Thực bào trong các phản ứng miễn dịch của cơ thể. Các quy định chung


  • 10. Enzyme vi sinh vật.
  • 11. Khái niệm văn hóa thuần túy.
  • 12. Phân lập và nuôi cấy nghiêm ngặt vi khuẩn kỵ khí và vi khuẩn ưa khí.
  • 13. Khái niệm về vô trùng, khử trùng, khử trùng và khử trùng.
  • 14. Ảnh hưởng của các yếu tố vật lý đến vi sinh vật. Khử trùng.
  • 15. Xạ khuẩn. Thu nhận, chuẩn độ và ứng dụng thực tế.
  • 16. Các giai đoạn của tương tác tế bào thực khuẩn. phage vừa phải. Lysogeny.
  • 17. Bộ máy di truyền ở vi khuẩn. Nhận dạng gen pcr.
  • 18. Tái tổ hợp gen.
  • 19. Yếu tố di truyền ngoài nhiễm sắc thể.
  • 20. Học thuyết về sự đối kháng của vi sinh vật. Thuốc kháng sinh.
  • 21. Xác định độ nhạy của vi sinh vật với kháng sinh.
  • 1. Phương pháp khuếch tán thạch (phương pháp đĩa)
  • 2. Phương pháp nhân giống
  • 22. Cơ chế phát sinh và lan rộng kháng thuốc.
  • 29. Vi nấm.
  • 30. Hệ vi sinh bình thường của cơ thể.
  • 31. Hệ vi sinh đường ruột.
  • 32. Bệnh loạn khuẩn đường ruột ở trẻ em.
  • 33. Hình thái và siêu cấu trúc của virus.
  • 34. Sự đa dạng di truyền phân tử của virut.
  • 35. Phương pháp nuôi cấy virut.
  • 36. Các giai đoạn chính của quá trình sinh sản của virus trong tế bào.
  • 37. Các kiểu tương tác giữa virut và tế bào.
  • 38. Bệnh sinh ung thư do virus.
  • 40. Bản chất của prion và các bệnh do prion.
  • 1. Khái niệm về nhiễm trùng và bệnh truyền nhiễm.
  • 2. Các tính năng của quá trình lây nhiễm trong tử cung.
  • 3.Exotoxins và Endotoxins của vi khuẩn
  • 4. Khả năng gây bệnh và độc lực.
  • 5. Các hình thức nhiễm trùng.
  • 6. Hệ thống miễn dịch.
  • 7. Chất trung gian của hệ thống miễn dịch.
  • 8. Hợp tác gian bào trong quá trình sinh miễn dịch.
  • 9. Thuyết miễn dịch chọn lọc vô tính.
  • 10. Trí nhớ miễn dịch.
  • 11. Khả năng dung nạp miễn dịch.
  • 12. Kháng nguyên.
  • 13. Cấu trúc kháng nguyên của vi sinh vật.
  • 14. Các yếu tố dịch thể và tế bào của sự bảo vệ không đặc hiệu.
  • 15. Hệ thống bổ sung.
  • 16. Phản ứng thực bào.
  • 17. Đáp ứng miễn dịch dịch thể.
  • 18. Vai trò của các globulin miễn dịch tiết trong miễn dịch tại chỗ ở trẻ em và người lớn. Các yếu tố miễn dịch của sữa mẹ.
  • 19. Đáp ứng miễn dịch tế bào.
  • 20. Phản ứng kháng nguyên-kháng thể.
  • 21. Huyết thanh ngưng kết monoreceptor.
  • 22. Phản ứng ngưng kết và các biến thể của nó.
  • 23. Phản ứng đông máu.
  • 24. Phản ứng tạo kết tủa.
  • 25. Phương pháp phát quang miễn dịch và ứng dụng của nó trong chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm.
  • 26. R-tion ràng buộc một lời khen. R-tion của tán huyết miễn dịch.
  • 27. Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết enzym: nguyên tắc, ứng dụng để chẩn đoán bệnh truyền nhiễm trong phòng thí nghiệm (IFA)
  • 28. Phương pháp đánh giá tình trạng miễn dịch của cơ thể
  • 29. Tính năng miễn dịch và đề kháng không đặc hiệu.
  • 30. Hệ thống interferon.
  • 31. Autoantigens. Các tự kháng thể. Bản chất của phản ứng tự miễn dịch.
  • 32. Suy giảm miễn dịch bẩm sinh (nguyên phát) và mắc phải (thứ phát): căn nguyên, biểu hiện, chẩn đoán
  • 33. Quá mẫn loại chậm (dị ứng phụ thuộc t) Phản ứng dị ứng da trong chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm
  • 34. Quá mẫn loại tức thời (dị ứng phụ thuộc B)
  • 35. Vắc xin vi rút sống. Ứng dụng trong thực hành nhi khoa.
  • 36. Liệu pháp huyết thanh, dự phòng huyết thanh. Phòng chống bệnh huyết thanh và sốc phản vệ ở trẻ em.
  • 37. Tiêm chủng và liệu pháp tiêm chủng.
  • 38. Vắc xin sống: thu nhận, yêu cầu đối với chủng vắc xin, ưu nhược điểm.
  • 39. Vắc xin bị giết. Nguyên tắc tiếp nhận. vắc xin hóa học.
  • 40. Danh mục vắc xin tiêm phòng bệnh định kỳ ở trẻ em. Đánh giá khả năng miễn dịch sau tiêm chủng
  • 16. Phản ứng thực bào.

    Thực bào- Quá trình hấp thụ tích cực, tiêu hóa và bất hoạt các phần tử lạ bởi các tế bào thực bào chuyên biệt.

    Các giai đoạn thực bào:

      Hóa trị là sự di chuyển có mục đích của thực bào dọc theo gradient nồng độ của các chất hoạt tính sinh học đặc biệt - chất hóa trị.

      Độ bám dính - dính vào một vi khuẩn. Opsonin (AT, fibronectin, chất hoạt động bề mặt) bao bọc vi sinh vật và hạn chế đáng kể tính di động của chúng.

      Nội bào (hấp thụ). Kết quả là một phagosome được hình thành với một vật thể thực bào được bao bọc bên trong. Lysosome lao đến phagosome và xếp thành hàng dọc theo chu vi của nó.

      Tiêu hóa. Sự kết hợp của một phagosome với một lysosome để tạo thành một phagolysosome. Hơn nữa, các vi sinh vật bị thực bào bị tấn công bởi sự phụ thuộc vào oxy (peroxide, oxy superoxide, cytochrome b; các sản phẩm được hình thành có tác dụng độc hại, làm hỏng vi sinh vật và các cấu trúc xung quanh) và không phụ thuộc oxy (hạt có lactoferrin, lysozyme, v.v.; các sản phẩm này gây tổn thương thành tế bào và phá vỡ một số yếu tố) quá trình trao đổi chất.

      kết quả của quá trình thực bào.

      Hoàn thành - chết và tiêu diệt vi sinh vật

      Không hoàn chỉnh - vi khuẩn được trang bị viên nang hoặc thành tế bào kỵ nước dày đặc có khả năng chống lại hoạt động của các enzym lysosome; ngăn chặn sự hợp nhất của phasome và lysosome.

    Các loại tế bào thực bào:

      Đại thực bào và tế bào đuôi gai - tế bào thực bào chuyên nghiệp và tế bào trình diện kháng nguyên

      Các vi thực bào - bạch cầu đa nhân trung tính (bạch cầu trung tính) - chỉ thực bào vừa phải

    Bạch cầu đơn nhân trong máu di chuyển vào các mô dưới ảnh hưởng của độc tố tế bào và trở thành nơi cư trú.

    Đại thực bào. Gan - Tế bào Kupffer

    Phổi - đại thực bào phế nang

    CNS - tế bào vi mô

    Tủy xương - tế bào hủy xương

    Thận - tế bào trung bì

    Vi sinh vật thực bào và xử lý (tiêu hóa) chúng; hiện kháng nguyên cho tế bào T.

    NK - chất diệt tự nhiên - không phân biệt AH, không phụ thuộc vào kháng thể, chỉ hoạt động chống lại tế bào và chỉ phản ứng với các yếu tố tế bào.

    Các chỉ số của quá trình thực bào:

    Chỉ số thực bào (hoạt động thực bào) - tỷ lệ phần trăm bạch cầu trung tính có chứa các hạt vi sinh vật

    Số lượng thực bào (chỉ số thực bào) - số lượng trung bình vi sinh vật được một tế bào thực bào hấp thụ.

    17. Đáp ứng miễn dịch dịch thể.

    Ba loại tế bào có liên quan đến các phản ứng miễn dịch dịch thể: đại thực bào (tế bào trình bày AG), tế bào trợ giúp T và tế bào lympho B

    Tế bào trình bày AG thực bào vi sinh vật và xử lý nó, tách nó thành các mảnh (xử lý AG). Các mảnh AG được tiếp xúc với bề mặt của tế bào trình bày AG cùng với phân tử MHC. Phức hợp MHC2 phân tử AG được trình bày cho T-helper. Sự nhận biết phức hợp bởi T-helper sẽ kích thích sự bài tiết IL-1 của các đại thực bào.

    T-helper dưới ảnh hưởng của IL-1, nó tổng hợp IL-2 và các thụ thể cho IL-2, thụ thể sau này, theo cơ chế tự tiết, kích thích sự gia tăng của T-helper, cũng như CTL. Do đó, sau khi tương tác với tế bào trình bày AG, T-helper có được khả năng đáp ứng với hoạt động của IL-2 bằng cách tái tạo nhanh chóng. Ý nghĩa sinh học của hiện tượng này là sự tích tụ của T-helpers, đảm bảo sự hình thành trong các cơ quan lymphoid của nhóm tế bào plasma cần thiết tạo ra kháng thể đối với AG này.

    Tế bào lympho B. Sự hoạt hóa của nó liên quan đến sự tương tác trực tiếp của AG với phân tử Ig trên bề mặt của tế bào B. Trong trường hợp này, tế bào lympho B tự xử lý AG và trình bày đoạn của nó liên quan đến phân tử MHC2 trên bề mặt của nó. Phức hợp này nhận ra T-helper được chọn bằng cách sử dụng cùng một kháng nguyên. Sự nhận biết bởi thụ thể T-helper của phức hợp AG-MHC2 trên bề mặt của tế bào lympho B dẫn đến sự tiết IL-2, IL-4, IL-5 và IFN-gamma bởi T-helper, dưới ảnh hưởng trong đó tế bào B nhân lên, tạo thành một bản sao của tế bào plasma. Tế bào huyết tương tổng hợp kháng thể. Sự tiết AT được kích thích bởi IL-6 do T-helper hoạt hóa tiết ra. Một số tế bào lympho B trưởng thành sau khi biệt hóa không phụ thuộc vào kháng nguyên sẽ lưu hành trong cơ thể dưới dạng tế bào nhớ.

    5 lớp: IgA, IgD, IgE, IgG, IgM; Các phân tử IgD, IgE, IgG được đại diện bởi các đơn phân, IgM bởi các pentamit, phân tử IgA trong huyết thanh là một đơn phân, và trong các chất lỏng bài tiết (nước bọt, nước mắt) nó là một chất dimer.

    IgG: thâm nhập qua nhau thai vào cơ thể thai nhi để đảm bảo hình thành miễn dịch thụ động ở thai nhi, sau khi trẻ sinh ra, hàm lượng của nó trong huyết thanh giảm xuống và đạt nồng độ tối thiểu sau 3-4 tháng, sau đó bắt đầu tăng lên. do sự tích lũy IgG của chính nó, đạt đến mức bình thường sau 7 năm. Việc phát hiện hiệu giá cao từ IgG đến Ag của một mầm bệnh cụ thể cho thấy rằng cơ thể đang ở giai đoạn dưỡng bệnh hoặc một bệnh cụ thể mới được chuyển đến.

    IgM: hàm lượng của nó tăng lên đáng kể ở trẻ sơ sinh đã bị nhiễm trùng trong tử cung. Sự hiện diện của IgM trong Ag của một mầm bệnh cụ thể cho thấy một quá trình lây nhiễm cấp tính.

    IgA: lưu thông trong huyết thanh, và cũng được tiết ra trên bề mặt biểu mô, có trong nước bọt, dịch lệ, sữa. Các phân tử IgA tham gia vào các phản ứng trung hòa và ngưng kết mầm bệnh. Các globulin miễn dịch tiết của lớp IgA (SIgA) khác với các globulin miễn dịch trong huyết thanh bởi sự hiện diện của thành phần chế tiết liên kết với 2 hoặc 3 đơn phân IgA.

    IgD:được tìm thấy trên bề mặt của tế bào lympho B đang phát triển, hàm lượng của nó đạt tối đa sau 10 năm, hiệu giá tăng nhẹ được ghi nhận trong thời kỳ mang thai, hen phế quản, lupus ban đỏ hệ thống và ở những người bị suy giảm miễn dịch

    IgE:được tổng hợp bởi các tế bào huyết tương trong các hạch bạch huyết phế quản và phúc mạc, trong niêm mạc của ống tiêu hóa. IgE còn được gọi là thuốc thử, vì chúng tham gia vào các phản ứng phản vệ, có tính tế bào rõ rệt.

    Từ tuần thứ 10 của sự phát triển trong tử cung, quá trình tổng hợp IgM bắt đầu, từ thứ 12 - IgG, từ thứ 30 - IgA, nhưng nồng độ của chúng thấp.

    Chức năng bảo vệ của các kháng thể trong quá trình nhiễm trùng:

    Ab thông qua các trung tâm liên kết Ag tương tác với các Ag khác nhau. Do đó, Abs ngăn ngừa nhiễm trùng hoặc loại bỏ mầm bệnh hoặc ngăn chặn sự phát triển của các phản ứng bệnh lý, đồng thời kích hoạt tất cả các hệ thống phòng thủ cụ thể.

    Tiêm chủng (thực bào miễn dịch)- Abs (qua các đoạn Fab) liên kết với thành tế bào của sinh vật; Đoạn Fc của Ab tương tác với thụ thể tương ứng của tế bào thực bào, thụ thể này làm trung gian cho sự hấp thụ hiệu quả sau đó của phức hợp được tạo thành bởi thực bào.

    Tác dụng chống độc Abs có thể liên kết và do đó vô hiệu hóa các độc tố của vi khuẩn.

    Kích hoạt khen thưởng Ab (IgM, IgG) sau khi liên kết với Ag (vi sinh vật, tế bào khối u) sẽ kích hoạt hệ thống khen, dẫn đến việc phá hủy tế bào này bằng cách thủng thành tế bào, tăng khả năng điều hòa hóa học, phản ứng hóa học và thực bào miễn dịch.

    Trung hòa- tương tác với các thụ thể của tế bào liên kết vi khuẩn hoặc vi rút, Ab có thể ngăn chặn sự bám dính và xâm nhập của vi sinh vật vào tế bào của sinh vật chủ.

    Các phức hợp miễn dịch tuần hoàn Abs liên kết với Ag hòa tan và tạo thành phức hợp tuần hoàn, với sự giúp đỡ của Ag được đào thải ra khỏi cơ thể, chủ yếu bằng nước tiểu và mật.

    Độc tính tế bào phụ thuộc kháng thể- bằng cách opso hóa Ag, Ab kích thích sự phá hủy của chúng bởi các tế bào gây độc tế bào. Bộ máy cung cấp khả năng nhận dạng mục tiêu là các thụ thể cho các đoạn Fc của Ab. Đại thực bào và bạch cầu hạt có khả năng tiêu diệt các mục tiêu đã opso hóa.

    Tính chất của kháng thể:

    Tính đặc hiệu- khả năng của kháng thể chỉ phản ứng với một kháng nguyên cụ thể, do sự hiện diện của các yếu tố quyết định kháng nguyên trên kháng nguyên và các thụ thể kháng nguyên (kháng thể) trên kháng thể.

    Valence- số lượng chất chống xác định trên kháng thể (thường là hóa trị hai);

    mối quan hệ, mối quan hệ là độ bền của mối liên hệ giữa yếu tố xác định và yếu tố phản xác định;

    Avidity là độ bền của liên kết kháng thể-kháng nguyên. Do hóa trị, một kháng thể được liên kết với một số kháng nguyên;

    Không đồng nhất- không đồng nhất, do sự hiện diện của ba loại yếu tố quyết định kháng nguyên:

    isotypic- đặc trưng cho sự thuộc về một globulin miễn dịch đối với một lớp nhất định (IgA, IgG, IgM, v.v.);

    Allotypic- (tính đặc hiệu nội bộ) tương ứng với các biến thể alen của globulin miễn dịch (động vật dị hợp tử có các loại globulin miễn dịch khác nhau);

    Idiotypical- phản ánh các đặc tính riêng của immunoglobulin (có thể gây ra các phản ứng tự miễn dịch).

    Đặc điểm tuổi:

    Trong giai đoạn sau khi sinh, có một động lực rất đáng kể về hàm lượng các globulin miễn dịch của các lớp khác nhau trong máu của trẻ em. Đó là do thực tế là trong những tháng đầu tiên của cuộc đời, quá trình phân hủy và loại bỏ các globulin miễn dịch loại B được chuyển qua nhau thai từ mẹ vẫn tiếp tục.

    Trong 4-6 tháng đầu tiên, các globulin miễn dịch của mẹ bị phá hủy hoàn toàn và quá trình tổng hợp các globulin miễn dịch của chính chúng bắt đầu.

    Thực bào là quá trình bảo vệ cổ xưa nhất được thực hiện bởi các tế bào chuyên biệt của hệ thống miễn dịch (Mechnikov 1883, 1892; Greenberg, 1999). Chính I. I. Mechnikov, người lần đầu tiên trong các nghiên cứu sinh lý cơ thể so sánh đã chứng minh vai trò then chốt của cơ chế bảo vệ miễn dịch này trong việc hình thành sức đề kháng của động vật đối với nhiễm trùng.

    Các tế bào thực bào chuyên nghiệp ở động vật có xương sống chủ yếu bao gồm bạch cầu trung tính (bạch cầu đa nhân, vi nhân) và bạch cầu đơn nhân / đại thực bào (đơn nhân, thực bào đơn nhân). Các tế bào này thích nghi về mặt sinh lý và sinh hóa để hấp thụ và làm bất hoạt các cơ thể vi sinh vật và các hạt có đường kính lớn hơn 0,5 µm (kích thước của vi khuẩn nhỏ nhất thuộc nhóm Mycoplasma). Sự khác biệt giữa quá trình thực bào và các dạng phản ứng nội bào khác của tế bào cho thấy sự tham gia bắt buộc vào quá trình này của bộ xương actin, bộ xương này, ở dạng vi sợi, thâm nhập vào các pseudopodia để bắt vi sinh vật và các phần tử. Quá trình thực bào đòi hỏi những điều kiện nhiệt độ nhất định cho quá trình của nó (t> + 13-18 ° C) và không xảy ra ở nhiệt độ thấp hơn ở động vật có xương sống. Cùng với bạch cầu trung tính và bạch cầu đơn nhân / đại thực bào, tế bào đuôi gai chưa trưởng thành, bạch cầu ái toan, tế bào mast, tế bào biểu mô, tiểu cầu và thậm chí một số tế bào lympho tham gia vào quá trình thực bào.

    Sự tiếp xúc của thực bào với vi sinh vật khởi đầu các phản ứng tế bào liên kết với màng tế bào chất, bộ xương tế bào, kích hoạt cơ chế tiêu diệt mầm bệnh, sản xuất cytokine, chemokine và các phân tử đóng vai trò quan trọng trong việc trình bày kháng nguyên (Underhill và Ozinsky, 2002) .

    Các thụ thể thực bào
    Tế bào Receptor Mục tiêu phối tử
    Bạch cầu FcyRs phức hợp miễn dịch

    pentraxin opso hóa zymosan (nấm men)

    Miền CH của các globulin miễn dịch SAP, SRV
    bạch cầu trung tính,

    bạch cầu đơn nhân /

    đại thực bào

    CR1 (CD35) Vi khuẩn và nấm đã được opso hóa bổ sung C3b, C4b,
    Cũng vậy CR3 (CD1 lb- CD18, oMp2, Maci) Vi khuẩn và nấm đã được opso hóa bổ sung

    Vi khuẩn gram âm

    Bordetella pertussis

    NPS, C3d LPS

    sợi hemag-glutinin P-glycan

    đại thực bào, tế bào đuôi gai CR4 (CD1lc-CD18) M. tuberculosis Không xác định
    Đại thực bào CD43 (leukosialin / sialophorin) M. tuberculosis Cũng vậy
    Béo phì CD48 Đường ruột

    vi khuẩn

    FimH
    Đại thực bào mannose

    cơ quan thụ cảm

    Viêm phổi

    candida albicans

    Dư lượng mannose hoặc fucose
    » Bộ phận tiếp nhận rác AI / I1 Tế bào lympho apoptotic Cầu khuẩn Gram dương ? axit lipoteichoic phosphatidylserine
    Tế bào Ser Người nhặt rác tái Apoptotic Phốt phát-
    nỉ lợp, tế bào biểu mô tuyến ức ceptor B 1 tế bào dilserine


    Tế bào Receptor Mục tiêu phối tử
    Đại thực bào MARCO E. co / i, S. aureus Không xác định
    » MER Apoptotic

    thymocytes

    ? Gas6Apoc-fatidyl-serine
    Nhiều PSR Apoptotic Phosphati-

    dilserine

    Đại thực bào CD36 Apoptotic

    bạch cầu trung tính

    Phosphati-

    dilserine

    » CD14 Pseudomonas

    apoptotic

    ? lps

    không xác định

    vừa vặn

    Nhiều tích phân pi Yersinia spp. sự phá hoại
    tế bào
    Đại thực bào opfz Apoptotic ? thrombospondin
    Đuôi gai sofZ Tương tự Không xác định
    al
    Biểu mô- E-cadherin Vi khuẩn Listeria spp. 1p1A
    tế bào
    Tương tự Gặp Tương tự 1p1B

    Các giai đoạn chính của quá trình thực bào: phản ứng hóa học, tiếp xúc của thực bào với vi khuẩn, hấp thụ (nội hóa) vi sinh vật (thực bào theo nghĩa hẹp của từ này), bất hoạt (giết chết) và tiếp theo là tiêu hóa mầm bệnh trong bộ máy không bào của thực bào (hoàn thành của quá trình thực bào). Cùng với các biểu hiện chức năng này, hiện tượng thực bào, như một quy luật, đi kèm với các phản ứng bài tiết của thực bào, đặc biệt là bạch cầu đơn nhân / đại thực bào và tế bào đuôi gai, trong đó các chất hoạt động sinh lý khác nhau được giải phóng để đảm bảo tính chất bảo vệ của quá trình và hoàn thành toàn bộ quá trình như toàn bộ.

    Các thụ thể khác nhau liên quan đến việc nhận biết, tiếp xúc và hấp thụ vi khuẩn bởi các tế bào thực bào (Bảng 7) (Greenberg, 78

    Grinstein, 2002). Bằng cách sử dụng các phương pháp di truyền phân tử hiện đại, người ta đã xác định được rằng những thay đổi trong biểu hiện của hơn 200 gen được quan sát thấy trong thực bào trong quá trình thực bào các hạt latex bởi đại thực bào chuột và khoảng 600 gen trong quá trình thực bào của Mycobacterium tuberculosis (Ehrt và cộng sự, 2001) . Tất cả điều này chứng tỏ bản chất phức tạp và phức tạp của những thay đổi cấu trúc và chức năng trong đại thực bào liên quan đến quá trình thực bào. Hiểu được cơ sở phân tử của chúng sẽ cung cấp trong tương lai việc tạo ra các tác nhân dược lý điều chỉnh cụ thể quá trình thực bào. Sự đa dạng của các thụ thể đảm bảo hiệu quả nhận biết các mầm bệnh (“không có nguồn gốc”) và là điều kiện cần thiết cho việc vô hiệu hóa các tác nhân lây nhiễm có chủ đích sau này. Trong một trong những khái niệm hiện đại về miễn dịch bẩm sinh, sự kết hợp của các thụ thể này thường được gọi là hệ thống các thụ thể (phân tử) nhận biết các mẫu phân tử liên quan đến mầm bệnh (Janeway, 1992, 2002). "

    1. Miễn dịch. Thực bào

    Miễn dịch (từ tiếng Latin immunitas - “thoát khỏi”, “giải phóng khỏi thứ gì đó”) là khả năng miễn dịch của cơ thể đối với các tác nhân lây nhiễm khác nhau, cũng như các sản phẩm chuyển hóa của chúng, các chất và mô có đặc tính kháng nguyên ngoại lai (ví dụ, chất độc động vật và thực vật ). xuất xứ). Khi đã bị bệnh, cơ thể chúng ta ghi nhớ tác nhân gây bệnh nên lần sau bệnh diễn biến nhanh hơn và không có biến chứng. Nhưng thường sau khi bị bệnh lâu dài, can thiệp phẫu thuật, trong điều kiện môi trường bất lợi và trong trạng thái căng thẳng, hệ thống miễn dịch có thể hoạt động sai. Giảm khả năng miễn dịch biểu hiện bằng cảm lạnh thường xuyên và kéo dài, các bệnh truyền nhiễm mãn tính (viêm amidan, nhọt, viêm xoang, nhiễm trùng đường ruột), sốt liên tục, v.v.

    Nếu tóm tắt tất cả những điều trên, chúng ta có thể nói rằng miễn dịch là một cách để bảo vệ cơ thể khỏi các cơ thể sống và các chất mang dấu hiệu của thông tin ngoại lai về mặt di truyền. Cơ chế tương tác cổ xưa và ổn định nhất của mô với bất kỳ yếu tố môi trường gây hại bên ngoài nào (kháng nguyên) là hiện tượng thực bào. Quá trình thực bào trong cơ thể được thực hiện bởi các tế bào đặc biệt - đại thực bào, vi đại thực bào và bạch cầu đơn nhân (tế bào tiền thân của đại thực bào). Đây là một quá trình phức tạp gồm nhiều giai đoạn nhằm bắt giữ và tiêu diệt tất cả các vi vật thể lạ với chúng trong mô mà không cần chạm vào các mô và tế bào của chính chúng. Thực bào, di chuyển trong chất lỏng gian bào của mô, khi gặp kháng nguyên, bắt giữ nó và tiêu hóa nó trước khi tiếp xúc với tế bào. Cơ chế bảo vệ này được I. M. Mechnikov phát hiện năm 1883 và là cơ sở lý thuyết của ông về khả năng tự vệ của cơ thể chống lại các vi khuẩn gây bệnh. Sự tham gia rộng rãi của các đại thực bào trong các quá trình miễn dịch khác nhau đã được thiết lập. Ngoài các phản ứng bảo vệ chống lại các bệnh nhiễm trùng khác nhau, các đại thực bào còn tham gia vào khả năng miễn dịch kháng khối u, nhận diện kháng nguyên, điều chỉnh các quá trình miễn dịch và giám sát miễn dịch, trong việc nhận biết và tiêu diệt các tế bào bị thay đổi đơn lẻ của cơ thể chúng, bao gồm cả các tế bào khối u, trong việc tái tạo các các mô và trong các phản ứng viêm. Các đại thực bào cũng sản xuất các chất khác nhau có tác dụng kháng nguyên. Thực bào bao gồm một số giai đoạn:

    2) sự gắn kết của thực bào với nó;

    3) nhận biết vi khuẩn hoặc kháng nguyên;

    4) sự hấp thụ của nó bởi một tế bào thực bào (thực bào thực tế);

    5) tiêu diệt vi khuẩn với sự trợ giúp của các enzym do tế bào tiết ra;

    6) tiêu hóa của vi sinh vật.

    Nhưng trong một số trường hợp, thực bào không thể tiêu diệt một số loại vi sinh vật, thậm chí có thể sinh sôi trong đó. Đó là lý do tại sao quá trình thực bào không phải lúc nào cũng có thể bảo vệ cơ thể khỏi bị hư hại.

    Từ cuốn sách Sức khỏe con chó của bạn tác giả Anatoly Baranov

    Từ cuốn sách Miễn dịch học Tổng quát và Lâm sàng tác giả N. V. Anokhin

    2. Miễn dịch Quá trình viêm là một cơ chế bù đắp cục bộ đảm bảo phục hồi vùng mô bị tổn thương đã bị thay đổi do tương tác với các yếu tố gây hại thuộc bất kỳ bản chất nào. Trong quá trình tiến hóa, một

    Từ cuốn sách Các bệnh truyền nhiễm của trẻ em. Toàn bộ tài liệu tham khảo tác giả tác giả không rõ

    MIỄN DỊCH Sau khi nhiễm não mô cầu hoặc sau một thời gian dài mang vi khuẩn, các kháng thể đặc hiệu bắt đầu được sản xuất trong cơ thể người: ngưng kết, kháng thể diệt khuẩn, kết tủa. Từ những ngày đầu tiên của bệnh, hiệu giá của hemagglutinin

    Từ cuốn sách Tiền đề của các bệnh ở trẻ em tác giả O. V. Osipova

    MIỄN DỊCH Mặc dù thực tế là các kháng thể kháng độc và kháng khuẩn đặc hiệu tích tụ trong máu của bệnh nhân trong suốt quá trình mắc bệnh, khả năng miễn dịch vẫn mang tính đặc hiệu và không ổn định. Trong thực tế, các trường hợp lặp đi lặp lại của bệnh cũng được mô tả, và không chỉ gây ra

    Từ cuốn sách Nuôi con bằng sữa mẹ bởi Martha Sears

    41. Thực bào như một cơ chế bảo vệ Thực bào là một cơ chế bảo vệ ban đầu của thai nhi. Thực bào tuần hoàn - bạch cầu đa nhân, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu ái toan, thực bào cố định trong mô - đại thực bào, tế bào lá lách, bạch cầu lưới nội mô hình sao -

    Từ cuốn sách Phục hồi chức năng sau các bệnh viêm nhiễm cơ quan sinh dục nữ tác giả Antonina Ivanovna Shevchuk

    Miễn dịch Sữa của bạn, giống như máu của bạn, là một chất sống. Kinh Qur'an gọi sữa mẹ là "máu trắng". Một giọt sữa mẹ chứa khoảng một triệu tế bào bạch cầu. Những tế bào này, được gọi là đại thực bào (ăn thịt lớn), nhấn chìm vi khuẩn. mẫu thân

    Từ cuốn sách Golden Mustache. Điều trị và ngăn ngừa cảm lạnh tác giả Julia Ulybina

    2. MIỄN DỊCH Như bạn đã hiểu, khả năng miễn dịch, lực lượng bảo vệ của cơ thể, giúp đối phó với các bệnh viêm nhiễm, bao gồm cả các bệnh nhiễm trùng tiềm ẩn. Tất cả các bệnh đều làm suy yếu hệ thống miễn dịch và đến lượt nó, nó trở nên không thể đánh bại bệnh tật.

    Từ cuốn sách Healing Mudras tác giả Tatiana Gromakovskaya

    Miễn dịch Tại sao cơ thể con người dễ mắc các bệnh khác nhau? Câu hỏi phức tạp này được trả lời khác nhau trong các sách tham khảo y học, sách giáo khoa, sách chuyên khảo và các ấn phẩm khoa học. Chỉ ra các nguyên nhân khác nhau (căn nguyên) và cơ chế phát triển (bệnh sinh)

    Từ sách Bách khoa toàn thư y học cổ truyền. Bộ sưu tập vàng của các công thức nấu ăn dân gian tác giả Ludmila Mikhailova

    Khả năng miễn dịch Linga mudra Đây là loại bùn chính để tăng khả năng miễn dịch (xem quả sung. 44 và 47). Nó là chất bùn chính kích thích khả năng phòng thủ của cơ thể, do đó huy động hệ thống miễn dịch và tăng tốc phục hồi. Cần phải thực hiện bùnra này với mục đích điều trị tối đa 3 lần một ngày trong 15

    Từ cuốn sách 365 công thức chăm sóc sức khỏe từ những người chữa bệnh tốt nhất tác giả Ludmila Mikhailova

    Từ cuốn sách Tỏi. người chữa bệnh kỳ diệu tác giả Anna Mudrova (tổng hợp)

    Miễn dịch Tăng cường hệ thống miễn dịch, chúng ta quan tâm chủ yếu đến chế độ dinh dưỡng. Hầu hết tất cả các loại thực phẩm từ thực vật, đặc biệt là màu vàng và đỏ (cà rốt, ớt đỏ, dưa, cà chua, bí ngô) đều chứa beta-carotene, được chuyển hóa thành vitamin A trong cơ thể.

    Từ cuốn sách The Best Herbalist from the Witch Doctor. Công thức nấu ăn dân gian cho sức khỏe tác giả Bogdan Vlasov

    Khả năng miễn dịch Nếu bạn thường xuyên bị cảm lạnh, chúng bắt đầu giống với các bệnh mãn tính, hãy nghĩ đến điều đó - có thể khả năng miễn dịch của bạn đã giảm đi Miễn dịch là khả năng cơ thể chống lại vi khuẩn, vi rút, chất độc.

    Từ cuốn sách Dinh dưỡng sinh thái: Natural, Natural, Alive! tác giả Lyubava Zhivaya

    Miễn dịch Miễn dịch là khả năng cơ thể chống lại vi khuẩn, vi rút và độc tố. Ngoài khả năng miễn dịch có được, các yếu tố bảo vệ không đặc hiệu đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ cơ thể khỏi các tác nhân gây bệnh truyền nhiễm. Nó không thể xuyên thủng

    Trích từ cuốn sách Trí tuệ bí mật của cơ thể con người tác giả Alexander Solomonovich Zalmanov

    Khả năng miễn dịch Các chức năng của protein trong cơ thể rất đa dạng. Protein không chỉ cần thiết để xây dựng cơ bắp như nhiều người vẫn nghĩ. Thiếu protein dẫn đến suy giảm khả năng miễn dịch, vì các globulin miễn dịch cũng là protein. Đây là cách dinh dưỡng không phải loài dẫn đến bệnh tật -

    Từ cuốn Atlas: giải phẫu người và sinh lý học. Hướng dẫn thực hành đầy đủ tác giả Elena Yurievna Zigalova

    Thực bào Các tế bào không chỉ có khả năng hình thành giả tế bào bằng cách co lại, chúng tiết ra các tấm bao bọc để cố định các phần tử lạ, chẳng hạn như các hạt bụi, vi khuẩn, phần còn lại của các tế bào đã chết, thoái hóa. Thực tế là bạch cầu và các tế bào di động khác.

    Từ sách của tác giả

    Miễn dịch Miễn dịch (lat. Immunitas - "giải phóng khỏi thứ gì đó") là sự bảo vệ cơ thể khỏi các sinh vật và chất ngoại lai về mặt di truyền, bao gồm vi sinh vật, vi rút, giun, các protein, tế bào khác nhau, bao gồm cả các tế bào bị biến đổi của chính chúng. CHÚ Ý Nhờ khả năng miễn dịch

    Một số lượng lớn các phương pháp để định lượng khả năng thực bào đã được mô tả trong tài liệu. Bộ sách này không cho phép chúng tôi mô tả chi tiết tất cả chúng, vì vậy chúng tôi sẽ giới hạn bản thân chỉ mô tả một số ít.

    Vật liệu và thiết bị

    Để làm việc, bạn phải có:

    Thuốc chống đông máu citratedextrose: 8 g axit xitric. 22 g natri xitrat ba nhóm thế (hai nước), 24,5 g glucozơ được hòa tan trong 1 lít nước;

    Dung dịch dextrosodextran: 4,5 g NaCl, 25 g glucose, 30 g dextran (số mol. Trọng lượng 500.000) trong 1 l;

    Dung dịch amoni clorua: 9 phần 0,83% amoni clorua, 1 phần đệm Tris-HCl pH 7,2 (20,6 g / l);

    Một hỗn hợp của ficoll - vizotrast: 9 g ficoll, 20 ml vizotrast, 100 ml H 2 0 đã được làm kín, tỷ trọng 1,077;

    Chất nền cho β-glucuronidase: 31,5 mg p-nitrophenyl-β-glucuronid và 100 μm Triton X 100 được hòa tan trong 100 ml dung dịch đệm natri axetat 0,05 M, pH 5;

    Thuốc thử thiếu hụt myeloperoxidase: định hình (10 ml 37% formaldehyde với 90 ml etanol tuyệt đối), dung dịch cơ chất (100 ml EDTA 30%, 0,3 g benzidine clorua, 0,038 g ZnS0 4 x7H 2 0,1 ml nước cất, 1 .0 g CH 3 C00Nax3H 2 0, 0,7 ml 3% H 2 0 2); đưa pH của dd NaOH 1,0M về 6,0.

    Thuốc thử thương mại:

    FSB, giải pháp của Hank và môi trường Eagle-MEM (Viện Dinh dưỡng và Chế phẩm Miễn dịch Nhà nước, Berlin-Weissensee, CHDC Đức);

    Heparin (5000 IU / mg) (Gedeon Richter, Hungary);

    Huyết thanh của phôi bò (có thể sử dụng công ty Flow Laboratories, Mỹ, một công ty khác);

    Visotrast (Danh sách VEB Fahlberg, Magdeburg, CHDC Đức);

    Infucoll (VEB Serumwerk Bernburg, CHDC Đức);

    Dextran, ficoll (Pharmacia, Thụy Điển);

    Cacbon dạng keo Сl1 / 143a (Wagner, Pelikanwerke, Đức);

    Diisodecyl phthalate, paradioxane (Coleman, Matheson và Bell, Hoa Kỳ);

    Triton X 100 (Serva, Đức, có thể là một công ty khác);

    Dầu O đỏ (Công ty hóa chất Đồng minh, Morristown, NY, Hoa Kỳ);

    Iaranitrophenyl-β-glucuronide (Sigma, Hoa Kỳ);

    Safranin O (Phòng thí nghiệm khoa học Fischer, Chicago, Hoa Kỳ);

    Hạt, ống polystyrene (Nunc, Đan Mạch);

    Lưới F 905 (VEB Orvo Wolfen, CHDC Đức).

    Lấy thực bào

    Các thông tin cần thiết về phân lập bạch cầu hạt ở người có thể tham khảo trong chương "Tách tế bào của hệ thống miễn dịch"; để lấy đại thực bào phúc mạc, xem các phần "Nuôi cấy đại thực bào và bạch cầu đơn nhân" và "Phân lập đại thực bào từ hỗn dịch tế bào lách". Vấn đề này được xem xét chi tiết trong một số tác phẩm.

    Ngoài ra, các phương pháp sau cũng cần được đề cập:

    8 ml máu được trộn với một dung dịch dextranglucose. Sau đó thêm dung dịch dextran 75 6% trong NaCl 0,15 M (5 ml). Hỗn hợp được để trong 45-50 phút ở nhiệt độ phòng để lắng hồng cầu. Chọc hút huyết tương. Hồng cầu dư được ly giải bằng cách thêm 0,83% amoni clorua (35 ml đến 15 ml huyết tương). Ly tâm 10 phút ở 80g, ngưng kết tủa trong NaCl 0,15 M làm lạnh đến 0 ° C. Gộp một số kết tủa và ly tâm trong 10 phút ở 800 g. Tế bào được giữ tốt nhất trên nước đá trong 0,15 M NaCl (môi trường này thích hợp hơn môi trường đệm với các cation hóa trị hai làm cho các tế bào dính vào nhau);

    Nếu đối tượng của hiện tượng thực bào là nấm men thì có thể bỏ qua bước xử lý amoni clorua, vì tế bào hồng cầu không can thiệp vào quá trình này. Có thể thu được các tế bào đơn nhân như sau: máu đã được gan hóa được trộn với 1/3 thể tích của môi trường Eagle chứa 15% glucose, được xếp trên một lớp hỗn hợp ficoll - visotrast và ly tâm trong 20 phút ở 400 g. Phần tế bào đơn nhân được hút bằng pipet Pasteur, rửa hai lần bằng PBS, và huyền phù được chuẩn bị trong môi trường Eagle (1 x 10 7 tế bào / ml).

    Chuẩn bị hạt cho quá trình thực bào

    Các mẫu cấy sống của Staphylococcus aureus (SG 511 hoặc 502 A), Staphylococcus mào tinh SG 475, E. coli và các vi khuẩn đường ruột khác, listeria, corynebacteria, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae thường được sử dụng hơn. Vi sinh vật được nuôi trong 24 giờ (nếu cần, 48 giờ) trên môi trường dinh dưỡng rắn và lỏng. Sinh khối thu được đem rửa ba lần bằng dd NaCl 0,15M. Huyền phù quá đặc được đo ở bước sóng 640 nm, nồng độ được xác định từ đường chuẩn.

    Hàm lượng vi sinh vật còn được xác định bằng các phương pháp rây trên môi trường dinh dưỡng đậm đặc; trong một số trường hợp, việc định lượng vi sinh vật có thể được thực hiện trong các buồng đếm.

    Khi làm việc với các mẫu cấy vi khuẩn sống, cần lưu ý luôn sử dụng các mẫu cấy ở cùng một giai đoạn. Việc bổ sung 0,01% albumin huyết thanh bò thúc đẩy sự tồn tại của vi sinh vật. Hỗn dịch đã chuẩn bị vẫn ổn định trong 1-2 giờ.

    Việc nuôi cấy vi sinh vật bị giết thường thu được bằng cách đun nóng trong 30 phút ở 80 ° C hoặc xử lý bằng hơi nước chảy. Vi khuẩn bị giết được rửa ba lần bằng NaCl 0,15 M, ngâm lại và xác định nồng độ của huyền phù.

    Chuẩn bị men làm bánh: 0,5 g men làm bánh được lơ lửng trong 0,15 M NaCl và đặt trong nồi cách thủy sôi trong 30 phút. Lọc qua một bộ lọc bông gạc. Khi sử dụng men sống, tế bào tươi (nuôi cấy 4-5 ngày) được rửa ba lần trong môi trường Eagle có bổ sung 1,0% glucose. Thường sử dụng huyền phù tế bào 10 8 và 10 9 tế bào / ml. Nấm men được sử dụng như các hạt thử nghiệm trong việc phát hiện các khuyết tật trong thành phần C5.

    Sử dụng huyền phù của các hạt polystyren: Chuẩn bị hỗn dịch nước 10% của các hạt polystyren có đường kính 1,091 μm. Nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với dung dịch BSA 0,2% trong NaCl 0,15 M, được ly tâm. Ở bước sóng 253 nm, huyền phù polystyren 1 μg / ml cho độ hấp thụ 1,17x10 -3.

    Ứng dụng huyền phù của lipopolysaccharide - dầu O đỏ trong dầu khoáng: 2 g dầu đỏ được nghiền trong 50 ml diisodecyl phthalate (hoặc dầu vaseline) trong cối sứ. Ly tâm trong 20 phút ở 500 g. Thêm 10 μg phần nổi phía trên vào 10 ml dioxin, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm. Hệ số chuyển đổi là 0,92. Ở giai đoạn thứ hai, 40 mg lipopolysaccharide (E. coli 0,26 B6, v.v.) được hòa tan trong 3 ml NaCl 0,15 M. Sau đó, 1 ml dung dịch O màu đỏ dầu trong diisodecyl sulfat được thêm vào hỗn hợp này, và hỗn hợp bị lơ lửng trong 90 giây. Hỗn dịch được sử dụng ngay lập tức và có thể được đông lạnh.

    Để thiết lập phản ứng thực bào, hồng cầu được chính thức hóa có thể được sử dụng làm hạt thử nghiệm.

    Thực bào vi khuẩn, diệt khuẩn

    Thí nghiệm huyền phù vi khuẩn sống: Thường dùng tỷ lệ 3-10 vi khuẩn / thực bào. Trong tổng thể tích 2 ml, 1x10 6 thực bào được trộn với 3x10 6 - 1x10 7 vi khuẩn. Trong thực tế, 1 ml dịch huyền phù vi khuẩn được thêm vào 1 ml dịch treo thực bào, trong đó 8 IU heparin đã được thêm vào. Thời gian tương tác thường là 30 phút, có trường hợp lâu hơn. Sau khi ủ, lấy 0,5 ml hỗn hợp, thêm 1,5 ml dung dịch gelatin 0,1% trong dung dịch Hank, làm lạnh đến 0 ° C, và ly tâm trong 3-4 phút ở 300 g. Smears được chuẩn bị từ kết tủa, được nhuộm màu theo Pappenheim. Xem 200 ô (nếu có thể ba lần). Tính tỷ lệ phần trăm của quá trình thực bào. Theo số lượng vi khuẩn có trong tế bào, người ta tính chỉ số hoạt động thực bào: số lượng vi khuẩn bị thực bào nhân với tỷ lệ số tế bào thực bào; cường độ thực bào được biểu thị bằng các số từ 1 đến 4.

    Lớp 1: Thực bào với vi khuẩn I-4
    Lớp 2: 5-7 vi khuẩn bị thực bào
    Lớp 3: 8-10 vi khuẩn thực bào
    Lớp 4: Hơn 10 vi khuẩn trên mỗi tế bào bị thực bào

    Khi xác định mức độ thực bào của vi sinh vật, phần lắng tế bào và phần nổi trên mặt được kiểm tra riêng biệt. Số lượng vi sinh vật sống được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng rắn 0,1 ml các phần được nghiên cứu. Ủ trong 24 (48) giờ Khi tính toán hoạt động diệt khuẩn, giả thiết rằng một khuẩn lạc được hình thành tương ứng với một vi khuẩn sống.

    Đối với một nghiên cứu trực tiếp về hoạt tính diệt khuẩn, máu của bệnh nhân và người hiến tặng khỏe mạnh được kiểm tra với việc bổ sung dung dịch kháng sinh (5000 IU penicilin và streptomycin / ml) và không có nó, và việc kiểm soát vi khuẩn cũng được thực hiện. Thành phần mẫu: 0,3 ml dung dịch Hank + 0,1 ml huyết thanh bình thường lấy từ máu lấy từ 5 người hiến + 0,5 ml huyền phù bạch cầu (10 7 tế bào / ml) + 0,1 ml huyền phù vi sinh vật (10 6 vi khuẩn / ml). Dung dịch kháng sinh được thêm vào trong 0,02 ml mỗi mẫu. Ủ mẫu ở 37 ° C và xác định số lượng vi sinh sau 20 phút, 1,5 giờ và 3 giờ. Để làm điều này, lấy 0,1 ml từ mỗi mẫu, pha loãng phần đã chọn với dung dịch Hank lần 10, 100 và 1000 lần và áp dụng cho thạch đã đun nóng. Đôi khi, đặc biệt nếu đã thêm kháng sinh, các dung dịch pha loãng trung gian được chuẩn bị để đếm chính xác vi khuẩn (ví dụ, 0,2 ml mẫu được trộn với 5 ml dung dịch Hank, ly tâm trong 5 phút ở 450 g, kết tủa được hòa tan trong 1,9 ml của PBS, áp dụng cho thạch). Nếu bạn muốn rút ngắn thời gian nghiên cứu vi khuẩn học, bạn có thể xác định vi khuẩn bên trong tế bào bằng phương pháp huỳnh quang bằng phương pháp nhuộm màu vàng acridine.

    Thực bào nấm men làm bánh: chuẩn bị hỗn dịch 10 9 tế bào / ml trong NaCl 0,15M. Trộn 0,1 ml hỗn dịch với 0,1 ml huyết tương bệnh nhân, ủ 30 phút ở 37 ° C, thêm 0,2 ml (10 6) PMNL, ủ 30 phút. Aliquots được thực hiện trong khoảng thời gian từ 5 đến 30 phút. 100 PMN được đếm và xác định số lượng các hạt nấm men bị bắt trên mỗi tế bào. Biến đổi sau đây được biết đến: 50 µl huyết thanh thử nghiệm được thêm vào 50 µl huyết thanh chuột lang (trước đó nó được pha loãng theo tỷ lệ 1 + 1 với môi trường Eagle với glucose), 50-200 µl huyền phù bạch cầu ( 10 7 tế bào / ml) được thêm vào, thể tích được điều chỉnh đến 450 µl với môi trường Kim tiêm với glucose và ủ trong 30 phút ở 37 ° C. Sau đó thêm 50 μl huyền phù nấm men (10 8 tế bào / ml), trộn đều, ủ trong 40 phút ở 37 ° C. Thêm 50 μl L-75 Se-methionine (tổng hoạt độ 100 kBq), trộn và ủ trong 1 giờ ở 37 ° C. Tế bào được kết tủa bằng cách ly tâm trong 5 phút ở 1000 g, chúng được rửa hai lần bằng PBS, độ phóng xạ được đo trên máy đếm gamma. Phần trăm nấm men bị thực bào được tính theo công thức:

    Thực bào bằng dung dịch dầu có màu đỏ trong dầu khoáng: 0,2 ml huyền phù hạt được trộn với 0,8 ml huyền phù tế bào đã được làm nóng trước đến 37 ° C. Sau 5 phút ủ, 6 ml dung dịch NaCl 0,15 M được làm lạnh đến 0 ° C có chứa 126 μg / l N-ethylmaleimide (để ngừng bắt giữ các hạt) được thêm vào. Ly tâm trong 10 phút ở 250 g. Phần nổi phía trên được loại bỏ, kết tủa được ngâm lại trong dung dịch NaCl và N-ethylmaleimide (xem ở trên), các tế bào được rửa hai lần. Tế bào được ly giải bằng sóng siêu âm, màu đỏ dầu được giải phóng. Thêm 1 ml dioxan. Ly tâm trong 15 phút ở 500 g, đo mật độ quang ở bước sóng 525 nm đối với dioxan tinh khiết. Mức độ thực bào (IF) được định nghĩa là lượng dầu khoáng (mg) được 10 7 tế bào hấp thụ mỗi phút. Bạn có thể sử dụng công thức sau để tính toán:

    Nghiên cứu về quá trình thực bào trong đơn lớp của đại thực bào:

    1. Pha: 2 ml huyền phù tế bào (200.000 tế bào / ml) được thêm vào các ống polystyrene vô trùng. Cấy trong 5 giờ ở 37 ° C, sau đó rửa bằng môi trường Eagle. Cho 2 ml môi trường nuôi cấy có 10% huyết thanh bất hoạt (30 phút, 56 ° C) của phôi bò vào ống nghiệm, ủ ở 37 ° C.

    2. Pha A: đưa vào huyền phù vi khuẩn (3-10 / đại thực bào), ủ 30-60 phút ở 37 ° C, các ống được tráng 6 lần với 3 ml môi trường để loại bỏ vi khuẩn không bị thực bào. Khắc phục ngay bằng hỗn hợp gồm 1 phần axit axetic băng và 3 phần metanol. Nhuộm chuẩn bị theo tháng 5 - Griinwald, đếm tế bào.

    Pha B: xác định vi khuẩn sống nội bào. Trình tự các hoạt động giống như trong giai đoạn A trước giai đoạn cố định. Sau khi rửa, cẩn thận loại bỏ tất cả các dấu vết của môi trường. Tế bào được ly giải, trong đó 2 ml dung dịch vô trùng 0,01% albumin huyết thanh bò (4 ° C) được thêm vào, lắc nhiều lần. Hầu hết các tế bào được ly giải sau 20 phút. Vi khuẩn được giải phóng được xác định bằng cách sàng trên môi trường dinh dưỡng dày đặc.

    Thực bào của hồng cầu: trộn 4x10 7 thực bào với 5x10 7 hồng cầu thử nghiệm trong 5 ml PBS. Chuyển 2 ml hỗn hợp vào đệm phosphat 5 mM được làm lạnh đến 0 ° C và ly tâm. Đo mật độ quang của phần nổi ở bước sóng 420 nm. Mức độ thực bào được xác định bằng sự giảm hàm lượng hemoglobin trong pha không có tế bào bằng cách sử dụng các đường chuẩn.

    Phương pháp đơn giản để xác định thanh thải

    Một ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: động vật được tiêm vào màng bụng với liều lượng 5x10 7 vi khuẩn trên 100 g trọng lượng (0,1 ml / / 100 g). Liều tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 10 6 đến 10 8 trên 100 g trọng lượng. Với khoảng thời gian từ 1-2 giờ, 3 cá thể được giết mổ từ mỗi nhóm động vật thí nghiệm; tổng thời lượng của thí nghiệm 16 giờ. Lấy vô trùng 0,5 ml máu tim, 1 ml dịch màng bụng tiết ra phổi, gan, lá lách và thận. Xi lanh được cắt ra khỏi mô cơ quan bằng pipet Pasteur. Xác định số lượng vi sinh vật bằng cách nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng lỏng và rắn.

    Ví dụ về xác định độ thanh thải ở chuột: sử dụng than keo hoặc dán nhãn 51 [Cr] ram hồng cầu. Chuột (ít nhất 5 con mỗi lần trải nghiệm) được tiêm vào tĩnh mạch 0,01 ml hỗn dịch than với tỷ lệ 16 mg trên 100 g trọng lượng. Trong vòng 15 phút với khoảng thời gian 2 phút, 0,025 ml máu được lấy từ khoang sau ổ mắt. Cho 0,025 ml máu đã chọn vào 2,0 ml dung dịch Na 2 C0 3 0,1%. Sau khi tán huyết, nồng độ của than được xác định so màu ở bước sóng 675 nm bằng đường chuẩn.

    t là thời gian tính bằng phút, C là nồng độ cacbon trong mẫu.

    Giá trị hiệu chỉnh của hiện tượng thực bào:

    Kiểm tra chức năng của tế bào thực bào

    Xác định sự tách lớp (đo hoạt tính (β-glucuropidase): 10 7 bạch cầu được lơ lửng trong 0,8 ml PBS trong ống nhựa, lắc trong 5 phút ở 37 ° C. Thêm 0,2 ml LPS nhạy cảm, các hạt fluorochromic (FC 80), làm nguội 30 phút trên đá, ly tâm trong 10 phút ở 250 g Kiểm tra hoạt tính của enzym trong phần nổi phía trên Ủ 0,9 ml hỗn hợp cơ chất trong 18 giờ với 0,1 ml phân đoạn khảo sát Thêm 2 ml NaOH 0,1 M, đo mật độ quang trên sóng 410 nm.

    Phép tính:

    (OD 410 x20) / (1,84x18) = số nmol của chất được phóng thích trong 1 giờ bởi 10 7 bạch cầu, tức là mức độ phân hủy được biểu thị bằng các nanomol của paranitrophenyl-β-glucuronide.

    Phương pháp xác định khuyết tật trong myeloperoxidase: kết quả tốt nhất thu được khi xác định sinh hóa H 2 0 2, cho thấy những thay đổi trong chuyển hóa trong quá trình thực bào. Đối với các mục đích thực tế, điều rất quan trọng là sự hoạt hóa của shunt hexose-monophosphat, khử tetrazolium nitroene, và liên kết của iốt ngoại sinh với protein PMNL tương quan với sự hình thành H 2 0 2. Một vết máu thông thường được cố định trong 30 giây bằng hỗn hợp cồn và formalin. Rửa bằng nước cất và nhuộm peroxidase trong 30 giây. Trong các tế bào chứa peroxidase, các tạp chất nhuộm màu xanh đậm được phát hiện.

    Thử nghiệm khử tetrazolium nitro blue (TNS). THC được khử bởi PMNL bình thường thành formazan. Trộn với 0,1 ml máu 0,1 ml dung dịch THC 0,1% trong NaCl 0,15 M, ủ 20 phút ở 37 ° C, lắc kỹ lại. Sự kết hợp formazan vào tế bào được xác định bằng kính hiển vi. Kết quả được biểu thị bằng phần trăm tế bào dương tính với formazan.

    Phương pháp sau đây có phần phức tạp hơn: nhỏ 1 giọt máu của bệnh nhân vào một tờ giấy bìa. Ủ 20 phút ở 37 ° C trong buồng ẩm, sau đó rửa kính cẩn thận bằng NaCl 0,15 M vô trùng. Đặt một tấm bìa lên phiến kính có chứa 1 giọt môi trường THC (0,5 ml huyết thanh + 0,3 ml NaCl 0,15 M vô trùng + 0,6 ml THC, xem ở trên). Ủ 30 phút trong buồng ẩm ở 37 ° C, lấy bìa ra và phơi khô trong không khí. Cố định bằng metanol tuyệt đối trong 60 giây và rửa bằng nước cất. Cặn trong 5 phút bằng safranin (1 g safranin + 100 ml nước cất + 40 ml glycerin), rửa. Tế bào dương tính với formazan lớn, giống như hạt nổ và chứa các hạt màu xanh lam. Thông thường, khoảng 30% tế bào dương tính với formazan được phát hiện trong chế phẩm.

    Các phương pháp đánh giá khả năng thực bào ở trên là tổng hợp của một số lượng rất lớn các ấn phẩm. Thông tin chi tiết hơn về những vấn đề này có thể được tìm thấy trong các công trình liên quan.

    Thực bào (từ tiếng Hy Lạp phago - I devour và cytos - một tế bào) là một quá trình hấp thụ và tiêu hóa các chất kháng nguyên, bao gồm cả vi sinh vật, bởi các tế bào có nguồn gốc trung bì, được gọi là thực bào. I. I. Mechnikov chia thực bào thành đại thực bào và vi đại thực bào. Hiện tại, macro và vi mô được hợp nhất trong một hệ thống đại thực bào (SMF). Hệ thống này bao gồm:

    • đại thực bào mô - tế bào biểu mô,
    • tế bào nội mô lưới hình sao (tế bào Kupffer),
    • đại thực bào phế nang và phúc mạc nằm trong phế nang và khoang phúc mạc,
    • tế bào biểu bì trắng của da (tế bào Langerhans), v.v.

    Các vi thực bào bao gồm:

    • bạch cầu trung tính,
    • bạch cầu ái toan,
    • bạch cầu ái kiềm.

    Chức năng của đại thực bào vô cùng đa dạng. Chúng là cơ quan đầu tiên phản ứng với một chất lạ, là những tế bào chuyên biệt hấp thụ và tiêu diệt các chất lạ trong cơ thể (tế bào chết, tế bào ung thư, vi khuẩn, vi rút và các vi sinh vật khác, kháng nguyên, chất vô cơ không chuyển hóa được). Ngoài ra, các đại thực bào sản xuất ra nhiều hoạt chất sinh học - các enzym (bao gồm lysozyme, peroxidase, esterase), các protein bổ thể, các chất điều hòa miễn dịch như interleukin. Sự hiện diện trên bề mặt của các đại thực bào của các thụ thể đối với các globulin miễn dịch (Am) và bổ thể, cũng như một hệ thống các chất trung gian, đảm bảo sự tương tác của chúng với các tế bào lympho T và B. Đồng thời, đại thực bào kích hoạt các chức năng bảo vệ của tế bào lympho T. Do sự hiện diện của các thụ thể đối với bổ thể và Am, cũng như hệ thống tương hợp mô Ag (HLA), các đại thực bào tham gia vào quá trình gắn kết và nhận biết các kháng nguyên. Như vậy, thực bào có ba chức năng:

    • bảo vệ, kết hợp với việc làm sạch cơ thể khỏi các tác nhân lây nhiễm, các sản phẩm phân hủy mô, v.v.;
    • đại diện, bao gồm trong việc trình bày các biểu mô kháng nguyên cho các tế bào lympho trên màng thực bào;
    • tiết, liên quan đến việc bài tiết các enzym lysosome và các chất hoạt tính sinh học khác - cytokine, đóng một vai trò quan trọng trong quá trình sinh miễn dịch.

    Có những dòng chảy tuần tự sau đây các giai đoạn thực bào.

    • Hóa chất điều trị- chuyển động có chủ đích của thực bào theo hướng gradient hóa học của chất hóa trị trong môi trường. Khả năng điều hòa hóa học có liên quan đến sự hiện diện trên màng của các thụ thể cụ thể đối với chất hóa trị (đối tượng của hiện tượng thực bào), có thể là vi khuẩn, các sản phẩm thoái hóa của các mô cơ thể, v.v.
    • Kết dính(sự gắn kết) cũng được trung gian bởi các thụ thể tương ứng, nhưng có thể tiến hành theo các quy luật của tương tác hóa lý không đặc hiệu. Các hạt được hấp phụ trên bề mặt của đại thực bào.
    • Nội bào(bắt giữ) - Xảy ra sự xâm nhập của màng tế bào, bắt giữ một hạt lạ và ngâm nó trong nguyên sinh chất. Kết quả của quá trình nội bào, một không bào thực bào được hình thành - phagosome(tức là bong bóng trong nguyên sinh chất xung quanh hạt hấp thụ).
    • tiêu hóa nội bào- bắt đầu bằng sự hấp thụ các vật bị thực bào. Phagosome kết hợp với lysosome của thực bào, nơi chứa hàng chục enzyme, và sự hình thành phagolysosome (phá hủy) hạt bị bắt giữ bởi các enzyme xảy ra. Khi một phần tử thuộc về sinh vật được hấp thụ (ví dụ, tế bào chết hoặc các bộ phận của nó, các protein của chính nó), nó sẽ bị các enzym phagolysosome phân tách thành các chất không kháng nguyên (axit amin, axit béo, nucleotide, monosugar). Nếu một phần tử lạ bị hấp thụ, thì các enzym của phagolysosome không thể phân hủy chất này thành các thành phần không phải kháng nguyên. Trong những trường hợp như vậy, phagolysosome với phần còn lại của kháng nguyên vẫn giữ được tính ngoại lai sẽ được đại thực bào truyền đến các tế bào lympho T và B, tức là một liên kết miễn dịch cụ thể được bật lên.

    chức năng bài tiết là sự bài tiết của thực bào các chất có hoạt tính sinh học - cytokine - đây là interleukin-1 và interleukin-2, là những chất trung gian tế bào có tác dụng điều hòa sự tăng sinh, biệt hóa và chức năng của thực bào, tế bào lympho, nguyên bào lympho và các tế bào khác. Các đại thực bào sản xuất và tiết ra các yếu tố điều hòa quan trọng như prostaglandin, leukotrienes, nucleotide chu kỳ với một loạt các hoạt động sinh học. Ngoài ra, đại thực bào tổng hợp và tiết ra một số sản phẩm có hoạt tính kháng khuẩn, kháng virus và gây độc tế bào (gốc oxy O2-H2O2, lysozyme, interferon, v.v.).

    Quá trình thực bào được tăng cường bởi các kháng thể opsonin, vì liên kết hoặc kháng nguyên dễ dàng hấp thụ hơn trên bề mặt của thực bào, do sự hiện diện của các thụ thể đối với các kháng thể này ở sau. Sự tăng cường khả năng thực bào bởi các kháng thể được gọi là thuốc phiện, I E. chuẩn bị vi sinh vật để bắt bởi thực bào. Sự thực bào của các kháng nguyên opso hóa được gọi là miễn dịch.

    Để mô tả hoạt động của quá trình thực bào được giới thiệu chỉ số thực bào.Để xác định nó, số lượng vi khuẩn được hấp thụ bởi một tế bào thực bào được đếm dưới kính hiển vi. Cũng thích chỉ số opsonophagocyticđại diện cho tỷ lệ các thông số thực bào thu được với huyết thanh miễn dịch và không miễn dịch. Chỉ số thực bào và chỉ số opsonophagocytic được sử dụng trong miễn dịch học lâm sàng để đánh giá tình trạng miễn dịch và tình trạng miễn dịch.

    Quá trình thực bào đóng vai trò quan trọng trong việc kháng khuẩn, kháng nấm và bảo vệ kháng vi rút, duy trì sức đề kháng của cơ thể đối với các chất lạ. Thực bào cũng có tác dụng kích hoạt và ức chế tế bào lympho, tham gia vào quá trình hồi sức dung nạp miễn dịch, chống nhiễm trùng, cấy ghép và miễn dịch kháng u, và một số dạng dị ứng (HRT).