Имунология на фагоцитите. Механизмът на фагоцитозата: стъпки и етапи

Травмите на меките тъкани на лицето могат да бъдат затворени - без нарушаване на целостта на кожата (натъртвания) и открити - с нарушения на целостта на кожата (ожулвания, драскотини, рани). Всички видове наранявания, с изключение на натъртвания, са открити и първично инфектирани.Откритите наранявания на лицево-челюстната област включват също всички видове наранявания, преминаващи през зъбите, дихателните пътища и носната кухина.

Анатомични и топографски характеристики на структурата на лицево-челюстната област при деца (еластична кожа, голямо количество фибри, добре развито кръвоснабдяване на лицето, непълна минерализация на костите, наличие на зони на растеж на костите на лицевия череп, наличието на зъби и техните рудименти) определят общите характеристики на проявата на наранявания в тях. В по-млада и предучилищна възраст нараняванията на меките тъкани на лицето са придружени от обширен и бързо нарастващ колатерален оток, кръвоизливи в тъканта (под формата на инфилтрат) и образуване на интерстициални хематоми. Увреждането на меките тъкани може да бъде придружено от костни наранявания, типични за детството според типа "зелена линия", субпериостални фрактури на фрагменти, пълни фрактури без тяхното изместване. Разместените зъби могат да проникнат в меките тъкани и да станат допълнителен фактор за тяхното механично увреждане. Може да бъде трудно да се установи „липса” на зъб в зъбната редица в периода на смесена оклузия и да се намери визуално или чрез палпация в тъканите.Това изисква задължителен рентгенов контрол, тъй като в бъдеще такъв „чужд тяло” в дебелината на меките тъкани става причина за развитието на абсцеси и флегмони на меките тъкани на лицето, чиято етиология е трудно да се установи.

Синини, ожулвания, драскотини. натъртваненаречено затворено нараняване на меките тъкани на лицето, без да се нарушава тяхната анатомична цялост с възможно ограничение на функцията (в случай на увреждане на букалната или паротидно-дъвкателната област и устните - горна или долна).

клинична картина. От значение са механизмът на нараняване, силата и мястото на приложение на увреждащия агент, възрастта на пострадалия и общото му състояние в момента на нараняване. При натъртвания се появява нарастващ травматичен оток на мястото на нараняване и в близко бъдеще се появява синина, която има цианотичен цвят, който след това придобива тъмночервен или жълто-зелен оттенък. На мястото на нараняване на меките тъкани чрез палпация се определя плътна, болезнена област като инфилтрат. Това се случва в резултат на пропиване на тъкани с ексудат (следствие от кръвоизлив). Признаците на възпаление със синини не се откриват или се появяват късно. Появата на дете с натъртване често не съответства на тежестта на нараняването поради нарастващ оток и образуване на хематоми. Общото състояние с натъртвания не се променя много, но психоемоционалните нарушения са значителни.Натъртванията в областта на брадичката могат да доведат до увреждане на лигаментния апарат на TMJ (отразено). В такива случаи активните и пасивни движения на долната челюст причиняват болка в детето - има съмнение за фрактура на кондиларния процес. За изясняване на диагнозата е необходимо рентгеново изследване.

Ожулвания, драскотини (повърхностни кожни лезии), дори без увреждане на базалния слой на дермата, без да е придружено от кървене, са първично заразени. КЛИНИКА- болка, нарушение на целостта на кожата, устната лигавица, подуване, хематом (букални и орални области, устни и др.). При обширен оток може да има ограничение при отваряне на устата. Връзката на епидермиса с базалния слой на дермата и фибрите при децата е все още крехка, поради което настъпва отлепване на кожата или подкожната мастна тъкан и на това място се натрупва кръв (хематом). Най-характерният симптом на хематома е неговата флуктуация (подуване). Палпацията на тази област на увреждане е болезнена. При натъртване на меките тъкани на лицето на нивото на зъбната редица, като правило, се уврежда и лигавицата на устната и устата, пълно изместване на зъба (млечен, постоянен с оформен корен, постоянен с оформен корен) може да възникне.

При преглед на дете, дори с натъртвания, ожулвания, драскотини, е необходимо да се изключи черепно-мозъчна травма и травма на костите на лицето. Това създава затруднения, тъй като по време на нараняването няма свидетели и детето не може да отговори на въпросите на лекаря и да изясни дали е имало замаяност, загуба на съзнание, гадене, повръщане, което е типично за черепно-мозъчна травма.

Лечение. Синините, които не са придружени от фрактури на лицевите кости и сътресение на мозъка, но са ограничени само до подкожни кръвоизливи и образуване на хематоми, бързо се лекуват. Това се улеснява от локалното приложение на студ в комбинация с превръзка под налягане, особено в първите часове след нараняването. В бъдеще сухата топлина, физиотерапевтичните процедури (UVI, UHF, лазерна терапия и др.), Хирудотерапията са ефективни. Полученият хематом трябва да се пробие при внимателно спазване на правилата на асептиката и да се приложи превръзка под налягане.

Незначителните повърхностни увреждания на кожата на лицето (ожулвания, драскотини) зарастват бързо, без нагнояване. След антисептично третиране с 0,1% разтвор на хлорхексидин, 1-2% алкохолен разтвор на йод, такива лезии бързо се епителизират под краста.

рани.Раната е нарушение на целостта на кожата и лигавиците с увреждане на подлежащите тъкани.

Разграничете раните: неогнестрелни оръжия - наранени и комбинации от тях, скъсани и комбинации от тях, нарязани, нахапани, нарязани, нарязани; огнестрелни оръжия - нацепени, куршуми; компресия; електрическо нараняване; изгаряния; измръзване. Раните също са тангенциални, проходни, слепи (може да имат изкълчени зъби като чужди тела.

В ежедневието при малки деца най-честите рани на езика, устните, небцето; при по-възрастните рани с по-разнообразна локализация, но също така най-често има лезия на устната област, лигавицата на устата и алвеоларния процес, брадичката на лицето, носа, челото, суперцилиарните дъги и др.

Всички рани са инфектирани или бактериално замърсени, инфекцията на устната кухина, зъбите, фаринкса и т.н. бързо се контаминира в MFA.

Лечението на рани по лицето при 80% от децата се извършва в поликлиника, но в повече от 20% от случаите е необходима хоспитализация в специализирани лицево-челюстни болници. Ако децата постъпят в детското общохирургично отделение (по-често с комбинирани и множествени наранявания), те не винаги се преглеждат от лицево-челюстния хирург в ранния период и нараняванията на лицево-челюстната област могат да останат неразпознати.

Клинична картина на ранатазависи от областта на местоположението му (глава, лице, шия). Основните признаци на дисфункция са болка, кървене, инфекция. Раните на лицево-челюстната област често се проявяват като комбинирани и множествени. При множествени и комбинирани кранио-челюстни наранявания могат да се наблюдават признаци на черепно-мозъчна травма и фрактури на костите на черепа. Навременната диагностика на увреждане на лицево-челюстната област и ранното предоставяне на специализирана помощ в пълен размер са предотвратяване на шок, загуба на кръв, инфекция на други области и други усложнения.

При рани на лицево-челюстната област детето трябва незабавно и задължително да бъде прегледано от детски лицево-челюстен хирург заедно с други специалисти.

Клиничните прояви на рани по лицето при деца са много разнообразни. Най-често раните могат да бъдат класифицирани като натъртени, разкъсани, порезни и др. Раните се характеризират с бързо нарастващ колатерален оток, придружен от значително кървене и поради функционалните особености на мимическата мускулатура имат зеещ вид, който не винаги съответстват на тежестта на нараняването.

При рани на устната област, устните и езика, освен кървящи и зеещи рани, децата имат нарушен прием на храна, изразено слюноотделяне, неясен говор, което утежнява състоянието на детето. Има условия за аспирация на кръвни съсиреци, слюнка и остатъци от тъкани, което застрашава живота на детето с развитие на дихателна недостатъчност.

Раните в областта на носа са придружени от значително кървене и подуване, което затруднява разпознаването на фрактури на костите на носа. Раните на паротидната дъвкателна област се характеризират с увреждане на паротидната слюнчена жлеза, което може да се прояви чрез обилно кървене, травма на лицевия нерв.

Раните на дъното на устата са опасни поради бързо разпространяващия се оток, кървене, което допринася за развитието на респираторни нарушения, бронхопулмонални усложнения. Колкото по-малко е детето, толкова по-бързо се увеличават тези явления и изискват спешна помощ. Раните на езика могат да бъдат придружени от обилно артериално кървене (когато лингвалната артерия е наранена), да допринесат за прибиране на езика и винаги да зейнат.

Диагностика на рани, както и всякакви наранявания: установяване на времето на увреждане, вида на травматичния фактор, определяне на соматичното състояние, психо-емоционалните характеристики на детето. В допълнение към клиничното, винаги е показано рентгеново изследване. Необходима е консултация с невропатолог, неврохирург, офталмолог, оториноларинголог, детски травматолог.

Лечение. В случай на рани на кожата на лицето, първичната хирургична обработка и налагането на първичен шев се извършват, като се вземе предвид времето от началото на развитието на процеса на раната. При първичното хирургично лечение на рани трябва да се вземат предвид козметичните изисквания, степента на развитие на инфекцията на раната и фазите на протичане на раневия процес.

При този тип рани се изолира фазата на възпаление, когато се развиват съдови реакции и настъпва некробиотично почистване на раната; фаза на репаративни процеси; фазата на образуване на белег и епителизация. Поетапното въздействие върху раната насърчава ранното възстановяване, подобрява резултата и намалява продължителността и степента на бактериално замърсяване на раните и активира репаративните процеси в тях.

Поради спешността, първичната хирургична обработка на рани по лицето често се извършва извън бокса, което я отличава от всяка планирана хирургична интервенция. Едно от основните изисквания при лечението на рани в лицево-челюстната област при деца е максимално щадящият подход към некротомията. В същото време е необходимо да се опитате да запазите тъканите колкото е възможно повече, което е безопасно при деца поради високите регенеративни способности на MFR тъканите.

При обширни рани на лицето, придружени от увреждане на костите на лицевия скелет, първата помощ често се състои в прилагане на превръзка върху раната и отвеждане на детето в специализирана стоматологична клиника.

Заплахата от асфиксия е свързана с навлизането в горните дихателни пътища на кръвен съсирек, разхлабена клапа от увредени меки тъкани, изместен зъб, костен фрагмент, друго чуждо тяло, както и с изместване на езика (което често се случва с наранявания на езика, дъното на устата и брадичката). Децата могат да развият ларингоспазъм (при писъци, плач), запушване на горните дихателни пътища с прекомерно производство на слуз, тъй като лигавицата на горните дихателни пътища е много уязвима и бързо реагира на психо-емоционалното състояние със спазъм и повишена секреция.

Първата помощ трябва да бъде спешна. Във всяка ситуация трябва да дадете на детето седнало положение, с лице надолу или легнало, като го обърнете на една страна, освободете устата с пръст, тампон, изсмукване от съдържанието, изпъскайте езика и го избутайте от устата . Ако тези мерки са неефективни, трябва да се извърши интубация, трахеотомията е по-малко желателна.

Кървенето може да бъде дифузно (в този случай е ефективна стегната превръзка под налягане, последвана от зашиване в раната или навсякъде), от артериалните стволове (езични, мандибуларни, лицеви, темпорални, каротидни). Необходимо е ясно да идентифицирате кървящия съд, да го натиснете с пръст, да приложите превръзка под налягане, преди да предоставите спешна помощ (спиране на кървенето в раната или навсякъде). При кървене от костна рана (фрактура на челюстите) е показана стегната тампонада, кървенето се спира чрез локално налягане на съда или навсякъде, след това фиксиране и обездвижване на костите по време на първичното хирургично лечение.

При кървене от носа по-често се извършва задна и по-рядко предна тампонада. Децата са много чувствителни към загуба на кръв, така че е важно (незабавно!) да се възстанови обемът и качеството на циркулиращата кръв.

Загубата на кръв е един от основните фактори за развитието на шок при дете поради рязко намаляване на обема на циркулиращата кръв и промени в нейните качествени характеристики.

Травматичен шок. Развитието на шока се влияе от най-силната емоционална реакция на болка, генерализиране на възбуждането на ЦНС без условия за адаптирането му поради незрялостта на мозъчните структури на детето. Шокът е придружен от нарушение на дихателната функция, дейността на сърдечно-съдовата и дихателната система, промени във водно-солевия метаболизъм и др. Колкото по-малко е детето, толкова по-бързо може да се развие травматичен шок.

Принципи на управление на удара- ранна помощ под формата на надеждно облекчаване на болката, спиране на кървенето, компенсиране и нормализиране на обема и качеството на циркулиращата течност чрез кръвопреливане, перфторан, реополиглюкин, плазма, преципитати и др.

Транспортирането на такова дете до специализирана медицинска институция трябва да бъде спешно, дори преходът от клиниката към болницата трябва да се извърши в положение на детето, лежащо на носилка (независимо от разстоянието). нараняване, независимо от неговия вид и тежест, възрастта на детето, лечението трябва да бъде само в стационарни условия с участието на неврохирург и невропатолог.

Въпреки това, значителна част от децата на възраст 6-7 години и по-големи с рани с малка степен, безопасни за развитие на усложненияможе да се лекува в клиника. В случай на наранявания на лицето, сроковете за първична (24-36 часа) и първоначално отложена хирургична обработка на рани с налагане на сляп шев и профилактично приложение на антибиотици (до 72 часа) са допустими по-широки, отколкото при наранявания на други области.

1. По време на първичната хирургична обработка на лицеви рани, те третират меките тъкани пестеливо и се изрязват само смачкани и очевидно нежизнеспособни тъкани. Тоалетната на раната е важна медицинска процедура, тъй като допринася за обеззаразяването на пиогенната флора и механичното почистване на раната; напоителните мерки се извършват със слаби разтвори на калиев перманганат, фурацилин, хлорхексидин, диоксидин, ензими и др.

2. При рани на лицево-челюстната област, проникващи в кухината на устата, носа и т.н., първо трябва да се зашие раната от страната на лигавицата, за да се предотврати по-нататъшно инфектиране на тъканите.

3. Раните по лицето, за да се получат добри козметични резултати, винаги трябва да се зашиват послойно със задължително зашиване на мимическата мускулатура и подкожната мастна тъкан.

4. По време на първичната хирургична обработка на рани по лицето трябва особено внимателно да се сравнят ръбовете на раната в областта на естествените отвори (червена граница на устните, крило на носа и др.).

5. При едновременно увреждане на меките тъкани на лицето и фрактури на костите на лицевия скелет (или зъбите), на първо място, първичната хирургична обработка на костната рана се извършва с фиксиране на костни фрагменти. На второ място се извършва PST на рани на меките тъкани.

За зашиване на рани по кожата на лицето трябва да се използва тънък (4/0 или 5/0) монофиламентен конец с атравматична игла (етилон, мирален и др.), Което позволява получаване на добър козметичен резултат. При лечението на деца с травма, в допълнение към първичната хирургична обработка на раната, често се използва противовъзпалителна терапия. Употребата на антибактериални лекарства е показана при наличие на обширни увреждания на меките тъкани, за да се предотврати нагнояване на раната. За същата цел в рамките на няколко дни след операцията се използват UVR рани, лазерна терапия и др.

В бъдеще, след отстраняване на конците, за да се получат добри козметични резултати, се предписва физиотерапия за областта на следоперативните белези: масаж, парафинотерапия, електрофореза с лидаза или ронидаза, фонофореза с хидрокортизон, лазерна терапия, магнитотерапия.

Не позволявайте напрежение на кожата по време на зашиване. Ако е необходимо, се извършва обездвижване на кожата за по-лесно сближаване на краищата на раната. Особено внимателно свържете краищата на раната в кръг от естествени отвори на лицето (устни, крила, върха и преградата на носа, клепачите, веждите, ушите).

При рани с тъканни дефекти, когато е невъзможно да се зашият ръбовете на раната без напрежение и пластичната хирургия е нерационална, се прилагат ламеларни конци, за да се намали обемът на образувания впоследствие дефект или белег. По време на хирургичното лечение на лицеви рани с тъканен дефект, ако местните условия позволяват, може да се извърши пластична хирургия: пластична хирургия с локални тъкани, клапи на крака, свободно присаждане на кожа и др.

За да се наблюдава детето и да се изяснят показанията за провеждане на планирани рехабилитационни мерки, децата трябва да бъдат регистрирани в диспансер.

Изгаряния на лицето и шията.

Изгарянията от първа степен се характеризират с хиперемия на кожата, подуване на тъканите и болка. При изгаряне от първа степен се засяга само епидермисът на кожата. След изгаряне от първа степен няма забележими белези, само понякога се променя пигментацията на засегнатите участъци от кожата.

Изгарянията от втора степен се характеризират с по-дълбоки кожни лезии, но със запазване на папиларния слой. В допълнение към симптомите, характерни за изгаряния от първа степен, се отбелязва образуването на мехури, пълни със серозна течност. Ако раната не се зарази с изгаряне от втора степен, повърхността на изгарянето се епителизира след 14-16 дни.

В литературата са описани голям брой методи за количествено определяне на фагоцитозата. Обемът на тази книга не ни позволява да опишем подробно всички, затова ще се ограничим да опишем само няколко.

Материали и оборудване

За да работите, трябва да имате:

Цитратдекстрозен антикоагулант: 8 g лимонена киселина. 22 g тризаместен натриев цитрат (двуводен), 24,5 g глюкоза се разтварят в 1 литър вода;

Разтвор на декстрозодекстран: 4,5 g NaCl, 25 g глюкоза, 30 g декстран (отн. мол. тегло 500 000) в 1 l;

Разтвор на амониев хлорид: 9 части 0,83% амониев хлорид, 1 част Tris-HCl буфер pH 7,2 (20,6 g/l);

Смес от фикол - визотраст: 9 g фикол, 20 ml визотраст, 100 ml бидестилирана Н 2 0, плътност 1,077;

Субстрат за β-глюкуронидаза: 31,5 mg р-нитрофенил-β-глюкуронид и 100 μm Triton X 100 се разтварят в 100 ml 0,05 М натриев ацетатен буфер рН 5;

Реагенти за дефицит на миелопероксидаза: фиксатор (10 ml 37% формалдехид с 90 ml абсолютен етанол), субстратен разтвор (100 ml 30% EDTA, 0,3 g бензидин хлорид, 0,038 g ZnS0 4 x7H 2 0, 1 ml дестилирана вода, 1,0 g CH 3C00Nax3H20, 0.7 ml 3% H202); доведете рН на 1.0 М NaOH до 6.0.

Търговски реактиви:

FSB, разтвор на Ханк и среда Eagle-MEM (Държавен институт за имунни препарати и хранителни среди, Берлин-Вайсензее, ГДР);

Хепарин (5000 IU/mg) (Gedeon Richter, Унгария);

Серум от говежди ембриони (Flow Laboratories, САЩ, може да се използва друга фирма);

Visotrast (VEB Fahlberg List, Магдебург, ГДР);

Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, ГДР);

Декстран, фикол (Pharmacia, Швеция);

Колоиден въглерод Сl1/143a (Wagner, Pelikanwerke, Германия);

Диизодецил фталат, парадиоксан (Coleman, Matheson и Bell, САЩ);

Triton X 100 (Serva, Германия, възможна е друга компания);

Oil red O (Allied chemical corp., Morristown, NY, USA);

Яранитрофенил-β-глюкуронид (Sigma, САЩ);

Safranin O (Fischer Scientific Lab., Чикаго, САЩ);

Полистиренови перли, тръби (Nunc, Дания);

Решетка F 905 (VEB Orvo Wolfen, ГДР).

Получаване на фагоцити

Необходимата информация за изолирането на човешки гранулоцити може да бъде получена в глава "Разделяне на клетки на имунната система"; за получаване на перитонеални макрофаги, вижте разделите "Култивиране на макрофаги и моноцити" и "Изолиране на макрофаги от суспензия на сплейоцити". Този въпрос е разгледан подробно в редица трудове.

Освен това трябва да се споменат следните методи:

8 ml кръв се смесват с разтвор на декстранглюкоза. След това добавете 6% разтвор на декстран 75 в 0,15 М NaCl (5 ml). Сместа се оставя за 45-50 минути при стайна температура за утаяване на еритроцитите. Аспирирайте плазма. Остатъчните еритроцити се лизират чрез добавяне на 0,83% амониев хлорид (35 ml към 15 ml плазма). Центрофугирайте за 10 минути при 80 g, суспендирайте утайката в 0,15 М NaCl, охладен до 0°C. Комбинирайте няколко утайки и центрофугирайте за 10 минути при 800 g. Клетките се държат най-добре върху лед в 0,15 М NaCl (тази среда е по-подходяща от буферирана среда с двувалентни катиони, които карат клетките да се слепват);

Ако обектът на фагоцитоза са дрожди, етапът на третиране с амониев хлорид може да бъде пропуснат, тъй като червените кръвни клетки не пречат на процеса. Мононуклеарните клетки могат да бъдат получени по следния начин: хепаринизираната кръв се смесва с 1/3 от обема на средата на Eagle, съдържаща 15% глюкоза, наслоява се върху слой от смес от фикол - визотраст и се центрофугира 20 минути при 400 g. Фракцията от мононуклеарни клетки се аспирира с пипета на Pasteur, промива се два пъти с PBS и се приготвя суспензия в среда на Eagle (1x107 клетки/ml).

Подготовка на частици за фагоцитоза

По-често се използват живи култури от Staphylococcus aureus (SG 511 или 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli и други ентеробактерии, листерии, коринебактерии, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae. Микроорганизмите се отглеждат 24 часа (при необходимост 48 часа) върху твърди и течни хранителни среди. Събраната биомаса се промива три пъти с 0.15 М NaCl. Твърде гъстата суспензия се измерва при 640 nm, концентрацията се определя от калибровъчната крива.

Концентрацията на микроорганизмите се определя и от методите на пресяване върху плътни хранителни среди; в някои случаи преброяването на микроорганизмите може да се извърши в камери за преброяване.

Когато работите с живи бактериални култури, трябва да се внимава винаги да се използват култури на един и същи етап. Добавянето на 0,01% говежди серумен албумин насърчава оцеляването на микроорганизмите. Приготвената суспензия остава стабилна за 1-2 часа.

Културите на убити микроорганизми обикновено се получават чрез нагряване в продължение на 30 минути при 80°C или чрез третиране с течаща пара. Убитите микроби се промиват три пъти с 0,15 М NaCl, ресуспендират се и се определя концентрацията на суспензията.

Приготвяне на хлебна мая: 0,5 g хлебна мая се суспендира в 0,15 M NaCl и се поставя на кипяща водна баня за 30 минути. Филтрира се през филтър от памучна марля. Когато се използват живи дрожди, пресни клетки (4-5 дневна култура) се промиват три пъти в среда на Eagle с добавяне на 1,0% глюкоза. Обикновено се използва клетъчна суспензия от 10 8 и 10 9 клетки/ml. Дрождите се използват като тестови частици при откриването на дефекти в компонент C5.

Използване на суспензия от полистиренови частици: Пригответе 10% водна суспензия от полистиренови частици с диаметър 1,091 μm. Разрежда се в съотношение 1 + 1 с 0,2% разтвор на BSA в 0,15 М NaCl, центрофугира се. При дължина на вълната 253 nm, суспензия от полистирол 1 μg/ml дава абсорбция от 1,17x10 -3.

Приложение на суспензия от липополизахарид - маслено червено О в минерално масло: 2 g маслено червено се стриват в 50 ml диизодецил фталат (или вазелиново масло) в порцеланово хаванче. Центрофугирайте за 20 минути при 500 g. Добавете 10 μg от супернатантната фракция към 10 ml диоксин, измерете оптичната плътност при дължина на вълната 525 nm. Коефициентът на преобразуване е 0,92. На втория етап 40 mg липополизахарид (Е. coli 0.26 B6 и др.) се разтварят в 3 ml 0.15 М NaCl. След това към тази смес се добавя 1 ml разтвор на маслообразно червено О в диизодецилсулфат и сместа се суспендира за 90 секунди. Суспензията се използва веднага и може да се замразява.

За да се настрои реакцията на фагоцитоза, формализираните еритроцити могат да се използват като тестови частици.

Фагоцитоза на бактерии, бактерицидно

Експеримент със суспензия на живи бактерии: Обикновено се използва съотношение 3-10 микроби/фагоцит. В общ обем от 2 ml се смесват 1x106 фагоцити с 3x106 - 1x106 микроби. На практика 1 ml бактериална суспензия се добавя към 1 ml суспензия от фагоцити, към която са добавени 8 IU хепарин. Времето за взаимодействие обикновено е 30 минути, в някои случаи е по-дълго. След инкубацията се вземат 0,5 ml от сместа, добавят се 1,5 ml 0,1% разтвор на желатин в разтвор на Hank, охладен до 0°C, и се центрофугира 3-4 минути при 300 g. От утайката се приготвят петна, които се оцветяват по Pappenheim. Вижте 200 клетки (ако е възможно три пъти). Изчислете процента на фагоцитоза. Според броя на бактериите, съдържащи се в клетките, се изчислява индексът на фагоцитната активност: броят на фагоцитираните бактерии се умножава по процента на фагоцитните клетки; интензивността на фагоцитозата се изразява с числа от 1 до 4.

Степен 1: Фагоцитиран с I-4 бактерии
Степен 2: фагоцитирани 5-7 бактерии
Степен 3: фагоцитирани 8-10 бактерии
Степен 4: Повече от 10 фагоцитирани бактерии на клетка

При определяне на нивото на фагоцитоза на живи микроби, клетъчната утайка и фракцията на супернатантата се проверяват отделно. Броят на живите микроби се определя чрез пресяване върху твърда хранителна среда на 0,1 ml от изследваните фракции. Инкубира се 24 (48) часа При изчисляване на бактерицидната активност се приема, че една образувана колония съответства на един жив микроб.

За насочено изследване на бактерицидната активност се изследва кръвта на пациенти и здрави донори с добавяне на антибиотичен разтвор (5000 IU пеницилин и стрептомицин / ml) и без него, като се извършва и бактериален контрол. Състав на пробата: 0,3 ml разтвор на Hank + 0,1 ml нормален серум, получен от кръв, взета от 5 донора + 0,5 ml левкоцитна суспензия (10 7 клетки / ml) + 0,1 ml микробна суспензия (10 6 микроби / ml). Добавя се разтвор на антибиотици по 0,02 ml на проба. Инкубирайте пробите при 37°C и определете броя на микробите след 20 минути, 1,5 часа и 3 часа. За да направите това, вземете 0,1 ml от всяка проба, разредете избраните аликвоти с разтвор на Hank 10, 100 и 1000 пъти и нанесете върху загрят агар. Понякога, особено ако са добавени антибиотици, се приготвят междинни разреждания за точно преброяване на микробите (например 0,2 ml от пробата се смесват с 5 ml разтвор на Hank, центрофугират се 5 минути при 450 g, утайката се разтваря в 1,9 ml PBS, приложен към агар). Ако искате да съкратите продължителността на бактериологичното изследване, можете да определите микробите вътре в клетката чрез флуоресценция, като използвате акридиново жълто оцветяване.

Фагоцитоза на хлебни дрожди: приготвя се суспензия от 10 9 клетки/ml в 0,15 М NaCl. Смесете 0,1 ml от суспензията с 0,1 ml плазма на пациента, инкубирайте 30 минути при 37 ° C, добавете 0,2 ml (10 6) PMNL, инкубирайте 30 минути. Аликвотни части се вземат на интервали от 5 до 30 минути. Преброяват се 100 PMN и се определя броят на уловените частици дрожди на клетка. Известна е следната модификация: 50 µl от тестовия серум се добавят към 50 µl серум от морско свинче (предварително се разрежда в съотношение 1 + 1 със среда на Eagle с глюкоза), 50-200 µl суспензия от левкоцити ( 107 клетки/ml) се добавят, обемът се регулира до 450 µl със среда Игла с глюкоза и се инкубира за 30 min при 37 °C. След това добавете 50 μl суспензия от дрожди (10 8 клетки/ml), разбъркайте, инкубирайте за 40 минути при 37 °C. Добавете 50 μl L-75 Se-метионин (обща активност 100 kBq), разбъркайте и инкубирайте за 1 час при 37 °C. Клетките се утаяват чрез центрофугиране за 5 минути при 1000 g, промиват се два пъти с PBS, радиоактивността се измерва на гама брояч. Процентът на фагоцитираните дрожди се изчислява по формулата:

Фагоцитоза с използване на разтвор на маслено червено в минерално масло: 0,2 ml суспензия от частици се смесват с 0,8 ml клетъчна суспензия, предварително загрята до 37°C. След 5 минути инкубация се добавят 6 ml 0,15 М разтвор на NaCl, охладен до 0°C, съдържащ 126 μg/l N-етилмалеимид (за спиране на улавянето на частици). Центрофугирайте за 10 минути при 250 g. Супернатантната фракция се изхвърля, утайката се ресуспендира в разтвор на NaCl и N-етилмалеимид (виж по-горе), клетките се промиват два пъти. Клетките се лизират с ултразвук, отделя се маслено червено. Добавете 1 ml диоксан. Центрофугира се за 15 минути при 500 g, измерва се оптичната плътност при дължина на вълната 525 nm спрямо чист диоксан. Степента на фагоцитоза (IF) се определя като количеството минерално масло (mg), абсорбирано на минута от 10 7 клетки. Можете да използвате следната формула за изчисляване:

Изследване на фагоцитозата в монослоя на макрофагите:

1. Фаза: 2 ml клетъчна суспензия (200 000 клетки/ml) се добавят към стерилни полистиренови епруветки. Инокулирайте за 5 часа при 37°C, след това промийте със среда на Eagle. 2 ml културална среда с 10% инактивиран (30 минути, 56 °C) серум от говежди ембриони се добавя към тестови епруветки, инкубирани при 37 °C.

2. Фаза А: въвежда се суспензия от микроби (3-10/макрофаг), инкубира се 30-60 минути при 37 °C, епруветките се изплакват 6 пъти с порции от 3 ml от средата за отстраняване на нефагоцитираните микроби. Фиксирайте незабавно със смес от 1 част ледена оцетна киселина и 3 части метанол. Оцветете препарата по May - Grinwald, пребройте клетките.

Фаза B: определяне на вътреклетъчни живи бактерии. Последователността на операциите е същата като във фаза А преди етапа на фиксиране. След измиване внимателно отстранете всички следи от средата. Клетките се лизират, за което се добавят 2 ml 0,01% стерилен разтвор на говежди серумен албумин (4°C), като се разклаща многократно. Повечето от клетките се лизират след 20 минути. Освободените бактерии се определят чрез пресяване върху плътни хранителни среди.

Фагоцитоза на еритроцити: смесете 4x107 фагоцити с 5x107 тестови еритроцити в 5 ml PBS. Прехвърлете 2 ml от сместа в 5 mM фосфатен буфер, охладен до 0°C и центрофугирайте. Измерете оптичната плътност на супернатантната фракция при дължина на вълната 420 nm. Степента на фагоцитоза се определя от намаляването на съдържанието на хемоглобин в безклетъчната фаза, като се използват калибровъчни криви.

Опростен метод за определяне на клирънс

Пример за определяне на клирънса при плъхове: животни се инжектират интраперитонеално при 5x107 микроби на 100 g тегло (0,1 ml/100 g). Оптималната доза може да варира от 10 6 до 10 8 на 100 g тегло. С интервал от 1-2 часа се колят по 3 индивида от всяка група опитни животни; обща продължителност на експеримента 16 часа. Вземете стерилно 0,5 ml кръв от сърцето, 1 ml перитонеална течност, секретирайте белите дробове, черния дроб, далака и бъбреците. Цилиндрите се изрязват от тъканта на органа с пипета на Пастьор. Определяне на броя на микроорганизмите чрез култивиране върху течни и твърди хранителни среди.

Пример за определяне на клирънс при мишки: използват се колоиден въглен или маркирани с 51 [Cr] еритроцити на овен. Мишките (най-малко 5 индивида на опит) се инжектират интравенозно с 0,01 ml суспензия от въглища в размер на 16 mg на 100 g тегло. В рамките на 15 минути с интервал от 2 минути се вземат 0,025 ml кръв от ретроорбиталното пространство. Избраните 0,025 ml кръв се добавят към 2,0 ml 0,1% разтвор на Na 2 C0 3. След хемолиза концентрацията на въглища се определя колориметрично при дължина на вълната 675 nm, като се използват калибровъчни криви.

t е времето в минути, C е концентрацията на въглерод в пробата.

Коригирана стойност на фагоцитозата:

Функционален скрининг на фагоцити

Определяне на дегранулация (измерване на активността (β-глюкуропидаза): 107 левкоцити се суспендират в 0,8 ml PBS в пластмасови епруветки, разклащат се в продължение на 5 минути при 37 °C. Добавят се 0,2 ml сенсибилизиран LPS, флуорохромни частици (FC 80), охлаждат се 30°С минути върху лед, центрофугирайте за 10 минути при 250 g Проверете активността на ензима във фракцията на супернатанта Инкубирайте 0,9 ml от субстратната смес за 18 часа с 0,1 ml от изследваната фракция Добавете 2 ml 0,1 М NaOH, измерете оптичната плътност на вълна 410 nm.

Изчисление:

(OD 410 x20)/(1,84x18) = брой nmol вещество, освободено за 1 час от 107 левкоцити, т.е. степента на дегранулация се изразява в наномоли паранитрофенил-β-глюкуронид.

Метод за определяне на дефекти в миелопероксидазата: най-добри резултати се получават чрез биохимично определяне на H 2 0 2, което показва промени в метаболизма по време на фагоцитоза. За практически цели е много важно активирането на хексозо-монофосфатния шънт, редукцията на тетразолиев нитроен и свързването на екзогенен йод към PMNL протеини да корелира с образуването на H 2 0 2 . Обикновена кръвна натривка се фиксира за 30 секунди със смес от алкохол и формалин. Промива се с дестилирана вода и се оцветява за пероксидаза за 30 секунди. В клетките, съдържащи пероксидаза, се откриват включвания, оцветени в тъмно синьо.

Тест за редукция на тетразолиево нитро синьо (TNS). THC се редуцира от нормален PMNL до формазан. Смесете с 0,1 ml кръв 0,1 ml 0,1% разтвор на THC в 0,15 M NaCl, инкубирайте 20 минути при 37 ° C, разбъркайте отново добре. Инкорпорирането на формазан в клетките се определя чрез микроскопия. Резултатът се изразява като процент на формазан-положителни клетки.

Следният метод е малко по-сложен: 1 капка от кръвта на пациента се нанася върху покривно стъкло. Инкубирайте за 20 минути при 37°C във влажна камера, след това внимателно измийте стъклото със стерилен 0,15 М NaCl. Поставете покривно стъкло върху предметно стъкло, съдържащо 1 капка THC среда (0,5 ml серум + 0,3 ml стерилен 0,15 М NaCl + 0,6 ml THC, вижте по-горе). Инкубирайте за 30 минути във влажна камера при 37°C, отстранете покривното стъкло и изсушете на въздух. Фиксирайте с абсолютен метанол за 60 секунди и измийте с дестилирана вода. Оцветете за 5 минути със сафранин (1 g сафранин + 100 ml дестилирана вода + 40 ml глицерин), измийте. Формазан-позитивните клетки са големи, подобни на бласт и съдържат сини гранули. Обикновено в препарата се откриват около 30% от формазан-позитивните клетки.

Горните методи за оценка на фагоцитозата са обобщение на много голям брой публикации. По-подробна информация по тези въпроси можете да намерите в съответните трудове.

Същността на фагоцитозата може да се опише само с няколко думи. В този процес специални фагоцитни клетки "изчисляват", поглъщат и усвояват вредните частици, които са влезли в тялото, главно инфекции. Целта на феномена е да ни предпази от потенциални патогени, токсини и т.н. И как точно се осъществява механизмът на фагоцитозата? Той преминава през няколко етапа, които ще бъдат разгледани по-подробно по-долу.

Етапи на фагоцитоза:

Хемотаксис

Зловреден обект влиза в тялото и остава незабелязан там за кратко време. Този обект, било то бактерия, чуждо тяло или нещо друго, отделя специални вещества (хемоатрактанти) и директно влиза в контакт с кръвта или тъканите. Всичко това кара тялото да осъзнае наличието на агресор в него.

Възниква каскада от биохимични реакции. В първия етап на фагоцитозата мастоцитите отделят специални съединения в кръвта, които предизвикват възпалителна реакция. Началото на възпалителния процес "събужда" макрофагите и другите фагоцитни клетки от състояние на покой. Неутрофилите, улавяйки присъствието на хемоатрактанти, бързо излизат от кръвта в тъканите и се втурват да мигрират към възпалителния фокус.

Трудно е да се опише, а още по-трудно е да си го представим, но проникването на патоген в тялото води до стартиране на истински ефект на доминото, който включва стотици (!) различни физиологични явления, протичащи в клетъчните и субклетъчните органи. нива. Състоянието на имунната система на този етап на фагоцитоза може да се сравни със състоянието на разстроен пчелен кошер, когато многобройните му обитатели се готвят да атакуват нарушителя.

Адхезия

Последователността на фагоцитозата продължава с втория етап, реакцията на адхезия. Фагоцитите, които са се приближили до правилното място, разширяват процесите си към патогена, влизат в контакт с него и го разпознават. Те не бързат да атакуват веднага и предпочитат първо да се уверят, че не грешат за „непознатия“. Разпознаването на вреден агент става с помощта на специални рецептори на повърхността на фагоцитните мембрани.

Активиране на мембраната

В третия етап на фагоцитозата в клетките-защитници протичат невидими реакции, които ги подготвят да уловят и унищожат патогена.

Потапяне

Мембраната на фагоцита е течно, пластично вещество, което може да променя формата си. Какво прави, когато клетката срещне злонамерен обект. На снимката се вижда, че фагоцитът протяга своите "пипала" към чуждата частица. След това той постепенно се разпространява около нея, пълзи по нея и напълно я пленява.

Образуване на фагозоми

Когато фагоцитът покрие частица от всички страни, мембраната му се затваря отвън и вътре в клетката остава затворен мехур с атакувания обект вътре. Така клетката сякаш поглъща частицата. Тази везикула се нарича фагозома.

Образуване на фаголизозома (сливане)

Докато протичаха други етапи на фагоцитоза, вътре във фагоцита се подготвяше за използване неговото оръжие - лизозомни органели, съдържащи "храносмилателните" ензими на клетката. Веднага щом бактерия или друг вреден обект бъде уловен от защитна клетка, лизозомите се приближават до него. Техните мембрани се сливат с обвивката, обгръщаща частицата, и съдържанието им се излива в тази „торба“.

Убиване

Това е най-драматичният момент в целия механизъм на фагоцитозата. Уловеният обект се смила и разгражда от фагоцита.

Отстраняване на продуктите на разцепване

Всичко, което е останало от убитата бактерия или друга смляна частица, се отстранява от клетката. Бившата фаголизозома, която е торбичка с продукти на разграждане, се приближава до външната мембрана на фагоцита и се слива с него. Така остатъците от абсорбирания обект се отстраняват от клетката. Последователността на фагоцитоза е завършена.

Какво определя успеха на фагоцитозата?

Уви, не винаги целият описан процес върви като часовник. В някои случаи патогенът е по-силен от фагоцитната връзка на имунитета, той преодолява защитата и човекът се разболява. Мечников също забеляза, че ако твърде много гъбични клетки действат върху ларви и червеи, тогава заразените организми умират.

Друга възможна причина за неуспех е непълната фагоцитоза. Някои (често много опасни и инфекциозни) патогени са защитени от храносмилане от фагоцити. В резултат на това те просто влизат в тях, живеят там и се развиват, недостъпни за други фактори за защита на имунитета. В края на краищата "нормалната" имунна система няма да атакува собствените си клетки, тя не знае, че вътре в тях има опасен патоген ...

За да се избегне "неуспешна" фагоцитоза и да се осигури най-добрата имунна защита, се препоръчва да се вземе лекарството Трансфер фактор. Неговите информационни молекули предават информация на имунните клетки как да се държат с различни патогени и как да се отърват от тях. В резултат на това работата на имунната система се подобрява, а това повишава нейната устойчивост към все още невъзникнали заболявания и ефективността на лечението на вече развилите се.

Имунитет: механизми за разгръщане

Клетките и молекулите действат съгласувано, поддържайки се взаимно на различни етапи от развитието на имунния отговор.

Неспецифични механизми

На първия етап от сблъсък с чужд антиген се стартира неспецифичен патологичен защитен процес - възпаление, придружено от фагоцитоза, освобождаване на възпалителни медиатори - хистамин, серотонин, цитокини и др. Фагоцитите (макрофагите) абсорбират антигени и се свързват с Т- хелперни лимфоцити, представяйки ги на повърхността антигенни детерминанти. Т-хелперите предизвикват възпроизвеждане (секретиране на специфични белтъчни вещества - интерлевкини) на клонове на Т-убийци и В-лимфоцити, специфични за даден антиген от съществуващи стволови клетки, които са тествани за толерантност в ембрионалния период (теорията за клонална селекция на Бърнет).

Възпаление (lat. inflammatio) е сложен, локален и общ патологичен процес, който възниква в отговор на увреждане (alteratio) или действието на патогенен стимул и се проявява в реакции (exudatio и др.), насочени към елиминиране на продуктите на увреждане и, ако е възможно , след това агенти (дразнители), както и водещи до максимално възстановяване за тези състояния (пролиферация и др.) в зоната на увреждане.

Схема на развитие на възпаление. Под въздействието на увреждащ фактор, провъзпалителните цитокини се освобождават от макрофага, който привлича други клетки към фокуса на възпалението, в резултат на което агрегацията или освобождаването на активни вещества от тях, целостта на тъканта се нарушава .

Фагоцитоза (Phago - да поглъщам и cytos - клетка) - процес, при който специални клетки на кръвта и тъканите на тялото (фагоцити) улавят и усвояват патогени на инфекциозни заболявания и мъртви клетки. Осъществява се от два вида клетки: гранулирани левкоцити (гранулоцити), циркулиращи в кръвта, и тъканни макрофаги. Откриването на фагоцитозата принадлежи на И. И. Мечников, който разкрива този процес, като прави експерименти с морски звезди и дафния, въвеждайки чужди тела в телата им. Например, когато Мечников постави спора на гъба в тялото на дафния, той забеляза, че тя е атакувана от специални подвижни клетки. Когато въвежда твърде много спори, клетките нямат време да ги усвоят и животното умира. Мечников нарича клетките, които защитават тялото от бактерии, вируси, гъбични спори и др. Фагоцити.

При хората има два вида професионални фагоцити:неутрофили и моноцити (в тъканите - макрофаги)

Основните етапи на фагоцитната реакция са сходни и за двата вида клетки. Реакцията на фагоцитоза може да бъде разделена на няколко етапа:

1. Хемотаксис. В реакцията на фагоцитоза по-важна роля принадлежи на положителния хемотаксис. Като хемоатрактанти има продукти, секретирани от микроорганизми и активирани клетки във фокуса на възпалението (цитокини, левкотриен В4, хистамин), както и продукти на разцепване на компоненти на комплемента (С3а, С5а), протеолитични фрагменти на коагулация на кръвта и фактори на фибринолиза (тромбин , фибрин), невропептиди, фрагменти имуноглобулини и др. Въпреки това, "професионалните" хемотаксини са цитокини от групата на хемокините.

По-рано от другите клетки неутрофилите мигрират към фокуса на възпалението, а макрофагите пристигат много по-късно. Скоростта на хемотактичното движение за неутрофили и макрофаги е сравнима, разликите във времето на пристигане вероятно са свързани с различни скорости на тяхното активиране.

2. Адхезия на фагоцити към обекта.Това се дължи на наличието на повърхността на фагоцитите на рецептори за молекули, представени на повърхността на обекта (собствен или свързан с него). По време на фагоцитоза на бактерии или стари клетки на организма гостоприемник се разпознават крайни захаридни групи - глюкоза, галактоза, фукоза, маноза и др., които се намират на повърхността на фагоцитираните клетки. Разпознаването се извършва от лектиноподобни рецептори с подходяща специфичност, предимно от маноза-свързващ протеин и селектини, присъстващи на повърхността на фагоцитите.

В случаите, когато обектите на фагоцитоза не са живи клетки, а парчета въглища, азбест, стъкло, метал и др., Фагоцитите първо правят обекта на абсорбция приемлив за реакцията, обвивайки го със собствени продукти, включително компонентите на извънклетъчната матрица, която произвеждат.

Въпреки че фагоцитите са способни да абсорбират различни видове "неподготвени" обекти, фагоцитният процес достига най-голяма интензивност по време на опсонизацията, т.е. фиксиране върху повърхността на обекти на опсонини, за които фагоцитите имат специфични рецептори - за Fc фрагмента на антитела, компоненти на системата на комплемента, фибронектин и др.

3. Активиране на мембраната.На този етап обектът е подготвен за потапяне. Има активиране на протеин киназа С, освобождаване на калциеви йони от вътреклетъчните депа. Сол-гел преходите в системата на клетъчните колоиди и актин-миозиновите пренареждания са от голямо значение.

4. Гмуркане. Обектът се опакова

5. Образуване на фагозома.Затваряне на мембраната, потапяне на предмет с част от мембраната на фагоцита вътре в клетката.

6. Образуване на фаголизозома.Сливането на фагозома с лизозоми, което води до образуването на оптимални условия за бактериолиза и разделяне на мъртвата клетка. Механизмите на конвергенция на фагозомите и лизозомите не са ясни, вероятно има активно движение на лизозомите към фагозомите.

7. Убиване и разделяне.Голяма е ролята на клетъчната стена на смляната клетка. Основните вещества, участващи в бактериолизата: водороден прекис, продукти на азотния метаболизъм, лизозим и др. Процесът на унищожаване на бактериалните клетки е завършен поради активността на протеази, нуклеази, липази и други ензими, чиято активност е оптимална при ниски pH стойности.

8. Изпускане на продукти от разграждане.

Фагоцитозата може да бъде: завършена (умъртвяването и храносмилането са успешни), непълна (за редица патогени фагоцитозата е необходима стъпка в техния жизнен цикъл, например при микобактерии и гонококи).

активиране на комплемента.

Системата на комплемента работи като биохимична каскада от реакции. Комплементът се активира от три биохимични пътя: класически, алтернативен и лектин. И трите пътя на активиране произвеждат различни варианти на C3 конвертаза (протеин, който разцепва C3). Класическият път (той е първият открит, но е еволюционно нов) изисква антитела да бъдат активирани (специфичен имунен отговор, адаптивен имунитет), докато алтернативният и лектиновият път могат да бъдат активирани от антигени без наличието на антитела (неспецифичен имунен реакция, вроден имунитет). Резултатът от активирането на комплемента и в трите случая е един и същ: C3 конвертазата хидролизира C3, създавайки C3a и C3b и предизвиквайки каскада от по-нататъшна хидролиза на елементи на системата на комплемента и събития на активиране. При класическия път активирането на C3 конвертазата изисква образуването на C4b2a комплекса. Този комплекс се образува при разцепването на С2 и С4 от С1 комплекса. Комплексът C1 от своя страна трябва да се свърже с имуноглобулини от клас M или G за активиране.C3b се свързва с повърхността на патогените, което води до по-голям „интерес“ на фагоцитите към C3b-свързаните клетки (опсонизация). C5a е важен хемоатрактант, който помага за привличането на нови имунни клетки в зоната на активиране на комплемента. Както C3a, така и C5a имат анафилотоксична активност, като директно причиняват дегранулация на мастоцитите (като резултат освобождаване на възпалителни медиатори). C5b започва образуването на мембранно атакуващи комплекси (MACs), състоящи се от C5b, C6, C7, C8 и полимерен C9. MAC е цитолитичният краен продукт на активирането на комплемента. MAC образува трансмембранен канал, който причинява осмотичен лизис на целевата клетка. Макрофагите поглъщат патогени, белязани от системата на комплемента.

класически начин

Класическият път се задейства от активирането на комплекса C1 (включва една молекула C1q и две молекули C1r и C1s всяка). Комплексът C1 се свързва чрез C1q с имуноглобулини от клас M и G, свързани с антигени. Хексамерният C1q е оформен като букет от неотворени лалета, чиито "пъпки" могат да се свързват с Fc областта на антителата. Една единствена IgM молекула е достатъчна, за да инициира този път, активирането от IgG молекули е по-малко ефективно и изисква повече IgG молекули.

C1q се свързва директно с повърхността на патогена, което води до конформационни промени в молекулата C1q и активира две молекули на C1r серин протеази. Те разцепват C1s (също серинова протеаза). След това комплексът C1 се свързва с C4 и C2 и след това ги разцепва, за да образува C2a и C4b. C4b и C2a се свързват един с друг на повърхността на патогена, за да образуват класическия път C3 конвертаза, C4b2a. Появата на C3 конвертаза води до разделянето на C3 на C3a и C3b. C3b образува, заедно с C2a и C4b, C5 конвертазата на класическия път.

Алтернативен път

Алтернативен път се задейства чрез хидролиза на С3 директно върху повърхността на патогена. В алтернативния път участват факторите B и D. С тяхна помощ се образува ензимът C3bBb. Протеин P го стабилизира и осигурява дълготрайното му функциониране.Освен това PC3bBb активира C3, в резултат на което се образува C5-конвертаза и се задейства образуването на мембранно атакуващ комплекс. По-нататъшното активиране на крайните компоненти на комплемента става по същия начин, както при класическия път на активиране на комплемента.

Алтернативният път се различава от класическия по следния начин: активирането на системата на комплемента не изисква образуването на имунни комплекси, протича без участието на първите компоненти на комплемента - С1, С2, С4. Различава се и по това, че действа веднага след появата на антигени – негови активатори могат да бъдат бактериални полизахариди и липополизахариди, вирусни частици, туморни клетки.

Лектинов (манозен) път на активиране на системата на комплемента

Свързаният с манан (мананът е полимер на маноза) път на лектин е хомоложен на класическия път на активиране на системата на комплемента. Този път използва манан-свързващия лектин (MBL), протеин, подобен на класическия път на активиране на C1q, който се свързва с манозни остатъци и други захари върху мембраната, за да позволи разпознаването на различни патогени. MBL е протеин, принадлежащ към групата колекционирани протеини, произведени от черния дроб и може да активира каскадата на комплемента чрез свързване към повърхността на патогена. MBL е 2-6 връхна молекула, която образува комплекс с MASP-I (манан-свързваща лектин-асоциирана серинова протеаза, MBL-асоциирана серинова протеаза) и MASP-II. MASP-I и MASP-II са много подобни на C1r и C1s от класическия път на активиране и може да имат общ еволюционен предшественик. Когато въглехидратоопределящите MBL върхове се свържат със специфично ориентирани манозни остатъци върху фосфолипидния двоен слой на патогена, MASP-I и MASP-II се активират и разцепват C4 протеин в C4a и C4b, и C2 протеин в C2a и C2b. C4b и C2a след това се комбинират при повърхностния патоген чрез образуване на C3 конвертаза, докато C4a и C2b действат като хемоатрактанти.

Клетъчен имунен отговор

Вирусът, който е влязъл в тялото, се ендоцитира от макрофагите и след това частично се унищожава в ендоплазмения ретикулум (1). В резултат на това се образуват чужди фрагменти, които се експонират върху клетъчната повърхност на макрофагите (2). Тези фрагменти са "представени" от специална група мембранни протеини (MHC протеини). Комплексът от вирусния фрагмент и главния протеин на комплекса за хистосъвместимост [MHC (MHC)] се разпознава и свързва от Т-клетките, използвайки специфични (Т-клетъчни) рецептори. Сред огромния брой Т-клетки само няколко притежават съответния рецептор (3).Свързването води до активирането на тези Т-клетки и появата на техните селективни копия (4, "клонова селекция"). Различни хормоноподобни сигнални протеини, интерлевкини [IL (IL), вижте стр. 378]. Тези протеини се секретират от онези клетки на имунната система, които се активират, когато се свържат с Т клетките. Така активираните макрофаги с представен вирусен фрагмент секретират IL-1 (5), а Т клетките произвеждат IL-2 (6), който стимулира тяхното собствено клонално копиране и репликация на Т-хелперни клетки.

Клонираните и активираните Т клетки изпълняват различни функции в зависимост от техния тип. Цитотоксичните Т-клетки (в зелената диаграма) са в състояние да разпознаят и свържат тези клетки на тялото, които са заразени с вируси и носят вирусни фрагменти върху техните МНС рецептори (7). Цитотоксичните Т клетки отделят перфорин, протеин, който прониква в мембраната на свързаната заразена клетка, което води до клетъчен лизис (8).

Напротив, Т-хелперите (в синята диаграма) се свързват с В-клетките, които представят на повърхността си фрагменти от вируса, свързан с протеина МНС (9). Това води до селективно клониране на отделни В клетки и тяхната масивна пролиферация, Интерлевкинът стимулира (10) узряването на В клетките - трансформация в плазмени клетки (11), способни да синтезират и секретират антитела (12)