Cơ chế thực bào: các giai đoạn và các giai đoạn. Thực bào trong các phản ứng miễn dịch của cơ thể
Miễn dịch: cơ chế triển khai
Các tế bào và phân tử hoạt động phối hợp, hỗ trợ lẫn nhau ở các giai đoạn khác nhau của quá trình phát triển phản ứng miễn dịch.
Cơ chế không cụ thể
Ở giai đoạn đầu của sự va chạm với kháng nguyên lạ, một quá trình bảo vệ bệnh lý không đặc hiệu được khởi động - viêm, kèm theo hiện tượng thực bào, giải phóng các chất trung gian gây viêm - histamine, serotonin, cytokine, v.v. Thực bào (đại thực bào) hấp thụ kháng nguyên và tiếp xúc với T- tế bào lympho trợ giúp, trình bày chúng trên bề mặt các yếu tố quyết định kháng nguyên. T-helpers kích hoạt sự sinh sản (tiết ra các chất protein cụ thể - interleukin) của các dòng vô tính của chất diệt T và tế bào lympho B đặc hiệu cho một kháng nguyên nhất định từ các tế bào gốc tồn tại đã được kiểm tra khả năng chịu đựng trong thời kỳ phôi thai (lý thuyết chọn lọc vô tính của Burnet).
Viêm (lat. viêm) là một quá trình bệnh lý phức tạp, cục bộ và tổng quát xảy ra để phản ứng với thiệt hại (alteratio) hoặc tác động của một kích thích gây bệnh và tự biểu hiện trong các phản ứng (exudatio, v.v.) nhằm loại bỏ các sản phẩm gây hại, và nếu có thể , sau đó là các tác nhân (chất gây kích ứng), cũng như dẫn đến sự phục hồi tối đa cho các tình trạng này (tăng sinh, v.v.) trong vùng tổn thương.Đề án về sự phát triển của chứng viêm. Dưới tác động của một yếu tố gây hại, các cytokine tiền viêm được giải phóng bởi đại thực bào, chúng thu hút các tế bào khác đến tâm điểm của tình trạng viêm, do đó, sự tập hợp hoặc giải phóng các chất hoạt động của chúng, tính toàn vẹn của mô bị vi phạm. .
Thực bào (Phago - ăn thịt và tế bào - tế bào) - một quá trình trong đó các tế bào đặc biệt của máu và các mô của cơ thể (thực bào) bắt và tiêu hóa mầm bệnh của các bệnh truyền nhiễm và tế bào chết. Nó được thực hiện bởi hai loại tế bào: bạch cầu hạt (bạch cầu hạt) lưu hành trong máu và đại thực bào mô. I. I. Mechnikov, người đã tiết lộ quá trình này bằng cách làm thí nghiệm với sao biển và giáp xác, đưa các dị vật vào cơ thể chúng. Ví dụ, khi Mechnikov đặt một bào tử của nấm vào cơ thể một loài giáp xác, ông nhận thấy rằng nó đã bị tấn công bởi các tế bào di động đặc biệt. Khi anh ta đưa vào quá nhiều bào tử, các tế bào không có thời gian để tiêu hóa hết, và con vật đã chết. Mechnikov gọi các tế bào bảo vệ cơ thể khỏi vi khuẩn, vi rút, bào tử nấm,… là thực bào.Ở người, có hai loại thực bào chuyên nghiệp:bạch cầu trung tính và bạch cầu đơn nhân (trong mô - đại thực bào)
Các giai đoạn chính của phản ứng thực bào là tương tự nhau đối với cả hai loại tế bào. Phản ứng thực bào có thể được chia thành nhiều giai đoạn:
1. Hóa trị. Trong phản ứng thực bào, một vai trò quan trọng hơn thuộc về điều hòa hóa học tích cực. Là thuốc hóa trị, có các sản phẩm được tiết ra bởi vi sinh vật và các tế bào hoạt hóa trong tâm điểm của viêm (cytokine, leukotriene B4, histamine), cũng như các sản phẩm phân cắt của các thành phần bổ thể (C3a, C5a), các mảnh phân giải protein của các yếu tố đông máu và tiêu sợi huyết (thrombin , fibrin), neuropeptides, các mảnh globulin miễn dịch, vv Tuy nhiên, chemotaxin "chuyên nghiệp" là các cytokine của nhóm chemokine.
Sớm hơn các tế bào khác, bạch cầu trung tính di chuyển đến tâm điểm của chứng viêm và đại thực bào đến muộn hơn nhiều. Tốc độ di chuyển hóa học của bạch cầu trung tính và đại thực bào là có thể so sánh được, sự khác biệt về thời gian đến có lẽ liên quan đến tốc độ hoạt hóa khác nhau của chúng.
2. Sự bám dính của thực bào vào vật thể.Đó là do sự hiện diện trên bề mặt thực bào của các thụ thể đối với các phân tử được trình bày trên bề mặt của đối tượng (riêng hoặc liên kết với nó). Trong quá trình thực bào của vi khuẩn hoặc tế bào cũ của sinh vật chủ, các nhóm saccharide cuối cùng được nhận biết - glucose, galactose, fucose, mannose, v.v., được trình bày trên bề mặt của các tế bào bị thực bào. Sự nhận biết được thực hiện bởi các thụ thể giống lectin có tính đặc hiệu thích hợp, chủ yếu bởi protein liên kết mannose và các selectin hiện diện trên bề mặt của thực bào.
Trong những trường hợp đối tượng của thực bào không phải là tế bào sống, mà là các mảnh than, amiăng, thủy tinh, kim loại, v.v., trước tiên, thực bào làm cho đối tượng hấp thụ có thể chấp nhận được phản ứng, bọc nó bằng các sản phẩm của chính chúng, bao gồm các thành phần của chất nền ngoại bào mà chúng tạo ra.
Mặc dù các tế bào thực bào có khả năng hấp thụ nhiều loại vật thể "không chuẩn bị" khác nhau, nhưng quá trình thực bào đạt cường độ lớn nhất trong quá trình opso hóa, i. sự cố định trên bề mặt của các đối tượng opsonin mà tế bào có các thụ thể cụ thể - đối với đoạn Fc của kháng thể, các thành phần của hệ thống bổ thể, fibronectin, v.v.
3. Kích hoạt màng.Ở giai đoạn này, đối tượng được chuẩn bị để ngâm. Có một sự hoạt hóa của protein kinase C, sự giải phóng các ion canxi từ các kho nội bào. Sự chuyển đổi sol-gel trong hệ thống chất keo tế bào và sự sắp xếp lại actin-myosin có tầm quan trọng lớn.
4. Lặn. Đối tượng đang bao bọc
5. Hình thành phagosome.Sự đóng màng, nhúng vật có một phần màng thực bào vào bên trong tế bào.
6. Hình thành phagolysosome.Sự hợp nhất của phagosome với lysosome, dẫn đến việc hình thành các điều kiện tối ưu cho quá trình phân hủy vi khuẩn và phân tách tế bào chết. Cơ chế hội tụ của các phasome và lysosome không rõ ràng, có thể là có sự di chuyển tích cực của các lysosome đến các phagosomes.
7. Giết và chia nhỏ.Vai trò của thành tế bào tiêu hoá rất lớn. Các chất chính tham gia vào quá trình phân hủy vi khuẩn: hydrogen peroxide, các sản phẩm của quá trình chuyển hóa nitơ, lysozyme, ... Quá trình tiêu diệt tế bào vi khuẩn được hoàn thành do hoạt động của protease, nuclease, lipase và các enzym khác, hoạt động của chúng là tối ưu ở mức thấp. giá trị pH.
8. Giải phóng các sản phẩm suy thoái.
Thực bào có thể là: hoàn thành (tiêu diệt và tiêu hóa thành công), không hoàn toàn (đối với một số mầm bệnh, thực bào là một bước cần thiết trong vòng đời của chúng, ví dụ như ở mycobacteria và gonococci).
kích hoạt bổ sung.
Hệ thống bổ thể hoạt động như một dòng phản ứng sinh hóa. Sự bổ sung được kích hoạt bởi ba con đường sinh hóa: con đường cổ điển, con đường thay thế và lectin. Cả ba con đường hoạt hóa đều tạo ra các biến thể khác nhau của C3 convertase (một loại protein phân cắt C3). Con đường cổ điển (nó là con đường đầu tiên được phát hiện, nhưng là mới về mặt tiến hóa) yêu cầu các kháng thể được kích hoạt (đáp ứng miễn dịch đặc hiệu, miễn dịch thích ứng), trong khi con đường thay thế và lectin có thể được kích hoạt bởi kháng nguyên mà không cần sự hiện diện của kháng thể (miễn dịch không đặc hiệu đáp ứng, miễn dịch bẩm sinh). Kết quả của sự hoạt hóa bổ thể trong cả ba trường hợp là như nhau: C3 convertase thủy phân C3, tạo ra C3a và C3b và gây ra một dòng thủy phân tiếp tục các phần tử của hệ thống bổ thể và các sự kiện hoạt hóa. Theo con đường cổ điển, sự hoạt hóa của C3 convertase đòi hỏi sự hình thành của phức hợp C4b2a. Phức hợp này được hình thành khi sự phân cắt của C2 và C4 bởi phức chất C1. Đến lượt nó, phức hợp C1 phải liên kết với các globulin miễn dịch lớp M hoặc G. C3b liên kết với bề mặt của mầm bệnh, dẫn đến sự “quan tâm” nhiều hơn đến các tế bào thực bào trong các tế bào liên kết với C3b (opsonization). C5a là một chất hóa trị quan trọng giúp thu hút các tế bào miễn dịch mới đến khu vực kích hoạt bổ thể. Cả C3a và C5a đều có hoạt tính phản vệ, trực tiếp gây ra sự suy giảm các tế bào mast (do đó, giải phóng các chất trung gian gây viêm). C5b bắt đầu hình thành phức hợp tấn công màng (MAC) bao gồm C5b, C6, C7, C8 và polyme C9. MAC là sản phẩm cuối cùng của quá trình hoạt hóa bổ thể. MAC tạo thành một kênh xuyên màng gây ra sự ly giải thẩm thấu của tế bào đích. Các đại thực bào nhấn chìm các mầm bệnh được hệ thống bổ thể đánh dấu.
cách cổ điển
Con đường cổ điển được thực hiện bằng cách kích hoạt phức hợp C1 (nó bao gồm một phân tử C1q và hai phân tử C1r và C1s mỗi phân tử). Phức hợp C1 liên kết qua C1q với các globulin miễn dịch lớp M và G liên kết với các kháng nguyên. Hexameric C1q có hình dạng giống như một bó hoa tulip chưa mở, các "chồi" của chúng có thể liên kết với vùng Fc của các kháng thể. Một phân tử IgM đơn lẻ là đủ để bắt đầu con đường này, quá trình hoạt hóa bởi các phân tử IgG kém hiệu quả hơn và cần nhiều phân tử IgG hơn.
C1q liên kết trực tiếp với bề mặt của mầm bệnh, dẫn đến thay đổi cấu trúc trong phân tử C1q và kích hoạt hai phân tử C1r serine protease. Chúng phân cắt C1s (cũng là một serine protease). Sau đó, phức chất C1 liên kết với C4 và C2 rồi phân cắt chúng để tạo thành C2a và C4b. C4b và C2a liên kết với nhau trên bề mặt mầm bệnh tạo thành con đường cổ điển C3 convertase, C4b2a. Sự xuất hiện của C3 convertase dẫn đến sự phân tách C3 thành C3a và C3b. C3b hình thành, cùng với C2a và C4b, chuyển đổi C5 của con đường cổ điển.
Con đường thay thế
Một con đường thay thế được kích hoạt bằng cách thủy phân C3 trực tiếp trên bề mặt của mầm bệnh. Các yếu tố B và D tham gia vào con đường thay thế. Với sự giúp đỡ của chúng, enzym C3bBb được hình thành. Protein P ổn định nó và đảm bảo nó hoạt động lâu dài. Hơn nữa, PC3bBb kích hoạt C3, kết quả là C5-convertase được hình thành và sự hình thành của phức hợp tấn công màng được kích hoạt. Việc kích hoạt thêm các thành phần bổ thể đầu cuối xảy ra theo cách tương tự như trong con đường kích hoạt bổ thể cổ điển.
Con đường thay thế khác với con đường cổ điển ở chỗ: sự hoạt hóa của hệ thống bổ thể không đòi hỏi sự hình thành các phức hợp miễn dịch; nó xảy ra mà không có sự tham gia của các thành phần bổ thể đầu tiên - C1, C2, C4. Nó cũng khác ở chỗ nó hoạt động ngay sau khi xuất hiện kháng nguyên - chất kích hoạt của nó có thể là polysaccharid của vi khuẩn và lipopolysaccharid, các phần tử virus, tế bào khối u.
Lectin (mannose) con đường kích hoạt hệ thống bổ thể
Mannan (mannan là một polyme của mannose) - con đường lectin liên kết tương đồng với con đường hoạt hóa cổ điển của hệ thống bổ thể. Con đường này sử dụng lectin liên kết mannan (MBL), một protein tương tự như con đường hoạt hóa C1q cổ điển, liên kết với cặn mannose và các loại đường khác trên màng để cho phép nhận biết nhiều loại mầm bệnh. MBL là một protein thuộc nhóm collectin của protein do gan sản xuất và có thể hoạt hóa dòng bổ thể bằng cách liên kết với bề mặt mầm bệnh. MBL là một phân tử có 2-6 đỉnh tạo thành phức hợp với MASP-I (Mannan-binding lectin Associated Serine Protease, MBL-linked serine protease) và MASP-II. MASP-I và MASP-II rất giống với C1r và C1 của con đường kích hoạt cổ điển và có thể có một tổ tiên tiến hóa chung. Khi các đỉnh MBL xác định carbohydrate liên kết với các gốc mannose được định hướng cụ thể trên lớp kép phospholipid của mầm bệnh, MASP-I và MASP-II được kích hoạt và phân cắt protein C4 thành C4a và C4b, và protein C2 thành C2a và C2b. C4b và C2a sau đó kết hợp tại mầm bệnh trên bề mặt bằng cách hình thành C3 convertase, trong khi C4a và C2b hoạt động như chất hóa trị.Phản ứng miễn dịch tế bào
Virus xâm nhập vào cơ thể sẽ bị nội bào bởi các đại thực bào và sau đó bị tiêu diệt một phần trong lưới nội chất (1). Kết quả là, các mảnh lạ được hình thành, chúng lộ ra trên bề mặt tế bào của đại thực bào (2). Những đoạn này được “trình bày” bởi một nhóm protein màng đặc biệt (protein MHC). Phức hợp của đoạn virus và protein phức hợp tương thích mô chính [MHC (MHC)] được các tế bào T nhận biết và liên kết bằng cách sử dụng các thụ thể cụ thể (tế bào T). Trong số rất nhiều tế bào T, chỉ một số ít có thụ thể thích hợp (3). Sự liên kết dẫn đến sự hoạt hóa của các tế bào T này và sự xuất hiện của các bản sao chọn lọc của chúng (4, "chọn lọc vô tính"). Các protein tín hiệu giống như hormone khác nhau, interleukin [IL (IL), xem tr. 378]. Các protein này được tiết ra bởi các tế bào của hệ thống miễn dịch và được kích hoạt khi liên kết với tế bào T. Do đó, các đại thực bào được hoạt hóa với một đoạn virus đã trình bày tiết ra IL-1 (5), và các tế bào T sản xuất IL-2 (6), kích thích sự sao chép vô tính của chính chúng và sao chép các tế bào T-helper.
Tế bào T được nhân bản và kích hoạt thực hiện các chức năng khác nhau tùy thuộc vào loại của chúng. Tế bào T gây độc tế bào (trong sơ đồ màu xanh lá cây) có thể nhận ra và liên kết các tế bào của cơ thể bị nhiễm vi rút và mang các mảnh vi rút trên các thụ thể MHC của chúng (7). Tế bào T gây độc tế bào tiết ra perforin, một loại protein thấm qua màng của tế bào bị nhiễm liên kết, dẫn đến ly giải tế bào (8).
Ngược lại, T-helpers (trong sơ đồ màu xanh lam) liên kết với tế bào B, chúng hiện diện trên các mảnh bề mặt của virus liên kết với protein MHC (9). Điều này dẫn đến nhân bản có chọn lọc các tế bào B riêng lẻ và sự gia tăng lớn của chúng, Interleukin kích thích (10) sự trưởng thành của tế bào B - biến đổi thành tế bào plasma (11) có khả năng tổng hợp và tiết ra kháng thể (12)
Thực bào (từ tiếng Hy Lạp phago - I devour và cytos - một tế bào) là một quá trình hấp thụ và tiêu hóa các chất kháng nguyên, bao gồm cả vi sinh vật, bởi các tế bào có nguồn gốc trung bì, được gọi là thực bào. I. I. Mechnikov chia thực bào thành đại thực bào và vi đại thực bào. Hiện tại, macro và vi mô được hợp nhất trong một hệ thống đại thực bào (SMF). Hệ thống này bao gồm:
- đại thực bào mô - tế bào biểu mô,
- tế bào nội mô lưới hình sao (tế bào Kupffer),
- đại thực bào phế nang và phúc mạc nằm trong phế nang và khoang phúc mạc,
- tế bào biểu bì trắng của da (tế bào Langerhans), v.v.
Các vi thực bào bao gồm:
- bạch cầu trung tính,
- bạch cầu ái toan,
- bạch cầu ái kiềm.
Chức năng của đại thực bào vô cùng đa dạng. Chúng là cơ quan đầu tiên phản ứng với một chất lạ, là những tế bào chuyên biệt hấp thụ và tiêu diệt các chất lạ trong cơ thể (tế bào chết, tế bào ung thư, vi khuẩn, vi rút và các vi sinh vật khác, kháng nguyên, chất vô cơ không chuyển hóa được). Ngoài ra, các đại thực bào sản xuất ra nhiều hoạt chất sinh học - các enzym (bao gồm lysozyme, peroxidase, esterase), các protein bổ thể, các chất điều hòa miễn dịch như interleukin. Sự hiện diện trên bề mặt của các đại thực bào của các thụ thể đối với các globulin miễn dịch (Am) và bổ thể, cũng như một hệ thống các chất trung gian, đảm bảo sự tương tác của chúng với các tế bào lympho T và B. Đồng thời, đại thực bào kích hoạt các chức năng bảo vệ của tế bào lympho T. Do sự hiện diện của các thụ thể đối với bổ thể và Am, cũng như hệ thống tương hợp mô Ag (HLA), các đại thực bào tham gia vào quá trình gắn kết và nhận biết các kháng nguyên. Như vậy, thực bào có ba chức năng:
- bảo vệ, kết hợp với việc làm sạch cơ thể khỏi các tác nhân lây nhiễm, các sản phẩm phân hủy mô, v.v.;
- đại diện, bao gồm trong việc trình bày các biểu mô kháng nguyên cho các tế bào lympho trên màng thực bào;
- tiết, liên quan đến việc bài tiết các enzym lysosome và các chất hoạt tính sinh học khác - cytokine, đóng một vai trò quan trọng trong quá trình sinh miễn dịch.
Có các dòng chảy tuần tự sau đây các giai đoạn thực bào.
- Hóa chất điều trị- chuyển động có chủ đích của thực bào theo hướng gradient hóa học của chất hóa trị trong môi trường. Khả năng điều hòa hóa học có liên quan đến sự hiện diện trên màng của các thụ thể cụ thể đối với chất hóa trị (đối tượng của hiện tượng thực bào), có thể là vi khuẩn, các sản phẩm thoái hóa của các mô cơ thể, v.v.
- Kết dính(sự gắn kết) cũng được trung gian bởi các thụ thể tương ứng, nhưng có thể tiến hành theo các quy luật của tương tác hóa lý không đặc hiệu. Các hạt được hấp phụ trên bề mặt của đại thực bào.
- Nội bào(bắt giữ) - Xảy ra sự xâm nhập của màng tế bào, bắt giữ một hạt lạ và ngâm nó trong nguyên sinh chất. Kết quả của quá trình nội bào, một không bào thực bào được hình thành - phagosome(tức là bong bóng trong nguyên sinh chất xung quanh hạt hấp thụ).
- tiêu hóa nội bào- bắt đầu bằng sự hấp thụ các vật bị thực bào. Phagosome hợp nhất với lysosome của thực bào, nơi chứa hàng chục loại enzyme, và sự hình thành phagolysosome (phá hủy) hạt bị bắt giữ bởi các enzyme xảy ra. Khi một phần tử của sinh vật bị hấp thụ (ví dụ, tế bào chết hoặc các bộ phận của nó, các protein của chính nó), nó sẽ bị các enzym phagolysosome phân tách thành các chất không có tính kháng nguyên (axit amin, axit béo, nucleotide, monosugar). Nếu một phần tử lạ bị hấp thụ, thì các enzym của phagolysosome không thể phân hủy chất này thành các thành phần không phải kháng nguyên. Trong những trường hợp như vậy, phagolysosome với phần còn lại của kháng nguyên vẫn giữ được tính ngoại lai sẽ được đại thực bào truyền đến các tế bào lympho T và B, tức là một liên kết miễn dịch cụ thể được bật lên.
chức năng bài tiết là sự bài tiết của thực bào các chất có hoạt tính sinh học - cytokine - đây là interleukin-1 và interleukin-2, là những chất trung gian tế bào có tác dụng điều hòa sự tăng sinh, biệt hóa và chức năng của thực bào, tế bào lympho, nguyên bào lympho và các tế bào khác. Các đại thực bào sản xuất và tiết ra các yếu tố điều hòa quan trọng như prostaglandin, leukotrienes, nucleotide chu kỳ với một loạt các hoạt động sinh học. Ngoài ra, đại thực bào tổng hợp và tiết ra một số sản phẩm có hoạt tính kháng khuẩn, kháng virus và gây độc tế bào (gốc oxy O2-H2O2, lysozyme, interferon, v.v.).
Quá trình thực bào được tăng cường bởi các kháng thể opsonin, vì liên kết hoặc kháng nguyên dễ dàng hấp thụ hơn trên bề mặt của thực bào, do sự hiện diện của các thụ thể đối với các kháng thể này ở sau. Sự tăng cường khả năng thực bào bởi các kháng thể được gọi là thuốc phiện, I E. chuẩn bị vi sinh vật để bắt bởi thực bào. Sự thực bào của các kháng nguyên opso hóa được gọi là miễn dịch.
Để mô tả hoạt động của quá trình thực bào được giới thiệu chỉ số thực bào.Để xác định nó, số lượng vi khuẩn được hấp thụ bởi một tế bào thực bào được đếm dưới kính hiển vi. Cũng thích chỉ số opsonophagocyticđại diện cho tỷ lệ các thông số thực bào thu được với huyết thanh miễn dịch và không miễn dịch. Chỉ số thực bào và chỉ số opsonophagocytic được sử dụng trong miễn dịch học lâm sàng để đánh giá tình trạng miễn dịch và tình trạng miễn dịch.
Quá trình thực bào đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ kháng khuẩn, kháng nấm và kháng virus, duy trì sức đề kháng của cơ thể đối với các chất lạ. Thực bào cũng có tác dụng kích hoạt và ức chế tế bào lympho, tham gia vào quá trình hồi sức dung nạp miễn dịch, chống nhiễm trùng, cấy ghép và miễn dịch kháng u, và một số dạng dị ứng (HRT).
Thực bào là một quá trình hấp thụ đặc biệt của tế bào gồm các phức hợp đại phân tử lớn hoặc các cấu trúc tiểu thể. Thực bào "chuyên nghiệp" ở động vật có vú là hai loại tế bào đã biệt hóa - bạch cầu trung tính và đại thực bào, chúng trưởng thành trong tủy xương từ HSC và chia sẻ một tế bào tiền thân trung gian chung.Bạch cầu trung tính lưu thông trong máu ngoại vi và chiếm một phần đáng kể trong số bạch cầu trong máu - 60-70%, hoặc 2,5-7,5x109 tế bào trên 1 lít máu. Thông thường, bạch cầu trung tính không rời khỏi mạch vào các mô ngoại vi, nhưng chúng là những người đầu tiên “lao nhanh” (tức là trải qua quá trình thoát mạch) đến vị trí viêm do sự biểu hiện nhanh chóng của các phân tử kết dính - VCAM-1 (VLA-4 endothelial ligand) và tích phân CDllb / CD18 (phối tử trên nội mô ICAM-1). Dấu hiệu độc quyền - CD66a và CD66d (ung thư biểu mô phôi Ag) được xác định trên màng ngoài của chúng.
Bạch cầu đơn nhân và đại thực bào. Bạch cầu đơn nhân là một “dạng trung gian”, trong máu chúng chiếm từ 5-10% tổng số bạch cầu. Mục đích của chúng là trở thành và trở thành đại thực bào ít vận động trong các mô.
Đại thực bào gan - Tế bào Kupffer, não - microglia, đại thực bào phổi - phế nang và mô kẽ, thận - trung bì.
♦ Các thụ thể trên màng đại thực bào.
O CD115 - Rc đối với yếu tố kích thích thuộc địa bạch cầu đơn nhân (M-CSF). Nó cũng có trên màng tế bào tiền thân đa năng của bạch cầu hạt và bạch cầu đơn nhân và tiền chất đơn năng của bạch cầu đơn nhân, o Bốn cấu trúc được biết đến - Rc trên màng tế bào của đại thực bào, liên kết những gì mà đại thực bào có khả năng hấp thụ theo cơ chế sự thực bào
CD14 - Rc cho phức hợp của LPS vi khuẩn với protein liên kết lipopolysaccharide trong huyết thanh (LBP), cũng như phức hợp LPS với các sản phẩm vi sinh vật khác (ví dụ, nội độc tố). - Rc để liên kết các mảnh của màng phospholipid và các thành phần khác của chính chúng bị hư hỏng và chết tế bào (Rc cho "rác", thụ thể của người nhặt rác). Chẳng hạn như CD 163 - Rc cho hồng cầu "già". Rc ràng buộc mannose. Chỉ hiện diện trên màng của đại thực bào mô.
- RC cho phần bổ sung - CR3 (CDllb / CD18 tích phân) và CR4 (tích phân CDllc / CD18). Ngoài bổ thể, chúng còn liên kết với một số sản phẩm vi khuẩn: lipopolysaccharides, Leishmania lipophosphoglycan, hemagglutinin từ các sợi Bordetella, cấu trúc bề mặt của tế bào nấm men thuộc các chi Candida và Histoplasma.
CD64 - Rc cho "đuôi" (các đoạn Fc) của IgG - FcyRI (Fcy-Rc của loại đầu tiên), cung cấp khả năng thực bào các phức hợp miễn dịch bởi các đại thực bào. Chúng được coi là dấu hiệu màng của bạch cầu đơn nhân / đại thực bào, vì chúng chỉ được biểu hiện trên các tế bào này. Các phân lớp của IgG về mức độ liên kết với FcyRI theo thứ tự sau: IgG3> IgGl> IgG4> IgG2. o Các thụ thể tương tác với miễn dịch tế bào lympho. Cùng với CD64 đã được đề cập, chúng bao gồm: - Rc cho các cytokine được sản xuất bởi các tế bào lympho miễn dịch. Liên kết với các phối tử Rc đối với IFNy và đối với yếu tố hoại tử khối u (TNF) dẫn đến hoạt hóa đại thực bào. Ngược lại, đại thực bào bị bất hoạt thông qua Rc đối với IL-10. - CD40, B7, MHC-I / II - các phân tử màng để tiếp xúc với các phân tử màng bổ sung của tế bào lympho, tức là
cho các tương tác trực tiếp giữa các tế bào. Bạch cầu trung tính không có các thụ thể như vậy. hậu quả của hiện tượng thực bào. Sau khi thực bào bao bọc màng của nó xung quanh đối tượng hấp thụ và bao bọc nó trong một túi màng gọi là phagosome, các sự kiện sau sẽ xảy ra.
♦ Sự phân cắt của vật chất bị thực bào. Quá trình này tuân theo các cơ chế sinh hóa giống nhau ở tất cả các tế bào thực bào, o Lysosome là các bào quan nội bào đặc biệt chứa một tập hợp các enzym thủy phân (acid protease và hydrolase) với độ pH tối ưu xấp xỉ 4,0. Trong tế bào, các lysosome kết hợp với các phagosomes thành một phagolysosome, nơi diễn ra các phản ứng tiêu hóa vật liệu được hấp thụ. 02-), oxy đơn (1O2), gốc hydroxyl (OH-), hypochloride (OC1-), oxit nitric ( KHÔNG +). Các gốc này cũng tham gia vào quá trình tiêu diệt đối tượng bị thực bào.
♦ Tiết các enzym lytic và các gốc oxy hóa vào khoảng gian bào, tại đây chúng cũng có tác dụng diệt khuẩn (nhưng cũng ảnh hưởng đến các mô của chính chúng).
Bạch cầu trung tính, ngoài các chất đã được đề cập, sản xuất và tiết ra collagenase, cathepsin G, gelatinase, elastase và phospholipase A2.
♦ Sản xuất và bài tiết các cytokine. Các đại thực bào và bạch cầu trung tính, được kích hoạt bởi các sản phẩm vi sinh vật, bắt đầu sản xuất cytokine và các chất trung gian hoạt động sinh học khác, tạo ra tình trạng viêm tiền miễn dịch ở vị trí đưa các chất bên ngoài vào, chuẩn bị khả năng phát triển phản ứng miễn dịch tế bào lympho.
O Đại thực bào sản xuất interleukin (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12); yếu tố hoại tử khối u a (TNFa); prostaglandin; leukotriene B4 (LTB4); yếu tố hoạt hóa tiểu cầu (PAF).
o Bạch cầu trung tính sản xuất TNFa, IL-12, chemokine IL-8, LTB4, và PAT.
♦ Xử lý và trình bày Ag - sự hình thành phức hợp bên trong tế bào từ các sản phẩm của sự phân cắt vật chất được thực bào với các phân tử MHC-II của chính nó và sự biểu hiện của phức hợp này trên bề mặt tế bào với “mục đích” trình bày Ag để T nhận biết -các tế bào bạch cầu. Quá trình này chỉ được thực hiện bởi các đại thực bào.
Một số lượng lớn các phương pháp để định lượng khả năng thực bào đã được mô tả trong tài liệu. Bộ sách này không cho phép chúng tôi mô tả chi tiết tất cả chúng, vì vậy chúng tôi sẽ giới hạn bản thân chỉ mô tả một số ít.
Vật liệu và thiết bị
Để làm việc, bạn phải có:
Thuốc chống đông máu citratedextrose: 8 g axit xitric. 22 g natri xitrat ba nhóm thế (hai nước), 24,5 g glucozơ được hòa tan trong 1 lít nước;
Dung dịch dextrosodextran: 4,5 g NaCl, 25 g glucose, 30 g dextran (số mol. Trọng lượng 500.000) trong 1 l;
Dung dịch amoni clorua: 9 phần 0,83% amoni clorua, 1 phần đệm Tris-HCl pH 7,2 (20,6 g / l);
Một hỗn hợp của ficoll - vizotrast: 9 g ficoll, 20 ml vizotrast, 100 ml H 2 0 đã được làm kín, tỷ trọng 1,077;
Chất nền cho β-glucuronidase: 31,5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronid và 100 μm Triton X 100 được hòa tan trong 100 ml dung dịch đệm natri axetat 0,05 M pH 5;
Thuốc thử thiếu hụt myeloperoxidase: cố định (10 ml 37% formaldehyde với 90 ml etanol tuyệt đối), dung dịch cơ chất (100 ml EDTA 30%, 0,3 g benzidine clorua, 0,038 g ZnS0 4 x7H 2 0,1 ml nước cất, 1 .0 g CH 3 C00Nax3H 2 0, 0,7 ml 3% H 2 0 2); đưa pH của dd NaOH 1,0M về 6,0.
Thuốc thử thương mại:
FSB, giải pháp của Hank và môi trường Eagle-MEM (Viện Dinh dưỡng và Chế phẩm Miễn dịch Nhà nước, Berlin-Weissensee, CHDC Đức);
Heparin (5000 IU / mg) (Gedeon Richter, Hungary);
Huyết thanh của phôi bò (có thể sử dụng công ty Flow Laboratories, Mỹ, một công ty khác);
Visotrast (Danh sách VEB Fahlberg, Magdeburg, CHDC Đức);
Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, CHDC Đức);
Dextran, ficoll (Pharmacia, Thụy Điển);
Cacbon dạng keo Сl1 / 143a (Wagner, Pelikanwerke, Đức);
Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson và Bell, Hoa Kỳ);
Triton X 100 (Serva, Đức, có thể là một công ty khác);
Dầu O đỏ (Công ty hóa chất Đồng minh, Morristown, NY, Hoa Kỳ);
Iaranitrophenyl-β-glucuronide (Sigma, Hoa Kỳ);
Safranin O (Phòng thí nghiệm khoa học Fischer, Chicago, Hoa Kỳ);
Hạt, ống polystyrene (Nunc, Đan Mạch);
Lưới F 905 (VEB Orvo Wolfen, CHDC Đức).
Lấy thực bào
Các thông tin cần thiết về phân lập bạch cầu hạt ở người có thể tham khảo trong chương "Tách tế bào của hệ thống miễn dịch"; để lấy đại thực bào phúc mạc, xem các phần "Nuôi cấy đại thực bào và bạch cầu đơn nhân" và "Phân lập đại thực bào từ hỗn dịch tế bào lách". Vấn đề này được xem xét chi tiết trong một số tác phẩm.
Ngoài ra, các phương pháp sau cũng cần được đề cập:
8 ml máu được trộn với một dung dịch dextranglucose. Sau đó thêm dung dịch dextran 75 6% trong NaCl 0,15 M (5 ml). Hỗn hợp được để trong 45-50 phút ở nhiệt độ phòng để lắng hồng cầu. Chọc hút huyết tương. Hồng cầu dư được ly giải bằng cách thêm 0,83% amoni clorua (35 ml đến 15 ml huyết tương). Ly tâm 10 phút ở 80g, ngưng kết tủa trong NaCl 0,15 M làm lạnh đến 0 ° C. Gộp một số kết tủa và ly tâm trong 10 phút ở 800 g. Tế bào được giữ tốt nhất trên nước đá trong 0,15 M NaCl (môi trường này thích hợp hơn môi trường đệm với các cation hóa trị hai làm cho các tế bào dính vào nhau);
Nếu đối tượng của hiện tượng thực bào là nấm men thì có thể bỏ qua bước xử lý amoni clorua, vì tế bào hồng cầu không can thiệp vào quá trình này. Có thể thu được các tế bào đơn nhân như sau: máu đã được gan hóa được trộn với 1/3 thể tích của môi trường Eagle chứa 15% glucose, được xếp trên một lớp hỗn hợp ficoll - visotrast và ly tâm trong 20 phút ở 400 g. Phần tế bào đơn nhân được hút bằng pipet Pasteur, rửa hai lần bằng PBS, và huyền phù được chuẩn bị trong môi trường Eagle (1 x 10 7 tế bào / ml).
Chuẩn bị hạt cho quá trình thực bào
Các mẫu cấy sống của Staphylococcus aureus (SG 511 hoặc 502 A), Staphylococcus mào tinh SG 475, E. coli và các vi khuẩn đường ruột khác, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae thường được sử dụng hơn. Vi sinh vật được nuôi trong 24 giờ (nếu cần, 48 giờ) trên môi trường dinh dưỡng rắn và lỏng. Sinh khối thu được đem rửa ba lần bằng dd NaCl 0,15M. Huyền phù quá đặc được đo ở bước sóng 640 nm, nồng độ được xác định từ đường chuẩn.
Hàm lượng vi sinh vật còn được xác định bằng các phương pháp rây trên môi trường dinh dưỡng đậm đặc; trong một số trường hợp, việc định lượng vi sinh vật có thể được thực hiện trong các buồng đếm.
Khi làm việc với các mẫu cấy vi khuẩn sống, cần lưu ý luôn sử dụng các mẫu cấy ở cùng một giai đoạn. Việc bổ sung 0,01% albumin huyết thanh bò thúc đẩy sự tồn tại của vi sinh vật. Hỗn dịch đã chuẩn bị vẫn ổn định trong 1-2 giờ.
Việc nuôi cấy vi sinh vật bị giết thường thu được bằng cách đun nóng trong 30 phút ở 80 ° C hoặc xử lý bằng hơi nước chảy. Vi khuẩn bị giết được rửa ba lần bằng NaCl 0,15 M, ngâm lại và xác định nồng độ của huyền phù.
Chuẩn bị men làm bánh: 0,5 g men làm bánh được lơ lửng trong 0,15 M NaCl và đặt trong nồi cách thủy sôi trong 30 phút. Lọc qua một bộ lọc bông gạc. Khi sử dụng men sống, tế bào tươi (nuôi cấy 4-5 ngày) được rửa ba lần trong môi trường Eagle có bổ sung 1,0% glucose. Thường sử dụng huyền phù tế bào 10 8 và 10 9 tế bào / ml. Nấm men được sử dụng như các hạt thử nghiệm trong việc phát hiện các khuyết tật trong thành phần C5.
Sử dụng huyền phù của các hạt polystyren: Chuẩn bị hỗn dịch nước 10% của các hạt polystyren có đường kính 1,091 μm. Nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với dung dịch BSA 0,2% trong NaCl 0,15 M, được ly tâm. Ở bước sóng 253 nm, huyền phù polystyren 1 μg / ml cho độ hấp thụ 1,17x10 -3.
Ứng dụng huyền phù của lipopolysaccharide - dầu O đỏ trong dầu khoáng: 2 g dầu đỏ được nghiền trong 50 ml diisodecyl phthalate (hoặc dầu vaseline) trong cối sứ. Ly tâm trong 20 phút ở 500 g. Thêm 10 μg phần nổi phía trên vào 10 ml dioxin, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm. Hệ số chuyển đổi là 0,92. Ở giai đoạn thứ hai, 40 mg lipopolysaccharide (E. coli 0,26 B6, v.v.) được hòa tan trong 3 ml NaCl 0,15 M. Sau đó, 1 ml dung dịch O màu đỏ dầu trong diisodecyl sulfat được thêm vào hỗn hợp này, và hỗn hợp bị lơ lửng trong 90 giây. Hỗn dịch được sử dụng ngay lập tức và có thể được đông lạnh.
Để thiết lập phản ứng thực bào, hồng cầu được chính thức hóa có thể được sử dụng làm hạt thử nghiệm.
Thực bào vi khuẩn, diệt khuẩn
Thí nghiệm huyền phù vi khuẩn sống: Thường dùng tỷ lệ 3-10 vi khuẩn / thực bào. Trong tổng thể tích 2 ml, 1x10 6 thực bào được trộn với 3x10 6 - 1x10 7 vi khuẩn. Trong thực tế, 1 ml dịch huyền phù vi khuẩn được thêm vào 1 ml dịch treo thực bào, trong đó 8 IU heparin đã được thêm vào. Thời gian tương tác thường là 30 phút, có trường hợp lâu hơn. Sau khi ủ, lấy 0,5 ml hỗn hợp, thêm 1,5 ml dung dịch gelatin 0,1% trong dung dịch Hank, làm lạnh đến 0 ° C, và ly tâm trong 3-4 phút ở 300 g. Smears được chuẩn bị từ kết tủa, được nhuộm màu theo Pappenheim. Xem 200 ô (nếu có thể ba lần). Tính tỷ lệ phần trăm của quá trình thực bào. Theo số lượng vi khuẩn có trong tế bào, người ta tính chỉ số hoạt động thực bào: số lượng vi khuẩn bị thực bào nhân với tỷ lệ số tế bào thực bào; cường độ thực bào được biểu thị bằng các số từ 1 đến 4.
Lớp 1: Thực bào với vi khuẩn I-4
Lớp 2: 5-7 vi khuẩn bị thực bào
Lớp 3: 8-10 vi khuẩn thực bào
Lớp 4: Hơn 10 vi khuẩn trên mỗi tế bào bị thực bào
Khi xác định mức độ thực bào của vi sinh vật, phần lắng tế bào và phần nổi trên mặt được kiểm tra riêng biệt. Số lượng vi sinh vật sống được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng rắn 0,1 ml các phần được nghiên cứu. Ủ trong 24 (48) giờ Khi tính toán hoạt động diệt khuẩn, giả thiết rằng một khuẩn lạc được hình thành tương ứng với một vi khuẩn sống.
Đối với một nghiên cứu trực tiếp về hoạt tính diệt khuẩn, máu của bệnh nhân và người hiến tặng khỏe mạnh được kiểm tra với việc bổ sung dung dịch kháng sinh (5000 IU penicilin và streptomycin / ml) và không có nó, và việc kiểm soát vi khuẩn cũng được thực hiện. Thành phần mẫu: 0,3 ml dung dịch Hank + 0,1 ml huyết thanh bình thường lấy từ máu lấy từ 5 người hiến + 0,5 ml huyền phù bạch cầu (10 7 tế bào / ml) + 0,1 ml huyền phù vi sinh vật (10 6 vi khuẩn / ml). Dung dịch kháng sinh được thêm vào trong 0,02 ml mỗi mẫu. Ủ mẫu ở 37 ° C và xác định số lượng vi sinh sau 20 phút, 1,5 giờ và 3 giờ. Để làm điều này, lấy 0,1 ml từ mỗi mẫu, pha loãng phần đã chọn với dung dịch Hank lần 10, 100 và 1000 lần và áp dụng cho thạch đã đun nóng. Đôi khi, đặc biệt nếu đã thêm kháng sinh, các dung dịch pha loãng trung gian được chuẩn bị để đếm chính xác vi khuẩn (ví dụ, 0,2 ml mẫu được trộn với 5 ml dung dịch Hank, ly tâm trong 5 phút ở 450 g, kết tủa được hòa tan trong 1,9 ml của PBS, áp dụng cho thạch). Nếu bạn muốn rút ngắn thời gian nghiên cứu vi khuẩn học, bạn có thể xác định vi khuẩn bên trong tế bào bằng phương pháp huỳnh quang bằng phương pháp nhuộm màu vàng acridine.
Thực bào nấm men làm bánh: chuẩn bị hỗn dịch 10 9 tế bào / ml trong NaCl 0,15M. Trộn 0,1 ml hỗn dịch với 0,1 ml huyết tương bệnh nhân, ủ 30 phút ở 37 ° C, thêm 0,2 ml (10 6) PMNL, ủ 30 phút. Aliquots được thực hiện trong khoảng thời gian từ 5 đến 30 phút. 100 PMN được đếm và xác định số lượng các hạt nấm men bị bắt trên mỗi tế bào. Biến đổi sau đây được biết đến: 50 µl huyết thanh thử nghiệm được thêm vào 50 µl huyết thanh chuột lang (trước đó nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với môi trường Eagle với glucose), 50-200 µl huyền phù bạch cầu ( 10 7 tế bào / ml) được thêm vào, thể tích được điều chỉnh đến 450 µl với môi trường Kim tiêm với glucose và ủ trong 30 phút ở 37 ° C. Sau đó thêm 50 μl huyền phù nấm men (10 8 tế bào / ml), trộn đều, ủ trong 40 phút ở 37 ° C. Thêm 50 μl L-75 Se-methionine (tổng hoạt độ 100 kBq), trộn và ủ trong 1 giờ ở 37 ° C. Tế bào được kết tủa bằng cách ly tâm trong 5 phút ở 1000 g, chúng được rửa hai lần bằng PBS, độ phóng xạ được đo trên máy đếm gamma. Phần trăm nấm men bị thực bào được tính theo công thức:
Thực bào bằng dung dịch dầu có màu đỏ trong dầu khoáng: 0,2 ml huyền phù hạt được trộn với 0,8 ml huyền phù tế bào đã được làm nóng trước đến 37 ° C. Sau 5 phút ủ, 6 ml dung dịch NaCl 0,15 M được làm lạnh đến 0 ° C có chứa 126 μg / l N-ethylmaleimide (để ngừng bắt giữ các hạt) được thêm vào. Ly tâm trong 10 phút ở 250 g. Phần nổi phía trên được loại bỏ, kết tủa được ngâm lại trong dung dịch NaCl và N-ethylmaleimide (xem ở trên), các tế bào được rửa hai lần. Tế bào được ly giải bằng sóng siêu âm, màu đỏ dầu được giải phóng. Thêm 1 ml dioxan. Ly tâm trong 15 phút ở 500 g, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm đối với dioxan tinh khiết. Mức độ thực bào (IF) được định nghĩa là lượng dầu khoáng (mg) được 10 7 tế bào hấp thụ mỗi phút. Bạn có thể sử dụng công thức sau để tính toán:
Nghiên cứu về quá trình thực bào trong đơn lớp của đại thực bào:
1. Pha: 2 ml huyền phù tế bào (200.000 tế bào / ml) được thêm vào các ống polystyrene vô trùng. Cấy trong 5 giờ ở 37 ° C, sau đó rửa bằng môi trường Eagle. Cho 2 ml môi trường nuôi cấy có 10% huyết thanh bất hoạt (30 phút, 56 ° C) của phôi bò vào ống nghiệm, ủ ở 37 ° C.
2. Pha A: đưa vào huyền phù vi khuẩn (3-10 / đại thực bào), ủ 30-60 phút ở 37 ° C, các ống được tráng 6 lần với 3 ml môi trường để loại bỏ vi khuẩn không bị thực bào. Khắc phục ngay bằng hỗn hợp gồm 1 phần axit axetic băng và 3 phần metanol. Nhuộm chuẩn bị theo tháng 5 - Griinwald, đếm tế bào.
Pha B: xác định vi khuẩn sống nội bào. Trình tự các hoạt động giống như trong giai đoạn A trước giai đoạn cố định. Sau khi rửa, cẩn thận loại bỏ tất cả các dấu vết của môi trường. Tế bào được ly giải, trong đó 2 ml dung dịch vô trùng 0,01% albumin huyết thanh bò (4 ° C) được thêm vào, lắc nhiều lần. Hầu hết các tế bào được ly giải sau 20 phút. Vi khuẩn được giải phóng được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng dày đặc.
Thực bào của hồng cầu: trộn 4x10 7 thực bào với 5x10 7 hồng cầu thử nghiệm trong 5 ml PBS. Chuyển 2 ml hỗn hợp vào đệm phosphat 5 mM được làm lạnh đến 0 ° C và ly tâm. Đo mật độ quang của phần nổi ở bước sóng 420 nm. Mức độ thực bào được xác định bằng sự giảm hàm lượng hemoglobin trong pha không có tế bào bằng cách sử dụng các đường chuẩn.
Phương pháp đơn giản để xác định thanh thải
Một ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: động vật được tiêm vào màng bụng với liều lượng 5x10 7 vi khuẩn trên 100 g trọng lượng (0,1 ml / / 100 g). Liều tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 10 6 đến 10 8 trên 100 g trọng lượng. Với khoảng thời gian từ 1-2 giờ, 3 cá thể được giết mổ từ mỗi nhóm động vật thí nghiệm; tổng thời lượng của thí nghiệm 16 giờ. Lấy vô trùng 0,5 ml máu tim, 1 ml dịch màng bụng tiết ra phổi, gan, lá lách và thận. Xi lanh được cắt ra khỏi mô cơ quan bằng pipet Pasteur. Xác định số lượng vi sinh vật bằng cách nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng lỏng và rắn.
Ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: sử dụng than keo hoặc dán nhãn 51 [Cr] ram hồng cầu. Chuột (ít nhất 5 con mỗi lần trải nghiệm) được tiêm vào tĩnh mạch 0,01 ml hỗn dịch than với tỷ lệ 16 mg trên 100 g trọng lượng. Trong vòng 15 phút với khoảng thời gian 2 phút, 0,025 ml máu được lấy từ khoang sau ổ mắt. Cho 0,025 ml máu đã chọn vào 2,0 ml dung dịch Na 2 C0 3 0,1%. Sau khi tán huyết, nồng độ của than được xác định so màu ở bước sóng 675 nm bằng đường chuẩn.
t là thời gian tính bằng phút, C là nồng độ cacbon trong mẫu.
Giá trị hiệu chỉnh của hiện tượng thực bào:
Kiểm tra chức năng của tế bào thực bào
Xác định sự tách lớp (đo hoạt tính (β-glucuropidase): 10 7 bạch cầu được lơ lửng trong 0,8 ml PBS trong ống nhựa, lắc trong 5 phút ở 37 ° C. Thêm 0,2 ml LPS nhạy cảm, các hạt fluorochromic (FC 80), làm nguội 30 phút trên đá, ly tâm trong 10 phút ở 250 g Kiểm tra hoạt tính của enzym trong phần nổi phía trên Ủ 0,9 ml hỗn hợp cơ chất trong 18 giờ với 0,1 ml phân đoạn khảo sát Thêm 2 ml NaOH 0,1 M, đo mật độ quang trên sóng 410 nm.
Phép tính:
(OD 410 x20) / (1,84x18) = số nmol của chất được phóng thích trong 1 giờ bởi 10 7 bạch cầu, tức là mức độ phân hủy được biểu thị bằng các nanomol của paranitrophenyl-β-glucuronide.
Phương pháp xác định khuyết tật trong myeloperoxidase: kết quả tốt nhất thu được khi xác định sinh hóa H 2 0 2, cho thấy những thay đổi trong chuyển hóa trong quá trình thực bào. Đối với các mục đích thực tế, điều rất quan trọng là sự hoạt hóa của shunt hexose-monophosphat, khử tetrazolium nitroene, và liên kết của iốt ngoại sinh với protein PMNL tương quan với sự hình thành H 2 0 2. Một vết máu thông thường được cố định trong 30 giây bằng hỗn hợp cồn và formalin. Rửa bằng nước cất và nhuộm peroxidase trong 30 giây. Trong các tế bào chứa peroxidase, các tạp chất nhuộm màu xanh đậm được phát hiện.
Thử nghiệm khử tetrazolium nitro blue (TNS). THC được khử bởi PMNL bình thường thành formazan. Trộn với 0,1 ml máu 0,1 ml dung dịch THC 0,1% trong NaCl 0,15 M, ủ 20 phút ở 37 ° C, lắc kỹ lại. Sự kết hợp formazan vào tế bào được xác định bằng kính hiển vi. Kết quả được biểu thị bằng phần trăm tế bào dương tính với formazan.
Phương pháp sau đây có phần phức tạp hơn: nhỏ 1 giọt máu của bệnh nhân vào một tờ giấy bìa. Ủ 20 phút ở 37 ° C trong buồng ẩm, sau đó rửa kính cẩn thận bằng NaCl 0,15 M vô trùng. Đặt một tấm bìa lên phiến kính có chứa 1 giọt môi trường THC (0,5 ml huyết thanh + 0,3 ml NaCl 0,15 M vô trùng + 0,6 ml THC, xem ở trên). Ủ 30 phút trong buồng ẩm ở 37 ° C, lấy bìa ra và phơi khô trong không khí. Cố định bằng metanol tuyệt đối trong 60 giây và rửa bằng nước cất. Cặn trong 5 phút bằng safranin (1 g safranin + 100 ml nước cất + 40 ml glycerin), rửa. Tế bào dương tính với formazan lớn, giống như hạt nổ và chứa các hạt màu xanh lam. Thông thường, khoảng 30% tế bào dương tính với formazan được phát hiện trong chế phẩm.
Các phương pháp đánh giá khả năng thực bào ở trên là tổng hợp của một số lượng rất lớn các ấn phẩm. Thông tin chi tiết hơn về những vấn đề này có thể được tìm thấy trong các công trình liên quan.
16. Phản ứng thực bào.
Thực bào- Quá trình hấp thụ tích cực, tiêu hóa và bất hoạt các phần tử lạ bởi các tế bào thực bào chuyên biệt.
Các giai đoạn thực bào:
Hóa trị là sự di chuyển có mục đích của thực bào dọc theo gradient nồng độ của các chất hoạt tính sinh học đặc biệt - chất hóa trị.
Độ bám dính - dính vào một vi khuẩn. Opsonin (AT, fibronectin, chất hoạt động bề mặt) bao bọc vi sinh vật và hạn chế đáng kể tính di động của chúng.
Endocytosis (hấp thụ). Kết quả là một phagosome được hình thành với một vật thể thực bào được bao bọc bên trong. Lysosome lao đến phagosome và xếp thành hàng dọc theo chu vi của nó.
Tiêu hóa. Sự kết hợp của một phagosome với một lysosome để tạo thành một phagolysosome. Hơn nữa, các vi sinh vật bị thực bào bị tấn công bởi sự phụ thuộc vào oxy (peroxide, oxy superoxide, cytochrome b; các sản phẩm được hình thành có tác dụng độc hại, làm hỏng vi sinh vật và các cấu trúc xung quanh) và không phụ thuộc oxy (hạt có lactoferrin, lysozyme, v.v.; các sản phẩm này gây tổn thương thành tế bào và phá vỡ một số yếu tố) quá trình trao đổi chất.
kết quả của quá trình thực bào.
Hoàn thành - chết và tiêu diệt vi sinh vật
Không hoàn chỉnh - vi khuẩn được trang bị viên nang hoặc thành tế bào kỵ nước dày đặc có khả năng chống lại hoạt động của các enzym lysosome; ngăn chặn sự hợp nhất của phasome và lysosome.
Các loại tế bào thực bào:
Đại thực bào và tế bào đuôi gai - tế bào thực bào chuyên nghiệp và tế bào trình diện kháng nguyên
Các vi thực bào - bạch cầu đa nhân trung tính (bạch cầu trung tính) - chỉ thực bào vừa phải
Bạch cầu đơn nhân trong máu di chuyển vào các mô dưới ảnh hưởng của độc tố tế bào và trở thành nơi cư trú.
Đại thực bào. Gan - Tế bào Kupffer
Phổi - đại thực bào phế nang
CNS - tế bào vi mô
Tủy xương - tế bào hủy xương
Thận - tế bào trung bì
Vi sinh vật thực bào và xử lý (tiêu hóa) chúng; hiện kháng nguyên cho tế bào T.
NK - chất diệt tự nhiên - không phân biệt AH, không phụ thuộc vào kháng thể, chỉ hoạt động chống lại tế bào và chỉ phản ứng với các yếu tố tế bào.
Các chỉ số của quá trình thực bào:
Chỉ số thực bào (hoạt động thực bào) - tỷ lệ phần trăm bạch cầu trung tính có chứa các hạt vi sinh vật
Số lượng thực bào (chỉ số thực bào) - số lượng trung bình vi sinh vật được một tế bào thực bào hấp thụ.
17. Đáp ứng miễn dịch dịch thể.
Ba loại tế bào có liên quan đến các phản ứng miễn dịch dịch thể: đại thực bào (tế bào trình bày AG), tế bào trợ giúp T và tế bào lympho B
Tế bào trình bày AG thực bào vi sinh vật và xử lý nó, tách nó thành các mảnh (xử lý AG). Các mảnh AG được tiếp xúc với bề mặt của tế bào trình bày AG cùng với phân tử MHC. Phức hợp MHC2 phân tử AG được trình bày cho T-helper. Sự nhận biết phức hợp bởi T-helper sẽ kích thích sự bài tiết IL-1 của các đại thực bào.
T-helper dưới ảnh hưởng của IL-1, nó tổng hợp IL-2 và các thụ thể cho IL-2, thụ thể sau này, theo cơ chế tự tiết, kích thích sự gia tăng của T-helper, cũng như CTL. Do đó, sau khi tương tác với tế bào trình bày AG, T-helper có được khả năng đáp ứng với hoạt động của IL-2 bằng cách tái tạo nhanh chóng. Ý nghĩa sinh học của hiện tượng này là sự tích tụ của T-helpers, đảm bảo sự hình thành trong các cơ quan lymphoid của nhóm tế bào plasma cần thiết tạo ra kháng thể đối với AG này.
Tế bào lympho B. Sự hoạt hóa của nó liên quan đến sự tương tác trực tiếp của AG với phân tử Ig trên bề mặt của tế bào B. Trong trường hợp này, tế bào lympho B tự xử lý AG và trình bày đoạn của nó liên quan đến phân tử MHC2 trên bề mặt của nó. Phức hợp này nhận ra T-helper được chọn bằng cách sử dụng cùng một kháng nguyên. Sự nhận biết bởi thụ thể T-helper của phức hợp AG-MHC2 trên bề mặt của tế bào lympho B dẫn đến sự tiết IL-2, IL-4, IL-5 và IFN-gamma bởi T-helper, dưới ảnh hưởng trong đó tế bào B nhân lên, tạo thành một bản sao của tế bào plasma. Tế bào huyết tương tổng hợp kháng thể. Sự tiết AT được kích thích bởi IL-6 do T-helper hoạt hóa tiết ra. Một số tế bào lympho B trưởng thành sau khi biệt hóa không phụ thuộc vào kháng nguyên sẽ lưu hành trong cơ thể dưới dạng tế bào nhớ.
5 lớp: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM; Các phân tử IgD, IgE, IgG được đại diện bởi các đơn phân, IgM bởi các pentamit, phân tử IgA trong huyết thanh là một đơn phân, và trong các chất lỏng bài tiết (nước bọt, nước mắt) nó là một chất dimer.
IgG: thâm nhập qua nhau thai vào cơ thể thai nhi để đảm bảo hình thành miễn dịch thụ động ở thai nhi, sau khi trẻ sinh ra, hàm lượng của nó trong huyết thanh giảm xuống và đạt nồng độ tối thiểu sau 3-4 tháng, sau đó bắt đầu tăng lên. do sự tích lũy IgG của chính nó, đạt đến mức bình thường sau 7 năm. Việc phát hiện hiệu giá cao từ IgG đến Ag của một mầm bệnh cụ thể cho thấy rằng cơ thể đang ở giai đoạn dưỡng bệnh hoặc một bệnh cụ thể mới được chuyển đến.
IgM: hàm lượng của nó tăng lên đáng kể ở trẻ sơ sinh đã bị nhiễm trùng trong tử cung. Sự hiện diện của IgM trong Ag của một mầm bệnh cụ thể cho thấy một quá trình lây nhiễm cấp tính.
IgA: lưu thông trong huyết thanh, và cũng được tiết ra trên bề mặt biểu mô, có trong nước bọt, dịch lệ, sữa. Các phân tử IgA tham gia vào các phản ứng trung hòa và ngưng kết mầm bệnh. Các globulin miễn dịch tiết của lớp IgA (SIgA) khác với các globulin miễn dịch trong huyết thanh bởi sự hiện diện của thành phần chế tiết liên kết với 2 hoặc 3 đơn phân IgA.
IgD:được tìm thấy trên bề mặt của tế bào lympho B đang phát triển, hàm lượng của nó đạt tối đa sau 10 năm, hiệu giá tăng nhẹ được ghi nhận trong thời kỳ mang thai, hen phế quản, lupus ban đỏ hệ thống và ở những người bị suy giảm miễn dịch
IgE:được tổng hợp bởi các tế bào huyết tương trong các hạch bạch huyết phế quản và phúc mạc, trong niêm mạc của ống tiêu hóa. IgE còn được gọi là thuốc thử, vì chúng tham gia vào các phản ứng phản vệ, có tính tế bào rõ rệt.
Từ tuần thứ 10 của sự phát triển trong tử cung, quá trình tổng hợp IgM bắt đầu, từ thứ 12 - IgG, từ thứ 30 - IgA, nhưng nồng độ của chúng thấp.
Chức năng bảo vệ của các kháng thể trong quá trình nhiễm trùng:
Ab thông qua các trung tâm liên kết Ag tương tác với các Ag khác nhau. Do đó, Abs ngăn ngừa nhiễm trùng hoặc loại bỏ mầm bệnh hoặc ngăn chặn sự phát triển của các phản ứng bệnh lý, đồng thời kích hoạt tất cả các hệ thống phòng thủ cụ thể.
Tiêm chủng (thực bào miễn dịch)- Abs (qua các đoạn Fab) liên kết với thành tế bào của sinh vật; Đoạn Fc của Ab tương tác với thụ thể tương ứng của tế bào thực bào, thụ thể này làm trung gian cho sự hấp thụ hiệu quả sau đó của phức hợp được tạo thành bởi thực bào.
Tác dụng chống độc Abs có thể liên kết và do đó vô hiệu hóa các độc tố của vi khuẩn.
Kích hoạt khen thưởng Ab (IgM, IgG) sau khi liên kết với Ag (vi sinh vật, tế bào khối u) sẽ kích hoạt hệ thống khen, dẫn đến việc phá hủy tế bào này bằng cách thủng thành tế bào, tăng hoạt động hóa học, phản ứng hóa học và thực bào miễn dịch.
Trung hòa- tương tác với các thụ thể của tế bào liên kết vi khuẩn hoặc vi rút, Ab có thể ngăn cản sự bám dính và xâm nhập của vi sinh vật vào tế bào của sinh vật chủ.
Các phức hợp miễn dịch tuần hoàn Abs liên kết với Ag hòa tan và tạo thành phức hợp tuần hoàn, với sự giúp đỡ của Ag được đào thải ra khỏi cơ thể, chủ yếu bằng nước tiểu và mật.
Độc tính tế bào phụ thuộc kháng thể- bằng cách opso hóa Ag, Ab kích thích sự phá hủy của chúng bởi các tế bào gây độc tế bào. Bộ máy cung cấp khả năng nhận dạng mục tiêu là các thụ thể cho các đoạn Fc của Ab. Đại thực bào và bạch cầu hạt có khả năng tiêu diệt các mục tiêu đã opso hóa.
Tính chất của kháng thể:
Tính đặc hiệu- khả năng của kháng thể chỉ phản ứng với một kháng nguyên cụ thể, do sự hiện diện của các yếu tố quyết định kháng nguyên trên kháng nguyên và các thụ thể kháng nguyên (kháng thể) trên kháng thể.
Valence- số lượng chất chống xác định trên kháng thể (thường là hóa trị hai);
mối quan hệ, mối quan hệ là độ bền của mối liên hệ giữa yếu tố xác định và yếu tố phản xác định;
Avidity là độ bền của liên kết kháng thể-kháng nguyên. Do hóa trị, một kháng thể được liên kết với một số kháng nguyên;
Không đồng nhất- không đồng nhất, do sự hiện diện của ba loại yếu tố quyết định kháng nguyên:
isotypic- đặc trưng cho sự thuộc về một globulin miễn dịch đối với một lớp nhất định (IgA, IgG, IgM, v.v.);
Allotypic- (tính đặc hiệu nội bộ) tương ứng với các biến thể alen của globulin miễn dịch (động vật dị hợp tử có các loại globulin miễn dịch khác nhau);
Idiotypical- phản ánh các đặc tính riêng của immunoglobulin (có thể gây ra các phản ứng tự miễn dịch).
Đặc điểm tuổi:
Trong giai đoạn sau khi sinh, có một động lực rất đáng kể về hàm lượng các globulin miễn dịch của các lớp khác nhau trong máu của trẻ em. Đó là do thực tế là trong những tháng đầu tiên của cuộc đời, quá trình phân hủy và loại bỏ các globulin miễn dịch loại B được chuyển qua nhau thai từ mẹ vẫn tiếp tục.
Trong 4-6 tháng đầu tiên, các globulin miễn dịch của mẹ bị phá hủy hoàn toàn và quá trình tổng hợp các globulin miễn dịch của chính chúng bắt đầu.