिका इलेक्ट्रोफोरेसीसच्या पद्धतीची विशिष्टता आणि संवेदनशीलता वाढविण्यासाठी, त्यांचे प्राथमिक व्युत्पन्नीकरण वापरले जाते, त्यानंतर क्वार्ट्ज केशिकामध्ये वेगळे करणे आणि प्रतिक्रिया उत्पादनांचे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक निर्धारण केले जाते. अशाप्रकारे, 9-फ्लोरेनिल्मेथिल फॉर्मेट, 9-(2-कार्बझोल)-एथिल क्लोरोफॉर्मेट आणि सायनाइन डाई व्युत्पन्न घटक म्हणून वापरले जातात. जलद विश्लेषण, नमुना तयार करण्यात सुलभता, अभिकर्मकांचा कमी वापर आणि उपकरणे तयार करणे यासारख्या फायद्यांमुळे या पद्धतीची शक्यता आहे.

आणि प्रथिने

हे ज्ञात आहे की सर्व 20 प्रकारच्या कॅनोनिकल α-amino ऍसिडची रचना समान आहे, कार्यात्मक गटांच्या तीन रूपांसह (चित्र 3.3). दुर्दैवाने, एमिनो आणि कार्बोक्सी गटांच्या प्रतिक्रिया फार विशिष्ट नाहीत, कारण अनुक्रमे, सर्व अमाईनचे वैशिष्ट्य, अनेक अमाइड्स आणि कार्बोक्झिलिक ऍसिडस्. हेच त्यांच्या बहुतेक रॅडिकल्सवर लागू होते = R, त्यांपैकी 10 नॉन-ध्रुवीय आहेत, म्हणजेच ते aliphatic = हायड्रोकार्बन गटांद्वारे दर्शविले जातात, त्यापैकी बहुतेक रासायनिकदृष्ट्या निष्क्रिय आहेत. बहुतेक आर ध्रुवीय अमीनो ऍसिडची विशिष्टता देखील तुलनेने कमी आहे, ज्यामध्ये अल्कोहोल (Ser, Tre, Tyr) amide (Acn, Gln) आणि कार्बोक्सिल गट (Asp, Glu) आढळतात. अमिनो ग्रुप (लिझ), इमिडाझोल हिस आणि ग्वानिडिनो ग्रुप आर्ग अधिक सक्रिय आहेत, तर थिओ ग्रुप सायसची क्रिया सर्वात जास्त आहे. म्हणून, α-C अणूवर अमिनो आणि कार्बोक्सी गटांच्या एकाच वेळी उपस्थितीसाठी विशिष्ट असलेल्या सार्वत्रिक निनहायड्रिन प्रतिक्रियाला अमिनो अॅसिड विश्लेषकांसह α-अमीनो अॅसिडच्या गुणात्मक आणि परिमाणात्मक विश्लेषणामध्ये सर्वात जास्त व्यावहारिक महत्त्व प्राप्त झाले आहे.

तांदूळ. ३.३. α-amino ऍसिडची रचना आणि त्यांच्या पॉलिमरायझेशन उत्पादनासाठी सामान्य सूत्रे. मजकूर मध्ये स्पष्टीकरण.

पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या संरचनेत α-amino ऍसिडचे पॉलिमरायझेशन (Fig. 3.3) त्यांचे सर्व प्रकार संरक्षित करते, परंतु:

1. ninhydrin प्रतिक्रिया नकारात्मक होते, कारण N- आणि C-टर्मिनलचा अपवाद वगळता, α-amino आणि α-carboxy गट पेप्टाइड बाँडच्या निर्मितीवर खर्च केले जातात. प्रथिनांसह सकारात्मक निनहायड्रिन प्रतिक्रिया ही तयारी किंवा डिशमध्ये अमीनो ऍसिड अशुद्धतेची उपस्थिती दर्शवते.

2. सर्व पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांसाठी, पेप्टाइड ग्रुपची बियुरेट प्रतिक्रिया, जी मोनोमेरिक अमीनो ऍसिडमध्ये अनुपस्थित आहे, विशिष्ट आहे.

3. R ​​amino ऍसिडच्या अधिक विशिष्ट प्रतिक्रियांपैकी, खालील उपयुक्त आहेत: केंद्रित नायट्रिक ऍसिडसह xantoprotein प्रतिक्रिया, सुगंधी R Phe, Tyr, Tri; पाच-सदस्य असलेल्या रिंग प्रोसाठी आयसाटिनसह प्रतिक्रिया, तसेच इमिडाझोल आर हिस, थिओ ग्रुप सायस आणि ग्वानिडिनो ग्रुप अर्गसाठी प्रतिक्रिया. हे लक्षात घेणे महत्त्वाचे आहे की यापैकी काही रुपये प्रथिने ग्लोब्यूल्समध्ये लपलेले असतात आणि त्यामुळे त्यांच्यावरील गुणात्मक प्रतिक्रिया कमकुवत होतात. म्हणून, ते पार पाडण्यापूर्वी, प्रथिने सामान्यत: एक किंवा दुसर्या मार्गाने विकृत केली जातात.

4. अमीनो ऍसिडच्या खऱ्या सोल्यूशन्सच्या विपरीत, प्रथिनांचे कोलाइडल द्रावण द्वारे दर्शविले जाते गाळाच्या प्रतिक्रियात्यांच्या हायड्रेशन शेल्सच्या नाश आणि परिणामी, पाणी काढून टाकणार्‍या एजंट्सच्या कृती अंतर्गत त्यांची विद्राव्यता कमी होण्याशी संबंधित आहे: तटस्थ लवण = खारटपणा, मिथेनॉल = MeOH, इथेनॉल = EtOH, एसीटोन, युरिया आणि इतर घटक.

गुणात्मक प्रतिक्रिया सादर करताना, आपण हे केले पाहिजे:

1. अग्निसुरक्षेच्या नियमांचे काळजीपूर्वक पालन करा आणि केंद्रित ऍसिड आणि अल्कली = EJ सह कार्य करा.

2. ग्लासग्राफ किंवा फील्ट-टिप पेनसह चाचणी ट्यूबच्या 2 पंक्ती चिन्हांकित करा आणि त्यापैकी एकामध्ये 0.5 मिली (2-5 थेंब) पेक्षा जास्त 1% अमीनो ऍसिड द्रावण आणि अंदाजे 1% प्रोटीन सोल्यूशन ठेवा. इतर मध्ये.

3. अमीनो ऍसिड आणि प्रथिने सोल्यूशन असलेल्या चाचणी ट्यूबच्या जोडीमध्ये, समांतरपणे संबंधित अभिकर्मकांचे 3-5 थेंब घाला आणि संबंधित प्रतिक्रियेसाठी सूचित केलेल्या उर्वरित प्रक्रिया करा.

4. चाचणी ट्यूब गरम करणे आवश्यक असल्यास, क्रूसिबलचे झाकण काढून टाका आणि मॅचसह कोरड्या इंधनासाठी आग लावा. त्यानंतर, टेस्ट ट्यूबला धारकामध्ये क्लॅम्प करा, ज्याची आदिम रचना अत्यंत अविश्वसनीय आहे. म्हणून, चाचणी ट्यूबची जोडी एका पट्टीमध्ये दुमडलेल्या कागदाच्या तुकड्याने गुंडाळणे चांगले आहे आणि त्यांना आपल्या अंगठ्याने धरून, समान रीतीने चाचणी ट्यूबच्या खालच्या भागाला ज्योतीमधून पार करा. शेजाऱ्यांवर मानेची दिशा टाळणे आणि द्रावण जलद उकळणे. ऑपरेशन पूर्ण केल्यानंतर, क्रूसिबल झाकणाने ज्योत वेळेवर विझवा.

5. प्रयोगांचे परिणाम, टेम्पलेटच्या अनुषंगाने, काढा प्रयोगशाळेतील नोटबुकच्या प्रसारावरटेबलच्या स्वरूपात:

6. निकालांचा विचार केल्यानंतर आणि प्रोटोकॉल पूर्ण केल्यानंतर, चाचणी ट्यूबच्या रॅकसह, ते शिक्षकांना संरक्षणासाठी सादर करा.

1. Ninhydrin प्रतिक्रिया.निनहायड्रिनच्या अल्कोहोल सोल्यूशनसह α-amino ऍसिडच्या डिमिनेशन आणि डीकार्बोक्सीलेशनवर आधारित:

परिणामी अमोनिया, ninhydrin च्या दोन रेणूंशी प्रतिक्रिया देऊन, 540 nm (प्रो - 440 nm साठी) जास्तीत जास्त शोषणासह रंगीत व्युत्पन्न बनवते.

प्रगती: अभ्यासाधीन नमुन्यांमध्ये ninhydrin च्या 0.5% अल्कोहोल द्रावणाचे 3-5 थेंब घाला. टेस्ट ट्युब्स मिश्रणाने हलक्या आचेवर गरम करा आणि 2-3 मिनिटांनंतर रंगाचा देखावा नोंदवा.

2. झँटोप्रोटीन प्रतिक्रिया.वर नमूद केल्याप्रमाणे, हे सुगंधी आर: फेन, टायर, ट्रायसह अमीनो ऍसिडच्या नायट्रो डेरिव्हेटिव्ह्जच्या निर्मितीवर आधारित आहे.

प्रगती: फ्युम हूडचा मसुदा चालू करून, चाचणी सोल्यूशनसह चाचणी ट्यूबच्या जोडीमध्ये केंद्रित नायट्रिक ऍसिड (HNO 3) चे काही थेंब काळजीपूर्वक घाला. मानेची दिशा शेजाऱ्यांकडे जाणे टाळून टेस्ट ट्युब हलक्या ज्योतीवर गरम करा आणि रंग विकास नोंदवा.

3. नायट्रोप्रसाइड प्रतिक्रिया.हे सोडियम सल्फाइड (Na 2 S) च्या प्रकाशनासह सल्फर-युक्त अमीनो ऍसिड सिस्टीनच्या अल्कधर्मी हायड्रोलिसिसवर आधारित आहे, जे सोडियम नायट्रोप्रसाइडच्या ताजे तयार केलेल्या द्रावणासह लाल कॉम्प्लेक्स देते.

प्रगती:चाचणी सोल्यूशनच्या 5-10 थेंबांसह दोन्ही टेस्ट ट्यूबमध्ये 20% सोडियम हायड्रॉक्साइड समान प्रमाणात घाला आणि किमान 3-5 मिनिटे उकळवा. चाचणी ट्यूबमध्ये सोडियम नायट्रोप्रसाइड द्रावणाचे 3-5 थेंब घाला आणि रंगाचा विकास नोंदवा.

4. बाय्युरेट प्रतिक्रिया.हे Cu 2+ आयन असलेल्या पेप्टाइड बाँडच्या रंगीत कॉम्प्लेक्सच्या अल्कधर्मी माध्यमात तयार होण्यावर आधारित आहे. सोल्युशनमधील पेप्टाइड्स आणि प्रथिने शोधण्यासाठी सार्वत्रिक चाचणी म्हणून काम करते. पेप्टाइड बॉन्ड्सच्या संख्येत वाढ झाल्यामुळे, द्रावणाची रंगाची तीव्रता रेषीयपणे वाढते, प्रथिने एकाग्रतेच्या फोटोमेट्रिक निर्धारणासाठी ते मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते.

प्रगती. चाचणी सोल्यूशनच्या 5-10 थेंबांसह चाचणी ट्यूबमध्ये समान प्रमाणात 10% सोडियम हायड्रॉक्साइड द्रावण घाला. चांगले मिसळा आणि 1% कॉपर सल्फेट द्रावणाचे 2 थेंब घाला (CuSO 4). नमुने मिसळा आणि काही मिनिटांनंतर रंग विकासाची नोंदणी करा.

5. उकळत्या सह चाचणी.प्रथिनांच्या थर्मल विकृतीवर आधारित.

प्रगती. 1% ऍसिटिक ऍसिड (AcOH) द्रावणाच्या एकापेक्षा जास्त थेंब नसलेल्या चाचणी सोल्यूशन्ससह दोन्ही टेस्ट ट्यूबला ऍसिडीफाय करा आणि उकळत्या गरम करा. द्रावण 2-3 मिनिटे उकळल्यानंतर, परिणाम नोंदवा आणि घटनेची यंत्रणा स्पष्ट करा.

6. जड धातूंच्या क्षारांसह पर्जन्य(मी) . त्यांचे विकृत गुणधर्म प्रथिन रेणूच्या कार्यात्मक गट R सह प्रतिक्रिया करण्याच्या हेवी मी केशन्सच्या क्षमतेवर आधारित आहेत: थिओ-, एमिनो-, कार्बोक्सी-, सुगंधी. तसेच, त्यांच्या मजबूत आयनांमुळे प्रोटीन रेणूंमध्ये आयनोजेनिक गटांचे पुनर्भरण होते, ज्यामुळे त्यांच्यातील आयनिक बंध नष्ट होतात.

प्रगती. कॉपर सल्फेट (CuSO 4) च्या 5% द्रावणाचे काही थेंब चाचणी सोल्यूशनसह दोन्ही टेस्ट ट्यूबमध्ये घाला. परिणाम रेकॉर्ड करा आणि स्पष्ट करा.

7. सेंद्रिय ऍसिडसह पर्जन्य.हे प्रथिनांचे आम्ल विकृतीकरण आणि ऑर्गनोक्लोरीनसह आर अमीनो ऍसिडचे थिओ-, एमिनो- आणि सुगंधी गटांच्या सहसंयोजक डेरिव्हेटिव्ह्जच्या निर्मितीवर आधारित आहे.

प्रगती. ट्रायक्लोरोएसिटिक ऍसिड (TCA) च्या 10% द्रावणाचे काही थेंब चाचणी सोल्यूशनसह चाचणी ट्यूबमध्ये घाला आणि काही मिनिटांत निकाल नोंदवा.

हा लेख अमीनो ऍसिड निश्चित करण्याच्या पद्धतींचा विचार करेल, ज्याचा वापर केवळ उत्पादनांच्या विश्लेषणामध्येच नाही तर जैवरसायन आणि फार्मास्युटिकल विश्लेषणामध्ये केला जातो.

केजेल्डहल पद्धतीनुसार अमिनो आम्लांपासून मिळणाऱ्या अमोनियाच्या निर्धारावर आधारित अमिनो आम्लांची एकूण मात्रा फोटोमेट्रिक पद्धतीने करता येते.

1-नॅफथॉलसह प्रतिक्रिया. आर्जिनिन, हिस्टिडाइन, टायरोसिन निर्धारित करण्यासाठी, 1-नॅफथॉलसह प्रतिक्रिया प्रस्तावित केली गेली. सोडियम हायपोक्लोराईट (NaOCl) च्या उपस्थितीत, द्रावण लाल होते. 50% इथेनॉलमध्ये एक नमुना द्रावण ज्यामध्ये अमीनो ऍसिड असते ते बर्फाने थंड केले जाते आणि 10% NaOCl द्रावण आणि नॅपथॉल द्रावण जोडले जाते. प्रतिक्रिया उत्पादन रंगीत लाल आहे (l कमाल = 550 nm). अमीनो ऍसिडची सामग्री परिणामी द्रावणाच्या रंगाच्या तीव्रतेद्वारे निर्धारित केली जाते.

बाय्युरेट प्रतिक्रिया. एमिनो ऍसिड निश्चित करण्यासाठी वापरल्या जाणार्या सर्वात महत्वाच्या प्रतिक्रियांपैकी एक म्हणजे बाय्युरेट प्रतिक्रिया. बियुरेटच्या अल्कधर्मी द्रावणात तांबे (II) मीठाचे सौम्य जलीय द्रावण जोडून प्रतिक्रिया केली जाते. या प्रकरणात, एक जटिल कंपाऊंड तयार झाल्यामुळे समाधान तीव्र व्हायलेट रंगात बदलते.

कमीतकमी 2 अमाइड गट किंवा एमिनोहायड्रॉक्सीथिलीन गट असलेली संयुगे, तसेच अमीनो ऍसिडचे अमाइड्स आणि इमिड्स बियुरेट प्रतिक्रियामध्ये प्रवेश करतात. प्रथिने आणि अमीनो ऍसिड आणि अमाइड्सचे केंद्रित द्रावण ही प्रतिक्रिया देतात. एमिनो ऍसिडचे पातळ द्रावण बाय्युरेट प्रतिक्रिया देत नाहीत आणि म्हणून प्रतिक्रिया प्रथिने हायड्रोलिसिसचा शेवट स्थापित करण्यासाठी वापरली जाऊ शकते. प्रथिनांच्या गुणात्मक आणि परिमाणवाचक निर्धारासाठी देखील प्रतिक्रिया वापरली जाते. रक्तातील प्रथिने आणि इतर जैविक द्रवपदार्थ निर्धारित करण्यासाठी क्लिनिकल निदान प्रयोगशाळांमध्ये वापरल्या जाणार्‍या पद्धती बाय्युरेट प्रतिक्रियावर आधारित आहेत.

ninhydrin प्रतिक्रिया. एमिनो ऍसिड निश्चित करण्यासाठी वापरली जाणारी दुसरी सर्वात महत्वाची प्रतिक्रिया म्हणजे निनहायड्रिन प्रतिक्रिया - ए-अमिनो ऍसिडसाठी रंग प्रतिक्रिया, जी अतिरिक्त निनहायड्रिनच्या अल्कधर्मी द्रावणात नंतरचे गरम करून चालते.

Ninhydrin अमोनिया, कार्बन डायऑक्साइड आणि मूळ अमिनो आम्लापेक्षा एक कार्बन अणू असलेले अल्डीहाइड तयार करून a-amino ऍसिडचे ऑक्सिडेटिव्ह डिकार्बोक्सिलेशन करते. कमी झालेले निनहायड्रिन नंतर सोडलेल्या अमोनिया आणि दुसऱ्या निनहायड्रिन रेणूवर प्रतिक्रिया देते आणि अमोनियासह रंगीत संक्षेपण उत्पादन तयार करते.

परिणामी कंपाऊंड (रंगद्रव्य) मध्ये वायलेट-निळा रंग आहे (l कमाल = 570 एनएम). या रंगीत कंपाऊंडची निर्मिती a-amino ऍसिडसाठी परिमाणात्मक चाचणीमध्ये वापरली जाते, ज्याद्वारे अमीनो ऍसिड शोधले जाऊ शकतात, अगदी त्यांची रक्कम 1 μg पेक्षा जास्त नाही.

प्रोलाइन आणि हायड्रॉक्सीप्रोलीन, ज्यांचा ए-एमिनो गट नाही, निनहायड्रिनशी प्रतिक्रिया देऊन पिवळे डेरिव्हेटिव्ह तयार करतात (l कमाल = 440 nm). प्रतिक्रिया विशिष्ट नाही, कारण निनहायड्रिनसह रंगीत उत्पादन अमोनिया आणि अमिनो गट (अमाइन, प्रथिने, पेप्टाइड्स) असलेली संयुगे देखील देते. तथापि, या संयुगांसह कोणतेही CO 2 सोडले जात नाही. कार्बन डाय ऑक्साईड सोडणे केवळ ए-अमीनो ऍसिडसाठी वैशिष्ट्यपूर्ण आहे. ऑटोमॅटिक एमिनो अॅसिड विश्लेषक (CO 2 व्हॉल्यूमचे मोजमाप) सह, a-amino ऍसिडचे कलरमेट्रिक परिमाणात्मक निर्धारण करण्यासाठी प्रतिक्रिया वापरली जाते.

ninhydrin प्रतिक्रिया glycine, isoleucine, leucine निर्धारित करण्यासाठी वापरली जाते; सेरीन, फेनिलॅलानिन, सिस्टीन, टायरोसिन, ट्रिप्टोफॅन इत्यादींद्वारे कमी तीव्र रंग दिला जातो.

परिणामी उत्पादने बर्‍यापैकी तीव्र रंगाने दर्शविली जातात (e = 1.8–3.3 10 4), परंतु रंगीत उत्पादने अस्थिर असतात. रंगाची तीव्रता वेगाने कमी होते. स्थिरीकरणासाठी CdCl 2 जोडले आहे. हे परिणामी संयुगेसह स्थिर कॉम्प्लेक्स बनवते. कॅडमियम क्लोराईड देखील प्रतिक्रिया वाढवते.

1,2-नॅफथोक्विनोन - 4-सल्फोक्झिलेटसह क्षारीय माध्यमात अमीनो अ‍ॅसिड्स आणि काही इतर संयुगे ज्यामध्ये अमीनो ग्रुप कंडेन्स होतो आणि 1,2-नॅफथोक्विनोन मोनोइमाइनचे लाल, पिवळे, केशरी रंगाचे डेरिव्हेटिव्ह तयार करतात.

प्रतिक्रिया a-amino ऍसिड (valine, isoleucine, leucine, इ.) निर्धारित करण्यासाठी वापरली जाते.

ट्रिप्टोफॅन निर्धारित करण्यासाठी 4-डायमेथिलामिनोबेन्झाल्डिहाइडसह प्रतिक्रिया वापरली जाऊ शकते. प्रतिक्रिया उत्पादनाचा रंग जांभळा आहे आणि रंगाची तीव्रता विश्लेषित द्रावणातील ट्रिप्टोफॅनची सामग्री निर्धारित करते.

तथापि, हे लक्षात घ्यावे की ही प्रतिक्रिया क्वचितच अन्न विश्लेषणामध्ये वापरली जाते.

सल्फर असलेल्या अमीनो ऍसिडचे परिमाणवाचक निर्धारण करण्यासाठी, खालील प्रतिक्रियेवर आधारित, ब्रोमॅटोमेट्रिक पद्धत वापरली जाते:

1% NaOH सोल्यूशनमध्ये सिस्टीनचे द्रावण ग्राउंड स्टॉपर, 0.1 N सह फ्लास्कमध्ये ओतले जाते. पोटॅशियम ब्रोमेट द्रावण, कोरडे पोटॅशियम ब्रोमाइड आणि 10% HCl सह ऍसिडिफाइड.

BrO 3 - + 5Br - + 6H + → 3Br 2 + 3H 2 O

प्रतिक्रियेच्या परिणामी तयार होणारे ब्रोमाइन, ज्याचे प्रमाण पोटॅशियम ब्रोमेटच्या प्रमाणात असते, ते अमीनो ऍसिडसह प्रतिक्रिया देते. 10 मिनिटांनंतर, पोटॅशियम आयोडाइड जोडले जाते, जे प्रतिक्रिया न केलेल्या ब्रोमिनवर प्रतिक्रिया देते आणि सोडलेले आयोडीन 0.1 एन सह टायट्रेट केले जाते. सूचक म्हणून स्टार्चसह सोडियम थायोसल्फेट द्रावण.

2I - + Br 2 → Br - + I 2

टायट्रेशनसाठी वापरल्या जाणार्‍या थायोसल्फेटचे प्रमाण ब्रोमाइनच्या प्रमाणात असते ज्याने एमिनो ऍसिडवर प्रतिक्रिया दिली नाही. जोडलेल्या पोटॅशियम ब्रोमेट आणि थायोसल्फेटच्या प्रमाणातील फरकाने, अमिनो आम्लावर प्रतिक्रिया देणारे ब्रोमीनचे प्रमाण आढळते आणि त्यामुळे अमिनो आम्लाचे प्रमाण आढळते.

मेथिओनाइन त्याच प्रकारे निर्धारित केले जाते. मेथिओनाइनचे सल्फोनमध्ये ऑक्सीकरण केले जाते:

ही प्रतिक्रिया, विशिष्ट परिस्थितींमध्ये, आपल्याला मेथिओनाइनची सामग्री अगदी अचूकपणे निर्धारित करण्यास अनुमती देते.