अनुवांशिक अभियांत्रिकीद्वारे इंटरफेरॉन मिळवणे. इंटरफेरॉन आणि क्लिनिकल औषधांमध्ये त्यांची भूमिका

असा निर्धार केला इंटरफेरॉनचे संश्लेषण केले जातेसेलमध्ये, प्रथम पॉलीपेप्टाइड साखळीच्या एन-टर्मिनसवर सिग्नल पेप्टाइड असलेल्या पूर्ववर्ती स्वरूपात, जे नंतर क्लीव्ह केले जाते आणि परिणामी, संपूर्ण जैविक क्रियाकलापांसह एक परिपक्व इंटरफेरॉन तयार होतो. बॅक्टेरियामध्ये परिपक्व प्रथिने तयार करण्यासाठी सिग्नल पेप्टाइड साफ करण्यास सक्षम एन्झाईम नसतात. करण्यासाठी बॅक्टेरिया परिपक्व इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करतात,जीनचा जो भाग एन्कोड करतो तो भाग प्लाझमिडमध्ये आणला जावा आणि सिग्नल पेप्टाइड एन्कोड करणाऱ्या जनुकाचा भाग काढून टाकला पाहिजे. प्रक्रिया आवश्यक आहे खालील अटींचे पालन:

इंटरफेरॉन जनुकामध्ये तीन Sau 3A1 क्लीवेज साइट्स असणे आवश्यक आहे, त्यापैकी एक सिग्नलिंग भागाला लागून आहे.

या एंझाइमसह जनुकाच्या अपूर्ण क्लीव्हेजमुळे न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम एन्कोडिंग परिपक्व इंटरफेरॉन असलेल्या जनुकाच्या तुकड्यांना वेगळे करणे शक्य होते.

एटीजी ट्रिपलेट एन्कोडिंग सिस्टीन सिग्नल भागासह एन्झाइमद्वारे क्लीव्ह केले जाते.

संपूर्ण जनुकाचा पॉलीन्यूक्लियोटाइड क्रम पुनर्संचयित करण्यासाठी, एक डीएनए तुकडा रासायनिकरित्या संश्लेषित केला गेला ज्यामध्ये हे ट्रिपलेट, तसेच त्याच्या शेजारील ATG ट्रिपलेट, प्रथिने संश्लेषणाचा प्रारंभ बिंदू.

हा तुकडा परिपक्व जनुकाच्या वेगळ्या भागाशी जोडला गेला होता, परिणामी पूर्ण परिपक्व इंटरफेरॉन जनुक पुनर्संचयित झाला.

पुनर्रचित जीन प्लाझमिडमध्ये अशा प्रकारे आणले गेले की ते डीएनए प्रवर्तक क्षेत्राला लागून होते, ज्याने mRNA संश्लेषण सुरू केले.

पासून अर्क ई कोलाय्,असे प्लाझमिड असलेले , अँटीव्हायरल क्रियाकलाप होता.

अनुवांशिक अभियांत्रिकीद्वारे संश्लेषित केलेले इंटरफेरॉन वेगळे केले गेले, शुद्ध केले गेले आणि त्याचे भौतिक-रासायनिक गुणधर्म दात्याच्या रक्तातून मिळवलेल्या इंटरफेरॉनच्या जवळपास असल्याचे दिसून आले. मिळवण्यात यश आले जिवाणूसक्षम संश्लेषणसुमारे 10 11 जिवाणू पेशी असलेल्या प्रति 1 लिटर बॅक्टेरियल सस्पेंशनमध्ये 5 मिग्रॅ इंटरफेरॉन पर्यंत, जे 1 लिटर रक्तदात्याच्या रक्तातून काढता येणाऱ्या इंटरफेरॉनच्या प्रमाणापेक्षा 5000 पट जास्त आहे.

सध्या, इंटरफेरॉन जनुकांना यीस्ट आणि ग्लायकोसिलेशन करण्यास सक्षम असलेल्या उच्च युकेरियोटिक पेशींमध्ये क्लोन केले गेले आहेत.

1991 मध्ये, युनायटेड स्टेट्समध्ये प्रथमच, मानवी ल्युकोसाइट इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करण्यासाठी अनुवांशिकदृष्ट्या अभियंता यीस्ट पेशींचा वापर करण्यात आला. Saccharomyces cerevisiae. LeIF जनुकाची परिणामी कार्यक्षम अभिव्यक्ती आणि यीस्ट पेशींसह बॅक्टेरियाच्या बदलीमुळे इंटरफेरॉनचे उत्पादन 10 पट वाढवणे शक्य झाले.

रशियामध्ये 1994 मध्ये, संपूर्ण जनुक संश्लेषण केले गेले α- आणि आकारात सुमारे 600 एन. n. (न्यूक्लियोटाइड पॉइंट्स) एन.एम. कोलोसोव्ह यांच्या मार्गदर्शनाखाली जैवऑर्गेनिक रसायनशास्त्र संस्थेत.

अनुवांशिक अभियांत्रिकी तंत्रज्ञानाचा वापर करून इंटरफेरॉन मिळवण्याच्या क्षेत्रात आणि कर्करोगासह विविध विषाणूजन्य रोगांच्या उपचारांसाठी त्यांचा वापर करण्याच्या क्षेत्रात मिळालेले यश असूनही, त्यांच्या जैवसंश्लेषणाच्या यंत्रणेचा उलगडा आणि इतर पदार्थांशी संवाद साधण्याबाबत अजूनही अनेक समस्यांचे निराकरण करणे बाकी आहे.

इंटरफेरॉनच्या जैविक क्रियेची योजना आकृती 8.34 मध्ये दर्शविली आहे.

तांदूळ. ८.३४. इंटरफेरॉनच्या कृतीची यंत्रणा

इंटरफेरॉनच्या कृतीची यंत्रणा खालीलप्रमाणे कमी केली जाऊ शकते मुख्य टप्पे:

1. सेल्युलर रिसेप्टर्सला बांधून, इंटरफेरॉन 5 "-ऑलिगोडेनिलन सिंथेटेस आणि प्रोटीन किनेज एन्झाईम्सचे संश्लेषण सुरू करून संबंधित जनुकांचे प्रतिलेखन सुरू करतात;

2. दोन्ही एन्झाईम दुहेरी अडकलेल्या डीएनएच्या उपस्थितीत त्यांची क्रिया दर्शवतात, जे अनेक व्हायरसची प्रतिकृती उत्पादने आहेत;

3. एंझाइम 5"-oligoadenylansynthetase 2" 5"-oligoadenylates (ATP पासून) चे संश्लेषण उत्प्रेरित करते, जे सेल्युलर रिबोन्यूक्लिझ सक्रिय करते;

4. प्रथिने किनेज फॉस्फोरीलेट्स आणि त्याद्वारे भाषांतर आरंभ घटक IF 2 सक्रिय करते. या घटनांच्या परिणामी, संक्रमित पेशीमध्ये प्रथिने जैवसंश्लेषण आणि विषाणू पुनरुत्पादन (mRNA आणि rRNA डिग्रेडेशन) प्रतिबंधित केले जाते, ज्यामुळे त्याचे lysis होते.

विषय: इंटरफेरॉन. इंटरफेरॉन मिळवत आहे.

1957 मध्ये लंडनमधील नॅशनल इन्स्टिट्यूट फॉर मेडिकल रिसर्चमध्ये व्हायरल इन्फेक्शनला प्रतिरोधक घटक म्हणून इंटरफेरॉनचा शोध लागला. असे आढळून आले की विषाणूच्या संपर्कात असलेल्या प्राण्यांच्या पेशी वातावरणात विषाणूजन्य संसर्गास निरोगी पेशींना प्रतिकार करण्यास सक्षम घटक स्राव करतात: ते सेलमधील विषाणूंच्या पुनरुत्पादनास प्रतिबंधित (हस्तक्षेप) करते आणि या क्षमतेमुळे, इंटरफेरॉन असे म्हणतात. इंटरफेरॉनचे तीन प्रकार आहेत:

α, β, प्रथम श्रेणीसाठी संदर्भित, γ-इंटरफेरॉन, द्वितीय श्रेणीसाठी संदर्भित.

इंटरफेरॉन-α, ल्युकोसाइट्सद्वारे उत्पादित, प्रामुख्याने अँटीव्हायरल, अँटीप्रोलिफेरेटिव्ह आणि अँटीट्यूमर प्रभाव असतो.

इंटरफेरॉन-बीटा, फायब्रोब्लास्ट्सद्वारे तयार होतो, मुख्यतः अँटीट्यूमर आणि अँटीव्हायरल प्रभाव असतो.

इंटरफेरॉन -γ - टी-लिम्फोसाइट्स आणि नैसर्गिक किलर (एनके-सेल्स) द्वारे तयार केले जाते आणि त्याला लिम्फोसाइटिक आणि रोगप्रतिकारक म्हणतात. यात प्रामुख्याने इम्युनोमोड्युलेटरी आणि कमकुवत अँटीव्हायरल प्रभाव आहे.

Ι वर्गाच्या इंटरफेरॉनचे उत्पादन व्हायरस, डबल-स्ट्रँडेड आरएनए, सिंथेटिक डबल-स्ट्रँडेड ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स, इंटरफेरॉन - γ - विषाणूजन्य आणि बॅक्टेरियल प्रतिजन किंवा लिम्फोसाइट्सच्या पृष्ठभागाच्या निर्धारकांविरूद्ध अँटीसेरा यांच्याद्वारे प्रेरित आहे. आयनीकृत पेशी, ज्यामुळे त्याचे लाइसिस होते. इंटरफेरॉनच्या अँटीप्रोलिफेरेटिव्ह अँटीट्यूमर क्रियेची हीच यंत्रणा आहे.

इंटरफेरॉन-γ एक पॉलीफंक्शनल इम्युनोमोड्युलेटरी लिम्फोकाइन आहे जो वेगवेगळ्या प्रकारच्या पेशींच्या वाढीवर आणि फरकावर परिणाम करतो. हे लिम्फोसाइटमध्ये प्रतिजैविक माहिती हस्तांतरित करण्याच्या टप्प्यावर मॅक्रोफेज सक्रिय करते, त्यांची प्रतिजैविक आणि ट्यूमरविरोधी क्रियाकलाप वाढवते आणि IL-1 चे उत्पादन वाढवते. IF-γ नैसर्गिक किलर, साइटोटॉक्सिक लिम्फोसाइट्स सक्रिय करते जे ट्यूमरच्या वाढीस प्रतिबंध करते.

इंटरफेरॉन-α प्रथिने आहेत, आणि β आणि γ - इंटरफेरॉन - ग्लायकोप्रोटीन्स, ते वैशिष्ट्यपूर्ण गोलाकार प्रथिने आहेत. α-इंटरफेरॉनमध्ये, दोन डायसल्फाइड बंध आढळले. इंटरफेरॉन हे 146-166 एमिनो ऍसिड अवशेषांचे कमी आण्विक वजन प्रथिने आहेत, प्रजाती-विशिष्ट, म्हणजे. मानवी इंटरफेरॉन मानवी शरीरात जैविक दृष्ट्या सक्रिय आहे, मुरिन - केवळ उंदराच्या शरीरात.

सर्वात चांगल्या प्रकारे अभ्यासलेल्या इंटरफेरॉनमध्ये α-इंटरफेरॉन आहेत; त्यांना एन्कोड करणार्‍या जनुकांची संख्या अंदाजे 20 आहे; ते 9व्या गुणसूत्रावर स्थानिकीकृत आहेत. β-इंटरफेरॉनच्या संदर्भात, फक्त एक प्रोटीन वेगळे केले गेले आहे जे मानवी β-इंटरफेरॉनशी संबंधित आहे - इंटरफेरॉन β 1 - जवळजवळ सर्व अँटीव्हायरल क्रियाकलाप त्याच्याशी संबंधित आहेत. हे शक्य आहे की जीनोममध्ये अनेक β-इंटरफेरॉन एन्कोडिंग जीन्स असतात. β-इंटरफेरॉन जीन्स 9व्या गुणसूत्रावर स्थानिकीकृत आहेत. इंटरफेरॉन-γ केवळ एका वैयक्तिक प्रथिनेद्वारे दर्शविले जाते, जे 12 व्या गुणसूत्रावर स्थित एका जनुकाद्वारे एन्कोड केलेले असते.

इंटरफेरॉन मिळवत आहे. इंटरफेरॉन हे व्हायरल इन्फेक्शनसाठी सर्वात प्रभावी उपचारांपैकी एक म्हणून काम करतात, परंतु ते प्रजाती-विशिष्ट आहेत आणि केवळ मानवी पेशींमधून मिळू शकतात. इंटरफेरॉन वेगळे आणि शुद्ध करण्याचे तंत्रज्ञान कुचकामी आहे, मुख्यतः अंतिम उत्पादनाच्या अत्यंत कमी उत्पन्नामुळे (फक्त 1 μg इंटरफेरॉन 1 लिटर रक्तापासून वेगळे केले जाऊ शकते, म्हणजे इंजेक्शनसाठी अंदाजे एक डोस).

सध्याच्या टप्प्यावर, आनुवंशिकदृष्ट्या अभियंता सूक्ष्मजीव वापरून इंटरफेरॉनचे जैवसंश्लेषण ही सर्वात आशादायक पद्धत आहे. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनद्वारे प्राप्त सीडीएनए ई. कोलीमध्ये क्लोन केले गेले. इंटरफेरॉन जनुक व्हेक्टर डीएनएमध्ये घातला गेला आणि जिवाणू नियामक घटक त्यास जोडले गेले, जिवाणू सेलमध्ये त्याचे प्रतिलेखन आणि भाषांतर प्रोग्रामिंग केले गेले. प्रथम, सेलमधील इंटरफेरॉन हे पॉलीपेप्टाइड साखळीच्या N-टर्मिनसवर सिग्नल पेप्टाइड असलेल्या पूर्ववर्ती स्वरूपात संश्लेषित केले जातात, जे नंतर क्लीव्ह केले जातात, परिणामी संपूर्ण जैविक क्रियाकलापांसह परिपक्व इंटरफेरॉन तयार होतो. बॅक्टेरियामध्ये परिपक्व प्रथिने तयार करण्यासाठी सिग्नल पेप्टाइड साफ करण्यास सक्षम एन्झाईम नसतात. म्हणून, बॅक्टेरिया परिपक्व इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करण्यासाठी, त्यास एन्कोड करणार्‍या जनुकाचा फक्त भाग प्लाझमिडमध्ये आणला पाहिजे आणि सिग्नल पेप्टाइड एन्कोड करणार्‍या जनुकाचा भाग काढून टाकला पाहिजे. ही प्रक्रिया खालीलप्रमाणे पार पाडली गेली. इंटरफेरॉन जनुकामध्ये तीन Sau 3A1 क्लीवेज साइट्स आहेत, त्यापैकी एक सिग्नलिंग भागाजवळ स्थित आहे. या एंझाइमसह जनुकाच्या अपूर्ण क्लीव्हेजमुळे प्रौढ इंटरफेरॉन एन्कोडिंग न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम असलेल्या जनुकाच्या तुकड्यांना वेगळे करणे शक्य होते, परंतु पहिल्या सिस्टीनशिवाय. एटीजी ट्रिपलेट एन्कोडिंग सिस्टीन सिग्नल भागासह एन्झाइमद्वारे क्लीव्ह केले जाते. संपूर्ण जनुकाचा पॉलीन्यूक्लियोटाइड क्रम पुनर्संचयित करण्यासाठी, एक लहान डीएनए तुकडा रासायनिक पद्धतीने संश्लेषित केला गेला ज्यामध्ये हे ट्रिपलेट, तसेच त्याच्या शेजारील एटीजी ट्रिपलेट, प्रथिने संश्लेषणाचा प्रारंभ बिंदू आहे. हा तुकडा परिपक्व जनुकाच्या वेगळ्या भागाशी जोडला गेला आणि परिणामी, पूर्ण परिपक्व इंटरफेरॉन जनुक पुनर्संचयित झाला. पुनर्रचित जीन प्लाझमिडमध्ये अशा प्रकारे आणले गेले की ते डीएनए प्रवर्तक क्षेत्राला लागून होते, ज्याने mRNA संश्लेषण सुरू केले. या प्लास्मिड असलेल्या ई. कोलायमधील अर्कांमध्ये विषाणूविरोधी क्रिया होती. अनुवांशिक अभियांत्रिकीद्वारे संश्लेषित केलेले इंटरफेरॉन वेगळे केले गेले, शुद्ध केले गेले आणि त्याचे भौतिक-रासायनिक गुणधर्म दात्याच्या रक्तातून मिळवलेल्या इंटरफेरॉनसारखेच असल्याचे दिसून आले.अंदाजे 1011 जिवाणू पेशी असलेल्या प्रति 1 लिटर बॅक्टेरियल सस्पेंशनमध्ये 5 मिलीग्राम इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करण्यास सक्षम बॅक्टेरिया मिळवणे शक्य होते, जे 1 लिटर रक्तदात्याच्या रक्तातून काढता येणा-या इंटरफेरॉनच्या प्रमाणापेक्षा 5000 पट जास्त आहे.

वेगवेगळ्या प्रयोगशाळांमध्ये अनुवांशिक अभियांत्रिकी तंत्रज्ञानाचा वापर करून, विविध इंटरफेरॉन तयार करणार्‍या जीवाणूंचे स्ट्रेन प्राप्त झाले: α-, β- आणि γ-प्रकार. β- आणि γ-इंटरफेरॉन मिळविण्यासाठी E. coli वापरण्याचा तोटा म्हणजे जीवाणूमधील युकेरियोटिक प्रथिनांसाठी ग्लायकोसिलेशन उपकरणाचा अभाव, ज्यामुळे नॉन-ग्लायकोलाइज्ड रेणूंचे संश्लेषण होते. आणि जरी ग्लायकोसिलेशनची भूमिका अस्पष्ट आहे आणि नॉन-ग्लायकोलाइज्ड β- आणि γ-इंटरफेरॉन जवळजवळ पूर्णपणे त्यांच्या अँटीव्हायरल क्रियाकलाप राखून ठेवतात, हे वैशिष्ट्य वैद्यकीय व्यवहारात अनुवांशिकदृष्ट्या अभियांत्रिकी औषधांच्या वापरासाठी सावध दृष्टिकोन ठरवते.

सध्या, इंटरफेरॉन जनुकांना यीस्ट आणि ग्लायकोसिलेशन करण्यास सक्षम असलेल्या उच्च युकेरियोटिक पेशींमध्ये क्लोन केले गेले आहेत. 1981 मध्ये, युनायटेड स्टेट्समध्ये प्रथमच, मानवी ल्युकोसाइट इंटरफेरॉनच्या संश्लेषणासाठी यीस्ट सॅकॅरोमायसेस सेरेव्हिसियाच्या अनुवांशिकदृष्ट्या इंजिनीयर पेशींचा वापर करण्यात आला. LeIF जनुकाची परिणामी कार्यक्षम अभिव्यक्ती आणि यीस्ट पेशींसह बॅक्टेरियाच्या बदलीमुळे इंटरफेरॉनचे उत्पादन 10 पट वाढवणे शक्य झाले.

इंटरफेरॉन अनुनासिक थेंब, मलम आणि इंजेक्शन सोल्यूशनच्या स्वरूपात औषधे म्हणून तयार केले जातात. दात्याच्या रक्तातील लिम्फोसाइट्समधून नैसर्गिक इंटरफेरॉन मिळवले जातात आणि अनुवांशिक अभियांत्रिकी तंत्रज्ञान (रीकॉम्बिनंट) वापरून कृत्रिमरित्या संश्लेषित केले जातात. सध्या, रशिया आणि परदेशात व्यावसायिक तयारी तयार केली जाते - मानवी ल्युकोसाइट, लिम्फोब्लास्टिक (वेलफेरॉन) आणि फायब्रोब्लास्ट (फेरॉन), तसेच अनुवांशिक अभियांत्रिकी पद्धतींद्वारे प्राप्त केलेले इंटरफेरॉन: रीकॉम्बीनंट α-इंटरफेरॉन (रोफेरॉन, रियलडेरॉन, इ.), β-इंटरफेरॉन आणि β-इंटरफेरॉन (फेरॉन) आणि जी.

इंटरफेरॉनरोगप्रतिकार यंत्रणेतील एक महत्त्वाचे संरक्षणात्मक प्रथिने आहे. विषाणूंच्या हस्तक्षेपाचा अभ्यास करताना हे आढळून आले, म्हणजे जेव्हा एका विषाणूने संक्रमित प्राणी किंवा पेशी संस्कृती दुसर्‍या विषाणूच्या संसर्गास असंवेदनशील बनतात तेव्हाची घटना. असे दिसून आले की हस्तक्षेप परिणामी प्रथिनेमुळे होतो, ज्यामध्ये संरक्षणात्मक अँटीव्हायरल गुणधर्म असतात. या प्रोटीनला इंटरफेरॉन असे नाव देण्यात आले.

इंटरफेरॉन हे ग्लायकोप्रोटीन प्रोटीनचे एक कुटुंब आहे जे रोगप्रतिकारक प्रणाली आणि संयोजी ऊतकांच्या पेशींद्वारे संश्लेषित केले जाते. कोणत्या पेशी इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करतात यावर अवलंबून, तीन प्रकार आहेत: α, β आणि γ-इंटरफेरॉन.

अल्फा इंटरफेरॉनल्युकोसाइट्सद्वारे उत्पादित होते आणि त्याला ल्यूकोसाइट म्हणतात; बीटा इंटरफेरॉनफायब्रोब्लास्टिक म्हणतात, कारण ते फायब्रोब्लास्ट्सद्वारे संश्लेषित केले जाते - संयोजी ऊतक पेशी आणि गॅमा इंटरफेरॉन -रोगप्रतिकारक, कारण ते सक्रिय टी-लिम्फोसाइट्स, मॅक्रोफेजेस, नैसर्गिक हत्यारे, म्हणजे, रोगप्रतिकारक पेशींद्वारे तयार केले जाते.

इंटरफेरॉन शरीरात सतत संश्लेषित केले जाते आणि रक्तातील त्याची एकाग्रता सुमारे 2 IU / ml (1 आंतरराष्ट्रीय युनिट - ME हे इंटरफेरॉनचे प्रमाण आहे जे व्हायरसच्या 1 CPD 50 पासून सेल संस्कृतीचे संरक्षण करते). इंटरफेरॉनचे उत्पादन जेव्हा विषाणूंचा संसर्ग होतो, तसेच आरएनए, डीएनए, कॉम्प्लेक्स पॉलिमर यांसारख्या इंटरफेरॉन प्रेरकांच्या संपर्कात आल्यावर नाटकीयरित्या वाढते. अशा इंटरफेरॉन इंड्युसर म्हणतात इंटरफेरोनोजेन्स

अँटीव्हायरल प्रभावाव्यतिरिक्त, इंटरफेरॉनमध्ये अँटीट्यूमर संरक्षण आहे, कारण ते ट्यूमर पेशींच्या प्रसारास (पुनरुत्पादन) विलंब करते, तसेच इम्युनोमोड्युलेटरी क्रियाकलाप, उत्तेजक फॅगोसाइटोसिस, नैसर्गिक हत्यारे, बी पेशींद्वारे प्रतिपिंड निर्मिती नियंत्रित करते, प्रमुख हिस्टोकॉम्पॅटिबिलिटी कॉम्प्लेक्सची अभिव्यक्ती सक्रिय करते.

कृतीची यंत्रणाइंटरफेरॉन जटिल आहे. इंटरफेरॉन सेलच्या बाहेरील विषाणूवर थेट कार्य करत नाही, परंतु विशेष सेल रिसेप्टर्सला बांधतो आणि प्रथिने संश्लेषणाच्या टप्प्यावर सेलच्या आत विषाणूच्या पुनरुत्पादनाच्या प्रक्रियेवर परिणाम करतो.

इंटरफेरॉनचा वापर. इंटरफेरॉनची क्रिया अधिक प्रभावी आहे, जितक्या लवकर ते संश्लेषित होऊ लागते किंवा बाहेरून शरीरात प्रवेश करते. म्हणून, इन्फ्लूएंझा सारख्या अनेक व्हायरल इन्फेक्शन्समध्ये रोगप्रतिबंधक कारणांसाठी, तसेच पॅरेंटरल हिपॅटायटीस (बी, सी, डी), नागीण, मल्टिपल स्क्लेरोसिस इत्यादींमध्ये उपचारात्मक हेतूंसाठी याचा वापर केला जातो. इंटरफेरॉन घातक ट्यूमर आणि इम्युनोसिसशी संबंधित रोगांच्या उपचारांमध्ये सकारात्मक परिणाम देते.

इंटरफेरॉन प्रजाती-विशिष्ट आहेत, म्हणजे मानवी इंटरफेरॉन प्राण्यांसाठी कमी प्रभावी आहे आणि त्याउलट. तथापि, या प्रजातीची विशिष्टता सापेक्ष आहे.

इंटरफेरॉन मिळवत आहे. इंटरफेरॉन दोन प्रकारे मिळवले जाते: अ) मानवी ल्युकोसाइट्स किंवा लिम्फोसाइट्सला सुरक्षित व्हायरसने संक्रमित करून, परिणामी संक्रमित पेशी इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करतात, ज्याला नंतर वेगळे केले जाते आणि त्यातून इंटरफेरॉनची तयारी तयार केली जाते; b) अनुवांशिक अभियांत्रिकीद्वारे - औद्योगिक परिस्थितीत इंटरफेरॉन तयार करण्यास सक्षम पुनर्संयोजक जिवाणू स्ट्रेन वाढवून. सहसा, स्यूडोमोनास, एस्चेरिचिया कोलीचे रीकॉम्बिनंट स्ट्रेन त्यांच्या डीएनएमध्ये अंतर्भूत इंटरफेरॉन जनुकांसह वापरले जातात. अनुवांशिक अभियांत्रिकीद्वारे प्राप्त केलेल्या इंटरफेरॉनला रीकॉम्बीनंट म्हणतात. आपल्या देशात, रीकॉम्बीनंट इंटरफेरॉनला अधिकृत नाव "रेफेरॉन" प्राप्त झाले. ल्युकोसाइट औषधापेक्षा या औषधाचे उत्पादन अधिक कार्यक्षम आणि स्वस्त आहे.

व्हायरल इन्फेक्शन, निओप्लाझम आणि इम्युनोडेफिशियन्सीसाठी रोगप्रतिबंधक आणि उपचारात्मक एजंट म्हणून रीकॉम्बीनंट इंटरफेरॉनला औषधांमध्ये व्यापक उपयोग आढळला आहे.

प्रतिजन. व्याख्या. पूर्ण आणि दोषपूर्ण प्रतिजनांची संकल्पना. प्रतिजनांसाठी आवश्यकता. सूक्ष्मजीवांच्या प्रतिजैविक गुणधर्मांबद्दल संकल्पना. बॅक्टेरियाची प्रतिजैविक रचना.

प्रतिजन(लॅटिन अँटी - विरुद्ध, जीनोस - जीनसमधून) - अनुवांशिकदृष्ट्या परकीय पदार्थ जे शरीराच्या अंतर्गत वातावरणात प्रवेश केल्यावर, प्रतिपिंड किंवा रोगप्रतिकारक टी-लिम्फोसाइट्सच्या निर्मितीच्या रूपात रोगप्रतिकारक प्रतिसाद देऊ शकतात आणि त्यांच्याशी संवाद साधू शकतात. प्रतिजनचे मुख्य गुणधर्म म्हणजे इम्युनोजेनिकता आणि विशिष्टता. प्रतिजन हे पेशींचे संरचनात्मक आणि रासायनिक घटक आणि त्यांच्या चयापचय उत्पादनांचे असतात.

अँटीजेन्स हे कोलाइडल स्ट्रक्चरचे पदार्थ आहेत जे शरीरासाठी परके असतात, जे त्याच्या अंतर्गत वातावरणात सोडल्यावर, विशिष्ट प्रतिरक्षाविज्ञान प्रतिक्रिया निर्माण करण्यास सक्षम असतात, जे स्वतः प्रकट होते, विशेषत: विशिष्ट ऍन्टीबॉडीजच्या निर्मितीमध्ये, संवेदनशील लिम्फोसाइट्स दिसणे किंवा या घटकास सहनशीलतेची स्थिती उद्भवते.

प्रतिजन असलेले पदार्थ शरीरासाठी परदेशी असले पाहिजेत, मॅक्रोमोलेक्युलर असणे आवश्यक आहे, कोलाइडल स्थितीत असणे आवश्यक आहे, शरीरात पॅरेंटेरली प्रवेश करणे आवश्यक आहे, म्हणजे. गॅस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रॅक्टला बायपास करणे, ज्यामध्ये पदार्थाचे विघटन आणि त्याचे परकीयपणा कमी होणे सहसा घडते. प्रतिजनांचे परकीयत्व हे प्रतिजन आणि जीवाच्या मॅक्रोमोलेक्यूल्समधील काही प्रमाणात रासायनिक फरक समजले पाहिजे, ज्यामध्ये ते प्रवेश करत नाहीत.

अँटिजेनिक गुणधर्म मॅक्रोमोलेक्यूलच्या आण्विक वजनाशी संबंधित आहेत. पदार्थाचे आण्विक वजन जितके जास्त तितकी त्याची प्रतिजैविकता जास्त. त्याच वेळी, उच्च आण्विक वजन ही प्रतिजनाची अनिवार्य मालमत्ता आहे असे मानणे चुकीचे आहे. तर, ग्लुकागॉन, व्हॅसोप्रेसिन - अँजिओटेन्सिनमध्ये देखील प्रतिजैविक गुणधर्म आहेत.

पूर्ण प्रतिजन, दोषपूर्ण प्रतिजन (हॅपटेन्स) आणि अर्ध-हॅपटेन्स यांच्यात फरक करण्याची प्रथा आहे.

पूर्ण प्रतिजनांना असे म्हणतात जे प्रतिपिंड तयार करतात किंवा लिम्फोसाइट्सचे संवेदीकरण करतात आणि शरीरात आणि प्रयोगशाळेतील प्रतिक्रियांमध्ये त्यांच्याशी प्रतिक्रिया करण्यास सक्षम असतात. प्रथिने, पॉलिसेकेराइड्स, उच्च-आण्विक न्यूक्लिक अॅसिड आणि या पदार्थांच्या जटिल संयुगेमध्ये पूर्ण वाढ झालेल्या प्रतिजनांचे गुणधर्म आहेत.

दोषपूर्ण प्रतिजन, किंवा हॅप्टन्स, स्वतःच प्रतिपिंड निर्मिती किंवा लिम्फोसाइट संवेदीकरण करण्यास सक्षम नसतात. हा गुणधर्म तेव्हाच दिसून येतो जेव्हा त्यांच्यामध्ये संपूर्ण प्रतिजन ("कंडक्टर") जोडले जातात आणि परिणामी प्रतिपिंड किंवा संवेदनाक्षम लिम्फोसाइट्सपैकी काही "कंडक्टर" साठी विशिष्ट असतात आणि काही हॅप्टनसाठी विशिष्ट असतात.

सेमी-हॅपटेन्स हे तुलनेने सोपे पदार्थ आहेत जे एखाद्या जीवाच्या अंतर्गत वातावरणात प्रवेश केल्यावर, या जीवाच्या प्रथिनांशी रासायनिक रीतीने एकत्रित होऊ शकतात आणि त्यांना प्रतिजनांचे गुणधर्म देऊ शकतात. काही औषधे (आयोडीन, ब्रोमिन, अँटीपायरिन इ.) देखील या पदार्थांशी संबंधित असू शकतात.

प्रतिजन रेणूमध्ये दोन असमान भाग असतात. c च्या सक्रिय (लहान भागाला) प्रतिजैनिक निर्धारक (एपिटोप) म्हणतात आणि प्रतिजैनिक विशिष्टता निर्धारित करते. अँटिजेनिक निर्धारक प्रतिजन रेणूच्या त्या ठिकाणी असतात जे सूक्ष्म वातावरणाशी सर्वाधिक जोडलेले असतात. उदाहरणार्थ, प्रथिने रेणूमध्ये, ते केवळ पॉलीपेप्टाइड साखळीच्या शेवटीच नव्हे तर त्याच्या इतर भागांमध्ये देखील स्थित असू शकतात. अँटिजेनिक निर्धारकांमध्ये कठोर रचना (टायरोसिन, ट्रिप्टोफॅन, फेनिलॅलानिन) असलेले कमीतकमी तीन अमीनो ऍसिड असतात. पॉलीपेप्टाइड साखळीतील एमिनो ऍसिडच्या बदलाच्या क्रमाशी आणि एकमेकांशी संबंधित त्यांच्या स्थानांच्या संयोजनाशी देखील प्रतिजनची विशिष्टता संबंधित आहे. प्रतिजन रेणूमधील प्रतिजैनिक निर्धारकांची संख्या त्याची व्हॅलेन्सी निर्धारित करते. हे प्रतिजन रेणूचे सापेक्ष आण्विक वजन जितके जास्त असेल तितके जास्त.

प्रतिजन रेणूचा उरलेला (निष्क्रिय) भाग निर्धारकाच्या वाहकाची भूमिका बजावतो असे मानले जाते आणि शरीराच्या अंतर्गत वातावरणात प्रतिजनच्या प्रवेशास प्रोत्साहन देते, त्याचे पिनोसाइटोसिस किंवा फॅगोसाइटोसिस, प्रतिजनच्या प्रवेशास सेल्युलर प्रतिक्रिया, इंटरसेल्युलर इंटरसेप्टर्सच्या मध्यस्थांची निर्मिती, इम्युन्युलर इंटरसेप्टर्समध्ये इम्युन्युलर प्रतिक्रिया असते. प्रतिजैविक निर्धारक).

जिवाणू पेशीच्या शारीरिक रचनांनुसार, एच-अँटीजेन्स (फ्लेजेलेटेड, जर जिवाणू असतील तर), के-अँटीजेन्स (पेशीच्या भिंतीच्या पृष्ठभागावर स्थित), ओ-अँटीजेन्स (बॅक्टेरियाच्या पेशीच्या भिंतीशी संबंधित), जीवाणूंद्वारे त्यांच्या वातावरणात उत्सर्जित केलेले प्रतिजन (पॉलीसीकेस्यूल प्रोटीन, पॉलीसीकेस्यूल प्रोटीन).

मायक्रोबियल सेलच्या असंख्य प्रतिजनांपैकी, असे काही असतात जे केवळ दिलेल्या प्रकारच्या सूक्ष्मजंतू (प्रकार प्रतिजन), दिलेल्या प्रजाती (प्रजाती प्रतिजन), तसेच सूक्ष्मजीवांच्या गटात (कुटुंब) सामान्य असतात (समूह प्रतिजन).

अशाप्रकारे, एक जिवाणू पेशी (सूक्ष्मजीवांच्या इतर राज्यांच्या सूक्ष्मजीवांप्रमाणे - विषाणू, प्रोटोझोआ, बुरशी) असंख्य प्रतिजनांचा एक जटिल कॉम्प्लेक्स आहे. जेव्हा ते मॅक्रोऑर्गॅनिझमच्या अंतर्गत वातावरणात प्रवेश करते, तेव्हा यापैकी बरेच प्रतिजन स्वतःचे विशिष्ट प्रतिपिंड तयार करतात. काही प्रतिजैविके क्वचितच लक्षात येण्याजोग्या प्रमाणात प्रतिपिंड (टायटर) तयार करतात, इतर - जलद आणि लक्षणीय प्रतिपिंड निर्मिती. त्यानुसार, "कमकुवत" आणि "मजबूत" प्रतिजन वेगळे केले जातात.

बॅक्टेरियल सेलचे सर्व प्रतिजन समान प्रजातीच्या रोगजनक सूक्ष्मजंतूंच्या मॅक्रोऑर्गॅनिझममध्ये पुन्हा प्रवेश करण्यासाठी प्रतिकार (प्रतिकारशक्ती) जोडण्यात समान प्रमाणात सहभागी नसतात. प्रतिकारशक्ती निर्माण करण्याच्या प्रतिजनाच्या क्षमतेला इम्युनोजेनिसिटी म्हणतात आणि अशा प्रतिजनाला इम्युनोजेन म्हणतात. हे देखील स्थापित केले गेले आहे की काही सूक्ष्मजीवांचे विशिष्ट प्रतिजन विविध प्रकारच्या अतिसंवेदनशीलता (एलर्जी) च्या विकासास कारणीभूत ठरू शकतात. अशा प्रतिजनांना ऍलर्जीन म्हणतात.

व्हायरल कणांच्या संरचनेनुसार, प्रतिजनांचे अनेक गट वेगळे केले जातात: परमाणु, कॅप्सिड आणि सुपरकॅप्सिड. व्हायरियनची प्रतिजैविक रचना व्हायरल कणांच्या संरचनेवर अवलंबून असते. फक्त संघटित व्हायरसची प्रतिजैविक विशिष्टता ribo- आणि deoxynucleoproteins शी संबंधित आहे. जटिल विषाणूंमध्ये, प्रतिजनचा एक भाग न्यूक्लियोकॅप्सिडशी संबंधित असतो आणि दुसरा बाह्य शेलमध्ये स्थानिकीकृत असतो - सुपरकॅप्सिड.

इम्युनोजेनिसिटी- रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया प्रेरित करण्याची क्षमता.

विशिष्टता- प्रतिजनची विशिष्ट प्रतिपिंडे किंवा सक्रिय (प्राइमड) लिम्फोसाइट्ससह परस्पर प्रतिक्रियांमध्ये प्रवेश करण्याची क्षमता, ज्यामुळे या प्रतिजनचे तटस्थीकरण होते.

इम्युनोजेनिसिटी निर्धारित केली जाते:

परदेशीपणा, त्या पदार्थ "स्वतः नाही" म्हणून रोगप्रतिकारक यंत्रणेद्वारे ओळखले जाणे आवश्यक आहे. शिवाय, जीव आणि प्रशासित पदार्थ यांच्यातील अनुवांशिक संबंध जितके कमी उच्चारले जातील, तितके चांगले इम्युनोजेन असेल;

आण्विक वजन, जे किमान 5-10 kD असावे. प्रतिजनचे आण्विक वजन जितके मोठे असेल तितकी प्रतिकारशक्ती मजबूत असेल;

रासायनिक निसर्ग. प्रतिजन प्रथिने, पॉलिसेकेराइड्स, पॉलीपेप्टाइड्स, फॉस्फोलिपिड्स, न्यूक्लिक अॅसिड्स इत्यादी असू शकतात.

रासायनिक निसर्ग आणि आण्विक वजन यावर अवलंबून, प्रतिजन असू शकतात पूर्ण आणि अपूर्ण

(होते).

पूर्ण प्रतिजन(इम्युनोजेन्स) विशिष्ट रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया प्रेरित करतात आणि प्रतिपिंड आणि सक्रिय टी-लिम्फोसाइट्सशी संवाद साधतात. हे मॅक्रोमोलेक्युलर पदार्थ आहेत - प्रथिने, पॉलिसेकेराइड्स, ग्लायकोप्रोटीन्स, लिपोपॉलिसॅकेराइड्स, लिपोप्रोटीन्स, न्यूक्लियोप्रोटीन्स आणि कॉर्पस्क्युलर फॉर्म (सूक्ष्मजीव, परदेशी पेशी इ.). प्रतिजन बाह्य किंवा अंतर्जात असू शकतात. एंडोजेनस एजी - सुधारित जीनोम असलेल्या शरीराच्या स्वतःच्या पेशी आणि त्यांनी तयार केलेली उत्पादने ( ऑटोएंटीजेन्स).

घडते- हे लहान आण्विक वजनाचे साधे रासायनिक संयुगे आहेत: डिसॅकराइड्स, लिपिड्स, पेप्टाइड्स, न्यूक्लिक अॅसिड इ. ते इम्युनोजेनिक नसतात, परंतु रोगप्रतिकारक प्रतिसादाच्या उत्पादनांशी (अँटीबॉडीज आणि टी-लिम्फोसाइट्स) संवाद साधताना उच्च पातळीची विशिष्टता असते. जर हॅप्टेनला प्रथिने एकत्र केले तर ते इम्युनोजेनिसिटीचे गुणधर्म प्राप्त करते (म्हणजे ते पूर्ण होते). या कॉम्प्लेक्सची विशिष्टता हेप्टेनद्वारे निश्चित केली जाते

अर्धवट होतो

Proantigens

अर्धवट होतोजेव्हा अजैविक पदार्थ (आयोडीन, ब्रोमिन, नायट्रोजन, इ.) प्रथिनांसह एकत्र होतात तेव्हा तयार होतात. असे कॉम्प्लेक्स अकार्बनिक यौगिकांसाठी विशिष्ट प्रतिपिंडे तयार करण्यास प्रवृत्त करू शकतात.

Proantigensऍलर्जी-हॅपटेन्स किंवा नॉन-एंटीजेनिक पदार्थ आहेत (सल्फोनामाइड्स, प्रतिजैविक, फेनोल्फथालीन इ.). मॅक्रोऑर्गेनिझम प्रथिने एकत्र केल्यावर, ते संवेदनाक्षमतेची स्थिती आणि ऍलर्जीक प्रतिक्रियांच्या विकासास कारणीभूत ठरू शकतात.

1957 मध्ये, शास्त्रज्ञांनी शोधून काढले की विषाणूची लागण झालेल्या पेशी एक विशेष पदार्थ तयार करतात जे एकसंध आणि विषम विषाणूंचे पुनरुत्पादन रोखतात, ज्याला ते इंटरफेरॉन म्हणतात. जर रोगप्रतिकारक प्रणाली प्रोटीन होमिओस्टॅसिस प्रदान करते आणि त्याद्वारे परदेशी अनुवांशिक माहिती काढून टाकते, तर इंटरफेरॉन प्रणाली थेट विदेशी अनुवांशिक माहितीवर परिणाम करते, सेल्युलर स्तरावर शरीरातून काढून टाकते आणि त्याद्वारे न्यूक्लिक होमिओस्टॅसिस सुनिश्चित करते. इंटरफेरॉन प्रणाली रोगप्रतिकारक प्रणालीशी जवळून संवाद साधते.
इंटरफेरॉन हे सेलच्या अनुवांशिक उपकरणामध्ये एन्कोड केलेले असतात. मानवी फायब्रोब्लास्ट इंटरफेरॉनची जनुके 5व्या गुणसूत्राच्या 2ऱ्या, 9व्या आणि लांब हातामध्ये स्थित आहेत, लिप्यंतरण-नियमन करणारे जनुक त्याच गुणसूत्राच्या लहान हातामध्ये आहे. इंटरफेरॉनच्या क्रियेची संवेदनाक्षमता ठरवणारे जनुक 21 व्या गुणसूत्रात स्थानिकीकृत आहे. α-इंटरफेरॉनचे जनुक 9व्या गुणसूत्रावर, γ-इंटरफेरॉनसाठी - 11व्या गुणसूत्रावर असते.
इंटरफेरॉन प्रणालीमध्ये मध्यवर्ती अवयव नसतो, कारण कशेरुकांच्या शरीराच्या सर्व पेशींमध्ये इंटरफेरॉन तयार करण्याची क्षमता असते, जरी पांढऱ्या रक्त पेशी सर्वात सक्रियपणे तयार करतात.
इंटरफेरॉन अखंड पेशींद्वारे उत्स्फूर्तपणे तयार होत नाही आणि त्याच्या निर्मितीसाठी इंड्यूसर आवश्यक असतात, जे विषाणू, जिवाणू विष, बुरशीजन्य जीवाणूंचे अर्क, फायटोहेमॅग्लुटिनिन, कृत्रिम पदार्थ - पॉली कार्बोक्झिलेट्स, पॉलीसल्फेट्स, डेक्सट्रान्स असू शकतात, परंतु सर्वात प्रभावी इंड्युसर आहेत: आर-स्ट्राफ आणि डबल-एन्स्ट्रा-डबल-एन-ए-डबल आणि इंटरफेरॉन. रिबोन्यूक्लियोटाइड्सचे सिंथेटिक कॉपॉलिमर (पॉली-जी सी, पॉली-आयसी), इ. इंटरफेरॉनचे प्रेरण त्याच्या जनुकांच्या उदासीनतेमुळे होते.
इंटरफेरॉनचे प्रकार. मानवी इंटरफेरॉनचे तीन प्रकार ओळखले जातात: α-इंटरफेरॉन, किंवा ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन, जे व्हायरस आणि इतर एजंट्ससह उपचार केलेल्या ल्यूकोसाइट्सद्वारे तयार केले जाते; β-इंटरफेरॉन, किंवा फायब्रोब्लास्ट इंटरफेरॉन, जे व्हायरस आणि इतर एजंट्सद्वारे उपचार केलेल्या फायब्रोब्लास्ट्सद्वारे तयार केले जाते. हे दोन्ही इंटरफेरॉन प्रकार 1 चे आहेत. मजबूत γ-इंटरफेरॉन, किंवा इम्यून इंटरफेरॉन, प्रकार 2 चे आहेत. α-इंटरफेरॉनचे अनेक उपप्रकार आहेत आणि मानवांमध्ये त्यांची एकूण संख्या 25 पर्यंत पोहोचते. मानवी इंटरफेरॉनची तुलनात्मक वैशिष्ट्ये टेबलमध्ये दिली आहेत. इंटरफेरॉन क्रियाकलाप आंतरराष्ट्रीय युनिट्स (एमई) मध्ये मोजला जातो. एक युनिट इंटरफेरॉनच्या प्रमाणाशी संबंधित आहे जे व्हायरसच्या पुनरुत्पादनास 50% प्रतिबंधित करते.
इंटरफेरॉनच्या इंडक्शन दरम्यान, त्याचे दोन किंवा अधिक प्रकार संश्लेषित केले जातात. तर, लिम्फोब्लास्ट्सवर इंटरफेरॉनच्या इंडक्शन दरम्यान, 87% ल्युकोसाइट आणि 13% फायब्रोब्लास्ट इंटरफेरॉन तयार होतात, फायब्रोब्लास्ट्सवर इंटरफेरॉनच्या इंडक्शनसह, व्यस्त संबंध होतात. तीन प्रकारच्या इंटरफेरॉनमध्ये सहक्रियात्मक संवाद असू शकतो.

टेबल 2
मानवी इंटरफेरॉनची तुलनात्मक वैशिष्ट्ये

इंटरफेरॉनचे गुणधर्म. इंटरफेरॉन प्रजाती-विशिष्ट आहेत. याचा अर्थ मानवी इंटरफेरॉन केवळ मानवी शरीरात सक्रिय आहे, परंतु इतर जैविक प्रजातींच्या शरीरात निष्क्रिय आहे. अर्थात, प्रजातींच्या विशिष्टतेतील अडथळे निरपेक्ष नाहीत: मानवी इंटरफेरॉन महान वानरांच्या ऊतींमध्ये काही क्रियाकलाप प्रदर्शित करते, कोंबडी कुटुंबातील संबंधित प्रजातींच्या शरीरात ऍक्रिन इंटरफेरॉन. तथापि, विषम जीवांमध्ये इंटरफेरॉनची क्रिया झपाट्याने कमी होते.
म्हणून, असा निष्कर्ष काढला जाऊ शकतो की कशेरुकांमध्ये दिसणारे इंटरफेरॉन त्यांच्या यजमानांसह एकत्रितपणे विकसित झाले. इंटरफेरॉन हे तुलनेने स्थिर प्रथिने आहे आणि ते अम्लीय वातावरण (pH2.2) चांगले सहन करते, ज्याचा उपयोग ते वेगळे आणि शुद्ध करण्यासाठी केला जातो. इंटरफेरॉनचे प्रतिजैविक गुणधर्म फार स्पष्ट नसतात; म्हणून, अनेक लसीकरणानंतरच त्यास प्रतिपिंड मिळू शकतात.
इंटरफेरॉनमध्ये विषाणूंविरूद्ध विशिष्टता नसते आणि विविध विषाणूंच्या पुनरुत्पादनावर उदासीनतेने कार्य करतात, जरी भिन्न विषाणूंमध्ये किंटरफेरॉनची असमान संवेदनशीलता असते. त्याची संवेदनशीलता सहसा किंटरफेरॉनच्या सिंड्युसिव्ह क्रियाकलापांशी जुळते. सर्वात सामान्यपणे वापरले जाणारे इंटरफेरॉन इंड्युसर आणि चाचणी विषाणू हे त्याच्या टायट्रेशनसाठी रॅबडोव्हायरस (वेसिक्युलर स्टोमाटायटिस व्हायरस), पॅरामिक्सोव्हायरस आणि टोगाव्हायरस आहेत. इंटरफेरॉनचे उत्पादन वापरलेल्या पेशींच्या स्वरूपावर देखील अवलंबून असते. अशा पेशी आहेत ज्या अनेक इंटरफेरॉन जनुकांमध्ये दोषपूर्ण आहेत.
इंटरफेरॉनमध्ये अँटीव्हायरल, अँटीट्यूमर, इम्युनोमोड्युलेटरी आणि इतर क्रिया आहेत. त्यांच्या अँटीव्हायरल कृतीचा सर्वाधिक अभ्यास केला गेला आहे आणि व्हायरल मॉडेल्सवर इंटरफेरॉनचे जैविक आणि इतर गुणधर्म स्पष्ट केले गेले आहेत.
सायटोप्रोलिफेरेटिव्ह क्रियाकलाप दडपशाहीशी संबंधित, उच्च डोसमध्ये पॅरेंटेरली प्रशासित केल्यावर इंटरफेरॉनचा अँटीट्यूमर प्रभाव असतो. सामान्य पेशींच्या संस्कृतीत इंटरफेरॉनची भर 2 तासांनंतर त्यांच्या डीएनए संश्लेषणाच्या प्रतिबंधाद्वारे आधीच सोबत आहे. व्हायरस-प्रेरित ट्यूमरमध्ये, इंटरफेरॉन ऑन्कोव्हायरसचे पुनरुत्पादन प्रतिबंधित करते आणि त्याच वेळी सायटोप्रोलिफेरेटिव्ह क्रियाकलाप दडपते.
इंटरफेरॉन हे रोगप्रतिकारक प्रतिसादाच्या विविध यंत्रणेचे नियामक आहे, जे रोगप्रतिकारक प्रतिसादांवर उत्तेजक किंवा निराशाजनक प्रभाव प्रदान करते.
इंटरफेरॉनच्या कृतीची यंत्रणा. इंटरफेरॉन प्लाझ्मा झिल्लीवर स्थित सेल्युलर रिसेप्टर्सशी बांधले जाते, जे संबंधित जनुकांच्या उदासीनतेसाठी सिग्नल म्हणून काम करते. परिणामी, विशेष प्रोटीन किनेज पीकेचे संश्लेषण प्रेरित होते, जे सर्व सस्तन प्राण्यांच्या पेशींमध्ये ट्रेस प्रमाणात असते आणि दुहेरी-असरलेल्या आरएनएच्या कमी एकाग्रतेमुळे आणि विषाणू-संक्रमित पेशींमध्ये - व्हायरल प्रतिकृती कॉम्प्लेक्सद्वारे सक्रिय होते.
प्रथिने किनेस फॉस्फोरिलेट्स इनिशिएटिंग ट्रान्सलेशन फॅक्टर eIF-2 चे ए-सब्युनिट करते आणि फॉस्फोरिलेशन इनिशिएटिंग फॅक्टरची क्रिया अवरोधित करते. परिणामी, इनिशिएशन कॉम्प्लेक्सशी संबंधित mRNA मोठ्या राइबोसोमल सब्यूनिटला बांधू शकत नाही, आणि म्हणून त्याचे भाषांतर अवरोधित केले आहे. सेल्युलर आणि व्हायरल mRNAs या दोन्हीच्या भाषांतरासाठी प्रारंभिक घटक eIF-2 सारखाच आवश्यक आहे, परंतु व्हायरल डबल-स्ट्रँडेड RNA स्ट्रक्चर्सशी संबंधित व्हायरल mRNA चे भाषांतर प्रामुख्याने प्रोटीन किनेजच्या स्थानिक सक्रियतेच्या परिणामी अवरोधित केले आहे.
इंटरफेरॉनने उपचार केलेल्या पेशींमध्ये, एन्झाइम सिंथेटेसचे संश्लेषण प्रेरित केले जाते, जे 2,5-ओलिगोएडेनिलिक ऍसिडचे उत्प्रेरक करते, जे सेल्युलर न्यूक्लीजची क्रिया व्हायरल mRNA नष्ट करण्यासाठी स्विच करते. अशाप्रकारे, विषाणूजन्य mRNAs न्यूक्लीजद्वारे खराब होतात. एमआरएनएचा अनुवाद आणि नाश सुरू होण्याच्या टप्प्याला इंटरफेरॉनद्वारे अवरोधित केल्याने विविध अनुवांशिक सामग्रीसह विषाणूंमुळे होणाऱ्या संसर्गामध्ये त्याच्या क्रियांची सार्वत्रिक यंत्रणा निश्चित होते.
इंटरफेरॉनचा वापर. इंटरफेरॉनचा वापर अनेक व्हायरल इन्फेक्शन्स टाळण्यासाठी आणि उपचार करण्यासाठी केला जातो. त्यांचा प्रभाव औषधाच्या डोसद्वारे निर्धारित केला जातो, परंतु इंटरफेरॉनच्या उच्च डोसमध्ये विषारी प्रभाव असतो. इन्फ्लूएंझा आणि इतर तीव्र श्वसन रोगांसाठी इंटरफेरॉनचा मोठ्या प्रमाणावर वापर केला जातो. औषध रोगाच्या सुरुवातीच्या टप्प्यात प्रभावी आहे, टॉपिकली लागू केले जाते, उदाहरणार्थ, दिवसातून 2-3 वेळा 3∙104-5∙104 युनिट्स पर्यंत एकाग्रतेमध्ये अप्पर रेस्पीरेटरी ट्रॅक्टच्या इन्स्टिलेशन किंवा इनहेलेशनद्वारे. डोळ्यांच्या बुबुळाच्या पुढील भागाचा होणारा दाह सह, इंटरफेरॉन डोळा थेंब स्वरूपात वापरले जाते. इंटरफेरॉनचा हिपॅटायटीस बी, हर्पस तसेच घातक निओप्लाझममध्ये उपचारात्मक प्रभाव असतो. या रोगांमध्ये, उच्च सांद्रता निर्धारित केली जाते. औषध पॅरेंटेरली वापरले जाते - इंट्राव्हेनस आणि इंट्रामस्क्युलरली शरीराच्या वजनाच्या 1 किलो प्रति 105 युनिट्सच्या डोसवर. जास्त डोस घेतल्यास दुष्परिणाम होतात (ताप, डोकेदुखी, केस गळणे, अंधुक दृष्टी इ.). इंटरफेरॉनमुळे लिम्फोपेनिया, मॅक्रोफेजची विलंब परिपक्वता, मुलांमध्ये - गंभीर शॉक स्थिती, हृदय व रक्तवाहिन्यासंबंधी रोग असलेल्या रूग्णांमध्ये - मायोकार्डियल इन्फेक्शन होऊ शकते. इंटरफेरॉनचे शुद्धीकरण लक्षणीयरीत्या त्याची विषाक्तता कमी करते आणि उच्च सांद्रता वापरण्यास अनुमती देते. किंटरफेरॉनला मोनोक्लोनल ऍन्टीबॉडीज वापरून ऍफिनिटी क्रोमॅटोग्राफीद्वारे शुद्धीकरण केले जाते.
अनुवांशिकरित्या इंजिनियर केलेले इंटरफेरॉन. अनुवांशिकरित्या अभियंता ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन प्रोकेरियोटिक प्रणाली (ई. कोली) मध्ये प्राप्त होते. इंटरफेरॉन मिळविण्यासाठी जैवतंत्रज्ञानामध्ये पुढील चरणांचा समावेश आहे:
1) इंटरफेरॉन इंड्यूसर्ससह ल्युकोसाइट मासचे उपचार;
2) उपचार केलेल्या पेशींमधून mRNA मिश्रणाचे पृथक्करण;
3) रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस वापरून एकूण पूरक डीएनए (सीडीएनए) मिळवणे;
4) Escherichia coli plasmid मध्ये cDNA घालणे आणि त्याचे क्लोनिंग;
5) इंटरफेरॉन जीन्स असलेल्या क्लोनची निवड;
6) यशस्वी जीन ट्रान्सक्रिप्शनसाठी प्लाझमिडमध्ये मजबूत प्रवर्तक समाविष्ट करणे;
7) इंटरफेरॉन जनुकाची अभिव्यक्ती, म्हणजे. संबंधित प्रथिनांचे संश्लेषण;
8) प्रोकॅरियोटिक पेशींचा नाश आणि ऍफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी वापरून इंटरफेरॉनचे शुद्धीकरण.
अत्यंत शुद्ध आणि केंद्रित इंटरफेरॉनची तयारी प्राप्त झाली आहे, ज्याची क्लिनिकमध्ये चाचणी केली जात आहे.
मानवी ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन, मूळ आणि केंद्रित, इन्फ्लूएंझा आणि इतर व्हायरल श्वसन रोगांच्या प्रतिबंध आणि उपचारांसाठी आहे.
ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन ही एक प्रजाती-विशिष्ट प्रथिने आहे जी इंटरफेरोनोजेन विषाणूच्या प्रभावांना प्रतिसाद म्हणून मानवी ल्युकोसाइट्सद्वारे संश्लेषित केली जाते. इंटरफेरॉनमध्ये निवडक अँटीव्हायरल क्रियाकलाप नाही आणि जवळजवळ सर्व व्हायरसवर कार्य करते.
इंटरफेरॉनच्या तयारीसाठी, ताज्या प्राप्त रक्तदात्याच्या ल्युकोसाइट्सचा वापर केला जातो. व्हायरसच्या प्रभावाखाली - इंटरफेरोनोजेन, संस्कृती माध्यमातील ल्यूकोसाइट्स इंटरफेरॉनचे संश्लेषण करतात. मग ल्युकोसाइट्स सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे काढले जातात, व्हायरस निष्क्रिय केला जातो. औषध मूळ इंटरफेरॉन आहे. केंद्रित नेटिव्ह इंटरफेरॉन मिळविण्यासाठी, ते सेफडेक्ससह स्तंभांवर क्रोमॅटोग्राफिक विभक्तीकरणाद्वारे अतिरिक्तपणे शुद्ध केले जाते.
इंटरफेरॉन कोरड्या स्वरूपात ampoules मध्ये तयार केले जाते. नेटिव्ह ड्राय इंटरफेरॉन एक राखाडी-तपकिरी सच्छिद्र पावडर आहे जी डिस्टिल्ड पाण्यात सहज विरघळते. विरघळलेल्या औषधाचा सोपॅलेसेन्ससह गुलाबी-लाल रंग आहे. द्रावणाची थोडीशी तपकिरी सावली अनुमत आहे. केंद्रित कोरडी तयारी एक सच्छिद्र राखाडी-पांढरी पावडर आहे, जी डिस्टिल्ड पाण्यात सहज विरघळते. औषधाच्या सोल्युशनमध्ये कोपॅलेसेन्ससह राखाडी रंग आहे, चला थोडासा पिवळसर-तपकिरी रंग म्हणूया. परदेशी अशुद्धता असू नये.
मानवी ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन विषाणूजन्य आणि बॅक्टेरियोलॉजिकलदृष्ट्या निर्जंतुकीकरण केले जाते. मूळ औषधाची अँटीव्हायरल क्रिया किमान 32 युनिट्स, केंद्रित - 100 युनिट्स असावी. वेसिक्युलर स्टोमाटायटीस विषाणू असलेल्या मानवी गर्भाच्या मस्क्यूकोस्केलेटल टिश्यूच्या प्राथमिक सेल कल्चरवर टायट्रेशनद्वारे क्रियाकलाप निर्धारित केला जातो.
औषधाच्या वापरासाठी कोणतेही contraindication नाहीत. इंटरफेरॉन गैर-प्रतिक्रियाशील आहे, साइड इफेक्ट्स होत नाही.
औषध 4 °C तापमानात साठवले जाते. शेल्फ लाइफ 1 वर्ष. त्याची मुदत संपल्यानंतर, औषधाची ही मालिका तयार करणाऱ्या संस्थेद्वारे पुन्हा नियंत्रण केले जाऊ शकते. भौतिक गुणधर्म आणि क्रियाकलाप राखताना, औषधाचे शेल्फ लाइफ आणखी 3 महिने वाढवता येते.

इंटरफेरॉन ल्युकोसाइट जनुक व्हायरस

सध्या, मायक्रोबायोलॉजिकल संश्लेषणाद्वारे इंटरफेरॉन मिळविण्याची पद्धत अधिक आशादायक म्हणून ओळखली जाते, ज्यामुळे तुलनेने स्वस्त कच्च्या मालापासून जास्त उत्पन्नासह लक्ष्य उत्पादन प्राप्त करणे शक्य होते. या प्रकरणात वापरलेले दृष्टिकोन जीवाणूंच्या अभिव्यक्तीसाठी इष्टतम असलेल्या स्ट्रक्चरल जीनचे रूपे तयार करणे शक्य करतात, तसेच त्याच्या अभिव्यक्तीवर नियंत्रण ठेवणारे नियामक घटक.

पिचिया पेस्टोरिस, स्यूडोमोनास पुटीडा आणि एस्चेरिचिया कोली स्ट्रेनच्या विविध रचनांचा प्रारंभिक सूक्ष्मजीव म्हणून वापर केला जातो.

इंटरफेरॉन उत्पादक म्हणून पी. पेस्टोरिस वापरण्याचे नुकसान म्हणजे या प्रकारच्या यीस्टसाठी अत्यंत कठीण किण्वन परिस्थिती, जैवसंश्लेषणादरम्यान इंड्युसरची एकाग्रता, विशेषतः मिथेनॉलची काटेकोरपणे देखभाल करण्याची आवश्यकता आहे.

Ps च्या स्ट्रॅन्स वापरण्याचा तोटा. पुटीडा ही अभिव्यक्तीच्या कमी पातळीवर किण्वन प्रक्रियेची जटिलता आहे (10 मिलीग्राम इंटरफेरॉन प्रति 1 लिटर संस्कृती माध्यम). Escherichia coli स्ट्रेनचा वापर अधिक उत्पादक आहे.

मोठ्या संख्येने प्लाझमिड्स आणि इंटरफेरॉन-एक्सप्रेसिंग ई. कोलाई स्ट्रेन ओळखले जातात: ई. कोलाई स्ट्रेन एटीसीसी 31633 आणि 31644 प्लाझमिड्स Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 किंवा Z-pBR 322 (Pstl)/HclN-SN-SN653 coli 765, 11644. INF-AP 2 (SU 1312961), E. coli strain pINF-F-Pa (AU 1312962), E. coli strain SG 20050 with plasmid p280/21FN, E. coli strain SG 20050 with plasmid pINF-196060 SG, 20050 सह. plasmid pINF16 (RU 2054041) आणि इतर. या स्ट्रेनच्या वापरावर आधारित तंत्रज्ञानाचा तोटा म्हणजे त्यांची अस्थिरता, तसेच इंटरफेरॉन अभिव्यक्तीची अपुरी पातळी.

वापरलेल्या स्ट्रेनच्या वैशिष्ट्यांसह, प्रक्रियेची कार्यक्षमता मुख्यत्वे इंटरफेरॉनच्या अलगाव आणि शुद्धीकरणासाठी वापरल्या जाणार्‍या तंत्रज्ञानावर अवलंबून असते.

इंटरफेरॉन तयार करण्यासाठी एक ज्ञात पद्धत, ज्यामध्ये Ps पेशींची लागवड समाविष्ट आहे. पुटीडा, बायोमास डिस्ट्रक्शन, पॉलीथिलीनेमाइन उपचार, अमोनियम सल्फेट फ्रॅक्शनेशन, फिनिसिलोक्रोम C-80 वर हायड्रोफोबिक क्रोमॅटोग्राफी, लाइसेटचे पीएच फ्रॅक्शनेशन, त्याची एकाग्रता आणि डायफिल्ट्रेशन, आयन-एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी वरील डीई-एन्ट्रोसेल, पीएच-52, डीई-एन्ट्रोसेल क्रोमॅटोग्राफी CM-52 सेल्युलोजवर प्राप्त केलेले एल्युएंट, फिल्टर कॅसेटद्वारे एकाग्रता वगळा आणि सेफाडेक्स G-100 (SU 1640996) वर जेल फिल्टरेशन करा. या पद्धतीचा तोटा, जटिल मल्टी-स्टेज किण्वन व्यतिरिक्त, अंतिम उत्पादन मिळविण्यासाठी बहु-स्टेज प्रक्रिया आहे.

इंटरफेरॉन तयार करण्यासाठी एक पद्धत देखील ज्ञात आहे, ज्यामध्ये थर्मोस्टेड शेकरमध्ये फ्लास्कमध्ये एलबी ब्रॉथमध्ये E. coli SG 20050/pIF16 स्ट्रेनची लागवड करणे, बायोमास सेंट्रीफ्यूग करणे, बफर सोल्यूशनने ते धुणे आणि पेशी नष्ट करण्यासाठी सोनिक करणे समाविष्ट आहे. परिणामी लिझॅट सेंट्रीफ्यूज केले जाते, बफरमध्ये युरियाच्या 3m द्रावणाने धुतले जाते, बफरमध्ये chuanidine क्लोराईडच्या द्रावणात विरघळले जाते, अल्ट्रासाऊंड, सेंट्रीफ्यूज, ऑक्सिडेटिव्ह सल्फिटोलाइझसह उपचार केले जाते, 8 मीटर युरियाच्या विरूद्ध डायलिसिस आणि जीएसएमआरयू 5-2-2-2-2000-2000 ची अंतिम तपासणी 2054041).

या पद्धतीचे तोटे म्हणजे अलगाव आणि शुद्धीकरण प्रक्रियेच्या मुख्य टप्प्यांची तुलनेने कमी उत्पादकता. विशेषतः, हे उत्पादनाच्या अल्ट्रासोनिक प्रक्रियेवर लागू होते, डायलिसिस आणि ऑक्सिडेटिव्ह सल्फिटोलिसिस, ज्यामुळे इंटरफेरॉनच्या उत्पादनामध्ये अस्थिरता येते, तसेच इंटरफेरॉनच्या औद्योगिक उत्पादनासाठी ही पद्धत वापरण्याची अशक्यता येते.

सर्वात जवळचे अॅनालॉग (प्रोटोटाइप) म्हणून, मानवी ल्युकोसाइट इंटरफेरॉन मिळविण्याची एक पद्धत दर्शविली जाऊ शकते, ज्यामध्ये रीकॉम्बीनंट ई. कोलाय स्ट्रेनची लागवड करणे, परिणामी बायोमास -70 डिग्री सेल्सियसपेक्षा जास्त नसलेल्या तापमानात गोठवणे, विरघळणे, डीएनएनए लायसोझाईम आणि डीएनएनए रीमोजायझमसह सूक्ष्मजीव पेशी नष्ट करणे आणि डीएनएनएमध्ये रीकॉम्बिनेंट तयार करणे समाविष्ट आहे. डिटर्जंट्ससह बफर सोल्यूशनने धुवून इंटरफेरॉनचे विलग अघुलनशील स्वरूप, ग्वानिडाइन हायड्रोक्लोराईडच्या द्रावणात इंटरफेरॉन अवक्षेपाचे विघटन, आयन-एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पुनर्निर्मिती आणि एक-चरण शुद्धीकरण. उत्पादक म्हणून, तीन प्रवर्तक असलेल्या रीकॉम्बीनंट pSS5 प्लास्मिडचा वापर करून प्राप्त केलेला E. coli SS5 स्ट्रेन: Plac, Pt7 आणि Ptrp, आणि प्रस्तुत न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापनांसह अल्फा-इंटरफेरॉन जनुक वापरला जातो.

हे प्लास्मिड असलेल्या E. coli SS5 स्ट्रेनद्वारे इंटरफेरॉन अभिव्यक्ती तीन प्रवर्तकांद्वारे नियंत्रित केली जाते: Plac, Pt7 आणि Ptrp. इंटरफेरॉनची अभिव्यक्ती पातळी सुमारे 800 मिलीग्राम प्रति 1 लिटर सेल सस्पेंशन आहे.

या पद्धतीचा तोटा म्हणजे पेशींचा एन्झाइमॅटिक विनाश, सूक्ष्मजीवांचे डीएनए आणि आरएनए आणि इंटरफेरॉनचे एक-स्टेज क्रोमॅटोग्राफिक शुद्धीकरण वापरण्याची कमी उत्पादनक्षमता. यामुळे इंटरफेरॉन अलगाव प्रक्रियेची अस्थिरता होते, त्याची गुणवत्ता कमी होते आणि इंटरफेरॉनच्या औद्योगिक उत्पादनासाठी वरील योजना वापरण्याची शक्यता मर्यादित करते.

या प्लाझमिडचे तोटे आणि त्यावर आधारित ताण म्हणजे E. coli BL21 (DE3) स्ट्रेनमधील मजबूत अनियंत्रित T7 फेज प्रमोटरचा प्लाझमिडमध्ये वापर, ज्यामध्ये T7 RNA पॉलिमरेझ जनुक लाख ओपेरॉन प्रवर्तकाच्या खाली असते आणि जे नेहमी "वाहते". परिणामी, इंटरफेरॉनचे संश्लेषण सेलमध्ये सतत घडते, ज्यामुळे प्लाझ्मिडचे पृथक्करण होते आणि स्ट्रेनच्या पेशींची व्यवहार्यता कमी होते आणि परिणामी, इंटरफेरॉनच्या उत्पादनात घट होते.

रीकॉम्बीनंट इंटरफेरॉन मिळविण्याचे उदाहरणः

स्यूडोमोनास पुटीडा 84 पेशींच्या 600 ग्रॅम बायोमासमध्ये रीकॉम्बीनंट पी व्हीजी-3 प्लास्मिडमध्ये लागवडीनंतर 130 मिलीग्राम अल्फा-2 इंटरफेरॉन होते. 5.0 L आणि 1.2% सोडियम क्लोराईड, 1.2% ट्रिस-(हायड्रॉक्सीमेथिल)-अमिनोमेथेन, 10% सुक्रोज, 0.2% ईडीटीएटीए, 0.2% एमिनोथेन, 1.2% ट्रिस-(हायड्रॉक्सीमेथिल)-अमीनोमेथेन, 10% सुक्रोज, 0.2% ईडीटीएटीए, 5.0 एल आणि 3.0 एल लायसिस बफर क्षमतेच्या यांत्रिक स्टिररसह बॅलिस्टिक विघटन करणार्‍या पात्रात पेशी लोड केल्या गेल्या. त्यात फेनिलमेथाइलसल्फोनिल फ्लोराईड आणि ०.०१% डायथिओथ्रिटॉल pH 7.7 वर जोडले गेले. 30 मिनिटांसाठी एकसंध निलंबन मिळेपर्यंत बायोमास ढवळला गेला, त्यानंतर ऑपरेटिंग निर्देशांनुसार बॅलिस्टिक विघटनकर्त्यामध्ये अभिसरण मोडमध्ये विघटित केले गेले. विघटन करण्याची वेळ 1.5 तास होती. विघटन प्रक्रिया पूर्ण झाली जेव्हा, तयारीच्या मायक्रोस्कोपी दरम्यान, सूक्ष्मदर्शकाच्या दृश्याच्या अनेक क्षेत्रांमध्ये सूक्ष्मजीवांचे कोणतेही संपूर्ण पेशी आढळले नाहीत. लिस्ड बायोमास सस्पेंशनची मात्रा 3.5 लीटर होती.

या टप्प्यावर प्राप्त झालेले लाइसेट नंतर न्यूक्लिक अॅसिडच्या वर्षाव अवस्थेत प्रवेश करते. हे करण्यासाठी, 1-1.2 l/h दराने ढवळत लायसेट असलेल्या कंटेनरमध्ये 180 मिली पॉलिथिलीनेमाइनचे 5% द्रावण जोडले गेले. निलंबन 1 तासासाठी ढवळण्यात आले आणि (5±2) सेल्सिअस तापमानात 1 तास (9500±500) rpm वर न्यूक्लिक अॅसिडचे अवक्षेपण वेगळे करण्यासाठी सेंट्रीफ्यूज केले गेले. सेंट्रीफ्यूगेशननंतर, सुपरनेटंट वेगळे केले गेले, ज्याचे प्रमाण 3.0 एल होते.

स्टिररसह हळू ढवळत असताना, 182 ग्रॅम कोरडे अमोनियम सल्फेट लहान भागांमध्ये सुपरनॅटंटमध्ये ओतले गेले (मागील भाग पूर्णपणे विरघळल्यानंतर प्रत्येक पुढील भाग जोडला गेला). अमोनियम सल्फेट जोडणे पूर्ण झाल्यानंतर, मीठ पूर्णपणे विरघळत नाही तोपर्यंत ढवळणे चालू ठेवले गेले आणि प्रथिने प्रक्षेपित निलंबन (5 ± 2)С तापमानात 16 तासांसाठी ठेवले गेले, आणि नंतर (5 ± 2) तापमानात 1 तास (13500 ± 500) rpm वर केंद्रीत केले गेले.

परिणामी अवक्षेप डिस्टिल्ड पाण्यात विरघळला गेला, एकूण व्हॉल्यूम 4 लिटरवर आणला. अल्फा-2 इंटरफेरॉन असलेल्या परिणामी द्रावणाचे ऍसिड फ्रॅक्शनेशन सोबतच्या प्रथिनांचा अवक्षेप करण्यासाठी केले गेले. हे करण्यासाठी, pH 4.75 च्या द्रावणात 5.0 मिली 50% ऍसिटिक ऍसिड जोडले गेले. परिणामी मिश्रण रेफ्रिजरेटरमध्ये हस्तांतरित केले गेले आणि 3 तासांसाठी (5±2)С तापमानात सोडले गेले, त्यानंतर प्रथिने निलंबन (13500±500) rpm वर 30 मिनिटांसाठी (5±2)С वर सेंट्रीफ्यूज केले गेले.

4 l supernatant ला 50.0 ml 1 M Tris द्रावण pH (6.9 ± 0.1) मध्ये जोडले गेले. लोरी पद्धतीद्वारे निर्धारित एकूण प्रथिनांची एकाग्रता, अल्फा-2 इंटरफेरॉन (6.80.5) 106 IU/ml ची जैविक क्रिया 9.0 mg/ml होती. विशिष्ट क्रियाकलाप 8.5105 IU/mg. या टप्प्यावर अल्फा-2 इंटरफेरॉनची एकूण सामग्री 2.91010 IU आहे.

क्रोमॅटोग्राफिक स्तंभात जलीय निलंबनाच्या स्वरूपात 0.6 l च्या प्रमाणात सॉर्बेंट सोलोज केजी ठेवले होते. नंतर, पेरीस्टाल्टिक पंप वापरून, 0.2 एम सोडियम हायड्रॉक्साईड द्रावणाचे 2.0 एल, डिस्टिल्ड वॉटरचे 6.0 एल, आणि पीएच (7.1 ± 0.1) वर 0.05 एम ट्रिस-एसीटेट बफर सोल्यूशनचे 4.5 एल अनुक्रमे सॉर्बेंटमधून पार केले गेले, ज्याचे कोलम पीएचच्या सहाय्याने निरीक्षण केले गेले.

अल्फा-2 इंटरफेरॉन असलेले प्रथिने द्रावण डिस्टिल्ड पाण्याने (6.0+2.0) mS/cm च्या तपमानावर पातळ केले गेले. या प्रकरणात द्रावणाची मात्रा 19.2 लीटर होती.

द्रावण स्तंभावर 1.5 l/तास या दराने लागू केले गेले, नंतर sorbent 2.0 l Tris-acetate बफर 0.05 M ने pH 7.0 वर धुतले. पीएच (10.2±0.1) सह 0.05 एम ट्रिस सोल्यूशनच्या 1.2 l सह उत्सर्जन केले गेले. अपूर्णांक संग्राहक वापरून संकलित केलेल्या अपूर्णांकांमधील इंटरफेरॉनची सामग्री एन्झाइम इम्युनोसेद्वारे निर्धारित केली गेली.

लोरी पद्धतीद्वारे निर्धारित एकूण प्रथिनांचे प्रमाण (2.2 ± 0.2) mg/ml आहे, अल्फा-2 इंटरफेरॉनची जैविक क्रिया (2.1 ± 0.5) 107 IU/ml आहे, औषधाची विशिष्ट क्रिया (9.7 ± 0.5) 106 IU/mg आहे. या टप्प्यावर अल्फा-2 इंटरफेरॉनची एकूण सामग्री (1.5±0.5)1010 IU आहे.

स्फेरोसेल qae सॉर्बेंट 0.15 L च्या प्रमाणात जलीय निलंबनाच्या रूपात स्तंभात लोड केले गेले आणि 0.15 L/h दराने 0.5 L 2 M सोडियम क्लोराईड द्रावणाने, 1.5 L डिस्टिल्ड वॉटर आणि 1.00t 1-80t क्षार द्रावणाने धुतले. 0, pH मीटरसह स्तंभाच्या आउटलेटवर बफर सोल्यूशनचे pH नियंत्रित करणे.

अल्फा-2 इंटरफेरॉन असलेले 0.7 l प्रोटीन द्रावण 0.15 l Spherocell-QAE सॉर्बेंट कॉलमवर 0.2 l/h दराने लागू केले गेले. स्तंभ 0.05 एम ट्रिस-एसीटेट बफर सोल्यूशन (पीएच 8.0) सह 0.1 एल च्या व्हॉल्यूमसह धुतले गेले, त्यानंतर 0.05 एम NaCl च्या व्यतिरिक्त त्याच बफर सोल्यूशनच्या 1.0 एल सह अशुद्धता प्रथिने धुतले गेले. इंटरफेरॉन pH 5.0 वर 0.1 M सोडियम एसीटेट बफर सोल्यूशनच्या 0.8 l सह उत्सर्जित होते. संग्राहक वापरून संकलित केलेल्या अपूर्णांकांमध्ये अल्फा -2 इंटरफेरॉनची सामग्री एन्झाइम इम्युनोसेद्वारे निर्धारित केली गेली. प्रथिने एकाग्रता (0.35±0.05) mg/ml होती, अल्फा-2 इंटरफेरॉनची जैविक क्रिया (1.7±0.2) 107 IU/ml होती. औषधाची विशिष्ट क्रिया 5.5107 IU/mg प्रोटीन आहे. एल्युएटमध्ये 1.20 x 1010 IU होते. या टप्प्यावर जैविक क्रियाकलापांचे उत्पन्न 82.5% आहे.

परिणामी द्रावण pH (5.0±0.1) मध्ये 50% ऍसिटिक ऍसिडसह समायोजित केले गेले आणि 0.05 M सोडियम एसीटेट बफरसह पातळ केले गेले. (5±2)C तापमानात विशिष्ट विद्युत चालकता (0.29±0.02) mS/cm होती. अशाप्रकारे तयार केलेले प्रथिने द्रावण स्फेरोसेल एलपी-एम सॉर्बेंट असलेल्या स्तंभावर ०.१ लीटर/तास दराने लागू केले गेले, वरील बफर द्रावणाच्या ०.३ लीटरने धुतले गेले आणि नंतर इंटरफेरॉन एका रेखीय सोडियम क्लोराईड एकाग्रता ग्रेडियंटच्या सहाय्याने तयार केले गेले आणि अल्ट्राग्रेड थिफ्राक्शन संग्राहक संग्राहक मिश्रणाचा वापर करून तयार केले गेले. एकूण प्रथिने आणि अल्फा-2 इंटरफेरॉन मोजले गेले. एकत्रित अपूर्णांकांमध्ये प्रथिने एकाग्रता (0.45±0.02) mg/ml. द्रावणाची मात्रा 0.1 ली आहे. अल्फा-2 इंटरफेरॉनची एकूण सामग्री (8.6±0.2) 109 IU. विशिष्ट क्रियाकलाप - e (7.5 ± 0.2) 107 IU / mg. या टप्प्यावर उत्पन्न 73% आहे.

परिणामी 3 0.1 एल सोल्यूशन एमिकॉन YM-3 मेम्ब्रेन वापरून अल्ट्राफिल्ट्रेशन सेलसह (5.0±0.2) मिली मध्ये केंद्रित केले गेले. अशा प्रकारे तयार केलेला नमुना 0.025 l/h दराने फॉस्फेट-बफरयुक्त सलाईनसह समतोल असलेल्या सेफाडेक्स G-100 सॉर्बेंट स्तंभावर लागू करण्यात आला. अपूर्णांकांची मात्रा 10.0 मिली आहे. क्रोमॅटोग्राफीनंतर मिळालेल्या अपूर्णांकांची अल्फा-2 इंटरफेरॉनच्या सामग्रीसाठी एन्झाइम इम्युनोएसेद्वारे आणि अल्फा-2 इंटरफेरॉनचे मुख्य शिखर असलेले अपूर्णांक एकत्र करून चाचणी केली गेली. परिणामी द्रावणाची मात्रा 30.2 मिली. लोरी पद्धतीने (०.९०±०.०२) मिग्रॅ/मिली निर्धारित केलेल्या एकूण प्रथिनांचे प्रमाण. द्रावणातील अल्फा-2 इंटरफेरॉनची एकूण सामग्री 5.5109 IU आहे. परिणामी औषध अल्फा-2 इंटरफेरॉन 2.3108 IU/mg ची विशिष्ट क्रिया. या टप्प्यावर अल्फा-2 इंटरफेरॉनचे उत्पादन 90.2% आहे. परिणामी उत्पादन निर्जंतुकीकरण आणि पॅकेज केले गेले. औषधाचे एकूण उत्पादन 35.8% आहे, शुध्दीकरण टप्प्यावर 51% सह.

मोठ्या प्रमाणात IFN मिळविण्यासाठी, पिल्ले भ्रूण पेशी किंवा विशिष्ट प्रकारच्या विषाणूने संक्रमित मानवी रक्त ल्युकोसाइट्सच्या सहा दिवसांच्या सिंगल-लेयर कल्चरचा वापर केला जातो. दुसऱ्या शब्दांत, IFN प्राप्त करण्यासाठी, एक विशिष्ट व्हायरस-सेल प्रणाली तयार केली जाते.

IFN च्या जैवसंश्लेषणासाठी जबाबदार जनुक मानवी पेशीपासून वेगळे केले गेले आहे. एक्सोजेनस मानवी IFN रीकॉम्बीनंट डीएनए तंत्रज्ञान वापरून प्राप्त केले जाते. IFN चे cDNA वेगळे करण्याची प्रक्रिया खालीलप्रमाणे आहे:

1) mRNA मानवी ल्युकोसाइट्सपासून वेगळे केले जाते, ते आकारानुसार विभक्त केले जाते, उलट प्रतिलेखन केले जाते आणि ते सुधारित प्लाझमिडच्या साइटवर घातले जाते.

2) परिणामी उत्पादन E. coli मध्ये रूपांतरित होते; परिणामी क्लोन ओळखल्या गेलेल्या गटांमध्ये विभागले जातात.

3) क्लोनचा प्रत्येक गट IFN - mRNA सह संकरित.

4) cDNA आणि xRNA असलेल्या परिणामी संकरांमधून, mRNA वेगळे केले जाते, त्याचे भाषांतर प्रथिने संश्लेषण प्रणालीमध्ये केले जाते.

5) अनुवादाच्या परिणामी प्रत्येक मिश्रणाची इंटरफेरॉन अँटीव्हायरल क्रियाकलाप निश्चित करा. इंटरफेरॉन क्रियाकलाप दर्शविलेल्या गटांमध्ये IFN - mRNA सह संकरित सीडीएनए क्लोन असतो; पूर्ण लांबीचा IFN - मानवी cDNA असलेला क्लोन पुन्हा ओळखा.

तत्सम माहिती.