Thực bào Các tế bào không chỉ có khả năng hình thành giả tế bào bằng cách co lại, chúng tiết ra các tấm bao bọc để cố định các phần tử lạ, chẳng hạn như các hạt bụi, vi khuẩn, phần còn lại của các tế bào đã chết, thoái hóa. Thực tế là bạch cầu và các tế bào di động khác.

Miễn dịch Miễn dịch (lat. Immunitas - "giải phóng khỏi thứ gì đó") là sự bảo vệ cơ thể khỏi các sinh vật và chất ngoại lai về mặt di truyền, bao gồm vi sinh vật, vi rút, giun, các protein, tế bào khác nhau, bao gồm cả các tế bào bị biến đổi của chính chúng. CHÚ Ý Nhờ khả năng miễn dịch

Một số lượng lớn các phương pháp để định lượng khả năng thực bào đã được mô tả trong tài liệu. Bộ sách này không cho phép chúng tôi mô tả chi tiết tất cả chúng, vì vậy chúng tôi sẽ giới hạn bản thân chỉ mô tả một số ít.

Vật liệu và thiết bị

Để làm việc, bạn phải có:

Thuốc chống đông máu citratedextrose: 8 g axit xitric. 22 g natri xitrat ba nhóm thế (hai nước), 24,5 g glucozơ được hòa tan trong 1 lít nước;

Dung dịch dextrosodextran: 4,5 g NaCl, 25 g glucose, 30 g dextran (số mol. Trọng lượng 500.000) trong 1 l;

Dung dịch amoni clorua: 9 phần 0,83% amoni clorua, 1 phần đệm Tris-HCl pH 7,2 (20,6 g / l);

Một hỗn hợp của ficoll - vizotrast: 9 g ficoll, 20 ml vizotrast, 100 ml H 2 0 đã được làm kín, tỷ trọng 1,077;

Chất nền cho β-glucuronidase: 31,5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronid và 100 μm Triton X 100 được hòa tan trong 100 ml dung dịch đệm natri axetat 0,05 M, pH 5;

Thuốc thử thiếu hụt myeloperoxidase: định hình (10 ml 37% formaldehyde với 90 ml etanol tuyệt đối), dung dịch cơ chất (100 ml EDTA 30%, 0,3 g benzidine clorua, 0,038 g ZnS0 4 x7H 2 0,1 ml nước cất, 1 .0 g CH 3 C00Nax3H 2 0, 0,7 ml 3% H 2 0 2); đưa pH của dd NaOH 1,0M về 6,0.

Thuốc thử thương mại:

FSB, giải pháp của Hank và môi trường Eagle-MEM (Viện Dinh dưỡng và Chế phẩm Miễn dịch Nhà nước, Berlin-Weissensee, CHDC Đức);

Heparin (5000 IU / mg) (Gedeon Richter, Hungary);

Huyết thanh của phôi bò (có thể sử dụng công ty Flow Laboratories, Mỹ, một công ty khác);

Visotrast (Danh sách VEB Fahlberg, Magdeburg, CHDC Đức);

Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, CHDC Đức);

Dextran, ficoll (Pharmacia, Thụy Điển);

Cacbon dạng keo Сl1 / 143a (Wagner, Pelikanwerke, Đức);

Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson và Bell, Hoa Kỳ);

Triton X 100 (Serva, Đức, có thể là một công ty khác);

Dầu O đỏ (Công ty hóa chất Đồng minh, Morristown, NY, Hoa Kỳ);

Iaranitrophenyl-β-glucuronide (Sigma, Hoa Kỳ);

Safranin O (Phòng thí nghiệm khoa học Fischer, Chicago, Hoa Kỳ);

Hạt, ống polystyrene (Nunc, Đan Mạch);

Lưới F 905 (VEB Orvo Wolfen, CHDC Đức).

Lấy thực bào

Các thông tin cần thiết về phân lập bạch cầu hạt ở người có thể tham khảo trong chương "Tách tế bào của hệ thống miễn dịch"; để lấy đại thực bào phúc mạc, xem các phần "Nuôi cấy đại thực bào và bạch cầu đơn nhân" và "Phân lập đại thực bào từ hỗn dịch tế bào lách". Vấn đề này được xem xét chi tiết trong một số tác phẩm.

Ngoài ra, các phương pháp sau cũng cần được đề cập:

8 ml máu được trộn với một dung dịch dextranglucose. Sau đó thêm dung dịch dextran 75 6% trong NaCl 0,15 M (5 ml). Hỗn hợp được để trong 45-50 phút ở nhiệt độ phòng để lắng hồng cầu. Chọc hút huyết tương. Hồng cầu dư được ly giải bằng cách thêm 0,83% amoni clorua (35 ml đến 15 ml huyết tương). Ly tâm 10 phút ở 80g, ngưng kết tủa trong NaCl 0,15 M làm lạnh đến 0 ° C. Gộp một số kết tủa và ly tâm trong 10 phút ở 800 g. Tế bào được giữ tốt nhất trên nước đá trong 0,15 M NaCl (môi trường này thích hợp hơn môi trường đệm với các cation hóa trị hai làm cho các tế bào dính vào nhau);

Nếu đối tượng của hiện tượng thực bào là nấm men thì có thể bỏ qua bước xử lý amoni clorua, vì tế bào hồng cầu không can thiệp vào quá trình này. Có thể thu được các tế bào đơn nhân như sau: máu đã được gan hóa được trộn với 1/3 thể tích của môi trường Eagle chứa 15% glucose, được xếp trên một lớp hỗn hợp ficoll - visotrast và ly tâm trong 20 phút ở 400 g. Phần tế bào đơn nhân được hút bằng pipet Pasteur, rửa hai lần bằng PBS, và huyền phù được chuẩn bị trong môi trường Eagle (1 x 10 7 tế bào / ml).

Chuẩn bị hạt cho quá trình thực bào

Các mẫu cấy sống của Staphylococcus aureus (SG 511 hoặc 502 A), Staphylococcus mào tinh SG 475, E. coli và các vi khuẩn đường ruột khác, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae thường được sử dụng hơn. Vi sinh vật được nuôi trong 24 giờ (nếu cần, 48 giờ) trên môi trường dinh dưỡng rắn và lỏng. Sinh khối thu được đem rửa ba lần bằng dd NaCl 0,15M. Huyền phù quá đặc được đo ở bước sóng 640 nm, nồng độ được xác định từ đường chuẩn.

Hàm lượng vi sinh vật còn được xác định bằng các phương pháp rây trên môi trường dinh dưỡng đậm đặc; trong một số trường hợp, việc định lượng vi sinh vật có thể được thực hiện trong các buồng đếm.

Khi làm việc với các mẫu cấy vi khuẩn sống, cần lưu ý luôn sử dụng các mẫu cấy ở cùng một giai đoạn. Việc bổ sung 0,01% albumin huyết thanh bò thúc đẩy sự tồn tại của vi sinh vật. Hỗn dịch đã chuẩn bị vẫn ổn định trong 1-2 giờ.

Việc nuôi cấy vi sinh vật bị giết thường thu được bằng cách đun nóng trong 30 phút ở 80 ° C hoặc xử lý bằng hơi nước chảy. Vi khuẩn bị giết được rửa ba lần bằng NaCl 0,15 M, ngâm lại và xác định nồng độ của huyền phù.

Chuẩn bị men làm bánh: 0,5 g men làm bánh được lơ lửng trong 0,15 M NaCl và đặt trong nồi cách thủy sôi trong 30 phút. Lọc qua một bộ lọc bông gạc. Khi sử dụng men sống, tế bào tươi (nuôi cấy 4-5 ngày) được rửa ba lần trong môi trường Eagle có bổ sung 1,0% glucose. Thường sử dụng huyền phù tế bào 10 8 và 10 9 tế bào / ml. Nấm men được sử dụng như các hạt thử nghiệm trong việc phát hiện các khuyết tật trong thành phần C5.

Sử dụng huyền phù của các hạt polystyren: Chuẩn bị hỗn dịch nước 10% của các hạt polystyren có đường kính 1,091 μm. Nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với dung dịch BSA 0,2% trong NaCl 0,15 M, được ly tâm. Ở bước sóng 253 nm, huyền phù polystyren 1 μg / ml cho độ hấp thụ 1,17x10 -3.

Ứng dụng huyền phù của lipopolysaccharide - dầu O đỏ trong dầu khoáng: 2 g dầu đỏ được nghiền trong 50 ml diisodecyl phthalate (hoặc dầu vaseline) trong cối sứ. Ly tâm trong 20 phút ở 500 g. Thêm 10 μg phần nổi phía trên vào 10 ml dioxin, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm. Hệ số chuyển đổi là 0,92. Ở giai đoạn thứ hai, 40 mg lipopolysaccharide (E. coli 0,26 B6, v.v.) được hòa tan trong 3 ml NaCl 0,15 M. Sau đó, 1 ml dung dịch O màu đỏ dầu trong diisodecyl sulfat được thêm vào hỗn hợp này, và hỗn hợp bị lơ lửng trong 90 giây. Hỗn dịch được sử dụng ngay lập tức và có thể được đông lạnh.

Để thiết lập phản ứng thực bào, hồng cầu được chính thức hóa có thể được sử dụng làm hạt thử nghiệm.

Thực bào vi khuẩn, diệt khuẩn

Thí nghiệm huyền phù vi khuẩn sống: Thường dùng tỷ lệ 3-10 vi khuẩn / thực bào. Trong tổng thể tích 2 ml, 1x10 6 thực bào được trộn với 3x10 6 - 1x10 7 vi khuẩn. Trong thực tế, 1 ml dịch huyền phù vi khuẩn được thêm vào 1 ml dịch treo thực bào, trong đó 8 IU heparin đã được thêm vào. Thời gian tương tác thường là 30 phút, có trường hợp lâu hơn. Sau khi ủ, lấy 0,5 ml hỗn hợp, thêm 1,5 ml dung dịch gelatin 0,1% trong dung dịch Hank, làm lạnh đến 0 ° C, và ly tâm trong 3-4 phút ở 300 g. Smears được chuẩn bị từ kết tủa, được nhuộm màu theo Pappenheim. Xem 200 ô (nếu có thể ba lần). Tính tỷ lệ phần trăm của quá trình thực bào. Theo số lượng vi khuẩn có trong tế bào, người ta tính chỉ số hoạt động thực bào: số lượng vi khuẩn bị thực bào nhân với tỷ lệ số tế bào thực bào; cường độ thực bào được biểu thị bằng các số từ 1 đến 4.

Lớp 1: Thực bào với vi khuẩn I-4
Lớp 2: 5-7 vi khuẩn bị thực bào
Lớp 3: 8-10 vi khuẩn thực bào
Lớp 4: Hơn 10 vi khuẩn trên mỗi tế bào bị thực bào

Khi xác định mức độ thực bào của vi sinh vật, phần lắng tế bào và phần nổi trên mặt được kiểm tra riêng biệt. Số lượng vi sinh vật sống được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng rắn 0,1 ml các phần được nghiên cứu. Ủ trong 24 (48) giờ Khi tính toán hoạt động diệt khuẩn, giả thiết rằng một khuẩn lạc được hình thành tương ứng với một vi khuẩn sống.

Đối với một nghiên cứu trực tiếp về hoạt tính diệt khuẩn, máu của bệnh nhân và người hiến tặng khỏe mạnh được kiểm tra với việc bổ sung dung dịch kháng sinh (5000 IU penicilin và streptomycin / ml) và không có nó, và việc kiểm soát vi khuẩn cũng được thực hiện. Thành phần mẫu: 0,3 ml dung dịch Hank + 0,1 ml huyết thanh bình thường lấy từ máu lấy từ 5 người hiến + 0,5 ml huyền phù bạch cầu (10 7 tế bào / ml) + 0,1 ml huyền phù vi sinh vật (10 6 vi khuẩn / ml). Dung dịch kháng sinh được thêm vào trong 0,02 ml mỗi mẫu. Ủ mẫu ở 37 ° C và xác định số lượng vi sinh sau 20 phút, 1,5 giờ và 3 giờ. Để làm điều này, lấy 0,1 ml từ mỗi mẫu, pha loãng phần đã chọn với dung dịch Hank lần 10, 100 và 1000 lần và áp dụng cho thạch đã đun nóng. Đôi khi, đặc biệt nếu đã thêm kháng sinh, các dung dịch pha loãng trung gian được chuẩn bị để đếm chính xác vi khuẩn (ví dụ, 0,2 ml mẫu được trộn với 5 ml dung dịch Hank, ly tâm trong 5 phút ở 450 g, kết tủa được hòa tan trong 1,9 ml của PBS, áp dụng cho thạch). Nếu bạn muốn rút ngắn thời gian nghiên cứu vi khuẩn học, bạn có thể xác định vi khuẩn bên trong tế bào bằng phương pháp huỳnh quang bằng phương pháp nhuộm màu vàng acridine.

Thực bào nấm men làm bánh: chuẩn bị hỗn dịch 10 9 tế bào / ml trong NaCl 0,15M. Trộn 0,1 ml hỗn dịch với 0,1 ml huyết tương bệnh nhân, ủ 30 phút ở 37 ° C, thêm 0,2 ml (10 6) PMNL, ủ 30 phút. Aliquots được thực hiện trong khoảng thời gian từ 5 đến 30 phút. 100 PMN được đếm và xác định số lượng các hạt nấm men bị bắt trên mỗi tế bào. Biến đổi sau đây được biết đến: 50 µl huyết thanh thử nghiệm được thêm vào 50 µl huyết thanh chuột lang (trước đó nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với môi trường Eagle với glucose), 50-200 µl huyền phù bạch cầu ( 10 7 tế bào / ml) được thêm vào, thể tích được điều chỉnh đến 450 µl với môi trường Kim tiêm với glucose và ủ trong 30 phút ở 37 ° C. Sau đó thêm 50 μl huyền phù nấm men (10 8 tế bào / ml), trộn đều, ủ trong 40 phút ở 37 ° C. Thêm 50 μl L-75 Se-methionine (tổng hoạt độ 100 kBq), trộn và ủ trong 1 giờ ở 37 ° C. Tế bào được kết tủa bằng cách ly tâm trong 5 phút ở 1000 g, chúng được rửa hai lần bằng PBS, độ phóng xạ được đo trên máy đếm gamma. Phần trăm nấm men bị thực bào được tính theo công thức:

Thực bào bằng dung dịch dầu có màu đỏ trong dầu khoáng: 0,2 ml huyền phù hạt được trộn với 0,8 ml huyền phù tế bào đã được làm nóng trước đến 37 ° C. Sau 5 phút ủ, 6 ml dung dịch NaCl 0,15 M được làm lạnh đến 0 ° C có chứa 126 μg / l N-ethylmaleimide (để ngừng bắt giữ các hạt) được thêm vào. Ly tâm trong 10 phút ở 250 g. Phần nổi phía trên được loại bỏ, kết tủa được ngâm lại trong dung dịch NaCl và N-ethylmaleimide (xem ở trên), các tế bào được rửa hai lần. Tế bào được ly giải bằng sóng siêu âm, màu đỏ dầu được giải phóng. Thêm 1 ml dioxan. Ly tâm trong 15 phút ở 500 g, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm đối với dioxan tinh khiết. Mức độ thực bào (IF) được định nghĩa là lượng dầu khoáng (mg) được 10 7 tế bào hấp thụ mỗi phút. Bạn có thể sử dụng công thức sau để tính toán:

Nghiên cứu về quá trình thực bào trong đơn lớp của đại thực bào:

1. Pha: 2 ml huyền phù tế bào (200.000 tế bào / ml) được thêm vào các ống polystyrene vô trùng. Cấy trong 5 giờ ở 37 ° C, sau đó rửa bằng môi trường Eagle. Cho 2 ml môi trường nuôi cấy có 10% huyết thanh bất hoạt (30 phút, 56 ° C) của phôi bò vào ống nghiệm, ủ ở 37 ° C.

2. Pha A: đưa vào huyền phù vi khuẩn (3-10 / đại thực bào), ủ 30-60 phút ở 37 ° C, các ống được tráng 6 lần với 3 ml môi trường để loại bỏ vi khuẩn không bị thực bào. Khắc phục ngay bằng hỗn hợp gồm 1 phần axit axetic băng và 3 phần metanol. Nhuộm chuẩn bị theo tháng 5 - Griinwald, đếm tế bào.

Pha B: xác định vi khuẩn sống nội bào. Trình tự các hoạt động giống như trong giai đoạn A trước giai đoạn cố định. Sau khi rửa, cẩn thận loại bỏ tất cả các dấu vết của môi trường. Tế bào được ly giải, trong đó 2 ml dung dịch vô trùng 0,01% albumin huyết thanh bò (4 ° C) được thêm vào, lắc nhiều lần. Hầu hết các tế bào được ly giải sau 20 phút. Vi khuẩn được giải phóng được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng dày đặc.

Thực bào của hồng cầu: trộn 4x10 7 thực bào với 5x10 7 hồng cầu thử nghiệm trong 5 ml PBS. Chuyển 2 ml hỗn hợp vào đệm phosphat 5 mM được làm lạnh đến 0 ° C và ly tâm. Đo mật độ quang của phần nổi ở bước sóng 420 nm. Mức độ thực bào được xác định bằng sự giảm hàm lượng hemoglobin trong pha không có tế bào bằng cách sử dụng các đường chuẩn.

Phương pháp đơn giản để xác định thanh thải

Một ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: động vật được tiêm vào màng bụng với liều lượng 5x10 7 vi khuẩn trên 100 g trọng lượng (0,1 ml / / 100 g). Liều tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 10 6 đến 10 8 trên 100 g trọng lượng. Với khoảng thời gian từ 1-2 giờ, 3 cá thể được giết mổ từ mỗi nhóm động vật thí nghiệm; tổng thời lượng của thí nghiệm 16 giờ. Lấy vô trùng 0,5 ml máu tim, 1 ml dịch màng bụng tiết ra phổi, gan, lá lách và thận. Xi lanh được cắt ra khỏi mô cơ quan bằng pipet Pasteur. Xác định số lượng vi sinh vật bằng cách nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng lỏng và rắn.

Ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: sử dụng than keo hoặc dán nhãn 51 [Cr] ram hồng cầu. Chuột (ít nhất 5 con mỗi lần trải nghiệm) được tiêm vào tĩnh mạch 0,01 ml hỗn dịch than với tỷ lệ 16 mg trên 100 g trọng lượng. Trong vòng 15 phút với khoảng thời gian 2 phút, 0,025 ml máu được lấy từ khoang sau ổ mắt. Cho 0,025 ml máu đã chọn vào 2,0 ml dung dịch Na 2 C0 3 0,1%. Sau khi tán huyết, nồng độ của than được xác định so màu ở bước sóng 675 nm bằng đường chuẩn.

t là thời gian tính bằng phút, C là nồng độ cacbon trong mẫu.

Giá trị hiệu chỉnh của hiện tượng thực bào:

Kiểm tra chức năng của thực bào

Xác định sự tách lớp (đo hoạt tính (β-glucuropidase): 10 7 bạch cầu được lơ lửng trong 0,8 ml PBS trong ống nhựa, lắc trong 5 phút ở 37 ° C. Thêm 0,2 ml LPS nhạy cảm, các hạt fluorochromic (FC 80), làm nguội 30 phút trên đá, ly tâm trong 10 phút ở 250 g Kiểm tra hoạt tính của enzym trong phần nổi phía trên Ủ 0,9 ml hỗn hợp cơ chất trong 18 giờ với 0,1 ml phân đoạn khảo sát Thêm 2 ml NaOH 0,1 M, đo mật độ quang trên sóng 410 nm.

Phép tính:

(OD 410 x20) / (1,84x18) = số nmol của chất được phóng thích trong 1 giờ bởi 10 7 bạch cầu, tức là mức độ phân hủy được biểu thị bằng các nanomol của paranitrophenyl-β-glucuronide.

Phương pháp xác định khuyết tật trong myeloperoxidase: kết quả tốt nhất thu được khi xác định sinh hóa H 2 0 2, cho thấy những thay đổi trong chuyển hóa trong quá trình thực bào. Đối với các mục đích thực tế, điều rất quan trọng là sự hoạt hóa của shunt hexose-monophosphat, khử tetrazolium nitroene, và liên kết của iốt ngoại sinh với protein PMNL tương quan với sự hình thành H 2 0 2. Một vết máu thông thường được cố định trong 30 giây bằng hỗn hợp cồn và formalin. Rửa bằng nước cất và nhuộm peroxidase trong 30 giây. Trong các tế bào chứa peroxidase, các tạp chất nhuộm màu xanh đậm được phát hiện.

Thử nghiệm khử tetrazolium nitro blue (TNS). THC được khử bởi PMNL bình thường thành formazan. Trộn với 0,1 ml máu 0,1 ml dung dịch THC 0,1% trong NaCl 0,15 M, ủ 20 phút ở 37 ° C, lắc kỹ lại. Sự kết hợp formazan vào tế bào được xác định bằng kính hiển vi. Kết quả được biểu thị bằng phần trăm tế bào dương tính với formazan.

Phương pháp sau đây có phần phức tạp hơn: nhỏ 1 giọt máu của bệnh nhân vào một tờ giấy bìa. Ủ 20 phút ở 37 ° C trong buồng ẩm, sau đó rửa kính cẩn thận bằng NaCl 0,15 M vô trùng. Đặt một tấm bìa lên phiến kính có chứa 1 giọt môi trường THC (0,5 ml huyết thanh + 0,3 ml NaCl 0,15 M vô trùng + 0,6 ml THC, xem ở trên). Ủ 30 phút trong buồng ẩm ở 37 ° C, lấy bìa ra và phơi khô trong không khí. Cố định bằng metanol tuyệt đối trong 60 giây và rửa bằng nước cất. Cặn trong 5 phút bằng safranin (1 g safranin + 100 ml nước cất + 40 ml glycerin), rửa. Tế bào dương tính với formazan lớn, giống như hạt nổ và chứa các hạt màu xanh lam. Thông thường, khoảng 30% tế bào dương tính với formazan được phát hiện trong chế phẩm.

Các phương pháp đánh giá khả năng thực bào ở trên là tổng hợp của một số lượng rất lớn các ấn phẩm. Thông tin chi tiết hơn về những vấn đề này có thể được tìm thấy trong các công trình liên quan.

Thực bào (từ tiếng Hy Lạp phago - I devour và cytos - một tế bào) là một quá trình hấp thụ và tiêu hóa các chất kháng nguyên, bao gồm cả vi sinh vật, bởi các tế bào có nguồn gốc trung bì, được gọi là thực bào. I. I. Mechnikov chia thực bào thành đại thực bào và vi đại thực bào. Hiện tại, macro và vi mô được hợp nhất trong một hệ thống đại thực bào (SMF). Hệ thống này bao gồm:

• đại thực bào mô - tế bào biểu mô,
• tế bào nội mô lưới hình sao (tế bào Kupffer),
• đại thực bào phế nang và phúc mạc nằm trong phế nang và khoang phúc mạc,
• tế bào biểu bì trắng của da (tế bào Langerhans), v.v.

Các vi thực bào bao gồm:

• bạch cầu trung tính,
• bạch cầu ái toan,
• bạch cầu ái kiềm.

Chức năng của đại thực bào vô cùng đa dạng. Chúng là cơ quan đầu tiên phản ứng với một chất lạ, là tế bào chuyên biệt hấp thụ và tiêu diệt các chất lạ trong cơ thể (tế bào chết, tế bào ung thư, vi khuẩn, vi rút và các vi sinh vật khác, kháng nguyên, các chất vô cơ không chuyển hóa được). Ngoài ra, các đại thực bào sản xuất ra nhiều hoạt chất sinh học - các enzym (bao gồm lysozyme, peroxidase, esterase), các protein bổ thể, các chất điều hòa miễn dịch như interleukin. Sự hiện diện trên bề mặt của các đại thực bào của các thụ thể đối với các globulin miễn dịch (Am) và bổ thể, cũng như một hệ thống các chất trung gian, đảm bảo sự tương tác của chúng với các tế bào lympho T và B. Đồng thời, đại thực bào kích hoạt các chức năng bảo vệ của tế bào lympho T. Do sự hiện diện của các thụ thể đối với bổ thể và Am, cũng như hệ thống tương hợp mô Ag (HLA), các đại thực bào tham gia vào quá trình gắn kết và nhận biết các kháng nguyên. Như vậy, thực bào có ba chức năng:

• bảo vệ, liên quan đến việc làm sạch cơ thể khỏi các tác nhân lây nhiễm, các sản phẩm phân hủy mô, v.v.;
• đại diện, bao gồm trong việc trình bày các biểu mô kháng nguyên cho các tế bào lympho trên màng thực bào;
• tiết, liên quan đến việc bài tiết các enzym lysosome và các chất hoạt động sinh học khác - cytokine, đóng một vai trò quan trọng trong quá trình hình thành miễn dịch.

Có các dòng chảy tuần tự sau đây các giai đoạn thực bào.

• Hóa chất điều trị- chuyển động có chủ đích của thực bào theo hướng gradient hóa học của chất hóa trị trong môi trường. Khả năng điều hòa hóa học có liên quan đến sự hiện diện trên màng của các thụ thể cụ thể đối với chất hóa trị (đối tượng của hiện tượng thực bào), có thể là vi khuẩn, các sản phẩm thoái hóa của các mô cơ thể, v.v.
• Kết dính(sự gắn kết) cũng được trung gian bởi các thụ thể tương ứng, nhưng có thể tiến hành theo các quy luật của tương tác hóa lý không đặc hiệu. Các hạt được hấp phụ trên bề mặt của đại thực bào.
• Nội bào(bắt giữ) - Xảy ra sự xâm nhập của màng tế bào, bắt giữ một hạt lạ và ngâm nó trong nguyên sinh chất. Kết quả của quá trình nội bào, một không bào thực bào được hình thành - phagosome(tức là bong bóng trong nguyên sinh chất xung quanh hạt hấp thụ).
• tiêu hóa nội bào- bắt đầu bằng sự hấp thụ các vật bị thực bào. Phagosome kết hợp với lysosome của thực bào, nơi chứa hàng chục enzyme, và sự hình thành phagolysosome (phá hủy) hạt bị bắt giữ bởi các enzyme xảy ra. Khi một phần tử thuộc về sinh vật được hấp thụ (ví dụ, tế bào chết hoặc các bộ phận của nó, các protein của chính nó), nó sẽ bị các enzym phagolysosome phân tách thành các chất không kháng nguyên (axit amin, axit béo, nucleotide, monosugar). Nếu một phần tử lạ bị hấp thụ, thì các enzym của phagolysosome không thể phân hủy chất này thành các thành phần không phải kháng nguyên. Trong những trường hợp như vậy, phagolysosome với phần còn lại của kháng nguyên vẫn giữ được tính ngoại lai sẽ được đại thực bào truyền đến các tế bào lympho T và B, tức là một liên kết miễn dịch cụ thể được bật lên.

chức năng bài tiết là sự bài tiết của thực bào các chất có hoạt tính sinh học - cytokine - đây là interleukin-1 và interleukin-2, là những chất trung gian tế bào có tác dụng điều hòa sự tăng sinh, biệt hóa và chức năng của thực bào, tế bào lympho, nguyên bào lympho và các tế bào khác. Các đại thực bào sản xuất và tiết ra các yếu tố điều hòa quan trọng như prostaglandin, leukotrienes, nucleotide chu kỳ với một loạt các hoạt động sinh học. Ngoài ra, đại thực bào tổng hợp và tiết ra một số sản phẩm có hoạt tính kháng khuẩn, kháng virus và gây độc tế bào (gốc oxy O2-H2O2, lysozyme, interferon, v.v.).

Quá trình thực bào được tăng cường bởi các kháng thể opsonin, vì liên kết hoặc kháng nguyên dễ dàng hấp thụ hơn trên bề mặt của thực bào, do sự hiện diện của các thụ thể đối với các kháng thể này ở sau. Sự tăng cường khả năng thực bào bởi các kháng thể được gọi là thuốc phiện, I E. chuẩn bị vi sinh vật để bắt bởi thực bào. Sự thực bào của các kháng nguyên opso hóa được gọi là miễn dịch.

Để mô tả hoạt động của quá trình thực bào được giới thiệu chỉ số thực bào.Để xác định nó, số lượng vi khuẩn được hấp thụ bởi một tế bào thực bào được đếm dưới kính hiển vi. Cũng thích chỉ số opsonophagocyticđại diện cho tỷ lệ các thông số thực bào thu được với huyết thanh miễn dịch và không miễn dịch. Chỉ số thực bào và chỉ số opsonophagocytic được sử dụng trong miễn dịch học lâm sàng để đánh giá tình trạng miễn dịch và tình trạng miễn dịch.

Quá trình thực bào đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ kháng khuẩn, kháng nấm và kháng virus, duy trì sức đề kháng của cơ thể đối với các chất lạ. Thực bào cũng có tác dụng kích hoạt và ức chế tế bào lympho, tham gia vào quá trình hồi sức dung nạp miễn dịch, chống nhiễm trùng, cấy ghép và miễn dịch kháng u, và một số dạng dị ứng (HRT).

Quá trình thực bào (hấp thụ vật thể pha rắn) bao gồm năm giai đoạn.

• 1. Kích hoạt (tăng chuyển hóa năng lượng). Các yếu tố hoạt hóa và điều hòa hóa học là các sản phẩm của vi khuẩn (LPS, peptide), các thành phần bổ thể (C3 và C5), các cytokine và các kháng thể.
• 2. Hóa trị.
• 3. Độ kết dính.
• 4. Sự hấp thụ.
• 5. Kết quả của quá trình thực bào.

Sự kết dính có liên quan đến sự hiện diện của một số thụ thể trên bề mặt của thực bào (với các mảnh Fc của kháng thể, thành phần bổ thể, fibronectin), đảm bảo sức mạnh của các tương tác qua trung gian thụ thể của opsonin bao bọc vi sinh vật và hạn chế tính di động của chúng (kháng thể, C3b, fibronectin).

Thực bào có giả amip giống như amip. Sau khi hấp thụ, một phagosome được hình thành với đối tượng được hấp thụ (vi khuẩn), một lysosome chứa các enzym lytic tham gia và kết hợp với nó, và một phagolysosome được hình thành.

Có ba kết quả có thể xảy ra của hiện tượng thực bào:

• - thực bào hoàn toàn;
• - thực bào không hoàn toàn;
• - xử lý kháng nguyên.

Thực bào hoàn toàn là quá trình tiêu hóa hoàn toàn các vi sinh vật trong tế bào thực bào.

Trong quá trình thực bào, một “vụ nổ oxy hóa” xảy ra với sự hình thành các loại oxy phản ứng, mang lại tác dụng diệt khuẩn.

Một trong những chức năng quan trọng nhất của đại thực bào (cùng với quá trình hóa học, thực bào, bài tiết các chất có hoạt tính sinh học) là xử lý (chế biến) kháng nguyên và sự trình bày của nó tới các tế bào có năng lực miễn dịch với sự tham gia của các protein thuộc lớp hệ thống tương hợp mô chính (MHC). 2.

Thực bào không chỉ là sự tiêu diệt ngoại vật mà còn là sự xuất hiện của một kháng nguyên để kích hoạt các phản ứng miễn dịch và tiết ra các chất trung gian của các phản ứng miễn dịch và viêm. Hệ thống đại thực bào là mắt xích trung tâm không chỉ trong đề kháng tự nhiên (miễn dịch loài), mà còn đóng vai trò quan trọng trong miễn dịch thu được, hợp tác tế bào trong phản ứng miễn dịch.

Viêm như một phản ứng bảo vệ của cơ thể đối với các tổn thương mô khác nhau phát sinh ở giai đoạn tiến hóa cao hơn quá trình thực bào và là đặc điểm của các sinh vật có tổ chức cao với hệ tuần hoàn và thần kinh.

Viêm nhiễm đi kèm với các phản ứng mạch máu và tế bào (bao gồm cả thực bào) khác nhau, cũng như khởi động một số chất trung gian của phản ứng viêm (histamine, serotonin, kinin, protein của giai đoạn viêm cấp tính, bạch cầu và prostaglandin, cytokine, bổ thể hệ thống).

Nhiều sản phẩm của vi khuẩn kích hoạt các tế bào của hệ thống bạch cầu đơn nhân và đại thực bào, các tế bào này phản ứng với chúng bằng cách giải phóng các sản phẩm có hoạt tính sinh học - cytokine, đặc biệt là interleukin. Chúng có thể được đặc trưng như chất trung gian của các phản ứng miễn dịch tế bào. Interleukin-1 (IL-1), có tác dụng kích thích sốt, tăng tính thấm thành mạch và tính chất kết dính của nội mô, đồng thời kích hoạt thực bào, đóng vai trò chính trong các phản ứng viêm.

Sốt. Nhiệt độ cơ thể tăng là một phản ứng bảo vệ của cơ thể làm xấu đi điều kiện sinh sản của nhiều vi sinh vật, kích hoạt các đại thực bào, tăng tốc độ lưu thông máu và tăng cường quá trình trao đổi chất trong cơ thể.

Chức năng rào cản của các hạch bạch huyết. Theo P.F. Zdrodovsky (1969), các hạch bạch huyết là một loại bộ lọc sinh học đối với các mầm bệnh mang theo bạch huyết. Tại đây, các vi sinh vật đã xâm nhập vào da hoặc màng nhầy và được mang theo dòng bạch huyết sẽ được giữ lại và tiếp xúc với hoạt động của các đại thực bào và các tế bào lympho hoạt hóa.

Hệ thống bổ thể là một phức hợp gồm các protein và glycoprotein trong huyết thanh của người và động vật có xương sống (có hơn 20 loại trong số chúng). Các thành phần riêng lẻ làm trung gian cho các quá trình viêm, opso hóa các mảnh lạ cho quá trình thực bào tiếp theo, cùng với các đại thực bào, tham gia vào việc tiêu diệt trực tiếp vi sinh vật và các tế bào lạ khác (ly giải vi khuẩn và vi rút). Trong điều kiện sinh lý, các thành phần của hệ thống bổ thể ở dạng không hoạt động. Có ba cách kích hoạt hệ thống bổ thể - cổ điển, thay thế và sử dụng shunt C1.

Con đường cổ điển - một chuỗi các phản ứng protease từ thành phần C1q đến C9 - được thực hiện khi có sự hiện diện của các kháng thể đối với kháng nguyên tương ứng. Thành phần C1q tương tác với phức hợp “kháng nguyên-kháng thể”, sau đó là C4, tiếp theo là C2. Phức hợp “kháng nguyên-kháng thể-C1C4C2” được hình thành, C3 (thành phần trung tâm của hệ thống) được kết nối với nó, và một chuỗi hoạt hóa với các chức năng tác động (opso hóa và ly giải vi khuẩn, kích hoạt hệ thống đại thực bào, viêm) được đưa ra. .

Một con đường thay thế được thực hiện trong lần tiếp xúc ban đầu với mầm bệnh (khi chưa có kháng thể). Nó được gây ra bởi LPS và các kháng nguyên vi sinh vật khác. C1, C4, C2 không tham gia, các con đường thay thế và cổ điển hợp nhất ở mức C3.

hệ thống interferon.

Interferon là glycoprotein được tổng hợp bởi các tế bào khác nhau của cơ thể với một loạt các hoạt tính sinh học (chủ yếu là kháng virus), một phản ứng nhanh của cơ thể đối với các tế bào nhận được tín hiệu không đặc hiệu về ngoại lai. Có một hệ thống toàn bộ các interferon, được chia thành các loại phụ alpha, beta và gamma với tính chất không đồng nhất rõ rệt. Tác dụng kháng vi-rút được thể hiện ở khả năng ngăn chặn sự sinh sản nội bào của vi-rút DNA và RNA (chủ yếu là kết quả của việc ngăn chặn sự tổng hợp các đại phân tử của vi-rút). Cảm ứng tổng hợp interferon là do virus, vi khuẩn, rickettsiae, động vật nguyên sinh, các hợp chất tổng hợp.

tế bào sát thủ.

Trong việc đảm bảo khả năng miễn dịch của loài, một vai trò thiết yếu thuộc về các tế bào lympho gây độc tế bào T (T-killlers), cũng như hệ thống tương hợp mô chính (chi tiết hơn trong các bài giảng sau).

Những kẻ giết người T, bằng cách trình bày các kháng nguyên của hệ thống tương hợp mô chính 1, nhận ra bất kỳ kháng nguyên ngoại lai nào (bao gồm cả những kháng nguyên đột biến, ví dụ, tế bào ung thư), tấn công và tiêu diệt chúng.

Tế bào NK (sát thủ tự nhiên) rất quan trọng trong việc duy trì cân bằng nội môi di truyền và bảo vệ chống khối u, chức năng nhận biết của chúng không phụ thuộc vào sự trình bày của kháng nguyên MHC (phức hợp tương hợp chính) lớp 1.

Hệ thống đề kháng không đặc hiệu và miễn dịch loài góp phần duy trì tính toàn vẹn về cấu trúc và chức năng của cơ thể và là cơ sở để hình thành miễn dịch thu được (đặc hiệu). Lên đến cấp độ cao hơn này, các hệ thống miễn dịch đặc hiệu và có được tạo thành một hệ thống tự vệ duy nhất và hiệu quả nhất của cơ thể khỏi mọi thứ xa lạ.

Hệ thống miễn dịch.

Hệ thống miễn dịch là một tập hợp các cơ quan, mô và tế bào đảm bảo tính ổn định của tế bào và di truyền của cơ thể. Các nguyên tắc về độ tinh khiết của kháng nguyên (di truyền) dựa trên việc nhận biết "ngoại lai của chính mình" và phần lớn được xác định bởi hệ thống gen và glycoprotein (sản phẩm biểu hiện của chúng) - phức hợp tương hợp mô chính (MHC), thường được gọi là HLA (người hệ thống kháng nguyên bạch cầu) ở người. Các protein MHC được biểu hiện rõ ràng trên bạch cầu của người, các kháng nguyên MHC được đánh máy bằng cách sử dụng nghiên cứu về bạch cầu.

các cơ quan của hệ thống miễn dịch.

Có trung tâm (tủy xương - cơ quan tạo máu, tuyến ức hoặc tuyến ức, mô lympho của ruột) và ngoại vi (lá lách, các hạch bạch huyết, tích tụ mô lympho trong lớp màng nhầy của chính loại ruột) các cơ quan miễn dịch.

Tế bào tiền thân của tế bào có năng lực miễn dịch được tạo ra bởi tủy xương. Một số hậu duệ của tế bào gốc trở thành tế bào lympho. Tế bào bạch huyết được chia thành hai lớp - T và B. Tiền thân của tế bào lympho T di chuyển đến tuyến ức, nơi chúng trưởng thành thành các tế bào có thể tham gia vào phản ứng miễn dịch. Ở người, tế bào lympho B trưởng thành trong tủy xương. Ở chim, các tế bào B chưa trưởng thành di chuyển đến chùm Fabricius nơi chúng đạt đến độ trưởng thành. Tế bào lympho B và T trưởng thành khu trú ở các hạch bạch huyết ngoại vi. Do đó, các cơ quan trung tâm của hệ thống miễn dịch thực hiện sự hình thành và trưởng thành của các tế bào có năng lực miễn dịch, các cơ quan ngoại vi cung cấp đáp ứng miễn dịch đầy đủ đối với kích thích kháng nguyên - “xử lý” kháng nguyên, nhận biết và tăng sinh vô tính tế bào lympho - biệt hóa phụ thuộc vào kháng nguyên.