У літературі описано багато методів кількісної оцінки фагоцитозу. Обсяг цієї книги не дозволяє докладно викласти всі з них, тому ми обмежимося лише описом деяких.

Матеріали та обладнання

Для роботи необхідно мати:

Цитратдекстрозний антикоагулянт: 8 г лимонної кислоти. 22 г тризаміщеного цитрату натрію (двоводного), 24,5 г глюкози розчиняють у 1 л води;

Розчин декстрозодекстрану: 4,5 г NaCl, 25 г глюкози, 30 г декстрану (відн. мовляв. маса 500 000) в 1 л;

Розчин хлористого амонію: 9 частин 0,83% хлористого амонію, 1 частина трис-НСl-буфера з рН 7,2 (20,6 г/л);

Суміш фіколл - візотраст: 9 г фіколу, 20 мл ізотрасту, 100 мл бідистильованої Н 2 0, щільність 1,077;

Субстрат для β-глюкуронідази: 31,5 мг паранітрофеніл-β-глюкуроніду та 100 мкм тритон X 100 розчиняють у 100 мл 0,05 М натрій-ацетатного буфера з рН 5;

Реагенти для визначення дефіциту мієлопероксидази: фіксатор (10 мл 37% формальдегіду з 90 мл абсолютного етанолу), субстратний розчин (100 мл 30% ЕДТА, 0,3 г хлористого бензидину, 0,038 г ZnS0 4 x7H 2 0, 0 г CH 3 C00Nax3H 2 0, 0,7 мл 3% Н 2 0 2); підводять рН 1,0 М NaOH до 6,0.

Комерційні реагенти:

ФСБ, розчин Хенкса та середовище Голка-MEM (Держ. інститут імунних препаратів та поживних середовищ, Берлін-Вайсензеї, НДР);

Гепарин (5000 ОД/мг) (Gedeon Richter, Угорщина);

Сироватка ембріонів корів (Flow Laboratories, США, можна іншої фірми);

Візотраст (VEB Fahlberg List, Magdeburg, НДР);

Інфуколл (VEB Serumwerk Bernburg, НДР);

Декстран, Фікол (Pharmacia, Швеція);

Колоїдне вугілля Сl1/143a (Wagner, Pelikanwerke, ФРН);

Діізодецилфталат, парадіоксан (Coleman, Matheson and Bell, США);

Тритон X 100 (Serva, ФРН, можна іншої фірми);

Олійний червоний О (Allied chemical corp., Morristown, NY, США);

Іаранітрофеніл-β-глюкуронід (Sigma, США);

Сафранін О (Fischer Scientific Lab., Chicago, США);

Полістиролові намисто, трубочки (Nunc, Данія);

Сітка F 905 (VEB Orvo Wolfen, НДР).

Одержання фагоцитів

Необхідні відомості про виділення гранулоцитів людини можна отримати у розділі "Розподіл клітин імунної системи"; отримання перитонеальних макрофагів див. у розділах "Культивування макрофагів і моноцитів" та "Виділення макрофагів із суспензії сплеїоцитів". Детально це питання розглядається у низці робіт.

Крім того, слід ще згадати про наступні методи:

8 мл крові змішують із розчином декстранглюкози. Потім додають 6% розчин декстрану 75 0,15 М NaCl (5 мл). Суміш залишають на 45-50 хв за кімнатної температури для седиментації еритроцитів. Відсмоктують плазму. Залишкові еритроцити лізують додаванням 0,83% хлористого амонію (35 мл до 15 мл плазми). Центрифугують 10 хвилин при 80g, осад суспендують в охолодженому до 0°С 0,15 М NaCl. Об'єднують кілька опадів та центрифугують 10 хвилин при 800 g. Клітини краще зберігати на льоду в 0,15 М NaCl (це середовище більше підходить, ніж забуферені середовища з бівалентними катіонами, що спричиняють злипання клітин);

Якщо об'єктом фагоцитозу є дріжджі, можна опустити стадію обробки хлористим амонієм, оскільки еритроцити не заважають процесу. Мононуклеари можна отримувати наступним чином: гепаринізовану кров змішують з 1/3 об'єму середовища Голка, що містить 15% глюкози, нашаровують на шар суміші фікол - візотраст і центрифугують 20 хв при 400 g. Фракцію мононуклеарів відсмоктують пастерівською піпеткою, двічі відмивають ФСБ і готують суспензію на середовищі Голка (1х107 клітин/мл).

Приготування частинок для фагоцитозу

Найчастіше використовують живі культури Staphylococcus aureus (SG 511 або 502 A), Staphylococcus epididermidis SG 475, E. coli та інші ентеробактерії, листерії, коринебактерії, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae. Мікроорганізми вирощують 24 години (при необхідності 48 год) на твердих та рідких живильних середовищах. Зібрану біомасу тричі відмивають 0,15 М NaCl. Занадто густу завись вимірюють при 640 нм, визначають концентрацію по калібрувальної кривої.

Концентрацію мікроорганізмів визначають також методами розсіву на щільні живильні середовища; у деяких випадках підрахунок мікроорганізмів можна проводити у лічильних камерах.

При роботі з живими бактеріальними культурами слід звертати увагу на те, щоб завжди використовувалися культури на одній і тій же стадії. Додавання 0,01% бичачий сироватковий альбумін сприяє виживаності мікроорганізмів. Виготовлена ​​суспензія залишається стабільною протягом 1-2 год.

Вбиті культури мікроорганізмів зазвичай отримують нагріванням протягом 30 хвилин при 80 ° С або обробкою парою. Вбиті мікроби тричі відмивають 0,15 М NaCl, ресуспендують та визначають концентрацію суспензії.

Приготування пекарських дріжджів: 0,5 г пекарських дріжджів суспендують 0,15 М NaCl і поміщають на 30 хв в киплячу водяну баню. Фільтрують через ватно-марлевий фільтр. При використанні живих дріжджів свіжі клітини (4-5-денна культура) тричі відмивають серед голки з додаванням 1,0% глюкози. Зазвичай використовують суспензію клітин 108 і 109 клітин/мл. Дріжджі використовують як тест-частин при виявленні дефектів компонента С5.

Використання суспензії частинок полістиролу: готують 10% водну суспензію частинок полістиролу діаметром 1,091 мкм. Розводять її у співвідношенні 1 + 1 0,2% розчином БСА 0,15 М NaCl, центрифугують. При довжині хвилі 253 нм суспензія полістиролу 1 мкг/мл дає поглинання 1,17 х10-3.

Застосування суспензії ліпополісахарид - олійний червоний Про в мінеральній олії: 2 г олійного червоного розтирають в 50 мл діізодецилфталату (або вазелінове масло) у фарфоровій ступці. Центрифугують 20 хв при 500 g. Додають 10 мкг надосадової фракції до 10 мл діоксину, вимірюють оптичну густину на довжині хвилі 525 ім. Чинник перерахунку дорівнює 0,92. На другому етапі 40 мг ліпополісахарид (Е. coli 0,26 В6 та ін) розчиняють у 3 мл 0,15 М NaCl. Потім додають до цієї суміші 1 мл олійного розчину червоного Про в диизодецилсульфате, суспендують суміш протягом 90 секунд. Суспензію використовують негайно, її можна заморожувати.

Для постановки реакції фагоцитозу як тестчастин можна використовувати формалінізовані еритроцити.

Фагоцитоз бактерій, бактерицидність

Експеримент із суспензією живих бактерій: зазвичай використовують співвідношення 3-10 мікробів/фагоцит. У загальному обсязі 2 мл змішують 1x10 6 фагацитів з 3х106 - 1х107 мікробів. Насправді до 1 мл суспензії фагоцитів, якого було додано 8 ME гепарину, доливають 1 мл суспензії бактерій. Час взаємодії становить зазвичай 30 хв, у деяких випадках він більший. Після інкубації відбирають 0,5 мл суміші, додають 1,5 мл 0,1% розчину желатину в розчині Хенкса, охолодженого до 0°З центрифугують 3-4 хв при 300 g. З осаду готують мазки, які забарвлюють за Паппенгеймом. Переглядають 200 клітин (по можливості тричі). Обчислюють відсоток фагоцитозу. За кількістю бактерій, що містяться в клітинах, розраховують індекс активності фагоцитозу: число фагоцитованих бактерій множать на відсоток фагоцитуючих клітин; Інтенсивність фагоцитозу виражають числами від 1 до 4.

Ступінь 1: фагоцитовано I-4 бактерії
Ступінь 2: фагоцитовано 5-7 бактерій
Ступінь 3: фагоцитовано 8-10 бактерій
Ступінь 4: фагоцитовано понад 10 бактерій на клітину

При визначенні рівня фагоцитозу живих мікробів окремо перевіряють осад клітин та надосадову фракцію. Кількість живих мікробів визначають розсівання на щільні живильні середовища 0,1 мл досліджуваних фракцій. Інкубують 24 (48) год. При розрахунку бактерицидності виходять з того, що одна колонія, що утворилася, відповідає одному живому мікробу.

Для спрямованого вивчення бактерицидності досліджують кров пацієнтів та здорових донорів з додаванням розчину антибіотиків (по 5000 ОД пеніциліну та стрептоміцину/мл) та без нього, а також проводять бактеріальний контроль. Склад проби: 0,3 мл розчину Хенкса+ 0,1 мл нормальної сироватки, одержаної з крові, взятої у 5 донорів, +0,5 мл суспензії лейкоцитів (10 7 клітин/мл) +0,1 мл суспензії мікробів (10 6 мікробів/мл). Розчин антибіотиків вносять по 0,02 мл пробу. Інкубують проби при 37 °С і визначають кількість мікробів через 20 хвилин, 1,5 години та 3 години. Для цього відбирають по 0,1 мл з кожної проби, розводять відібрані аліквоти розчином Хенкса в 10, 100 та 1000 разів і наносять на підігрітий агар. Іноді, особливо якщо були додані антибіотики, для точного підрахунку мікробів готують проміжні розведення (наприклад, 0,2 мл проби змішують з 5 мл розчину Хенкса, центрифугують 5 хвилин при 450 g, розчиняють осад в 1,9 мл ФСБ, наносять на агар) . Якщо хочуть скоротити тривалість бактеріологічного дослідження, можна визначати мікроби, що знаходяться всередині клітини, за флюоресценцією за допомогою фарбування акридиновим жовтим.

Фагоцитоз пекарських дріжджів: готують суспензію 10 9 клітин/мл 0,15 М NaCl. Змішують 0,1 мл суспензії з 0,1 мл плазми хворого, інкубують 30 хв при 37 °С, додають 0,2 мл (10 6) ПМЯЛ, інкубують 30 хв. Відбирають аліквоти через інтервали від 5 до 30 хв. Прораховують 100 ПМЯЛ і визначають кількість захоплених дріжджових частинок на клітину. Відома наступна модифікація: до 50 мкл сироватки морської свинки додають 50 мкл досліджуваної сироватки (попередньо її розводять у співвідношенні 1 + 1 середовищем Голка з глюкозою), додають 50-200 мкл суспензії лейкоцитів (10 7 Голка з глюкозою та інкубують 30 хв при 37 °С. Потім додають 50 мкл суспензії дріжджів (10 8 клітин/мл) перемішують інкубують 40 хвилин при 37 °С. Вносять 50 мкл L-75 Sе-метіоніну (загальна активність 100 кБк) перемішують та інкубують 1 годину при 37 °С. Осідають клітини центрифугуванням протягом 5 хвилин при 1000 g, відмивають їх двічі ФСБ, вимірюють радіоактивність на гамі-лічильнику. Відсоток фагоцитованих дріжджів обчислюють за такою формулою:

Фагоцитоз з використанням олійного розчину червоного в мінеральній олії: 0,2 мл суспензії частинок змішують з 0,8 мл клітинної суспензії, попередньо нагрітої до 37°С. Через 5 хвилин інкубації додають 6 мл охолодженого до 0°З 0,15 М розчину NaCl, що містить 126 мкг/кл N-етилмалеіміду (для припинення захоплення частинок). Центрифугують 10 хвилин при 250 g. Надосадову фракцію відкидають, осад ресуспендують у розчині NaCl і N-етилмалеіміду (див. вище), двічі відмивають клітини. Лізують клітини ультразвуком, відбувається вивільнення олійного червоного. Додають 1 мл діоксану. Центрифугують 15 хвилин при 500 g, вимірюють оптичну щільність хвилі 525 нм проти чистого діоксану. Ступінь фагоцитозу (ІФ) визначають як кількість мінеральної олії (мг), що поглинається за хвилину 10 7 клітинами. Для підрахунку можна використати таку формулу:

Дослідження фагоцитозу в моношарі макрофагів:

1. Фаза: в стерильні полістирольні пробірки вносять по 2 мл суспензії клітин (200 000 клітин/мл). Інокулюють 5 годин при 37°З потім відмивають середовищем Голка. Вносять у пробірки 2 мл культурального середовища з 10% інактивованої (30 хв, 56 °С) сироватки ембріонів корів, інкубують при 37 °С.

2. Фаза А: вносять суспензію мікробів (3-10/макрофаг), інкубують 30-60 хв при 37 °С, 6 разів обполіскують пробірки порціями середовища по 3 мл для видалення нефагоцитованих мікробів. Негайно фіксують препарат сумішшю 1 частини крижаної оцтової кислоти з 3 частин метанолу. Фарбують препарат по May - Griinwald, підраховують клітини.

Фаза Б: Визначення внутрішньоклітинних живих бактерій. Послідовність операцій та ж, що у фазі А до етапу фіксації. Після відмивання ретельно видаляють усі сліди середовища. Лізують клітини, для чого вносять 2 мл 0,01% стерильного розчину бичачий сироватковий альбумін (4°С), багаторазово струшують. Більшість клітин лізується через 20 хвилин. Вивільнені бактерії визначають шляхом розсіву на щільні живильні середовища.

Фагоцитоз еритроцитів: змішують 4x10 7 фагоцитів з 5x10 7 тест-еритроцитів у 5 мл ФСБ. Переносять 2 мл суміші охолоджений до 0°С 5 мМ фосфатний буфер і центрифугують. Вимірюють оптичну густину надосадової фракції при довжині хвилі 420 нм. Ступінь фагоцитозу визначають за зниженням вмісту гемоглобіну в безклітинній фазі за допомогою калібрувальних кривих.

Спрощений метод визначення кліренсу

Приклад визначення кліренсу на щурах: тваринам вводять внутрішньочеревно по 5х10 7 мікробів на 100 г ваги (0,1 мл / / 100 г). Оптимальна доза може коливатися від 106 до 108 на 100 г ваги. З інтервалом 1-2 години з кожної групи експериментальних тварин забивають по 3 особи; загальна тривалість експерименту 16 год. Стерильно беруть 0,5 мл крові із серця, 1 мл перитонеальної рідини, виділяють легені, печінку, селезінку та нирки. З тканини органів вирізають циліндри пастерівською піпеткою. Визначають кількість мікроорганізмів шляхом культивування на рідких та твердих живильних середовищах.

Приклад визначення кліренсу на мишах: використовують колоїдне вугілля або мічені 51 [Сг] еритроцити барана. Мишам (щонайменше 5 особин на досвід) внутрішньовенно вводять по 0,01 мл суспензії вугілля з розрахунку 16 мг на 100 г ваги. Протягом 15 хвилин з інтервалом 2 хвилини відбирають по 0,025 мл крові з ретроорбітального простору. Відібрані 0,025 мл крові вносять у 2,0 мл 0,1% розчину Na 2 C0 3 . Після гемолізу концентрацію вугілля визначають колориметрично на довжині хвилі 675 нм за допомогою кривих калібрувань.

t-час у хвилинах, С – концентрація вуглецю в пробі.

Кориговане значення фагоцитозу:

Функціональний скринінг фагоцитів

Визначення дегрануляції (вимірювання активності (β-глюкуропідази): 10 7 лейкоцитів суспендують в 0,8 мл ФСБ у пластикових пробірках, струшують 5 хвилин при 37 ° С. Додають 0,2 мл сенсибілізованих ЛПС, флюорохромнрованих0 хв на льоду, центрифугують 10 хвилин при 250 g. Перевіряють активність ферменту в надосадовій фракції і додають 2 мл 0,1 М NaOH, вимірюють оптичну щільність на хвилі. 410 нм.

Розрахунок:

(ОП 410 х20)/(1,84х18) = число нмолей речовини, що вивільняються за 1 годину 10 7 лейкоцитами, тобто ступінь дегрануляції виражають в наномолях паранітрофеніл-β-глюкуроніду.

Метод визначення дефектів мієлопероксидази: найкращі результати дає біохімічне визначення Н202, що вказує на зміни метаболізму в процесі фагоцитозу. Для практичних цілей дуже важливо, що активація гексозо-монофосфатного шунту, відновлення тетразолієвого нітроєнного та зв'язування екзогенного йоду з білками ПМЯЛ корелюють з утворенням Н202. Звичайний мазок крові фіксують 30 секунд сумішшю алкоголь-формалін. Відмивають дистильованою водою і протягом 30 сек проводять забарвлення на пероксидазу. У клітинах, що містять пероксидазу, виявляються включення, пофарбовані в темно-блакитний колір.

Проба відновлення тетразолиевого нітросинього (ТНС). ТНС відновлюється нормальними ПМЯЛ до формазану. Змішують з 0,1 мл крові 0,1 мл 0,1% розчину ТНС 0,15 М NaCl, інкубують 20 хвилин при 37 °С, ще раз ретельно перемішують. Включення формазану до клітин визначають мікроскопією. Результат виражають у відсотках формазан-позитивних клітин.

Дещо складніший наступний метод: 1 краплю крові пацієнта наносять на покривне скло. Інкубують 20 хвилин при 37°С у вологій камері, потім обережно відмивають скло стерильним 0,15 М NaCl. Кладають покривне скло на предметне, куди було нанесено 1 крапля ТНС-середовища (0,5 мл сироватки + 0,3 мл стерильного 0,15 М NaCl + 0,6 мл ТНС, див. раніше). Інкубують 30 хвилин у вологій камері при 37 С, видаляють покривне скло і висушують на повітрі. Протягом 60 секунд фіксують абсолютним метанолом та відмивають дистильованою водою. Фарбують протягом 5 хв сафраніном (1 г сафраніну + 100 мл дистильованої води + 40 мл гліцерину), відмивають. Формазан-позитивні клітини відрізняються великими розмірами, вони нагадують бластні клітини та містять блакитні гранули. Зазвичай у препараті визначається близько 30% формазан-позитивних клітин.

Наведені вище методи оцінки фагоцитозу є узагальнення дуже великої кількості публікацій. Детальнішу інформацію з цих питань можна знайти у відповідних роботах.

Фагоцитоз (від грец. phago – пожираю і cytos – клітина) є процесом поглинання та перетравлення антигенних речовин, у тому числі мікроорганізмів, клітинами мезодермального походження, названими фагоцитами. І. І. Мечников розділив фагоцити на макрофаги та мікрофаги. В даний час макро-і мікрофаги об'єднані в єдину систему макрофагів (СМФ). До цієї системи відносять:

• тканинні макрофаги - епітеліоїдні клітини,
• зірчасті ретикулоендотеліоцити (клітини Купфера),
• альвеолярні та перитонеальні макрофаги, що знаходяться в альвеолах та порожнини очеревини,
• білі відросткові епідермоцити шкіри (клітини Лангерганса) та ін.

До мікрофаг відносяться:

• нейтрофіли,
• еозинофіли,
• базофілі.

Функції макрофагівнадзвичайно різноманітні. Вони перші реагують на чужорідну речовину, будучи спеціалізованими клітинами, що поглинають і знищують в організмі чужорідні субстанції (кліти, що відмирають, ракові клітини, бактерії, віруси та інші мікроорганізми, антигени, неметаболізовані неорганічні речовини). Крім того, макрофаги виробляють багато біологічно активних речовин – ферменти (у тому числі лізоцим, пероксидазу, естеразу), білки комплементу, імуномодулятори типу інтерлейкінів. Наявність на поверхні макрофагів рецепторів до імуноглобулінів (Am) та комплементу, а також система медіаторів забезпечує їхню взаємодію з Т- та В-лімфоцитами. При цьому макрофаги активують захисні функції Т-лімфоцитів. Завдяки наявності рецепторів до комплементу та Am, а також Аг системи гістосумісності (HLA) макрофаги беруть участь у зв'язуванні та розпізнаванні антигенів. Таким чином, фагоцитам притаманні три функції:

• захисна, пов'язана з очищенням організму від інфекційних агентів, продуктів розпаду тканин тощо;
• що представляє, що полягає у презентації лімфоцитів антигенних епітолів на мембрані фагоциту;
• секреторна, пов'язана з секрецією лізосомних ферментів та інших біологічно активних речовин – цитокінів, які відіграють важливу роль імуногенезі.

Розрізняють такі послідовно протікаючі стадії фагоцитозу.

• Хемотаксис- Цілеспрямоване пересування фагоцитів у напрямку хімічного градієнта хемоаттрактантів у навколишньому середовищі. Здатність до хемотаксису пов'язана з наявністю на мембрані специфічних рецепторів для хемоаттрактантів (об'єктів фагоцитозу), якими можуть виступати бактерії, продукти деградації тканин організму та ін.
• Адгезія(прикріплення) також опосередкована відповідними рецепторами, але може протікати відповідно до законів неспецифічної фізико-хімічної взаємодії. Відбувається адсорбція частинок поверхні макрофага.
• Ендоцитоз(Захоплення) - відбувається інвагінація клітинної мембрани, захоплення чужорідної частки та занурення її в протоплазму. Внаслідок ендоцитозу утворюється фагоцитарна вакуоль – фагосома(Т. Е. Бульбашка в протоплазмі навколо поглиненої частинки).
• Внутрішньоклітинне перетравлення– починається в міру поглинання об'єктів, що фагоцитуються. Відбувається злиття фагосоми з лізосомою фагоциту, що містить десятки ферментів, та утворення фаголізосоми (деструкція) захопленої частинки ферментами. При поглинанні частинки, що належить самому організму (наприклад, клітина, що загинула або її частини, власні білки), відбувається розщеплення її ферментами фаголізосоми до неантигенних речовин (амінокислоти, жирні кислоти, нуклеотиди, моносахара). Якщо поглинається чужорідна частка, то ферменти фаголізосоми не в змозі розщепити речовину до неантигенних компонентів. У таких випадках фаголізосома з частиною антигену, що залишилася і зберегла чужорідність, передається макрофагом Т- і В-лімфоцитам, тобто включається специфічна ланка імунітету.

Секреторна функціяполягає у секреції фагоцитами біологічно активних речовин – цитокінів – це інтерлейкін-1 та інтерлейкін-2, які є клітинними медіаторами, що надають регулюючу дію на проліферацію, диференціацію та функції фагоцитів, лімфоцитів, лімфобластів та інших клітин. Макрофаги продукують та секретують такі важливі регуляторні фактори, як простагландини, лейкотрієни, циклічні нуклеотиди з широким спектром біологічної активності. Крім того, макрофаги синтезують і секретують ряд продуктів, що мають антибактеріальну, антивірусну та цитотоксичну активність (кисневі радикали О2-Н2О2, лізоцим, інтерферон та ін.).

Фагоцитоз посилюється антитілами-опсонінами, оскільки зв'язаний або антиген легше адсорбується на поверхні фагоциту, внаслідок наявності у останнього рецепторів до цих антитіл. Таке посилення фагоцитозу антитілами названо опсонізацією, тобто. підготовкою мікроорганізмів до захоплення фагоцитами Фагоцитоз опсонізованих антигенів називають імунним.

Для характеристики активності фагоцитозу введено фагоцитарний показник.Для визначення його підраховують під мікроскопом кількість бактерій, поглинених одним фагоцитом. Користуються також опсонофагоцитарним індексом, Що представляє відношення фагоцитарних показників, отриманих з імунною та не імунною сироваткою. Фагоцитарний показник та опсонофагоцитарний індекс використовують у клінічній імунології для оцінки стану імунітету та імунного статусу.

Фагоцитоз відіграє велику роль у протибактеріальному, протигрибковому та противірусному захисті, підтримці резистентності організму до чужорідних речовин. Фагоцити також надають активуючу та супресивну дію на лімфоцити, беруть участь у реанімації імунологічної толерантності, антиінфекційного, трансплантаційного та протипухлинного імунітету, деяких форм алергії (ГЗТ).

Імунітет- це спосіб захисту організму від живих тіл та речовин, що несуть на собі ознаки генетично чужорідної інформації.

Імунітет- цілісна система біологічних механізмів самозахисту організму.

За допомогою імунітету розпізнається та знищується все чужорідне. Чужорідне – не своє, генетичні поділу між речовинами.

Завдання - підтримка структурної цілісності організму. Забезпечує

1. Збереження гомеостазу
2. Збереження функціональної структурної цілісності організму
3. Збереження біологічної особливості організму.
4. Знищується клітини, які генетично відрізняються від клітин організму.

Імунологія- наука про організми, молекули імунної системи. Вивчає структурну функцію імунітету та реакцію імунітету на чужорідні антитіла. Вивчає послідовність імунної відповіді та способи впливу на неї.

Розвиток імунології

Основоположник – праці Мечникова 1883 рік. Створив фагоцитарну теорію імунітету, 1897 - Ерліх створив гуморальну теорію імунітету, 1908 - отримання ноб. Премії за теорію.

Емпірично було запропоновано вакцини (до цього звук).

Дженер - вакцина проти коров'ячі віспи

1974 - віспа ліквідована.

Вакцина Пастера – вакцина проти сказу.

Видовий імунітет.

Несприйнятливість обумовлена ​​вродженими біологічними особливостями організму.

Відрізняється властивостями

1. Видова ознака (тварини не хворіють на хвороби людей)

2. Генетично детермінований – у спадок

3. Неспецифічний – не має виборчого спрямування, а проявляється проти різних інфекцій

4. стійкий, але не абсолютний

Механізми видового імунітету.

Зовнішні бар'єривидового імунітету.

1. Шкіра є механічним бар'єром по дорозі інфекційних агентів - патогенів. Має бактерицидну властивість, бо секрети потових і сальних залоз містять пероксид водню, а також сечовину, ненасичені жирні кислоти, жовчні пігменти аміак.
2. Слизова оболонка. Секрет слизових вимиває патогенні з поверхні. Містить лізоцим, секреторні антитіла, інгібітори бактерій та вірусів.
3. Антатомо-фізіологічні особливості організму. Вії циліндричного епітелію верхніх дих. Шляхів. Затримують патогени, а також блювання, кашель, чхання – це фізіологічні акти. Вії, брови очей запобігають попаданню патогенів

Внутрішні бар'єри

1. Нормальна мікрофлора організму, що заселяє слизову оболонку, шкіру, різні біотопи. Є антагоністом патогенних та умовно патогенних організмів. Має імунізуючу дію. Завдяки чому індукує утворення антитіл. Синтез вітамінів – К, B.
2. Мембрани клітин
3. Функцію гістогематичних бар'єрів. Здійснюють захист мозку, репродуктивну систему, очі.
4. Лімфоїдна система. Входить система лімфоїдних вузлів та утворень
5. Лихоманка – збільшення температури посилює обмінні процеси, кровотік, активність ферментів, макрофагів, інгібує розмноження вірусів та бактерій.
6. Запалення виникає у разі пошкодження тканин. У осередок запалення спрямовуються фагоцити. Активуються біологічно активні речовини (БАВ) – серототнін та гістомін, які збільшують проникність судин, що призводить до розвитку набряку, почервоніння, накопичуються речовини – антитіла та комплімент, які забезпечують знищення патогену.
7. Функція системи виділення. Від зруйнованих патогенів позбавляється через ШКТ, дихальні шляхи та сечовидільну систему.

Клітинні механізми видового імунітету.

Фагоцитоз та функції натуральних кілерів NK клітин.

Фагоцитоз- процес захоплення та знищення чужорідних антигенів фагоцитами.

У фагоцитозі беруть участь клітини, які поділяються на такі види – мікрофаги. Це поліморфноядерні нейтрофіли периферичної крові. Макрофаги – моноцити, фагові макрофаги, які отримали назву гістіоцитів. Клітини Купера печінки, остеокласти – кісткової тканини, а також клітини мікроглії нервової тканини. Макро та мікрофаги на мембранах мають багато рецепторів, ферментів та виражений лізосомальний апарат.

Стадії фагоцитозу

1. Рух фагоциту до об'єкта здійснюється хемотаксисом. Це спрямований рух клітини до певних хім. Групам, певним рецепторам.
2. Прилипання об'єкта до фагоцитів, що позначається як адгезія та абсорбція, які відбуваються за рахунок взаємодії з рецепторами
3. Поглинання фагоцитом об'єкта. На місці прикріплення клітинна стінка інвагінує. Об'єкт занурюється у фагоцит. Утворюється фагосома, яка зливається з лізосомою та утворюється комплекс фаголізосому.
4. Результат різний. Варіанти результату 1. Перетравлення об'єкта. 2. Розмноження об'єкта у фагоциті 3. Виштовхування об'єкта з фагоциту

Механізми перетравлення

1. О-залежний. Фагоцит активно поглинає кисень, відбувається окислювальний вибух, утворюються активні форми кисню, такі як гідроксиліон, супероксиданіон, пероксид водню, який згубно діє на бактерію.
2. Кисень незалежний. Здійснюється за рахунок катіонних білків та лізосомальних ферментів.

Види фагоцитозу

1. Завершений - об'єкт перетравлюється
2. Незавершений - бактерії не перетравлюються

Механізми незавершеного фагоцитозу.

1. Бактерії можуть бути стійкими до дії лізосомальних ферментів, наприклад гонококи.
2. Мікроорганізми можуть виходити з фагоциту і розмножуватися, що притаманно рикетсій.
3. Бактерії можуть перешкоджати утворенню фаголізосоми – туберкульозна паличка.

Оцінка фагоцитозу.

Для оцінки фагоцитарної активності використовують такі показники

-Відсоток фагоцитозу (ПФ)- кількість фагоцитів зі 100, що виявляють функціональну активність.

У нормі проти стафілаккоків або будь-яких корпускул - 60-80 %

-Індекс фагоцитозу (ІФ)-Кількість бактерій, захоплених одним фагоцитом зі 100. Приблизно 6-8 бактерій захоплює 1 фагоцит.

Активність фагоцитів може збільшуватися під впливом цитокінів, компліментів, антитіл, серед яких опсоніни. Це антитіла, які готують бактерію фагоцитозу. У їх присутності фагоцитоз іде активніше. Синтезуються опсоніни в імунізованому організмі.

Наявність опсонінів визначається за опсоно-фагоцитарним індексом (ОФІ)

ОФІ = ПФімунної сироватки / ФП нормальної сироватки. Якщо > 1, то є опсонини. У хворого на бруцельоз формуються опсоніни. Антиєтла готують фагоцити до захоплення бруцел. 80/20 = 4. Якщо< 1 человек болен.

Функції фагоцитів

1. Забезпечення фагоцитозу
2. Переробка антигенів
3. Презентація антигену клітин імунної системи та запуск наступної імунної реакції.
4. Секреція БАВ – біологічно активних речовин. Понад 5-. Цитокіни, компоненти комплементи, простогландини,

Натуральні кілери.

Це природні вбивці, що відносяться до лімфоцитів, що не володіють властивостями T і B лімфоцитів, надають цитотоксичну дію на клітини пухлин, які містять віруси. Мають особливий білок, який у присутності іонів кальцію швидко полімеризується, утворюються субодиниці, які вбудовуються в клітинну мембрану, формується канал, яким у клітину спрямовується вода. Клітина набухає, лопається, що позначається як цитоліз.

Гуморальні фактори видового імунітету

1. Комплімент – багатокомпонентна система білків сироватки крові, що забезпечує підтримку гомеостазу. Поєднує 9 компонентів-фракцій і позначається латинською З з індексом 1,2,3,4,5 і тд. В систему входять субкомпоненти C1R, C1S, C5A, C5B. Регуляторні білки, фактори, що беруть участь в активації компліменту - гаммаглобуліни, іони магнію та кальцію. Компоненти компліменту перебувають у неактивному стані й у прояви функціонального дії необхідна активація системи комплименты. Розрізняють такі шляхи активації -

1. Класичний
2. Альтернативний
3. Лектиновий.

Активація за класичним типом. Активація йде за типом каскаду, що посилюється.

1 молекула розпадається, активує 2 молекули тощо. Ініціюється комплексом антиген-антитіло, що взаємодіє з першою фракцією С1, яка розпадається на субкомпоненти. Взаємодіє з C4, яка взаємодія з С2, яка активує С3, яка розпадається на субкомпоненти С3А та С3Б, що призводять до активації С5, який розпадається на субкомпоненти С5а та С5б, активується С6 і тд до С9. Комплекс С6-С9 - мембранатакуючий комплекс, вбудовується в мембрану, формується канал, яким надходить вода і клітина лізується.

Активація за альтернативним типом.Запускається ЛПС та мікробними антигенами, які активують відразу С3 фракцію. Далі С5 і С9.

Активація по лектиновомутипу запускається монозв'язуючими білками, які з'єднуються із залишками монози на бактеріальних клітинах, активується протеаза, які розщеплюється 4йю фракцію компліменту. Потім С2,3 і тд С9. Через війну комплімент активується.

Комплімент у результаті активації виконує такі функції

1. Ліза клітини
2. Стимуляція фагоцитозу, наприклад, С5, фракція посилює хемотаксис.
3. Збільшення проникності судин, що забезпечується субкомпонентами
4. Посилюється процес запалення

До гуморальних факторів видового імунітету відноситься фермент лізоцим, який руйнує пептидоглікан клітинної стінки, тим самим спричиняє загибель бактерій, синтезується макрофагами та моноцитами. Міститься у великій кількості в крові, рідинах організму, багато в слині та слізній рідині

Білки гострої фази, наприклад, реактивний білок. Це велика білкова молекула з 5 однакових субодиниць – пентроксин. Має спорідненість із речовинами клітинної стінки бактерій. Забезпечує опсонізацію бактерій, активацію компліменту класичним шляхом

Ендогенні пептиди, які мають активність антибіотиків, здатні вбивати бактерій

Інтерферон, захисні білки сироватки крові, серед яких, крім білків гострої фази, розрізняють пропердин, бета-лізин, монозосвящувальні білки.

Сутність фагоцитозу можна описати буквально кількома словами. У цьому процесі особливі клітини-фагоцити «обчислюють», пожирають і перетравлюють шкідливі частки, які у організм, переважно інфекції . Мета явища полягає в тому, щоб захистити нас від потенційних патогенів, токсинів тощо. А як саме здійснюється механізм фагоцитозу? Він проходить у кілька етапів, про які буде детальніше розказано нижче.

Етапи фагоцитозу:

Хемотаксис

Шкідливий об'єкт проникає в організм, і він недовго залишається там непоміченим. Цей об'єкт, чи то бактерія, стороннє тіло чи щось інше, виділяє особливі речовини (хемоаттрактанти) і прямо контактує з кров'ю чи тканинами. Все це повідомляє організм про присутність всередині нього агресора.

Виникає каскад біохімічних реакцій. На першій стадії фагоцитозу опасисті клітини викидають у кров спеціальні сполуки, що викликають реакцію запалення. Початок запального процесу «пробуджує» від стану спокою макрофаги та інші клітини-фагоцити. Нейтрофіли, вловивши присутність хемоаттрактантів, швидко виходять із крові в тканини і поспішають мігрувати до запального вогнища.

Складно це описати, а ще складніше собі це уявити, але проникнення патогену в організм веде до запуску справжнього ефекту доміно, що включає сотні (!) Різних фізіологічних явищ, що проходять на клітинному та субклітинному рівнях. Стан імунної системи цьому етапі фагоцитозу можна порівняти зі станом потривоженого бджолиного вулика, що його численні жителі готуються атакувати кривдника.

Адгезія

Послідовність фагоцитозу продовжується другою стадією – реакцією адгезії. Фагоцити, що підійшли до потрібного місця, простягають до патогену свої відростки, вступають з ним в контакт і розпізнають його. Вони не поспішають відразу нападати і спочатку вважають за краще переконатися, чи не помиляються вони на рахунок «чужинця». Розпізнання шкідливого агента відбувається з допомогою спеціальних рецепторів лежить на поверхні мембран фагоцитів.

Активація мембрани

На третій стадії фагоцитозу в клітинах-захисниках відбуваються невидимі реакції, які готують їх до захоплення та знищення патогену.

Занурення

Мембрана фагоциту – це текуча, пластична субстанція, яка може змінювати форму. Що вона і робить, коли клітина стикається зі шкідливим об'єктом. На фото видно, що фагоцит простягає до чужорідної частки свої щупальця. Потім він поступово розтікається навколо неї, наповзає на неї і її повністю захоплює.

Освіта фагосоми

Коли фагоцит охоплює частинку з усіх боків, його мембрана замикається зовні, а всередині клітини залишається закрита бульбашка з атакованим об'єктом усередині. Таким чином, клітина начебто ковтає частинку. Ця бульбашка носить назву фагосоми.

Формування фаголізосоми (злиття)

Поки проходили інші етапи фагоцитозу, всередині фагоциту готувалася до використання його зброя – органели-лізосоми, що містять «травні» ферменти клітини. Як тільки бактерія або інший шкідливий об'єкт виявився полонений клітиною-захисником, до неї наближаються лізосоми. Їхні мембрани зливаються з оболонкою, що обволікає частинку, і їх вміст виливається всередину цього «мішка».

Кіллінг

Це найдраматичніший момент у всьому механізмі фагоцитозу. Захоплений об'єкт перетравлюється та розщеплюється фагоцитом.

Видалення продуктів розщеплення

Все, що залишилося від убитої бактерії або іншої перевареної частинки, видаляється з клітини. Колишня фаголізосома, що є мішечком з продуктами деградації, підходить до зовнішньої мембрани фагоциту і зливається з нею. Так із клітини видаляються залишки поглиненого об'єкта. Послідовність фагоцитозу завершується.

Від чого залежить успішність фагоцитозу?

На жаль, не завжди весь описаний процес проходить як по маслу. У деяких випадках патоген виявляється сильнішим за фагоцитарну ланку імунітету, він переборює захист, і людина хворіє. Ще Мечников помічав, що й на личинок і черв'яків вплинути занадто багато грибкових клітин, то заражені організми гинуть.

Інша можлива причина невдачі - незавершений фагоцитоз. Деякі (часто дуже небезпечні та заразні) збудники захищені від перетравлення фагоцитами. В результаті вони просто проникають всередину, живуть там і розвиваються, недоступні для інших факторів захисту імунітету. Адже «нормальна» імунна система не атакуватиме власні ж клітини, вона не знає, що всередині них – небезпечний збудник.

Щоб уникнути «невдалого» фагоцитозу та забезпечити найкращий імунний захист, рекомендується приймати препарат Трансфер Фактор. Його інформаційні молекули передають клітинам імунітету відомості про те, як поводитися з різними патогенами і як їх позбуватися. В результаті робота імунітету налагоджується, а це підвищує його стійкість до хвороб, що ще не виникли, і ефективність лікування від вже розвинених.

Тема: «Вчення про імунітет. Неспецифічні фактори захисту ».

Імунітет– це спосіб захисту організму від генетично чужорідних речовин – антигенів екзогенного та ендогенного походження, спрямований на підтримку та збереження гомеостазу, структурної та функціональної цілісності організму, біологічної (антигенної) індивідуальності кожного організму та виду в цілому.

Таке визначення наголошує:

що імунологія вивчає способи та механізми захисту від будь-яких генетично чужорідних для даного організму антигенів, будуть вони мікробного, тваринного чи іншого походження;

що механізми імунітету спрямовані проти антигенів, які можуть проникати в організм, як із поза, так і формуватися в самому організмі;

що система імунітету спрямована на збереження та підтримання генетично детерменованої антигенної індивідуальності кожної особини, кожного виду в цілому

Імунний захист про біологічну агресію досягається тріадою реакцій, Що включає:

розпізнавання чужорідних та змінених власних макромолекул (АГ)

видалення з організму АГ і несучих клітин.

запам'ятовування контакту з конкретними артеріальною гіпертензією, що визначає їх прискорене видалення при повторному надходженні в організм.

Основоположники імунології:

Луї Пастер – принцип вакцинації.

І. І. Мечников - вчення про фагоцитоз.

Пауль Ерліх - гіпотеза про антитіла.

Про важливість імунології як науки свідчить те, що автори багатьох відкриттів відзначені Нобелівською премією.

Фактори неспецифічнірезистентності організму

У неспецифічному захисті від мікробом та антигенів важливу роль, як зазначалося вище, відіграють три бар'єри: 1) механічний, 2) фізико-хімічний та 3) імунобіологічний. Основними захисними чинниками цих бар'єрів є шкіра та слизові оболонки, ферменти, фагоцитуючі клітини, комплемент, інтерферон, інгібітори сироватки крові.

Шкіра та слизові оболонки

Багатошаровий епітелій здорової шкіри та слизових оболонок зазвичай непроникний для мікробів та макромолекул. Однак при малопомітних мікроушкодженнях, запальних змінах, укусах комах, опіках та травмах через шкіру та слизові не можуть проникати мікроби та макромолекули. Віруси та деякі бактерії можуть проникати в макроорганізм міжклітинно, через клітинно та за допомогою фагоцитів, що переносять поглинених мікробів через епітелій та слизових оболонок. Свідченням цього є інфікування в природних умовах через слизові верхніх дихальних шляхів, легенів, шлунково-кишкового трактату урогенітального тракту, а також можливість пероральної та інгаляційної імунізації живими вакцинами, коли вакцинний штам бактерій і вірусів проникає через слиз.

Фізико-хімічний захист

На чистій і неушкодженій шкірі зазвичай тримається мало мікробів, оскільки потові і сальні залози постійно виділяють на її поверхню речовини, що мають бактерицидну дію (оцтова, мурашина, молочна кислоти).

Шлунок також є бар'єром для проникних перорально бактерій, вірусів, антигенів, оскільки останні інактивуються та руйнуються під впливом кислого вмісту шлунка (рН 1,5-2,5) та ферментів. У кишечнику інактивуючими факторами служать ферменти та бактеріоцини, що утворюються нормальною мікробною флорою кишечника, а також трипсин, панкреатин, ліпаза, амілаза та жовч.

Імунобіологічний захист

Фагоцитоз

Фагоцитоз(Від грец. phagos - пожираю, cytos - Клітина), відкритий і вивчений І. І. Мечниковим, є одним з основних потужних факторів, що забезпечують резистентність організму, захист від сторонніх речовин, у тому числі мікробів. Це найдавніша форма імунного захисту, яка з'явилася вже у кишковопорожнинних.

Механізм фагоцитозу полягає в поглинанні, перетравленні, інактивації чужорідних для організму речовин спеціалізованими клітинами - фагоцитами.

І. І. Мечніков до фагоцитуючих клітинкамвідніс макрофаги та мікрофаги. Найбільш вивчені і чисельно переважають це моноцити крові і макрофаги тканин, що утворюються з них. Тривалість перебування моноцитів у кровотоку становить 2-4 доби. Після цього вони мігрують у тканини, перетворюючись на макрофаги. Тривалість життя макрофагів - від 20 діб до 7 міс (мова йде про різні субпопуляції тканинних макрофагів); здебільшого це – 20 -40 днів.

Макрофаги більші за моноцити через розпластану форму. Макрофаги поділяються на резидентні (стабільно локалізуються в певних тканинах) і рухливі (мобілізовані в осередок запалення). вєдину мононуклеарну фагоцитуючусистему:

До неї включені тканинні макрофаги(альвеолярні, перитонеальні та ін.), клітки Лангергансаі Гренстейна(епідермоцити шкіри), клітини Купфера(зіркові ретикулоендотеліоцити), епітеліоїдні клітини, нейтрофіли та еозинофіли крові та деякі інші.

Основні функції фагоцитів.

видаляють з організму клітини, що відмирають, та їх структури (еритроцити, ракові клітини);

видаляють неметабілізовані неорганічні речовини, що потрапляють у внутрішнє середовище організму тим чи іншим шляхом (наприклад, частинки вугілля, мінеральний та інший пил, що проникає у дихальні шляхи);

поглинають та інактивують мікроби (бактерії, віруси, гриби), їх останки та продукти;

синтезують різноманітні біологічно активні речовини, необхідні забезпечення резистентності організму (деякі компоненти комплементу, лизоцим, інтерферон, інтерлейкіни та інших.);

беруть участь у регуляції імунної системи;

здійснюють «ознайомлення» Т-хелперів з антигенами, тобто беруть участь у кооперації імунокомпетентних клітин.

Отже, фагоцити є, з одного боку, своєрідними «сміттярниками», що очищають організм від усіх сторонніх частинок незалежно від їх природи та походження (неспецифічна функція), а з іншого боку, беруть участь у процесі специфічного імунітету шляхом представлення антигену імунокомпетентним клітинам (Т~ ) та регуляції та до активності.

Стадії фагоцитозу . Процес фагоцитозу, тобто поглинання сторонньої речовини клітинами, має кілька стадій:

наближення фагоциту до об'єкту поглинання (хемотаксис);

адсорбція пречовини, що оковтається, на поверхні фагоциту;

поглинанняречовини шляхом інвагінації клітинної мембрани з утворенням у протоплазмі фагосоми (вакуолі, бульбашки), що містить поглинену речовину;

злиттяфагосоми з лізосомою клітини з утворенням фаголізосоми;

активація лізосомальних ферментів та перетравленняречовини у фаголізосомі за їх допомогою.

Особливості фізіології фагоциту. Для здійснення своїх функцій фагоцити мають великий набор літичних ферментів, а також продукують перекисні і N0" іон-радикали, які можуть вражати мембрану (або стінку) клітини на відстані або після фагоцитування. На цитоплазматичній мембрані знаходяться рецептори до компонентів комплементу, Fc-фрагментів імуноглобуна , гістаміну, а також антигени гістосумісності I і II класу.Внутрішньоклітинні лізосоми містять до 100 різних ферментів, здатних «перетравити» практично будь-яку органічну речовину.

Фагоцити мають розвинену поверхню та дуже рухливі. Вони здатні активно переміщатися до об'єкта фагоцитозу за градієнтом концентрації особливих біологічно активних речовин. хемоаттрактантів.Таке пересування отримало назву хемотаксис (Від грец. chymeia - мистецтво сплавлення металів та taxis - розташування, побудова). Це АТФ-залежний процес, у якому беруть участь скорочувальні білки актин та міозин. До хемоаттрактантів відносяться, наприклад, фрагменти компонентів комплементу (СЗа і С5а), лімфокіни ІЛ-8 та ін, продукти розпаду клітин і бактерій, плюс змінений епітелій кровоносної судини в місці запалення. Як відомо, раніше інших клітин у вогнище запалення мігрують нейтрофіли, значно пізніше туди надходять макрофаги. Однак швидкість хемотаксичного переміщення однакова. Відмінності пов'язані з різним набором факторів, що служать для них хемоаттрактантами, з швидшою початковою реакцією нейтрофілів (запуск хемотаксису), а також присутність нейтрофілів у шарі пристінок судин (тобто їх готовність до проникнення в тканини)

Адсорбціяречовини на поверхні фагоциту здійснюється за рахунок слабких хімічних взаємодій і відбувається або спонтанно, неспецифічно, або зв'язуванням зі специфічними рецепторами (до імуноглобулінів, компонентів комплементу). Мембранні структури, що взаємодіють при контакті фагоцитів з клітинами мішенями (зокрема, опсоніни на поверхні мікробної клітини та їх рецептори на поверхні фагоциту), розташовані рівномірно на взаємодіючих клітинах. Це створює умови для послідовного обхвату частинки псевдоподіями, що тотально залучає в процес всю поверхню фагоциту і призводить до поглинання частки внаслідок замикання мембрани принципом «застібки блискавки»."Захоплення" фагоцитом речовини викликає вироблення великої кількості перекисних радикалів ("кисневий вибух") і N0", які викликають незворотні, летальні пошкодження як цілісних клітин, так і окремих молекул.

Поглинанняадсорбованої на фагоциті речовини відбувається шляхом ендоцитоза.Це енергозалежний процес, пов'язаний із перетворенням енергії хімічних зв'язків молекули АТФ на скорочувальну активність внутрішньоклітинного актину та міозину. Оточення фагоцитованої речовини бішарової цитоплазматичної мембрани та утворення ізольованої внутрішньоклітинної бульбашки - фагосоминагадує «застібання блискавки». Усередині фагосоми продовжується атака поглиненої речовини активними радикалами. Після злиття фагосоми та лізосоми та утворення в цитоплазмі фаголізосомивідбувається активація лізосомальних ферментів, які руйнують поглинену речовину до елементарних складових, придатних для подальшої утилізації потреб самого фагоциту.

У фаголізосомі існує кілька систем факторів бактерицидності:

фактори, що вимагають участі кисню

азотисті метаболіти

активні субстанції, у тому числі й ферменти

локальне окиснення.

Однією з основних форм руйнування мікроорганізму всередині макрофагу – це кисневий вибух. Кисневий, або дихальний вибух – це процес утворення продуктів частково відновленого кисню, вільних радикалів, перекисів та інших продуктів, які мають високу антимікробну активність. Ці процеси розвиваються протягом секунд, що й визначило їхнє позначення як «вибух». Виявлено відмінності між КВ нейтрофілів та макрофагами. У першому випадку реакція більш короткочасна, але інтенсивніша, вона призводить до великого накопичення перекису водню і не залежить від синтезу білків, у другому випадку вона більш тривала, але пригнічується інгібітором синтезу білка циклогексидином.

Окис азоту та радикал NO (особливо важливо при руйнуванні мікобактерій).

Ферментативне розщеплення речовини може відбуватися позаклітинно при виході ферментів за межі фагоциту.

Важко надходити в мікробну клітину поживних речовин через зниження її електронного потенціалу. У кислому середовищі підвищується активність ферментів.

Фагоцити, як правило, «перетравлюють» захоплені бактерії, гриби, віруси, здійснюючи таким чином завершений фагоцитоз. Однак у ряді випадків фагоцитоз носить незавершений характер: поглинені бактерії (наприклад, єрсинії) або віруси (наприклад, збудник ВІЛ-інфекції, натуральної віспи) блокують ферментативну активність фагоциту, не гинуть, не руйнуються і навіть розмножуються у фагоцитах. Такий процес отримав назву незавершений фагоцитоз.

Невеликий олігопептид може бути ендоцитований фагоцитом і після процесингу (тобто обмеженого протеолізу) включений до складу молекули антигену гістосовмітнотиIIкласу.У складі складного макромолекулярного комплексу олігопептид виставляється (експресується) на поверхні клітини для ознайомлення з ним Т-хелперів.

Фагоцитоз активуєтьсяпід впливом антитіл-опсонінів, ад'ювантами, комплементом, імуноцитокінами (ІЛ-2) та іншими факторами. Механізм активуючого дії опсонінівзаснований на зв'язуванні комплексу антиген-антитіло з рецепторами до Fc-фрагментів імуноглобулінів на поверхні фагоцитів. Аналогічним чином діє комплемент, який сприяє зв'язуванню на специфічних йому рецепторах фагоцита (С-рецепторах) комплексу антиген-антитіло. Ад'ювантиукрупнюють молекули антигену і таким чином полегшують процес його поглинання, так як інтенсивність фагоцитозу залежить від величини частки, що поглинається.

Активність фагоцитів характеризується фагоцитарними показникамиі опсоно-фагоцітарним індексом.

Фагоцитарні показники оцінюються кількістю бактерій, поглинених або «перетравлених» одним фагоцитом в одиницю часу, а опсонофагоцитарний індекс представляє відношення фагоцитарних показників, отриманих з імунної, тобто містить опсоніни, та неімунної сироваткою. Ці показники використовуються у клінічній практиці для визначення імунного статусу індивідуума.

Секреторна активність макрофагів. Ттака активність властива переважно активованим фагоцитуючим клітинам, але принаймні макрофаги виділяють субстанції (лізоцим, простагландин Е2) спонтанно. Активність виражається у двох формах:

1 . викид вмісту гранул (для макрофагів лізосом), тобто. дегрануляція.

2 . секреція за участю ЕПР та апарату Гольджі.

Дегрануляція властива всім основним фагоцитуючим клітинам, а другий тип виключно макрофагам.

З залишивши гранул нейтрофіліврозділений на дві частини, одні діють при нейтральних або лужних значеннях ph, інша кислі гідролази.

Головна особливість макрофагівпорівняно з нейтрофілами, це значно більш виражена секреція, не пов'язана з дегрануляцією.

Макрофаги спонтанно секретують: лізоцим, компоненти компліменту, ряд ферментів (наприклад, еластазу), фібронектин, апопротеїн А та ліпопротеїнову ліпазу. При активізаціїзначно збільшується секреція: С2, С4, фібронектину, активатора плазміногену, включається синтез цитокінів (ІЛ1, 6 та 8), ФНПα, інтерферонів α, β, гормонів та ін.

Активація макрофагів призводить до процесів дегрануляції фагосом та лізосом з виділення продуктів, аналогічних тим, що виділяються при дегрануляції нейтрофілів. Комплекс цих продуктів зумовлює позаклітинний бактеріоліз і цитоліз, а також перетравлення компонентів зруйнованих клітин. Однак позаклітинна бактерицидна активність у макрофагів виражена слабше, ніж у нейтрофілів. . Макрофаги не викликають масованого аутолізу, що призводить до формування гною.